CN104535513A - 一种九节茶提取物及其制剂的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种九节茶提取物及其制剂的检测方法,包括如下步骤:1)对照品溶液的制备;2)标准曲线的制备:量取对照品溶液,测定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线;3)供试品溶液的制备;4)量取供试品溶液,测定吸光度,由标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量,计算,即得总酚的含量;5)量取供试品溶液,测定吸光度,由标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量,计算,即得不被吸附的多酚的含量;6)供试品中鞣质含量的计算。本发明能很好地控制九节茶提取物及其制剂的质量,进一步提高了其质量控制标准,保证其质量的稳定、均一、可控。该方法进一步提高了鞣质的提取效率和结果的准确度,节省了检验工时。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药材提取物及其制剂的检测分析方法,具体涉及一种九节茶提取物及其制剂的检测方法,属于药物分析技术领域。
背景技术
九节茶又名接骨金粟兰、九节花、九节风等,为金粟兰科植物草珊瑚Sarcandra glabra(Thunb.)Nakai的干燥地上部分,主要分布于我国长江以南的广东、广西、江西、福建、湖南、浙江等省区,为多年生常绿草本或亚灌木植物。九节茶的药用历史悠久,历代医书都有记载其广泛的药用价值。它具有清热凉血、消炎止痛、活血消斑、祛风除湿、舒筋活络等功效,用于流行性感冒、风热感冒、咽喉炎、肺炎、菌痢、急性胃肠炎、阑尾炎、疮疡脓肿、蜂窝织炎等。
九节茶含酚类、鞣质、黄酮苷、香豆素、有机酸、内酯等成分,其中鞣质(tannins)又称单宁,是广泛存在于植物体内一类结构比较复杂的多元酚类化合物。以前对鞣质的研究较少,多认为是无用的杂质将其去除,近年来,随着分析、分离手段的进步,逐步发现鞣质具有抑制脂质过氧化、抗菌、抗病毒、抗肿瘤等多种药理活性,使其在临床应用中日益受到重视,并且对鞣质的含量测定方法提出了更高的要求。目前,关于九节茶相关制剂中异嗪皮啶、迷迭香酸等成分的含量测定有较多报道,虽也有关于该制剂中鞣质含量测定的文献报道,但采用的多是《中国药典》2010年版一部收载的鞣质含量测定方法。鞣质的含量测定方法有干酪素法、皮粉法、高锰酸钾法、络合滴定法等,其中最常用的是干酪素法。干酪素法是《中国药典》2010年版一部收载的鞣质的含量测定方法,但该测定法中对所使用的试剂“干酪素”未作明确规定,不同生产厂家生产的干酪素以及同一厂家生产的不同批次的干酪素均对鞣质的含量测定结果的影响很大,导致测定结果的重复性差、准确度低,从而影响到产品的质量可控性。此外,该测定方法中供试品溶液制备时需放置过夜,操作用时长,鞣质提取不完全,也影响到测定结果的准确性。
发明内容
针对现有技术的不足,本发明的目的旨在提供一种九节茶提取物及其制剂的检测方法,上述检测方法具有可操作性强、重复性好、准确度高、操作用时短的特点,上述检测方法能很好地控制九节茶提取物及其制剂的质量,进一步提高了其质量控制标准,保证其质量的稳定、均一、可控。同时,该方法进一步提高了鞣质的提取效率和结果的准确度,节省了检验工时。
为实现上述目的,本发明采用如下技术方案:
一种九节茶提取物及其制剂的检测方法,其特征在于,包括如下步骤(以下步骤应避光操作):
1)对照品溶液的制备:精密称取没食子酸对照品50mg,置100ml棕色量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,精密量取5ml,置50ml棕色量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,即得对照品溶液,每1ml对照品溶液中含没食子酸0.05mg;
2)标准曲线的制备:精密量取对照品溶液0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml,分别置25ml棕色量瓶中,各加入磷钼钨酸试液1ml,再分别加水11.5ml、11ml、10ml、9ml、8ml、7ml,用浓度为29%的碳酸钠溶液稀释至刻度,摇匀,放置30分钟以相应的试剂为空白,按照紫外-可见分光光度法,在760nm的波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线;
3)供试品溶液的制备:取定量的九节茶提取物或以九节茶提取物制成的固体制剂粉末,精密称定,置具塞锥形瓶中,加水250ml,称定重量,经过提取,放冷,再称定重量,用水补足减失的重量,摇匀,静置使固体物沉淀,滤过,弃去初滤液50ml,精密量取续滤液20ml,置100ml棕色量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,即得供试品溶液。
4)供试品溶液中总酚的测定:精密量取供试品溶液2ml,置25ml棕色量瓶中,加入磷钼钨酸试液1ml,加水10ml,用浓度为29%的碳酸钠溶液稀释至刻度,摇匀,放置30分钟以相应的试剂为空白,按照紫外-可见分光光度法,在760nm的波长处测定吸光度,由步骤2)的标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量(mg),计算,即得总酚的含量;
5)供试品溶液中不被吸附的多酚的测定:精密量取供试品溶液25ml,加至已盛有0.6g干酪素极细粉的100ml具塞锥形瓶中,密塞,置30℃水浴中保温1小时,时时振摇,取出,放冷,摇匀,滤过,弃去初滤液,精密量取续滤液2ml,置25ml棕色量瓶中,加入磷钼钨酸试液1ml,加水10ml,用浓度为29%的碳酸钠溶液稀释至刻度,摇匀,放置30分钟以相应的试剂为空白,按照紫外-可见分光光度法,在760nm的波长处测定吸光度,由步骤2)的标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量(mg),计算,即得不被吸附的多酚的含量;
6)供试品中鞣质含量的计算:根据供试品溶液稀释倍数分别计算出供试品中的总酚量和不被吸附的多酚量,再按下式计算供试品中鞣质的含量:鞣质含量=总酚量-不被吸附的多酚量。
所述九节茶提取物或以九节茶提取物制成的固体制剂粉末是指以金粟兰科植物草珊瑚Sarcandra glabra(Thunb.)Nakai的干燥地上部分为原料,经水提乙醇沉淀、干燥后得到的提取物,或所得提取物通过加入一些辅料制成颗粒剂、胶囊剂、片剂等固体制剂经粉碎后得到的粉末。
实现本发明的目的还可以通过采取如下技术方案达到:
作为优选,在步骤5)中,所述的干酪素极细粉是指能全部通过八号筛,并含能通过九号筛不少于95%的干酪素粉末。
作为优选,在步骤3)中,所述的九节茶提取物及其制剂的检测方法粉末取样量为0.25g。
作为优选,在步骤3)中,所述的提取方法为加热回流提取或加热超声处理。
作为优选,在步骤3)中,加热回流提取的时间为0.5-1小时。
作为优选,在步骤3)中,加热超声处理的时间为1-2小时。
与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:
1.本发明首次建立了一种能准确测定九节茶提取物及其制剂中鞣质的含量测定方法,该方法能很好地控制九节茶提取物及其制剂的质量,进一步提高了其质量控制标准,保证其质量的稳定、均一、可控。
2.《中国药典》2010年版一部收载的鞣质的含量测定方法采用干酪素法,本发明通过大量创造性的实施例发现该测定法中所使用的试剂“干酪素”对鞣质的含量测定结果影响很大。采用不同生产厂家生产的干酪素以及同一厂家生产的不同批次的干酪素对多批九节茶提取物及其制剂分别进行了鞣质的含量测定,结果同一批九节茶提取物及其制剂分别采用不同生产厂家生产的干酪素以及同一厂家生产的不同批次的干酪素其鞣质的含量测定结果偏差很大,进而发现是由于“干酪素”的粒度差异造成了测定结果的偏差大,使用粒度为“极细粉”的干酪素时,测定结果明显高于使用粒度为“中粉”的干酪素。为了进一步确定干酪素粒度与鞣质的含量测定结果的相关性,将原厂家生产的粒度为中粉的干酪素粉碎成极细粉后,与粉碎前作了对比研究,结果也表明当干酪素粒度为“极细粉”时,样品的鞣质的含量测定结果明显高于“中粉”,且测定结果重复性很好。原因是干酪素在该测定法中的作用是选择性地吸附鞣质类成分,起到定量反应的作用,其吸附作用强弱直接影响到供试品中鞣质的含量测定结果的准确性。由于“鞣质含量=总酚量-不被吸附的多酚量”,而不同生产厂家生产的干酪素其粒度差异较大,干酪素的吸附能力取决于其粒度大小,粒度小者比表面积大,对供试品中的鞣质吸附完全,供试品鞣质的含量测定结果准确度高。干酪素粒度大者其比表面积小,吸附作用弱,使不被吸附的多酚含量偏高,从而导致供试品鞣质的含量测定结果偏低。《中国药典》2010年版一部收载的鞣质的含量测定方法中对所使用的试剂“干酪素”未作明确规定,针对该方法中的不足之处,本发明中建立的方法将干酪素粒度明确为“极细粉”,新建立的方法重复性好、准确度高,提高了九节茶提取物及其制剂质量的可控性。
3.《中国药典》2010年版一部收载的鞣质含量测定方法中供试品溶液制备时需放置过夜,操作用时长,鞣质提取不完全,本发明供试品溶液的制备采用加热回流法或加热超声法代替供试品的静置过夜,提高了鞣质的提取效率和结果的准确度,节省了检验工时。
综上所述,本发明建立的九节茶提取物及其制剂中鞣质的含量测定方法具有可操作性强、重复性好、准确度高、操作用时短等优点,方法能很好地控制九节茶提取物及其制剂的质量,进一步提高了其质量控制标准,保证其质量的稳定、均一、可控。为达到本发明的目的,发明中还对九节茶提取物及其制剂中鞣质的含量测定方法进行了重复性、中间精密度、加样回收率等方法学验证试验,试验结果表明,该方法重复性好、准确度高。此外,本发明中建立的方法对其他药材、药材提取物及其制剂中鞣质的含量测定也提供了很好的借鉴作用。
附图说明
图1是本发明的没食子酸线性关系图。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案,下面通过具体实施例对本发明作进一步的详细说明,这些实施例仅用于阐述本发明,而不是限制本发明的保护范围。
本发明提供的含量测定方法中所用九节茶提取物及其制剂由广州白云山敬修堂药业股份有限公司提供,其他试剂均为市售。干酪素为化学纯,分别由洛阳市化学试剂厂、汕头市西陇化工厂及广东环凯微生物科技有限公司提供,没食子酸对照品由中国药品生物制品检定所提供,批号110831-200302。水为超纯水,其它试剂为分析纯。主要仪器有日本岛津公司UV-2450型紫外分光光度计,KQ-600DE型数控超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司),Precisa 404A、92SM-202A型电子分析天平等。
实施例1:
不同生产厂家的干酪素对九节茶提取物中鞣质含量测定结果的影响:
一种九节茶提取物的检测方法,包括如下步骤(以下步骤应避光操作):
1)对照品溶液的制备:精密称取没食子酸对照品50.10mg,置100ml棕色量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,精密量取5ml,置50ml棕色量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,即得浓度为0.05010mg/ml的没食子酸对照品溶液。
2)标准曲线的制备:精密量取上述对照品溶液0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml,分别置25ml棕色量瓶中,各加入磷钼钨酸试液1ml,再分别加水11.5ml、11ml、10ml、9ml、8ml、7ml,用29%碳酸钠溶液稀释至刻度,摇匀,放置30分钟以相应的试剂为空白,照紫外-可见分光光度法,在760nm的波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。回归方程为Y=0.1183X+0.0472,r=0.9995,结果表明,没食子酸对照品浓度在1.0020μg/ml~10.020μg/ml之间与其吸光度呈良好的线性关系。见附图1。
3)供试品溶液的制备:取九节茶提取物粉末约0.25g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加水250ml,称定重量,加热回流1小时,放冷,再称定重量,用水补足减失的重量,摇匀,静置(使固体物沉淀),滤过,弃去初滤液50ml,精密量取续滤液20ml,置100ml棕色量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,即得。
4)供试品溶液中总酚的测定:精密量取供试品溶液2ml,置25ml棕色量瓶中,加入磷钼钨酸试液1ml,加水10ml,用浓度为29%的碳酸钠溶液稀释至刻度,摇匀,放置30分钟以相应的试剂为空白,按照紫外-可见分光光度法,在760nm的波长处测定吸光度,从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量(mg),计算,即得总酚的含量;
5)供试品溶液中不被吸附的多酚的测定:精密量取供试品溶液25ml,加至已盛有0.6g干酪素极细粉的100ml具塞锥形瓶中,密塞,置30℃水浴中保温1小时,时时振摇,取出,放冷,摇匀,滤过,弃去初滤液,精密量取续滤液2ml,置25ml棕色量瓶中,加入磷钼钨酸试液1ml,加水10ml,用浓度为29%的碳酸钠溶液稀释至刻度,摇匀,放置30分钟以相应的试剂为空白,按照紫外-可见分光光度法,在760nm的波长处测定吸光度,从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量(mg),计算,即得不被吸附的多酚的含量;
6)供试品中鞣质含量的计算:根据供试品溶液稀释倍数分别计算出供试品中的总酚量和不被吸附的多酚量,再按下式计算供试品中鞣质的含量:鞣质含量=总酚量-不被吸附的多酚量。
试验结果显示,同一批九节茶提取物采用不同生产厂家生产的干酪素(不同生产厂家生产的干酪素粒度差别很大)测得的鞣质的含量偏差很大,使用粒度为“极细粉”的干酪素时,测定结果明显高于使用粒度为“中粉”的干酪素,表明该测定法中所使用的试剂“干酪素”对鞣质的含量测定结果影响较大。见表1。
表1 不同生产厂家(粒度)的干酪素对九节茶提取物中鞣质的含量测定结果的影响
注:干酪素生产厂家(粒度):A.洛阳市化学试剂厂,过8号筛(极细粉),B.汕头市西陇化工厂,过4号筛(中粉),C.广东环凯微生物科技有限公司,过4号筛(中粉)。
实施例2:具体操作步骤同实施例1,不同的是供试品溶液的制备过程中,供试品为用九节茶提取物制成的颗粒剂、胶囊剂、片剂经粉碎后所得。
实施例3:
同一生产厂家的不同批次干酪素对九节茶提取物中鞣质含量测定结果的影响:具体操作步骤同实施例1,不同的是供试品溶液中不被吸附的多酚的测定所采用的干酪素分别为同一厂家生产的不同批次干酪素,考察同一生产厂家的不同批次干酪素对九节茶提取物中鞣质含量测定结果的影响。试验结果显示,采用同一个厂家生产的不同批次的干酪素测定同一批九节茶提取物中的鞣质含量,其结果偏差亦很大,表明该测定法中所使用的试剂“干酪素”对鞣质的含量测定结果影响较大。见表2。
表2 同一生产厂家的不同批次干酪素对九节茶提取物中鞣质的含量测定结果的影响
实施例4:具体操作步骤同实施例3,不同的是供试品溶液的制备过程中,供试品为用九节茶提取物制成的颗粒剂、胶囊剂、片剂经粉碎后所得。
实施例5:
同一生产厂家的干酪素粉碎前后对九节茶提取物中鞣质含量测定结果的影响:具体操作步骤同实施例1,不同的是供试品溶液中不被吸附的多酚的测定所采用的干酪素分别为同一生产厂家粉碎前和粉碎后的干酪素,考察同一生产厂家的干酪素粉碎前后对九节茶提取物中鞣质含量测定结果的影响。试验结果表明,采用粉碎后的干酪素(极细粉)测得的九节茶提取物中鞣质的含量结果明显高于采用粉碎前的干酪素(中粉)测得的结果,且测定结果的重复性更好。见表3、表4。
表3 同一生产厂家的干酪素粉碎前后对九节茶提取物中鞣质含量测定结果的影响一
注:干酪素生产厂家(粒度):B1.汕头市西陇化工厂,粉碎前过4号筛(中粉),B2.汕头市西陇化工厂,粉碎后过8号筛(极细粉)。
表4 同一生产厂家的干酪素粉碎前后对九节茶提取物中鞣质含量测定结果的影响二
注:干酪素生产厂家(粒度):C1.广东环凯微生物科技有限公司,粉碎前过4号筛(中粉),C2.广东环凯微生物科技有限公司,粉碎后过8号筛(极细粉)。
实施例6:具体操作步骤同实施例5,不同的是供试品溶液的制备过程中,供试品为用九节茶提取物制成的颗粒剂、胶囊剂、片剂经粉碎后所得。
实施例7:
不同供试品溶液制备方法对九节茶提取物中鞣质含量测定结果的影响:具体操作步骤同实施例1,不同的是供试品溶液制备分别采用药典方法(静置过夜法)、加热回流法、加热超声法,考察不同制备方法对九节茶提取物中鞣质含量测定结果的影响。试验结果表明,供试品溶液的制备采用加热回流法或加热超声法时,九节茶提取物中的鞣质提取更完全,测定结果的准确度更高,且加热回流0.5~1小时与加热超声处理1~2小时的提取效果相近。见表5。
表5 不同供试品溶液制备方法对九节茶提取物中鞣质含量测定结果的影响
实施例8:具体操作步骤同实施例7,不同的是供试品溶液的制备过程中,供试品为用九节茶提取物制成的颗粒剂、胶囊剂、片剂经粉碎后所得。
实施例9:
重复性试验:取同一批供试品6份,按“供试品溶液的制备”项下进行处理并测定鞣质的含量。结果RSD=1.45%,表明此方法的重复性良好,见表6。
表6 重复性试验结果
实施例10:
中间精密度试验:取同一批供试品6份,分别由A、B、C三人,在不同的时间,用同一台设备,按鞣质含量测定方法测定。结果精密度良好,RSD=1.79%,见表7。
表7 中间精密度试验结果
实施例11:
加样回收率试验:取同一批已知含量的供试品6份(含量:95.14mg/g),每份取约0.125g,精密称定,置具塞锥形瓶中,分别精密加入没食子酸对照品溶液(1.0024mg/ml)10ml,余下按“供试品溶液的制备”项下进行处理并测定,计算回收率。结果平均回收率为98.36%,RSD=2.03%,见表8。
表8 加样回收率试验结果
实施例12:
不同批次九节茶提取物中鞣质的含量测定:对10批九节茶提取物按本发明中建立的方法进行鞣质的含量测定,结果鞣质的含量在95.14mg/g~123.85mg/g之间,见表9。由于不同批次九节茶提取物中鞣质的含量差异较大,为了避免因药材产地、采收季节、生长年限等因素造成含量的波动,在10批提取物中鞣质含量最低的一批基础上下调20%,据此规定本品鞣质的含量不得少于76.0mg/g。
表9 不同批次九节茶提取物中鞣质的含量测定结果
对于本领域的技术人员来说,可根据以上描述的技术方案以及构思,做出其它各种相应的改变以及变形,而所有的这些改变以及变形都应该属于本发明权利要求的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种九节茶提取物及其制剂的检测方法,其特征在于,包括如下步骤:
1)对照品溶液的制备:精密称取没食子酸对照品50mg,置100ml棕色量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,精密量取5ml,置50ml棕色量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,即得对照品溶液,每1ml对照品溶液中含没食子酸0.05mg;
2)标准曲线的制备:精密量取对照品溶液0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml,分别置25ml棕色量瓶中,各加入磷钼钨酸试液1ml,再分别加水11.5ml、11ml、10ml、9ml、8ml、7ml,用浓度为29%的碳酸钠溶液稀释至刻度,摇匀,放置30分钟以相应的试剂为空白,按照紫外-可见分光光度法,在760nm的波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线;
3)供试品溶液的制备:取定量的九节茶提取物或以九节茶提取物制成的固体制剂粉末,精密称定,置具塞锥形瓶中,加水250ml,称定重量,经过提取,放冷,再称定重量,用水补足减失的重量,摇匀,静置使固体物沉淀,滤过,弃去初滤液50ml,精密量取续滤液20ml,置100ml棕色量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,即得供试品溶液。
4)供试品溶液中总酚的测定:精密量取供试品溶液2ml,置25ml棕色量瓶中,加入磷钼钨酸试液1ml,加水10ml,用浓度为29%的碳酸钠溶液稀释至刻度,摇匀,放置30分钟以相应的试剂为空白,按照紫外-可见分光光度法,在760nm的波长处测定吸光度,由步骤2)的标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量(mg),计算,即得总酚的含量;
5)供试品溶液中不被吸附的多酚的测定:精密量取供试品溶液25ml,加至已盛有0.6g干酪素极细粉的100ml具塞锥形瓶中,密塞,置30℃水浴中保温1小时,时时振摇,取出,放冷,摇匀,滤过,弃去初滤液,精密量取续滤液2ml,置25ml棕色量瓶中,加入磷钼钨酸试液1ml,加水10ml,用浓度为29%的碳酸钠溶液稀释至刻度,摇匀,放置30分钟以相应的试剂为空白,按照紫外-可见分光光度法,在760nm的波长处测定吸光度,由步骤2)的标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量(mg),计算,即得不被吸附的多酚的含量;
6)供试品中鞣质含量的计算:根据供试品溶液稀释倍数分别计算出供试品中的总酚量和不被吸附的多酚量,再按下式计算供试品中鞣质的含量:鞣质含量=总酚量-不被吸附的多酚量。
2.根据权利要求1所述的九节茶提取物及其制剂的检测方法,其特征在于:在步骤5)中,所述的干酪素极细粉是指能全部通过八号筛,并含能通过九号筛不少于95%的干酪素粉末。
3.根据权利要求1所述的九节茶提取物及其制剂的检测方法,其特征在于:在步骤3)中,所述的九节茶提取物及其制剂的粉末取样量为0.25g。
4.根据权利要求1所述的九节茶提取物及其制剂的检测方法,其特征在于:在步骤3)中,所述的提取方法为加热回流提取或加热超声处理。
5.根据权利要求4所述的九节茶提取物及其制剂的检测方法,其特征在于:在步骤3)中,加热回流提取的时间为0.5-1小时。
6.根据权利要求4所述的九节茶提取物及其制剂的检测方法,其特征在于:在步骤3)中,加热超声处理的时间为1-2小时。
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CN101580525A (zh) * | 2009-06-06 | 2009-11-18 | 中国科学院西北高原生物研究所 | 从红景天药材中提取红景天苷、多糖和鞣质类物质的方法 |
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2014
- 2014-12-17 CN CN201410803162.9A patent/CN104535513A/zh active Pending
Patent Citations (1)
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