CN103245737A

CN103245737A - 抗病毒口服液的检测方法

Info

Publication number: CN103245737A
Application number: CN2013101350506A
Authority: CN
Inventors: 邢婵娟; 沈熊; 汪玉军; 李东明
Original assignee: HANGZHOU L-TONJUN PHARMACEUTICAL Co Ltd
Current assignee: HANGZHOU L-TONJUN PHARMACEUTICAL Co Ltd
Priority date: 2013-04-17
Filing date: 2013-04-17
Publication date: 2013-08-14

Abstract

本发明公开了一种抗病毒口服液的检测方法。该方法采用高效液相色谱法检测（R,S）-告依春的含量。该检测方法可以对抗病毒口服液的主要成分的含量进行有效检测，弥补了原检测方法的不足，提高了产品的质量和疗效，也有利于管理部门对产品的监测。

Description

抗病毒口服液的检测方法

技术领域

本发明涉及一种抗病毒口服液的检测方法，属于制药技术领域。

背景技术

抗病毒口服液是收载于药品标准的药物，由板蓝根、连翘、知母、芦根、广藿香、地黄、石菖蒲、郁金、石膏等九味中药制成的口服溶液剂，具有清热祛湿，凉血解毒的功能，用于风热感冒，流感等病毒感染疾病。现有的抗病毒口服液的检测方法过于简单，主要是对板蓝根的定性检查，而不具备对其主要药物成分的含量的定量检测，使得现有的抗病毒口服液的检测方法不够完善，检测结果不够准确，影响药物的疗效。为了更进一步保证该产品的质量及更有利于对该产品质量的监督、管理，应对该产品中的检测方法进行改进，从而更进一步保证该产品的质量和疗效。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种抗病毒口服液的检测方法。该检测方法可以对抗病毒口服液的主要药物成分的含量进行有效定量检测，弥补了原检测方法的不足，提高了产品的质量和疗效，也有利于管理部门对产品的监测。

为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案如下：一种抗病毒口服液的检测方法，该方法采用高效液相色谱法检测（R,S）-告依春的含量。

上述的抗病毒口服液的检测方法中，该方法具体包括以下步骤；

色谱条件；采用YMC C-18柱，流动相：以甲醇为流动相A，以0.01%磷酸溶液为流动相B梯度洗脱

流量为1ml/min；柱温为30℃；检测波长为236nm；进样量为10μl；

（R,S）-告依春对照品的确定；将中国药品生物制品检定研究院生产的批号为111753-201103的R,S-告依春确定为对照品；

对照品溶液的制备；取（R，S）--告依春适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含(R，S)—告依春0.02㎎的溶液,即得。

供试品溶液的制备；精密量取抗病毒口服液25ml，用乙酸乙酯振摇提取6次，每次25ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇溶解，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每1ml含板蓝根以（R，S）--告依春计，不得少于25μg。

前述的抗病毒口服液的检测方法中，所述的抗病毒口服液，采用板蓝根129g、石膏57g、芦根61g、地黄32g、郁金25g、知母25g、石菖蒲25g、广藿香29g和连翘46g制成1000ml。

前述的抗病毒口服液的检测方法中，所述抗病毒口服液的该制备方法的具体步骤是，称取板蓝根、石膏、芦根、地黄、郁金、知母、石菖蒲、广藿香、连翘九味药材，加水煎煮二次；第一次煎煮1.5小时，第二次煎煮1小时20分钟，滤过，滤液合并，浓缩至200ml，加95%的乙醇使含醇量为70%，静置，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至适量，将浸膏加水适量，用氢氧化钠调节PH后冷藏，取上清液加入蜂蜜，蔗糖，挥发油，挥发油乳液，抑菌剂；用氢氧化钠调节PH，最后加水至1000ml，混匀、滤过、灌封、灭菌，得到抗病毒口服液。

与现有技术相比，本发明相对于抗病毒口服液的原有检测方法，增加了板蓝根中主要药物成分（R,S）-告依春的定量检测，使得抗病毒口服液中的主要药物成分的含量得到精确检测，且该检测方法具有准确度高、稳定性好、精密度高、回收率好、检测速度快的特点，弥补了原检测方法的不足，提高了产品的质量和疗效，也有利于管理部门对产品的监测。

稳定性试验：取同一供试液，分别于0h，1h ,4h,8h,24h,48h进样测定，记录峰面积，RSD为1.58%，见表1

表1 稳定性试验表

时间（h）	0	1	2	4	8	24	RSD（%）
								峰面积	3445659	3449500	3401098	3398545	3458792	3389784	1.58%

从上表可以得出，同一供试液不同时间测得的峰面积的RSD只有1.58%，表明本发明的稳定性优越。

精密度试验：取同一供试品，连续进样6次，记录峰面积，RSD为1.04%，见表2

表2 精密度试验表

进样次数	1	2	3	4	5	6	RSD（%）
								峰面积	3445659	3447455	3448865	348987	3412473	3398752	1.04%

从上表可以得出，同一供试液不同次数测得的峰面积的RSD只有1.04%，表明本发明的检测结构精密度很高。

加样回收试验：精密量取（R,S）-告依春对照品配成浓度为0.02mg/ml的溶液，取抗病毒口服液（批号：20121201）精密量取25ml5份，于1-5份中分别加入1ml，2ml，2.5ml，3ml，3.5ml对照品溶液，以下操作同制备供试品溶液项，制得5份供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，结果平均回收率100.4%，RSD为2.58%，因此本发明还具有优越的回收率。

线性范围试验：标准曲线制备；精密称取（R,S）-告依春对照品20mg，置20ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；用甲醇配成浓度为0.001,0.005,0.02,0.05,0.1,0.2,0.3mg/ml的对照品溶液，精密吸取各对照品溶液10μl注入液相色谱仪，测定，记录（R,S）-告依春值的峰面积，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；记录峰面积，（R,S）-告依春在0.01-3μg范围内峰面积X与浓度Y线性关系良好，见下表和图1。

进样量（μg）	0.01	0.05	0.20	0.50	1.01	2.02	3.06
								峰面积	64700	331466	1301527	3154059	6672711	12835470	19625905

回归方程Y=6398922X+21889 r为0.9998

与此同时，本发明的检测步骤、使用的药剂、检测方法中的参数选择都是申请人经过反复试验、比较、筛选、总结得到的，是上述众多因素的协同作用才得到本发明的有益效果，下面列出本发明的一部分筛选过程：

抗病毒口服液成分复杂，且含有蔗糖、蜂蜜、防腐剂等物质，申请人曾分别使用石油醚、氯仿、乙酸乙酯作为提取溶剂，结合药典特征图谱检测的方法，最终确定以乙酸乙酯提取的方法制备样品，使（R,S）-告依春的分离较好。

申请人试验中在色谱条件的选择中采用了A法：甲醇-0.02%磷酸溶液（7:93）恒流比，检测波长为245nm；以及B法：乙腈为流动相A,0.01%磷酸溶液为流动相B,进行梯度洗脱检测（见下表3），检测波长：236nm；；以及C法甲醇为流动相A,以0.01%磷酸溶液为流动相B,进行梯度洗脱检测（见下表4），检测波长：236nm，对比了三种方法的试验条件，最终确定甲醇为流动相A,以0.01%磷酸溶液为流动相B,进行梯度洗脱检测（见下表5），该法（C法）分离度，准确度均优于其他两法，能满足含量测定的需求，另根据图谱的显示，采用B法检测，进完一针至少要1个半小时，对于正常的检测来说，这个耗时太长了；采用本发明的检测方法（C法），进完一针最多只需1个小时，大大减少了检测时间；也说明本发明的检测方法明显优于B法。

表3

时间（分钟）	流动相A（%）	流动相B（%）
			0～22	7→18	93→82
22～29	18	82
			29～31	18→23	82→77
31～40	23	77
			40～53	23→40	77→60
53～60	40	60
			60～65	40→7	60→93

[0034] 表4

时间（分钟）	流动相A（%）	流动相B（%）
			0～18	10→20	90→80
18～30	20	80
			30～40	20→30	80→70

表5

附图说明

图1是抗病毒口服液线性关系图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明。

实施例：

一种抗病毒口服液的检测方法，该方法采用高效液相色谱法检测（R,S）-告依春的含量。该方法具体包括以下步骤；

仪器与试药：岛津LC-20A高效液相色谱仪，四元低压泵，UV检测器，YMC C-18柱（4.6mm×25cm，5μm）。

试药与试剂：（R,S）-告依春对照品（中国药品生物制品检定研究院，批号：111753-201103）；

抗病毒口服液（杭州老桐君制药有限公司，批号： 20121201,20121202,20121203）；

乙腈（色谱纯），甲醇（色谱纯），水（纯化水），其他试剂为分析纯。

色谱条件；采用YMC C-18柱（4.6mm×25cm，5μm），流动相：以甲醇为流动相A，以0.01%磷酸溶液为流动相B梯度洗脱

流量为1ml/min；柱温为30℃；检测波长为236nm；进样量为10μl；

（R,S）-告依春对照品的确定；将中国药品生物制品检定研究院生产的批号为111753-201103的（R,S）-告依春确定为对照品；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每1ml含板蓝根以（R，S）--告依春计，不得少于25μg。

前述抗病毒口服液的该制备方法的具体步骤是，称取板蓝根、石膏、芦根、地黄、郁金、知母、石菖蒲、广藿香、连翘九味药材，加水煎煮二次；第一次煎煮1.5小时，第二次煎煮1小时20分钟，滤过，滤液合并，浓缩至200ml，加95%的乙醇使含醇量为70%，静置，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至适量，将浸膏加水适量，用氢氧化钠调节PH后冷藏，取上清液加入蜂蜜，蔗糖，挥发油，挥发油乳液，抑菌剂；用氢氧化钠调节PH，最后加水至1000ml，混匀、滤过、灌封、灭菌，得到抗病毒口服液。

Claims

1.抗病毒口服液的检测方法，其特征在于：该方法采用高效液相色谱法检测R,S-告依春的含量。

2.根据权利要求1所述的抗病毒口服液的检测方法，其特征在于：该方法具体包括以下步骤；

流量为1ml/min；柱温为30℃；检测波长为236nm；进样量为10μl；

对照品溶液的制备；取（R，S）--告依春适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含(R，S)—告依春0.02㎎的溶液,即得；

本品每1ml含板蓝根以（R，S）--告依春计，不得少于25μg。

3.根据权利要求1或2所述的抗病毒口服液的检测方法，其特征在于：所述的抗病毒口服液，采用板蓝根129g、石膏57g、芦根61g、地黄32g、郁金25g、知母25g、石菖蒲25g、广藿香29g和连翘46g制成1000ml。

4.根据权利要求3所述的抗病毒口服液的检测方法，其特征在于：所述抗病毒口服液的该制备方法的具体步骤是，称取板蓝根、石膏、芦根、地黄、郁金、知母、石菖蒲、广藿香、连翘九味药材，加水煎煮二次；第一次煎煮1.5小时，第二次煎煮1小时20分钟，滤过，滤液合并，浓缩至200ml，加95%的乙醇使含醇量为70%，静置，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至适量，将浸膏加水适量，用氢氧化钠调节PH后冷藏，取上清液加入蜂蜜，蔗糖，挥发油，挥发油乳液，抑菌剂；用氢氧化钠调节PH，最后加水至1000ml，混匀、滤过、灌封、灭菌，得到抗病毒口服液。