CN103792301A - 一种抗病毒颗粒中告依春的含量测量方法 - Google Patents

Abstract

本发明的目的是提供一种抗病毒颗粒中告依春的含量测量方法，特别的，本发明的目的是提供一种操作简单、专属性强、准确度高的抗病毒颗粒中告依春的含量测量方法。本发明在现有质量标准基础上，建立的抗病毒颗粒中(R，S)-告依春的含量测量方法填补了该中药组合物中板蓝根药材测定项的空白，并能很好的实现产品的检测，提高了产品质量可控性。

Description

一种抗病毒颗粒中告依春的含量测量方法

技术领域

本发明涉及(R，S)-告依春的含量测定方法，特别是涉及抗病毒颗粒中(R，S)-告依春的含量测量方法。

背景技术

抗病毒颗粒主要由板蓝根、连翘、石膏、知母、芦根、地黄、广藿香、石菖蒲和郁金，该中药组合物现行质量标准仅针对连翘建立了连翘苷的含量测定方法。

而中药数字化等理念的发展，要求对于根据传统处方制得的中药制剂建立更加严格的质量控制方法，包括对于中药制剂中各活性物质的含量检测方法，提高了中药制剂产品质量可控性。抗病毒颗粒中含有板蓝根提取物，但至今未见任何有关该关键药材板蓝根指标成分(R，S)-告依春相应的鉴别或含量测定研究，难以有效并准确的检测抗病毒颗粒中关键活性物质(R，S)-告依春的含量。

虽然板蓝根药材质量标准及相关研究已有明确的指标成分(R，S)-告依春的含量测定方法，然而抗病毒颗粒由9种中药材制备而成，其中化学成分比板蓝根药材的化学成分更加复杂，检测方法的影响因素进而增加，使得板蓝根中(R，S)-告依春含量测定方法难以直接运用于抗病毒颗粒测定中。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗病毒颗粒中告依春的含量测量方法，特别的，本发明的目的是提供一种操作简单、专属性强、准确度高的抗病毒颗粒中告依春的含量测量方法。

本发明在现有质量标准基础上，建立的抗病毒颗粒中(R，S)-告依春的含量测量方法填补了该中药组合物中板蓝根药材测定项的空白，并能很好的实现产品的检测，提高了产品质量可控性。

具体的，本发明的抗病毒颗粒中告依春的含量测量方法如下：

(1)抗病毒颗粒供试品溶液制备：取抗病毒颗粒，研细，精密称定2-6g，置于25ml量瓶中，加溶剂A20ml溶解，超声提取，所述超声提取所用的超声清洗器功率为400W，频率为80kH，提取时间为15-45分钟，加溶剂A至刻度，摇匀，离心，取上清液，过微孔滤膜(0.45μm)，取续滤液，即得；所述溶剂A选自水、30％甲醇、70％甲醇。

(2)对照品溶液的制备：取(R，S)-告依春对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含4μg的溶液，即得。

(3)色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶柱(250mm×4.6mm，5μm)为填充剂，以245nm作为检测波长，柱温为30-40℃，流速为0.8-1.0ml/分钟，流动相选自甲醇-水、甲醇-0.02％磷酸、乙腈-水-磷酸-三乙胺。

步骤(1)所述抗病毒颗粒供试品溶液制备过程优选为：取抗病毒颗粒，研细，精密称定2-4g，置于25ml量瓶中，加水溶解，超声提取，所述超声提取所用的超声清洗器功率为400W，频率为80kH，提取时间为30分钟，加水至刻度，摇匀，离心，取上清液，过微孔滤膜(0.45μm)，取续滤液，即得。

步骤(1)所述抗病毒颗粒供试品溶液制备过程更优选为：取抗病毒颗粒，研细，精密称定4g，置于25ml量瓶中，加水20ml溶解，超声提取，所述超声提取所用的超声清洗器功率为400W，频率为80kH，提取时间为30分钟，加水至刻度，摇匀，离心，取上清液，过微孔滤膜(0.45μm)，取续滤液，即得。

步骤(3)所述色谱条件中，所述柱温优选为35℃。

步骤(3)所述色谱条件中，所述流速优选为1.0ml/分钟。

步骤(3)所述色谱条件中，所述流动相优选为甲醇-水。

步骤(3)所述色谱条件中，所述流动相为甲醇-水，所述甲醇和水的混合比例为15∶85(v/v)。

步骤(3)所述色谱条件中，所述流动相优选为乙腈-水-磷酸-三乙胺。

步骤(3)所述色谱条件中，所述流动相为乙腈-水-磷酸-三乙胺，所述乙腈、水、磷酸和三乙胺的混合比例为8.5∶90.72∶0.73∶0.05(v/v)。

步骤(3)所述色谱条件中，所述流动相优选为甲醇-0.02％磷酸，所述甲醇-0.02％磷酸中甲醇和0.02％磷酸的混合比例为7∶93或10∶90(v/v)。

步骤(3)所述色谱条件中，所述流动相优选为甲醇-0.02％磷酸，所述甲醇-0.02％磷酸中甲醇和0.02％磷酸的混合比例为7∶93(v/v)。

步骤(3)所述色谱条件优选为，以十八烷基硅烷键合硅胶柱(250mm×4.6mm，5μm)为填充剂，以245nm作为检测波长，柱温为35℃，流速为1.0ml/分钟，流动相为甲醇-0.02％磷酸。

步骤(3)所述色谱条件优选为，以十八烷基硅烷键合硅胶柱(250mm×4.6mm，5μm)为填充剂，以245nm作为检测波长，柱温为35℃，流速为1.0ml/分钟，流动相为甲醇-0.02％磷酸，所述甲醇-0.02％磷酸中甲醇和0.02％磷酸的混合比例为7∶93或10∶90(v/v)。

步骤(3)所述色谱条件优选为，以十八烷基硅烷键合硅胶柱(250mm×4.6mm，5μm)为填充剂，以245nm作为检测波长，柱温为35℃，流速为1.0ml/分钟，流动相为甲醇-0.02％磷酸，所述甲醇-0.02％磷酸中甲醇和0.02％磷酸的混合比例为10∶90(v/v)。

本发明的抗病毒颗粒中告依春的含量测量方法优选如下：

(1)抗病毒颗粒供试品溶液制备：取抗病毒颗粒，研细，精密称定4g，置于25ml量瓶中，加水20ml溶解，超声提取，所述超声提取所用的超声清洗器功率为400W，频率为80kH，提取时间为30分钟，加水至刻度，摇匀，离心，取上清液，过微孔滤膜(0.45μm)，取续滤液，即得。

(2)对照品溶液的制备：取(R，S)-告依春对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含4μg的溶液，即得。

(3)色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶柱(250mm×4.6mm，5μm)为填充剂，以245nm作为检测波长，柱温为35℃，流速为1.0ml/分钟，流动相为甲醇-0.02％磷酸。

本发明的抗病毒颗粒中告依春的含量测量方法更优选如下：

(1)抗病毒颗粒供试品溶液制备：取抗病毒颗粒，研细，精密称定4g，置于25ml量瓶中，加水20ml溶解，超声提取，所述超声提取所用的超声清洗器功率为400W，频率为80kH，提取时间为30分钟，加水至刻度，摇匀，离心，取上清液，过微孔滤膜(0.45μm)，取续滤液，即得。

(2)对照品溶液的制备：取(R，S)-告依春对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含4μg的溶液，即得。

(3)色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶柱(250mm×4.6mm，5μm)为填充剂，以245nm作为检测波长，柱温为35℃，流速为1.0ml/分钟，流动相为甲醇-0.02％磷酸，所述甲醇-0.02％磷酸中甲醇和0.02％磷酸的混合比例为7∶93或10∶90(v/v)。

本发明的抗病毒颗粒中告依春的含量测量方法最优选如下：

(1)抗病毒颗粒供试品溶液制备：取抗病毒颗粒，研细，精密称定4g，置于25ml量瓶中，加水20ml溶解，超声提取，所述超声提取所用的超声清洗器功率为400W，频率为80kH，提取时间为30分钟，加水至刻度，摇匀，离心，取上清液，过微孔滤膜(0.45μm)，取续滤液，即得。

(2)对照品溶液的制备：取(R，S)-告依春对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含4μg的溶液，即得。

(3)色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶柱(250mm×4.6mm，5μm)为填充剂，以245nm作为检测波长，柱温为35℃，流速为1.0ml/分钟，流动相为甲醇-0.02％磷酸，所述甲醇-0.02％磷酸中甲醇和0.02％磷酸的混合比例为10∶90(v/v)。

附图说明

图1为实施例1中流动相1为甲醇-水，甲醇和水的混合比例为15∶85(v/v)的高效液相色谱图。

图2为实施例1中流动相2为甲醇-0.02％磷酸，甲醇和0.02％磷酸的混合比例为7∶93(v/v)的高效液相色谱图。

图3为实施例1中流动相3为甲醇-0.02％磷酸，甲醇和0.02％磷酸的混合比例为10∶90(v/v)的高效液相色谱图。

图4为实施例1中流动相4为乙腈-水-磷酸-三乙胺，乙腈、水、磷酸和三乙胺的混合比例为8.5∶90.72∶0.73∶0.05(v/v)的高效液相色谱图。

图5为实施例2中柱温1为30℃的高效液相色谱图。

图6为实施例2中柱温2为35℃的高效液相色谱图。

图7为实施例2中柱温3为40℃的高效液相色谱图。

图8为实施例3中流动相流速1为0.8ml/分钟的高效液相色谱图。

图9为实施例3中流动相流速2为1.0ml/分钟的高效液相色谱图。

图10为实施例6中不含板蓝根阴性干扰对照试验的高效液相色谱图；其中A曲线为(R，S)-告依春对照品形成的曲线，B曲线为不含板蓝根阴性对照形成的曲线，C曲线为抗病毒颗粒供试品形成的曲线。

图11为实施例7中线性关系考察实验形成的标准曲线图。

具体实施方式

实施例1流动相确定

一、主要检验仪器设备、对照品及试药

仪器设备：Agilent1260高效液相色谱仪(含G1311B四元泵、G1329B自动控温自动进样器、G4212BDAD检测器、Chemstation色谱数据处理工作站)、KQ-500VDE型双频数控超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)、CPA225D电子天平(德国赛多利斯)；

试剂：甲醇、乙腈为色谱纯，水为自制重蒸馏水，其它试剂均为分析纯；

样品：抗病毒颗粒样品由四川光大制药有限公司提供的9g/袋含糖型抗病毒颗粒。

二、测量抗病毒颗粒中告依春的含量

(1)抗病毒颗粒供试品溶液制备：取抗病毒颗粒，研细，精密称定4g，置于25ml量瓶中，加水20ml溶解，超声提取，所述超声提取所用的超声清洗器功率为400W，频率为80kH，提取时间为30分钟，加水至刻度，摇匀，离心，取上清液，过微孔滤膜(0.45μm)，取续滤液，即得。

(2)色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶柱(250mm×4.6mm，5μm)为填充剂，以245nm作为检测波长，柱温为35℃，流速为1.0ml/分钟；

流动相1为甲醇-水，甲醇和水的混合比例为15∶85(v/v)；

流动相2为甲醇-0.02％磷酸，甲醇和0.02％磷酸的混合比例为7∶93(v/v)；

流动相3为甲醇-0.02％磷酸，甲醇和0.02％磷酸的混合比例为10∶90(v/v)；

流动相4为乙腈-水-磷酸-三乙胺，乙腈、水、磷酸和三乙胺的混合比例为8.5∶90.72∶0.73∶0.05(v/v)。

三、实验结果

图1-4结果表明，以甲醇-0.02％磷酸(10∶90)作为流动相测定本品的分离效果及响应值最佳。

实施例2柱温确定

一、主要检验仪器设备、对照品及试药

仪器设备：Agilent1260高效液相色谱仪(含G1311B四元泵、G1329B自动控温自动进样器、G4212BDAD检测器、Chemstation色谱数据处理工作站)、KQ-500VDE型双频数控超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)、CPA225D电子天平(德国赛多利斯)；

试剂：甲醇、乙腈为色谱纯，水为自制重蒸馏水，其它试剂均为分析纯；

样品：抗病毒颗粒样品由四川光大制药有限公司提供的9g/袋含糖型抗病毒颗粒。

二、测量抗病毒颗粒中告依春的含量

(1)抗病毒颗粒供试品溶液制备：取抗病毒颗粒，研细，精密称定4g，置于25ml量瓶中，加水20ml溶解，超声提取，所述超声提取所用的超声清洗器功率为400W，频率为80kH，提取时间为30分钟，加水至刻度，摇匀，离心，取上清液，过微孔滤膜(0.45μm)，取续滤液，即得。

(2)色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶柱(250mm×4.6mm，5μm)为填充剂，以245nm作为检测波长，流速为1.0ml/分钟，流动相为甲醇-0.02％磷酸，甲醇和0.02％磷酸的混合比例为10∶90(v/v)；

柱温1为30℃；

柱温2为35℃；

柱温3为40℃；

三、实验结果

图5-7结果表明，柱温为35℃时主要色谱峰分离度及响应值最佳。

实施例3洗脱流速确定

一、主要检验仪器设备、对照品及试药

仪器设备：Agilent1260高效液相色谱仪(含G1311B四元泵、G1329B自动控温自动进样器、G4212BDAD检测器、Chemstation色谱数据处理工作站)、KQ-500VDE型双频数控超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)、CPA225D电子天平(德国赛多利斯)；

试剂：甲醇、乙腈为色谱纯，水为自制重蒸馏水，其它试剂均为分析纯；

样品：抗病毒颗粒样品由四川光大制药有限公司提供的9g/袋含糖型抗病毒颗粒。

二、测量抗病毒颗粒中告依春的含量

(1)抗病毒颗粒供试品溶液制备：取抗病毒颗粒，研细，精密称定4g，置于25ml量瓶中，加水20ml溶解，超声提取，所述超声提取所用的超声清洗器功率为400W，频率为80kH，提取时间为30分钟，加水至刻度，摇匀，离心，取上清液，过微孔滤膜(0.45μm)，取续滤液，即得。

(2)色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶柱(250mm×4.6mm，5μm)为填充剂，以245mm作为检测波长，柱温为35℃，流动相为甲醇-0.02％磷酸，甲醇和0.02％磷酸的混合比例为10∶90(v/v)；

流动相流速1为0.8ml/分钟；

流动相流速2为1.0ml/分钟。

三、实验结果

图8-9结果表明，流速为1.0ml/分钟时主要色谱峰分离度较佳。

实施例4溶剂A的选择

一、主要检验仪器设备、对照品及试药

仪器设备：Agilent1260高效液相色谱仪(含G1311B四元泵、G1329B自动控温自动进样器、G4212BDAD检测器、Chemstation色谱数据处理工作站)、KQ-500VDE型双频数控超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)、CPA225D电子天平(德国赛多利斯)；

试剂：甲醇、乙腈为色谱纯，水为自制重蒸馏水，其它试剂均为分析纯；

样品：抗病毒颗粒样品及阴性对照品由四川光大制药有限公司提供。

二、测量抗病毒颗粒中告依春的含量

(1)抗病毒颗粒供试品溶液制备：取抗病毒颗粒，研细，精密称定4g，置于25ml量瓶中，加溶剂A20ml溶解，超声提取，所述超声提取所用的超声清洗器功率为400W，频率为80kH，提取时间为30分钟，加水至刻度，摇匀，离心，取上清液，过微孔滤膜(0.45μm)，取续滤液，即得；溶剂A分别为水、30％甲醇、70％甲醇。

(2)色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶柱(250mm×4.6mm，5μm)为填充剂，以245nm作为检测波长，柱温为35℃，流动相流速1为0.8ml/分钟，流动相为甲醇-0.02％磷酸，甲醇和0.02％磷酸的混合比例为10∶90(v/v)。

三、实验结果

由表1可知，三种溶剂的提取率相近，综合考虑到水环保和相对节约成本，最终选择水作为溶剂A。

表1不同溶剂A的含量测定

实施例5超声提取时间的选择

一、主要检验仪器设备、对照品及试药

仪器设备：Agilent1260高效液相色谱仪(含G1311B四元泵、G1329B自动控温自动进样器、G4212BDAD检测器、Chemstation色谱数据处理工作站)、KQ-500VDE型双频数控超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)、CPA225D电子天平(德国赛多利斯)；

对照品：(R，S)-告依春对照品(中检所；批号：111753-201103)；

试剂：甲醇、乙腈为色谱纯，水为自制重蒸馏水，其它试剂均为分析纯；

样品：抗病毒颗粒样品由四川光大制药有限公司提供的9g/袋含糖型抗病毒颗粒。

二、测量抗病毒颗粒中告依春的含量

(1)抗病毒颗粒供试品溶液制备：取抗病毒颗粒，研细，精密称定4g，置于25ml量瓶中，加溶剂A20ml溶解，超声提取，所述超声提取所用的超声清洗器功率为400W，频率为80kH，提取时间为，加水至刻度，摇匀，离心，取上清液，过微孔滤膜(0.45μm)，取续滤液，即得；超声提取，所述超声提取所用的超声清洗器功率为400W，频率为80kH，提取时间为15分钟、30分钟、45分钟，考察(R，S)-告依春的含量。

(2)色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶柱(250mm×4.6mm，5μm)为填充剂，以245nm作为检测波长，柱温为35℃，流动相流速1为0.8ml/分钟，流动相为甲醇-0.02％磷酸，甲醇和0.02％磷酸的混合比例为10∶90(v/v)；

三、实验结果

由表2结果可知，超声处理30分钟，基本可以提取完全。

表2不同超声提取时间的含量测定

实施例6不含板蓝根阴性干扰对照试验

分别取抗病毒颗粒、(R，S)-告依春对照品及不含板蓝根阴性对照样品，按以下步骤进行测定，结果表明不含板蓝根阴性对照无干扰。

一、主要检验仪器设备、对照品及试药

仪器设备：Agilent1260高效液相色谱仪(含G1311B四元泵、G1329B自动控温自动进样器、G4212BDAD检测器、Chemstation色谱数据处理工作站)、KQ-500VDE型双频数控超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)、CPA225D电子天平(德国赛多利斯)；

对照品：(R，S)-告依春对照品(中检所；批号：111753-201103)；

试剂：甲醇、乙腈为色谱纯，水为自制重蒸馏水，其它试剂均为分析纯；

样品：抗病毒颗粒样品和不含板蓝根阴性对照样品由四川光大制药有限公司提供。

二、测量抗病毒颗粒中告依春的含量

(1)抗病毒颗粒供试品溶液制备：取抗病毒颗粒，研细，精密称定4g，置于25ml量瓶中，加溶剂A20ml溶解，超声提取，所述超声提取所用的超声清洗器功率为400W，频率为80kH，提取时间为30分钟，加水至刻度，摇匀，离心，取上清液，过微孔滤膜(0.45μm)，取续滤液，即得。

(2)不含板蓝根阴性对照样品溶液制备：取阴性对照样品颗粒，研细，精密称定4g，置于25ml量瓶中，加溶剂A20ml溶解，超声提取，所述超声提取所用的超声清洗器功率为400W，频率为80kH，提取时间为30分钟，加水至刻度，摇匀，离心，取上清液，过微孔滤膜(0.45μm)，取续滤液，即得。

(3)对照品溶液的制备：取(R，S)-告依春对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含4μg的溶液，即得。

(4)色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶柱(250mm×4.6mm，5μm)为填充剂，以245nm作为检测波长，柱温为35℃，流动相流速1为0.8ml/分钟，流动相为甲醇-0.02％磷酸，甲醇和0.02％磷酸的混合比例为10∶90(v/v)；

三、实验结果

根据图10的结果表明不含板蓝根阴性对照无干扰。

实施例7

实验1)：线性关系考察

取(R，S)-告依春对照品5.88mg，置50ml量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品母液。精密量取对照品母液稀释得到浓度分别为29.40μg/ml、7.35μg/ml、3.675μg/ml、1.8375μg/ml、0.2297μg/ml系列对照品溶液，分别吸取该系列对照品溶液10μl，注入液相色谱仪中，按“实施例6色谱条件”测定。每份连续进样3次，取对照品峰面积及浓度的平均值进行计算，以浓度为横坐标X，峰面积为纵坐标Y，绘制标准曲线，得到线性方程Y＝372.124X+18.258，r＝1.0000。

图11结果表明，(R，S)-告依春在0.2297～29.40μg/ml浓度范围内，标准曲线呈良好的线性关系。

实验2)：精密度试验

取同一份(R，S)-告依春对照品溶液(3.675μg/ml)，按“实施例6色谱条件”测定，连续进样6次。

表3精密度试验结果

由表3测定数据可知(R，S)-告依春平均峰面积为1369.79，RSD值为0.13％，结果表明本法精密度良好。

实验3)：稳定性试验

取抗病毒颗粒样品(批号：1101006)，分别按供试品制备方法制成供试品溶液，分别在0h，3h，6h，9h，12h，18h，24h不同时间按“实施例6色谱条件”进样分析，由表4测定数据可知(R，S)-告依春平均峰面积分别为1253.33，RSD值分别为0.71％，表明供试品溶液在24h内稳定。

表4抗病毒颗粒样品(批号：1101006)稳定性试验结果

实验4)：重复性试验

取抗病毒颗粒样品(批号：1101006)6份，按照供试品溶液的制备，按“实施例6色谱条件”进样测定，由表5测定数据可知(R，S)-告依春平均含量分别为0.00210％，RSD值分别为0.56％，结果表明本法重复性良好。

表5抗病毒颗粒样品(批号：1101006)重复性试验结果

实验5)：加样回收率试验

取已知(R，S)-告依春含量的抗病毒颗粒样品(批号：1101006)9份，每份约2g，精密称定，每3份为一组，置25ml量瓶中；

第一组分别精密加入浓度为47.04μg/ml(S1)对照品溶液各0.8ml；

第二组分别精密加入对照品溶液S1各1ml；

第三组分别精密加入对照品溶液S1各1.2ml。

按供试品制备方法制备样品，并按“实施例6色谱条件”进样分析。

由表6测定数据可知(R，S)-告依春平均回收率为97.91％，RSD为1.17％。结果表明本方法具有良好的回收率，可用于含蔗糖抗病毒颗粒中(R，S)-告依春的含量测定。

表6抗病毒颗粒样品加样回收率试验

实施例8抗病毒颗粒供试品中(R，S)-告依春含量检测

(1)抗病毒颗粒供试品溶液制备：取抗病毒颗粒，研细，精密称定2g，置于25ml量瓶中，加30％甲醇20ml溶解，超声提取，所述超声提取所用的超声清洗器功率为400W，频率为80kH，提取时间为30分钟，加30％甲醇至刻度，摇匀，离心，取上清液，过微孔滤膜(0.45μm)，取续滤液，即得。

(2)对照品溶液的制备：取(R，S)-告依春对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含4μg的溶液，即得。

(3)色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶柱(250mm×4.6mm，5μm)为填充剂，以245nm作为检测波长，柱温为35℃，流动相流速为1.0ml/分钟，流动相为甲醇-0.02％磷酸，甲醇和0.02％磷酸的混合比例为10∶90(v/v)。

抗病毒颗粒供试品由四川光大制药有限公司提供的9g/袋含糖型抗病毒颗粒，批号为11101016，检测的结果为0.11mg/袋。

实施例9抗病毒颗粒供试品中(R，S)-告依春含量检测

(1)抗病毒颗粒供试品溶液制备：取抗病毒颗粒，研细，精密称定6g，置于25ml量瓶中，加70％甲醇20ml溶解，超声提取，所述超声提取所用的超声清洗器功率为400W，频率为80kH，提取时间为30分钟，加70％甲醇至刻度，摇匀，离心，取上清液，过微孔滤膜(0.45μm)，取续滤液，即得。

(2)对照品溶液的制备：取(R，S)-告依春对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含4μg的溶液，即得。

(3)色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶柱(250mm×4.6mm，5μm)为填充剂，以245nm作为检测波长，柱温为35℃，流动相流速为1.0ml/分钟，流动相为甲醇-0.02％磷酸，甲醇和0.02％磷酸的混合比例为10∶90(v/v)。

抗病毒颗粒供试品由四川光大制药有限公司提供的9g/袋含糖型抗病毒颗粒，批号为1105022，检测的结果为0.09mg/袋。

实施例10抗病毒颗粒供试品中(R，S)-告依春含量检测

(1)抗病毒颗粒供试品溶液制备：取抗病毒颗粒，研细，精密称定4g，置于25ml量瓶中，加水20ml溶解，超声提取，所述超声提取所用的超声清洗器功率为400W，频率为80kH，提取时间为30分钟，加水至刻度，摇匀，离心，取上清液，过微孔滤膜(0.45μm)，取续滤液，即得。

(2)对照品溶液的制备：取(R，S)-告依春对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含4μg的溶液，即得。

(3)色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶柱(250mm×4.6mm，5μm)为填充剂，以245nm作为检测波长，柱温为35℃，流动相流速为1.0ml/分钟，流动相为甲醇-0.02％磷酸，甲醇和0.02％磷酸的混合比例为10∶90(v/v)。

抗病毒颗粒供试品由四川光大制药有限公司提供的9g/袋含糖型抗病毒颗粒，批号为1105030，检测的结果为0.08mg/袋。

实施例11抗病毒颗粒供试品(1106045)中(R，S)-告依春含量检测

(1)抗病毒颗粒供试品(1106045)溶液制备：取抗病毒颗粒，研细，精密称定6g，置于25ml量瓶中，加水20ml溶解，超声提取，所述超声提取所用的超声清洗器功率为400W，频率为80kH，提取时间为15分钟，加水至刻度，摇匀，离心，取上清液，过微孔滤膜(0.45μm)，取续滤液，即得。

(2)对照品溶液的制备：取(R，S)-告依春对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含4μg的溶液，即得。

(3)色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶柱(250mm×4.6mm，5μm)为填充剂，以245nm作为检测波长，柱温为30℃，流动相流速为1.0ml/分钟，流动相为甲醇-0.02％磷酸，甲醇和0.02％磷酸的混合比例为10∶90(v/v)。

抗病毒颗粒供试品(1106045)由四川光大制药有限公司提供的9g/袋含糖型抗病毒颗粒，检测的结果为0.10mg/袋。

实施例12抗病毒颗粒供试品中(R，S)-告依春含量检测

(1)抗病毒颗粒供试品溶液制备：取抗病毒颗粒，研细，精密称定4g，置于25ml量瓶中，加水20ml溶解，超声提取，所述超声提取所用的超声清洗器功率为400W，频率为80kH，提取时间为45分钟，加水至刻度，摇匀，离心，取上清液，过微孔滤膜(0.45μm)，取续滤液，即得。

(2)对照品溶液的制备：取(R，S)-告依春对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含4μg的溶液，即得。

(3)色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶柱(250mm×4.6mm，5μm)为填充剂，以245nm作为检测波长，柱温为45℃，流动相流速为1.0ml/分钟，流动相为甲醇-0.02％磷酸，甲醇和0.02％磷酸的混合比例为10∶90(v/v)。

抗病毒颗粒供试品由四川光大制药有限公司提供的9g/袋含糖型抗病毒颗粒，批号为1106051，检测的结果为0.11mg/袋。

实施例13抗病毒颗粒供试品中(R，S)-告依春含量检测

(1)抗病毒颗粒供试品溶液制备：取抗病毒颗粒，研细，精密称定4g，置于25ml量瓶中，加水20ml溶解，超声提取，所述超声提取所用的超声清洗器功率为400W，频率为80kH，提取时间为30分钟，加水至刻度，摇匀，离心，取上清液，过微孔滤膜(0.45μm)，取续滤液，即得。

(2)对照品溶液的制备：取(R，S)-告依春对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含4μg的溶液，即得。

(3)色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶柱(250mm×4.6mm，5μm)为填充剂，以245nm作为检测波长，柱温为40℃，流动相流速为0.8ml/分钟，流动相为甲醇-0.02％磷酸，甲醇和0.02％磷酸的混合比例为10∶90(v/v)。

抗病毒颗粒供试品由四川光大制药有限公司提供的9g/袋含糖型抗病毒颗粒，批号为1106060，检测的结果为0.11mg/袋。

实施例14抗病毒颗粒供试品中(R，S)-告依春含量检测

(1)抗病毒颗粒供试品溶液制备：取抗病毒颗粒，研细，精密称定4g，置于25ml量瓶中，加水20ml溶解，超声提取，所述超声提取所用的超声清洗器功率为400W，频率为80kH，提取时间为30分钟，加水至刻度，摇匀，离心，取上清液，过微孔滤膜(0.45μm)，取续滤液，即得。

(2)对照品溶液的制备：取(R，S)-告依春对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含4μg的溶液，即得。

(3)色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶柱(250mm×4.6mm，5μm)为填充剂，以245nm作为检测波长，柱温为35℃，流动相流速为0.8ml/分钟，流动相为乙腈-水-磷酸-三乙胺，所述乙腈、水、磷酸和三乙胺的混合比例为8.5∶90.72∶0.73∶0.05(v/v)。

抗病毒颗粒供试品由四川光大制药有限公司提供的9g/袋含糖型抗病毒颗粒，批号为1107070，检测的结果为0.10mg/袋。

实施例15抗病毒颗粒供试品中(R，S)-告依春含量检测

(1)抗病毒颗粒供试品溶液制备：取抗病毒颗粒，研细，精密称定4g，置于25ml量瓶中，加水20ml溶解，超声提取，所述超声提取所用的超声清洗器功率为400W，频率为80kH，提取时间为30分钟，加水至刻度，摇匀，离心，取上清液，过微孔滤膜(0.45μm)，取续滤液，即得。

(2)对照品溶液的制备：取(R，S)-告依春对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含4μg的溶液，即得。

(3)色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶柱(250mm×4.6mm，5μm)为填充剂，以245nm作为检测波长，柱温为35℃，流动相流速为1.0ml/分钟，流动相为甲醇-0.02％磷酸，所述甲醇-0.02％磷酸中甲醇和0.02％磷酸的混合比例为10∶90(v/v)。

抗病毒颗粒供试品由四川光大制药有限公司提供的9g/袋含糖型抗病毒颗粒，批号为1109112，检测的结果为0.11mg/袋。

实施例16抗病毒颗粒供试品中(R，S)-告依春含量检测

(1)抗病毒颗粒供试品溶液制备：取抗病毒颗粒，研细，精密称定4g，置于25ml量瓶中，加水20ml溶解，超声提取，所述超声提取所用的超声清洗器功率为400W，频率为80kH，提取时间为30分钟，加水至刻度，摇匀，离心，取上清液，过微孔滤膜(0.45μm)，取续滤液，即得。

(2)对照品溶液的制备：取(R，S)-告依春对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含4μg的溶液，即得。

(3)色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶柱(250mm×4.6mm，5μm)为填充剂，以245nm作为检测波长，柱温为35℃，流动相流速为1.0ml/分钟，流动相为甲醇-0.02％磷酸，所述甲醇-0.02％磷酸中甲醇和0.02％磷酸的混合比例为7∶93(v/v)。

抗病毒颗粒供试品由四川光大制药有限公司提供的4g/袋无蔗糖抗病毒颗粒，批号为1101016，检测的结果为0.11mg/袋。

Claims (10)

1.一种抗病毒颗粒中告依春的含量测量方法，包括如下步骤：

(1)抗病毒颗粒供试品溶液制备：

取抗病毒颗粒，研细，精密称定2-6g，置于25ml量瓶中，加溶剂A20ml溶解，超声提取，所述超声提取所用的超声清洗器功率为400W，频率为80kH，提取时间为15-45分钟，加溶剂A至刻度，摇匀，离心，取上清液，过微孔滤膜(0.45μm)，取续滤液，即得；所述溶剂A选自水、30％甲醇、70％甲醇；

(2)对照品溶液的制备：取(R，S)-告依春对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含4μg的溶液，即得；

(3)色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶柱(250mm×4.6mm，5μm)为填充剂，以245nm作为检测波长，柱温为30-40℃，流速为0.8-1.0ml/分钟，流动相选自甲醇-水、甲醇-0.02％磷酸、乙腈-水-磷酸-三乙胺。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述抗病毒颗粒供试品溶液制备过程为：取抗病毒颗粒，研细，精密称定4g，置于25ml量瓶中，加水20ml溶解，超声提取，所述超声提取所用的超声清洗器功率为400W，频率为80kH，提取时间为30分钟，加水至刻度，摇匀，离心，取上清液，过微孔滤膜(0.45μm)，取续滤液，即得。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述色谱条件中，所述柱温为35℃。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述色谱条件中，所述流速为1.0ml/分钟。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述色谱条件中，所述流动相为甲醇-0.02％磷酸。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述色谱条件中，所述流动相优选为甲醇-0.02％磷酸，所述甲醇-0.02％磷酸中甲醇和0.02％磷酸的混合比例为7∶93或10∶90(v/v)。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述色谱条件中，所述流动相优选为甲醇-0.02％磷酸，所述甲醇-0.02％磷酸中甲醇和0.02％磷酸的混合比例为7∶93(v/v)。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述色谱条件为，以十八烷基硅烷键合硅胶柱(250mm×4.6mm，5μm)为填充剂，以245nm作为检测波长，柱温为35℃，流速为1.0ml/分钟，流动相为甲醇-0.02％磷酸，所述甲醇-0.02％磷酸中甲醇和0.02％磷酸的混合比例为7∶93或10∶90(v/v)。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述色谱条件优选为，以十八烷基硅烷键合硅胶柱(250mm×4.6mm，5μm)为填充剂，以245nm作为检测波长，柱温为35℃，流速为1.0ml/分钟，流动相为甲醇-0.02％磷酸，所述甲醇-0.02％磷酸中甲醇和0.02％磷酸的混合比例为10∶90(v/v)。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)抗病毒颗粒供试品溶液制备：取抗病毒颗粒，研细，精密称定4g，置于25ml量瓶中，加水20ml溶解，超声提取，所述超声提取所用的超声清洗器功率为400W，频率为80kH，提取时间为30分钟，加水至刻度，摇匀，离心，取上清液，过微孔滤膜(0.45μm)，取续滤液，即得；

(2)对照品溶液的制备：取(R，S)-告依春对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含4μg的溶液，即得；

(3)色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶柱(250mm×4.6mm，5μm)为填充剂，以245nm作为检测波长，柱温为35℃，流速为1.0ml/分钟，流动相为甲醇-0.02％磷酸，所述甲醇-0.02％磷酸中甲醇和0.02％磷酸的混合比例为10∶90(v/v)。

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