CN104764821A - 测定定喘止咳糖浆中活性成分盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种测定定喘止咳糖浆中活性成分盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱含量的方法，它包括对照品溶液的制备步骤、供试品溶液的制备步骤和高效液相色谱测定步骤，确定产品每1mL含盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的总量计，不少于0.50mg为合格，本发明使用高效液相色谱法对控制定喘止咳糖浆产品质量的盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量进行测定，相比于现有标准中无含量测定项的检测，能直接通过检测盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量来控制药品的内在质量，而且本测定方法中，盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱分离效果好，稳定性和准确度高，重复性好，这样能更好地控制定喘止咳糖浆产品的质量。

Description

测定定喘止咳糖浆中活性成分盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量的方法

技术领域

本发明涉及一种药物的检测方法，具体涉及测定定喘止咳糖浆中活性成分盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量的方法。

背景技术

定喘止咳糖浆是《卫生部药品标准》中药成方制剂第十三册收载的中药制剂，具有宣肺平喘，理气止咳，临床常用于治疗风寒喘咳，胸腹胀满，亦可用于支气管哮喘，支气管炎。由于原药品标准仅规定了常规检查，具体为：(1)取本品20ml，加乙醚15ml，振摇，分取乙醚液，挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，加5％香草醛的硫酸溶液数滴，即显棕红色；(2)取本品15ml，加水20ml，振摇，加10％氢氧化钠溶液调节PH值至10以上，加乙醚提取二次，合并乙醚液，挥干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取盐酸麻黄碱对照品10mg，加乙醇2ml使溶解，作为对照品溶液，照薄层色谱法(附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各20ml，分别点于同一硅胶G薄层板上，用氯仿－甲醇－甲醇(4:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5％茚三酮溶液，于105℃烘约5分钟，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

此标准无含量测定项检测，不能有效地控制药品的内在质量，根据相关要求，需要对该制剂增订含量测定标准，以更好的控制产品质量。

定喘止咳糖浆的处方由麻黄、杏仁、厚朴、陈皮、柴胡、紫苏叶、甘草等中药组成，麻黄辛、微苦，温。具散寒，宣肺平喘功能，为该方主药，确定为含量检测对象，而麻黄含有活性成分为盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱。

因此，迫切需要研发一种定喘止咳糖浆中活性成分盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱含量的方法，来作为评定定喘止咳糖浆质量的标准具有重要的意义。

发明内容

为克服上述现有背景技术的不足，本发明的目的在于提供一种能更好地控制定喘止咳糖浆产品质量的麻黄碱、伪麻黄碱含量的测定方法。

本发明的目的是通过如下措施来达到的：测定定喘止咳糖浆中活性成分盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量的方法，包括以下步骤：

(1)对照品溶液的制备：取盐酸麻黄碱对照品、盐酸伪麻黄碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每1mL各含20μg的混合溶液，即得盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱对照品溶液。

(2)供试品溶液的制备：精密量取定喘止咳糖浆5ml，置25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用滤纸过滤，精密吸取续滤液2ml，置10ml容量瓶中，加入1ml稀盐酸，加流动相至10ml，摇匀，用0.45μm滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

(3)用高效液相色谱测定：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，其中流动相流速为0.9mL/min，柱温为30℃，检测波长为210nm，理论板数按盐酸麻黄碱峰计算不低于3000，分别吸取对照品溶液与供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，测定，得供试品溶液每1mL含盐酸麻黄碱(C₁₀H₁₅NO·HCl)和盐酸伪麻黄碱(C₁₀H₁₅NO·HCl)的总量计，不少于0.50mg为合格。

其中流动相中各成分的体积比为：甲醇：pH3.0的0.02mol/L磷酸二氢钠缓冲液(含0.4％的三乙胺)溶液＝4：96。

进一步地，使用高效液相色谱测定时，所用色谱柱的柱高250mm，内径4.6mm，填充剂粒径为5μm。

本发明的有益效果在于：本发明使用高效液相色谱法对控制定喘止咳糖浆产品质量的盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱进行测定，相比于现有标准中无含量测定项的检测，本发明能直接通过检测盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的含量来控制药品的内在质量，而且本测定方法中，盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱分离效果好，稳定性和准确度高，重复性好，这样能更好地控制定喘止咳糖浆产品的质量。

附图说明

图1为盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱对照品色谱图；

图2为供试品色谱图；

图3为阴性对照色谱图；

图4为盐酸麻黄碱标准曲线图；

图5为盐酸伪麻黄碱标准曲线图。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步的详细描述：

本发明提供测定定喘止咳糖浆中活性成分盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量的方法，包括以下步骤：

(1)对照品溶液的制备：取盐酸麻黄碱对照品、盐酸伪麻黄碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每1mL各含20μg的混合溶液，即得盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱对照品溶液。

(2)供试品溶液的制备：精密量取定喘止咳糖浆5ml，置25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用滤纸过滤，精密吸取续滤液2ml，置10ml容量瓶中，加入1ml稀盐酸，加流动相至10ml，摇匀，用0.45μm滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

(3)用高效液相色谱测定：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，其中流动相流速为0.9mL/min，柱温为30℃，检测波长为210nm，理论板数按盐酸麻黄碱峰计算不低于3000，分别吸取对照品溶液与供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，测定，得供试品溶液每1mL含盐酸麻黄碱(C10H15NO·HCl)和盐酸伪麻黄碱(C10H15NO·HCl)的总量计，不少于0.50mg为合格。

其中流动相中各成分的体积比为：甲醇：pH3.0的0.02mol/L磷酸二氢钠缓冲液(含0.4％的三乙胺)溶液＝4：96。

使用高效液相色谱测定时，所用色谱柱的柱高250mm，内径4.6mm，填充剂粒径为5μm。

相关试验报告如下：

1、仪器与试药

DIONEX高效液相色谱仪，ΜVD170μLC紫外检测器，电子天平(北京赛多利斯天平有限公司)，Welch(月旭)Μltimate XB-C18柱(250mm×4.6mm，5μm)。定喘止咳糖浆(湖北端正药业有限公司生产，批号121201、121202、121203)，盐酸麻黄碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号171237-201208，供含量测定用)；盐酸伪麻黄碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号171241-201007，供含量测定用)，HPLC用水为双蒸水(实验室自制)，甲醇为色谱纯，盐酸(开封东大化工有限公司试剂厂)、乙醚(国药集团化学试剂有限公司)、甲醇(国药集团化学试剂有限公司)等均为分析纯。

1.1对照品溶液的制备

取盐酸麻黄碱对照品、盐酸伪麻黄碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每1mL各含20μg的混合溶液，即得盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱对照品溶液。

1.2对照品储备液的制备

精称取盐酸麻黄碱对照品3.095mg至10mL容量瓶，用流动相定容，得盐酸麻黄碱对照品储备液；称取盐酸伪麻黄碱对照品3.970mg至10mL容量瓶，用流动相定容，得盐酸伪麻黄碱对照品储备液。

1.3供试品溶液的制备

供试品溶液的制备：精密量取定喘止咳糖浆5ml，置25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用滤纸过滤，精密吸取续滤液2ml，置10ml容量瓶中，加入1ml稀盐酸，加流动相至10ml，摇匀，用0.45μm滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

1.4阴性对照溶液的制备

现行定喘止咳糖浆现行制法(《卫生部药品标准》中药成方制剂第十三册)：

麻黄300g，杏仁400g，厚朴300g，陈皮300g，柴胡200g，紫苏叶300g，甘草200g，以上七味，麻黄、陈皮、厚朴、紫胡、紫苏叶提取挥发油，药渣与甘草、苦杏仁加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，静置24小时，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.10～1.22的清膏；另取蔗糖1333g制成糖浆，加入清膏，挥发油及防腐剂适量，约制成3000ml，即得。

按上述处方及工艺制成不含麻黄的阴性对照品，按1.3项下的方法制成阴性对照溶液。

2.方法和结果

2.1色谱系统适应性试验

Μltimate XB-C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；以甲醇—pH3.0的0.02mol/L磷酸二氢钠缓冲液(含0.4％的三乙胺)(4：96)为流动相；流速：0.9mL/min；柱温：30℃；检测波长：210nm；分别取制备好的对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液进样，进样量都为20μL，结果如图1至3，其中图1盐酸麻黄碱保留时间在30.617min，盐酸伪麻黄碱保留时间为35.983min；与图1对照品色谱峰保留时间相对应，图2中的盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱色谱峰与其他杂质峰完全分离，分离效果好，因此说明实验所采用的色谱柱、流动相及配比、保留时间的选择恰当，色谱条件良好；图3中阴性对照溶液在与对照品溶液和供试品溶液相同保留时间处未显色谱峰，故认为对测定无干扰。

2.2标准曲线

将盐酸麻黄碱对照品储备液、盐酸伪麻黄碱对照品储备液分别稀释为系列浓度，精密吸取上述不同浓度的对照品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，照2.1条件测定色谱峰面积，结果见表1，以对照品溶液的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，见图4和图5，结果表明盐酸麻黄碱在1.9344～30.9500μg/mL线性关系良好，盐酸伪麻黄碱在2.4813～39.7000μg/mL线性关系良好。

表1线性关系

2.3精密度试验

精密吸取对照品溶液20μL，照2.1色谱条件测定，重复进样5次，测定吸收峰面积，结果见表2。盐酸麻黄碱RSD为1.19％，盐酸伪麻黄碱RSD为2.08％，表明仪器精密度良好，测定方法准确、可信。

表2精密度试验结果

2.4重复性试验

取批号为121201的定喘止咳糖浆5份，按供试品溶液制备方法及2.1色谱条件测定，结果见表3。盐酸麻黄碱的RSD＝3.10％，盐酸伪麻黄碱的RSD＝4.97％，表明该方法的重复性良好。

表3重复性试验结果

2.5稳定性试验

取同一份供试品溶液，分别于1h、4h、8h、12h、24h进样，测定峰面积，结果盐酸麻黄碱RSD为2.35％，盐酸伪麻黄碱RSD为1.85％，表明对照品溶液在24h内稳定，结果见表4。

表4稳定性试验结果

2.6加样回收率

精密吸取已知含量的同一批定喘止咳糖浆(批号为121201)5份，每份中分别加入盐酸麻黄碱对照品500μg及盐酸伪麻黄碱对照品180μg，按供试品溶液制备方法制备供试品液，以正文色谱条件测定，计算。结果见表5，盐酸麻黄碱平均回收率为99.4576％，盐酸伪麻黄碱平均回收率为96.5747％。

表5加样回收试验结果

3.含量测定及限度制订

对3批样品制备供试品溶液，按正文色谱条件测定，计算含量，结果见表6。3批样品每100mL含盐酸麻黄碱(C₁₀H₁₅NO·HCl)和盐酸伪麻黄碱(C₁₀H₁₅NO·HCl)的总量为59.1mg至65.6mg。

表6样品含量测定结果

上述三批样品为小样检测，实际生产中为大样检测，根据3批样品的含量结合生产实际，根据3批样品的含量结合生产实际，暂定本品每100mL含盐酸麻黄碱(C₁₀H₁₅NO·HCl)和盐酸伪麻黄碱(C₁₀H₁₅NO·HCl)的总量不得少于0.50mg，确定每100m l定喘止咳糖浆中含盐酸麻黄碱(C₁₀H₁₅NO·HCl)和盐酸伪麻黄碱(C₁₀H₁₅NO·HCl)的总量大于或等于0.50mg，说明其是按现行定喘止咳糖浆制法所得的合格品；若少于0.50mg，说明该定喘止咳糖浆不合格。

结论：以上方法学考察的各项数据均符合中药质量标准研究的有关规定，正文所述方法适用于测定定喘止咳糖浆中活性成分盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱含量，因此能直接通过检测盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱的含量来控制药品的内在质量，而且本测定方法中，盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱分离效果好，稳定性和准确度高，重复性好，表明该方法科学、合理、可行。

其它未详细说明的部分均属于现有技术。

Claims (2)

1.测定定喘止咳糖浆中活性成分盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一：对照品溶液的制备：取盐酸麻黄碱对照品、盐酸伪麻黄碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每1mL各含20μg的混合溶液，即得盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱对照品溶液；

步骤二：供试品溶液的制备：精密量取定喘止咳糖浆5ml，置25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用滤纸过滤，精密吸取续滤液2ml，置10ml容量瓶中，加入1ml稀盐酸，加流动相至10ml，摇匀，用0.45μm滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

步骤三：用高效液相色谱测定：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，其中流动相流速为0.9mL/min，柱温为30℃，检测波长为210nm，理论板数按盐酸麻黄碱峰计算不低于3000，分别吸取对照品溶液与供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，测定，得供试品溶液每1mL含盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的总量计，不少于0.50mg为合格；

其中流动相中各成分的体积比为：甲醇：pH3.0的0.02mol/L磷酸二氢钠缓冲液溶液＝4：96，所述磷酸二氢钠缓冲液溶液含0.4％的三乙胺。

2.根据权利要求1所述的测定定喘止咳糖浆中活性成分盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量的方法，其特征在于所述步骤三中，使用高效液相色谱测定时，所用色谱柱的柱高250mm，内径4.6mm，填充剂粒径为5μm。