CN103616444B - 一种注射用七叶皂苷钠的分析检测方法 - Google Patents

一种注射用七叶皂苷钠的分析检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种注射用七叶皂苷钠的分析检测方法,通过建立注射用七叶皂苷钠标准指纹图谱,全面综合反映和控制注射用七叶皂苷钠的整体质量状况。其包括以下步骤:(1)注射用七叶皂苷钠标准指纹图谱的制备;(2)待测注射用七叶皂苷钠指纹图谱的制备;(3)待测注射用七叶皂苷钠质量分析。其中,步骤(1)和步骤(2)中指纹图谱制备的色谱条件为:色谱柱填充料为C18烷基硅烷键合硅胶,柱温30℃,流动相由体积比为60:40~70:30的磷酸溶液—乙腈溶液组成,流动相pH值为1.5~2.5,进样量为20μl,紫外检测波长为200nm~220nm。

Description

一种注射用七叶皂苷钠的分析检测方法
技术领域
[0001] 本发明涉及药物检测技术领域,具体涉及一种注射用七叶皂苷钠的分析检测方 法。
背景技术
[0002] 七叶皂苷钠是从娑罗子中提取所得的总皂苷,主要成分为七叶皂苷钠A、B、C和D, 还含有少量的七叶皂苷钠E、F。目前,七叶皂苷钠的检测方法主要有三氯化铁比色法和酸碱 滴定法,其是对七叶皂苷钠的总皂苷含量进行测定,无法全面反映总皂苷中各成分的种类、 数量和比例关系,产品质量控制不够全面。
发明内容
[0003] 针对上述问题,本发明提供了一种注射用七叶皂苷钠的分析检测方法,通过建立 注射用七叶皂苷钠标准指纹图谱,全面综合反映和控制注射用七叶皂苷钠的整体质量状 况。
[0004] 一种注射用七叶皂苷钠的分析检测方法,其特征在于:包括以下步骤:
[0005] (1)注射用七叶皂苷钠标准指纹图谱的制备;
[0006] (2)待测注射用七叶皂苷钠指纹图谱的制备;
[0007] (3)待测注射用七叶皂苷钠质量分析。
[0008] 步骤(1)和步骤(2)中指纹图谱制备的色谱条件为:色谱柱填充料为C18烷基硅烷 键合硅胶,柱温30 °C,流动相由体积比为60 :40~70 :30的磷酸溶液一乙腈溶液组成,流动 相pH值为1. 5~2. 5,进样量为20 μ 1,紫外检测波长为200nm~220nm〇
[0009] 其进一步特征在于:
[0010] 步骤(1)中注射用七叶皂苷钠标准指纹图谱的制备具体操作为:根据上述色谱条 件,对若干批不同批次的注射用七叶皂苷钠进行检测,对检测所得指纹图谱进行分析比较, 确定共有峰个数、出峰次序、相对保留时间和相对峰面积比值,共有峰共有6个,依次为E 峰、F峰、A峰、B峰、C峰、D峰,在共有峰中,以B峰作为参照峰,各共有峰相对保留时间范围 为:A 峰:0· 830~0· 850、B 峰:1、C 峰:1. 288~L 316、D 峰:1· 451~1· 500、E 峰:0· 530~0· 577、F 峰:0. 610~0. 652,各相对峰面积比值范围为A峰:1. 454~1. 713、B峰:1、C峰:0. 973~1. 419、 D 峰:0· 488~0· 561、E 峰:0· 047~0· 088、F 峰:0· 039~0· 084。
[0011] 所述步骤(3)中待测注射用七叶皂苷钠质量分析具体包括:①待测注射用七叶 皂苷钠指纹图谱所得共有峰个数、出峰次序与注射用七叶皂苷钠标准指纹图谱中的共有峰 个数、出峰次序一致,②待测注射用七叶皂苷钠指纹图谱所得相对保留时间、相对峰面积比 值包含在注射用七叶皂苷钠标准指纹图谱的相对保留时间、相对峰面积比值的范围之内, ③待测注射用七叶皂苷钠指纹图谱检测结果显示,理论板数按七叶皂苷钠A计应不低于 5000,七叶皂苷钠A、B分离度应彡1. 5。
[0012] 其更进一步特征在于:
[0013] 所述步骤(1)中用于制备注射用七叶皂苷钠标准指纹图谱对照品以及步骤(2)中 用于制备待测注射用七叶皂苷钠指纹图谱供试品的浓度为1~5mg/ml、溶剂为甲醇;
[0014] 所述紫外检测波长为210nm或215nm ;
[0015] 所述流动相ρΗ2· 1~2. 2,磷酸溶液一乙腈溶液体积比为67:33。
[0016] 注射用七叶皂苷钠标准指纹图谱的建立能够全面反映注射用七叶皂苷钠总皂苷 的各成分,通过待测注射用七叶皂苷钠指纹图谱相关数据(即:共有峰数量、出峰次序、相对 保留时间、相对峰面积比值)与注射用七叶皂苷钠标准指纹图谱的相关参数进行对比,从而 快速、全面地对注射用七叶皂苷钠中七叶皂苷钠的各成分进行质量分析,确保注射用七叶 皂苷钠的产品质量控制更加全面、稳定。
附图说明
[0017] 图1为注射用七叶皂苷钠标准指纹图谱。
[0018] 图2为注射用七叶皂苷钠(批号:120404)指纹图谱。
具体实施方式
[0019] 实施例中所用仪器、试剂、药品:
[0020] 高效液相色谱仪:Agi lent 1200。
[0021] 色谱柱:Hypersil ODS,250*4. 6nm, 5 μ m。
[0022] 乙腈:Spectrum Chemical MFG Corp.,批号 3AL0038,色谱纯。
[0023] 甲醇:Spectrum Chemical MFG Corp.,批号 ZY0542 ,色谱纯。
[0024] 磷酸:国药集团化学试剂有限公司,批号T20110713,纯度:分析纯。
[0025] 注射用七叶皂苷钠:下述实施例所涉及的注射用七叶皂苷钠均为自制的不同批号 无菌冻干粉针。
[0026] 注射用七叶皂苷钠标准指纹图谱制备
[0027] 流动相为乙腈-磷酸溶液(33:67),pH为2. 1,磷酸溶液质量分数为0. 42%,流速 lml/min,检测波长为220nm,色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂,柱温:30°C,进样量为 2.5mg/ml,20 μ1〇
[0028] 0. 42%质量分数的磷酸溶液的配制:取85%磷酸5. 5ml,用水稀释至1000ml。
[0029] 供试品溶液制备:取注射用七叶皂苷钠适量,加甲醇溶解并稀释制成每1ml含 2. 5mg的溶液。
[0030] 取20 μ 1供试品溶液注入液相色谱仪,记录色谱图。
[0031] 注射用七叶皂苷钠标准指纹图谱如图1,共有峰共有6个,其峰形、出峰次序如图1 所示,依次为E峰、F峰、A峰、B峰、C峰、D峰。
[0032] 在共有峰中,以B峰作为参照峰,各共有峰相对保留时间范围为:A峰: 0· 830~0· 850、B 峰:1、C 峰:1· 288~1· 316、D 峰:1· 451~1· 500、E 峰:0· 530~0· 577、F 峰: 0. 610~0. 652,各相对峰面积比值范围为 A 峰:1.454~1. 713、B 峰:1、C 峰:0. 973~1.419、D 峰:0· 488~0· 561、Ε 峰:0· 047~0· 088、F 峰:0· 039~0· 084。
[0033] 理论板数按七叶皂苷钠A计应不低于5000,七叶皂苷钠A、B分离度应彡1. 5。
[0034] 实施例1
[0035] 色谱条件:流动相为乙腈-磷酸溶液(33:67),pH为2. 1,磷酸溶液质量分数 为0. 42%,流速lml/min,检测波长为220nm,色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂,柱温: 30 °C,进样量为 2. 5mg/ml,20 μ 1。
[0036] 供试品溶液制备:取注射用七叶皂苷钠(批号:120404)适量,加甲醇溶解并稀释 制成每1ml含2. 5mg的溶液。
[0037] 取20 μ 1供试品溶液注入液相色谱仪,记录色谱图。
[0038] 待测注射用七叶皂苷钠指纹图谱(图2)和注射用七叶皂苷钠标准指纹图谱(图1) 进行比较,共有峰数量相同,共有6个共有峰,出峰次序相同,相对保留时间:A峰:0. 849、B 峰:1、C 峰:1. 288、D 峰:1. 451、E 峰:0. 576、F 峰:0. 649,相对峰面积比值:A 峰:1. 454、 B峰:1、C峰:0. 987、D峰:0. 546、E峰:0. 079、F峰:0. 084,其相对保留时间、相对峰面 积比值包含在注射用七叶皂苷钠标准指纹图谱的相对保留时间、相对峰面积比值的范围之 内,且理论板数按七叶皂苷钠A计不低于5000,七叶皂苷钠A、B分离度> 1. 5,因此,待测注 射用七叶皂苷钠的各项有效成分的种类、数量和比例关系符合质量要求。
[0039] 实施例2
[0040] 色谱条件:流动相为乙腈-磷酸溶液(30:70),pH为2.5,:磷酸溶液质量分数 为0. 42%,流速lml/min,检测波长为200nm,色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂,柱温: 30 °C,进样量为 lmg/ml,20 μ 1。
[0041] 供试品溶液制备:取注射用七叶皂苷钠(批号:110102)适量,加甲醇溶解并稀释 制成每1ml含Img的溶液。
[0042] 取20 μ 1供试品溶液注入液相色谱仪,记录色谱图。
[0043] 待测注射用七叶皂苷钠指纹图谱和注射用七叶皂苷钠标准指纹图谱(图1)进行比 较,共有峰数量相同,共有6个峰,出峰次序也相同,相对保留时间:A峰:0. 843、B峰:1、C 峰:1. 289、D 峰:1. 450、E 峰:0. 575、F 峰:0. 648,相对峰面积比值:A 峰:1. 454、B 峰:1、 C峰:0. 986、D峰:0. 547、E峰:0. 086、F峰:0. 065,其相对保留时间、相对峰面积比值包含 在注射用七叶皂苷钠标准指纹图谱相对保留时间、相对峰面积比值的范围之内,并且理论 板数按七叶皂苷钠A计不低于5000,七叶皂苷钠A、B分离度> 1. 5,因此,待测注射用七叶 皂苷钠的各项有效成分的种类、数量和比例关系符合质量要求。
[0044] 实施例3
[0045] 色谱条件:流动相为乙腈-磷酸溶液(40:60),pH为1.5,磷酸溶液质量分数 为0. 42%,流速lml/min,检测波长为220nm,色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂,柱温: 30 °C,进样量为 5mg/ml,20 μ 1。
[0046] 供试品溶液制备:取注射用七叶皂苷钠(批号:120406)适量,加甲醇溶解并稀释 制成每1ml含5mg的溶液。
[0047] 取20 μ 1供试品溶液注入液相色谱仪,记录色谱图。
[0048] 待测注射用七叶皂苷钠指纹图谱和注射用七叶皂苷钠标准指纹图谱(图1)进行比 较,共有峰数量相同,共有6个峰,出峰次序亦相同,相对保留时间:A峰:0. 838、B峰:1、C 峰:1. 304、D 峰:1. 456、Ε 峰:0· 574、F 峰:0· 630,相对峰面积比值:A 峰:1. 521、Β 峰:1、C 峰:1. 003、D峰:0. 522、E峰:0. 048、F峰:0. 076,其相对保留时间、相对峰面积比值包含在 注射用七叶皂苷钠标准指纹图谱相对保留时间、相对峰面积比值的范围之内,且理论板数 按七叶皂苷钠A计不低于5000,七叶皂苷钠A、B分离度> 1. 5,因此,待测注射用七叶皂苷 钠的各项有效成分的种类、数量和比例关系符合质量要求。
[0049] 实施例4
[0050] 色谱条件:流动相为乙腈-磷酸溶液(25:50),pH为2. 2,磷酸溶液质量分数 为0. 42%,流速lml/min,检测波长为215nm,色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂,柱温: 30 °C,进样量为 2. 5mg/ml,20 μ 1。
[0051] 供试品溶液制备:取注射用七叶皂苷钠(批号:120108)适量,加甲醇溶解并稀释 制成每1ml含2. 5mg的溶液。
[0052] 取20 μ 1供试品溶液注入液相色谱仪,记录色谱图。
[0053] 待测注射用七叶皂苷钠指纹图谱和注射用七叶皂苷钠标准指纹图谱(图1)进行比 较,共有峰数量相同,共有6个峰,而且出峰次序也相同,相对保留时间:A峰:0. 843、B峰: 1、C 峰:1. 308、D 峰:1. 457、Ε 峰:0. 574、F 峰:0. 637,相对峰面积比值:A 峰:1. 518、Β 峰: 1、C峰:0. 996、D峰:0. 533、E峰:0. 052、F峰:0. 073,其相对保留时间、相对峰面积比值包 含在注射用七叶皂苷钠标准指纹图谱相对保留时间、相对峰面积比值的范围之内,理论板 数按七叶皂苷钠A计不低于5000,七叶皂苷钠A、B分离度> 1. 5,因此,待测注射用七叶皂 苷钠的各项有效成分的种类、数量和比例关系符合质量要求。
[0054] 实施例5本发明指纹图谱检测方法的方法学验证
[0055] 1、重复性试验
[0056] 取同一批次的注射用七叶皂苷钠(批号:110119),按实施例1中的操作,平行制备 5份供试品,采用实施例1中的色谱条件,分别进样,进行分析。
[0057] 以B峰的保留时间和峰面积作为参照,计算其他5个共有峰的相对保留时间(RRT) 和相对峰面积(RA),其结果见表1。
[0058] 表1重复性试验结果
[0059]
Figure CN103616444BD00061
[0060] 注:相对保留时间(RRT)为各指纹峰的保留时间与参考峰B峰的保留时间的比值, 相对峰面积(RA)为各指纹峰的峰面积与参考峰B峰的峰面积的比值。
[0061] 表1结果显示,相对保留时间的RSD〈2%,相对峰面积的RSD〈2%,重复性良好。
[0062] 2、精密度试验
[0063] 取同一批次的注射用七叶皂苷钠(批号:120408),按照实施例1的方法制备供试 品溶液,对同一供试品溶液连续进样5次,并按照实施例1中的色谱条件进行分析。
[0064] 以B峰的保留时间和峰面积作为参照,计算其他5个共有指纹峰的相对保留时间 (RRT)和相对峰面积(RA),检测结果见表2。
[0065] 表2精密度试验结果
[0066]
Figure CN103616444BD00071
[0067] 表2结果显示,相对保留时间的RSD〈2%,相对峰面积的RSD〈2%,精密度良好。
[0068] 3、稳定性试验
[0069] 取同一批次的注射用七叶皂苷钠(批号:120812),按照实施例1的方法制备供试 品溶液,对同一供试品溶液分别在0小时、3小时、6小时、9小时、12小时和24小时进样,并 按照实施例1中的色谱条件进行分析。
[0070] 以B峰的保留时间和峰面积作为参照,计算其他5个共有指纹峰的相对保留时间 (RRT)和相对峰面积(RA),检测结果见表3。
[0071] 表3稳定性试验结果
[0072]
Figure CN103616444BD00072
[0073] 表3结果显示,相对保留时间的RSD〈2%,相对峰面积的RSD〈2%,供试品溶液在24 小时内基本稳定。

Claims (1)

1. 一种注射用七叶皂苷钠的分析检测方法,其特征在于:包括以下步骤: (1) 注射用七叶皂苷钠标准指纹图谱的制备; (2) 待测注射用七叶皂苷钠指纹图谱的制备; (3) 待测注射用七叶皂苷钠质量分析; 步骤(1)和步骤(2)中指纹图谱制备的色谱条件为:色谱柱填充料为C18烷基硅烷 键合硅胶,柱温30°C,流动相由磷酸溶液一乙腈溶液组成,磷酸溶液一乙腈溶液体积比为 67:33,流动相pH值为pH2. 1~2. 2,进样量为20y1,紫外检测波长为210nm或215nm;步 骤(1)中注射用七叶皂苷钠标准指纹图谱的制备具体操作为:根据上述色谱条件,对若干 批不同批次的注射用七叶皂苷钠进行检测,对检测所得指纹图谱进行分析比较,确定共有 峰个数、出峰次序、相对保留时间和相对峰面积比值,共有峰共有6个,依次为E峰、F峰、A 峰、B峰、C峰、D峰,在共有峰中,以B峰作为参照峰,各共有峰相对保留时间范围为:A峰: 0• 830~0. 850、B峰:1、C峰:1. 288~1. 316、D峰:1. 451~1. 500、E峰:0• 530~0. 577、F峰: 0. 610~0. 652,各相对峰面积比值范围为A峰:1. 454~1. 713、B峰:1、C峰:0. 973~1. 419、D 峰:0. 488~0. 561、E峰:0. 047~0. 088、F峰:0. 039~0. 084 ;所述步骤(3)中待测注射用七叶 皂苷钠质量分析具体包括:①待测注射用七叶皂苷钠指纹图谱所得共有峰个数、出峰次序 与注射用七叶皂苷钠标准指纹图谱中的共有峰个数、出峰次序一致;②待测注射用七叶皂 苷钠指纹图谱所得相对保留时间、相对峰面积比值包含在注射用七叶皂苷钠标准指纹图谱 的相对保留时间、相对峰面积比值的范围之内;③待测注射用七叶皂苷钠指纹图谱检测结 果显示理论板数按七叶皂苷钠A计应不低于5000,七叶皂苷钠A、B分离度应多1. 5 ;所述步 骤(1)中用于制备注射用七叶皂苷钠标准指纹图谱对照品以及步骤(2)中用于制备待测注 射用七叶皂苷钠指纹图谱供试品的浓度为1~5mg/ml、溶剂为甲醇。
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