CN105021608A - 用于检测饮品总多酚含量的试剂盒、制备方法和使用试剂盒进行检测的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种用于检测饮品总多酚含量的试剂盒、制备方法和使用试剂盒进行饮品中总多酚含量检测的方法，属于食品营养检测领域。所述的试剂盒包括显色剂、显色稳定剂和标准品，本发明采用优化的Folio-Ciocalteu法，饮品样本与组合试剂在45℃水浴反应0.5h后显色，降低了显色反应时间；所述试剂盒在紫外分光光度计和半自动生化分析仪的应用简单易行、灵敏度高、无需制定标曲，大大缩短检测时间，尤以半自动生化分析仪的应用，可直观读取检测结果，降低检测难度；可同时对多个饮品样本进行显色和检测，高效、准确、快捷，易于批量检测。因此，本申请的试剂盒和检测方法在液体或固体饮品总多酚含量检测中具有很大的应用前景。
Description
技术领域
本发明提供了一种用于检测饮品总多酚含量的试剂盒、制备方法和使用试剂盒进行检测的方法，尤其涉及一种适用于半自动生化分析仪的饮品总多酚测定试剂盒及检测方法，可以进行液体及固体饮品总多酚含量的测定，属食品营养检测领域。
背景技术
植物多酚是多羟基类化合物的总称，狭义上是单宁或鞣质，广义上还包括小分子酚类化合物，如花青素、儿茶素、栎精、没食子酸等。其广泛存在于蔬菜、水果、豆类、谷物类等植物中，尤以种子植物中更为常见，苹果、葡萄、荔枝、浆果等水果中植物多酚含量很高。它们也存在于茶叶、啤酒、果酒、果汁等饮料中，与人类的生活和健康密切相关。
植物多酚是植物体内复杂的酚类次生代谢物，具有多元酚结构，酚羟基中的邻位酚羟基可与金属离子发生络合反应，且极易被氧化，对活性氧等自由基有较强的捕捉能力，使其具有很强的抗氧化性和清除自由基的能力。多酚还可以通过疏水键和多点氢键与蛋白质、生物碱、多糖等发生复合反应。另外，植物多酚在200～300nm波长间有较强的紫外吸收能力。
近年来发现植物多酚能够抑制动物和人类肿瘤的发展，防治心脑血管疾病、提高免疫力、调解内分泌系统、保肝以及抗炎、抗癌、抗氧化、抗衰老等功效，被称作人类健康的“第七营养素”。其功能活性被很好地应用于医药、化妆品、食品、环境等领域，在美、德、法、意、日、澳大利亚、加拿大、罗马尼亚、匈牙利等国己有许多植物多酚专利及产品问世。尼柯维斯基公司成功开发并推出了以“苹果酚”命名的苹果多酚产品，并得到广泛的应用。此外，茶多酚和银杏黄酮也已被广泛运用于食品、医药、精细化工等领域。而对食品的理化性质和营养高低的鉴别，取决于其中营养活性成分的种类和含量。液体饮品中多酚物质的含量，对其色泽、风味和非生物稳定性有重要影响。啤酒中过高量的多酚物质可使啤酒口味粗涩、苦味不正、后苦味长，并且会引起啤酒冷浑浊和永久性浑浊，过低量的多酚对啤酒的稳定性以及风味又有不良影响。果酒中多酚物质不仅影响果酒的颜色、风味和香气，还能抑制微生物生长，且在储藏过程中参与沉淀物的形成。然而，在贮藏及加工过程中，过多的多酚物质会使果酒褐变，导致货架期简短，经济效益降低。
多酚，作为饮品中一个重要的营养素指标，其分析方法对于饮品的质量检测具有重要意义。目前多酚含量的测定方法主要有以下这些：
高锰酸钾滴定法，原理是在靛红作指示剂的情况下，高锰酸钾氧化具还原性的多酚物质。此法虽简便易行，但滴定终点较难观察，测定灵敏度低。
香草醛盐酸法，在酸性条件下，多酚与香草醛发生缩合，产物在浓酸作用下形成有色的正碳离子。其对测定条件要求严格，干扰因素多，稳定性较差。
酒石酸压铁法，是茶多酚含量检测的国标方法。其测定原理是茶多酚类物质能与过量的亚铁离子形成紫蓝色络合物，颜色的深浅与多酚含量成正比，具有良好的重现性。此法多适用于低含量多酚的茶叶原料，测出的数值往往偏高。
普鲁士蓝法，在酸性条件下，多酚能将Fe(CN)6 3-还原成Fe(CN)6 4-，还原产物Fe(CN)6 4-与Fe3+反应生成Fe[Fe(CN)6]3(普鲁士蓝)供定量测定。反应中不好控制高铁溶液用量，用量少时会生生成成藤氏蓝Fe3[Fe(CN)6]2沉淀，不适测定。
高效液相色谱法，准确性高，灵敏度好，检测限低，但其前处理复杂，成本高，不适于大量的定量分析，多用于单体酚类的测定。
Folin-Denis(FD)法，利用样品测试液中易氧化的羟基与FD试剂作用，产生蓝色，于波长725nm处有最大吸收而用比色法测定。但FD显色剂稳定性差，灵敏度低，测定结果误差较大。
Folin-Ciocalteu法，其原理是在碱溶液中，酚类化合物可将钨钼酸定量还原(W6+变成W5+)，其自身被氧化为蓝色化合物，颜色深浅程度与酚含量正相关。此法价格低、灵敏度高，但反应时间较长，不适于批量产品的快速测定。
综上所述，各种检测方法的灵敏度、准确度、检测繁简程度和成本等方面均存在较大差异，因而建立新的简便易行、灵敏度高、准确性好、成本低廉，耗时少的绿色检测方法仍是社会的迫切要求和重要的研究目标。
发明内容
本发明的主要目的在于克服上述不足之处，提供一种用于检测饮品总多酚含量的试剂盒、制备方法和使用方法，以及上述检测试剂盒其制备方法在检测饮品中总多酚含量的应用。所述的试剂盒包括显色剂、显色稳定剂和标准品，
本发明还提供了一种快速测定液体或固体饮品总多酚含量试剂盒的制备方法和使用方法，以及上述检测试剂盒其制备方法在检测饮品中总多酚含量的应用。
本发明采用优化的Folio-Ciocalteu法检测总多酚含量，饮品样本与组合试剂在45℃水浴反应0.5h后显色，降低了显色反应时间。
本发明用于检测饮品总多酚含量的试剂盒是通过以下技术方案达到上述目的：试剂盒包括显色剂(氧化剂)、显色稳定剂和标准液；
其中所述显色剂为氧化剂，显色剂采用福林酚试剂，体积浓度为10％；
所述显色稳定剂为碳酸钠溶液，质量体积浓度为12％；
所述标准液为没食子酸溶液，质量浓度为0.1mg/mL。
所述的试剂盒检测体系中优选地的多酚终浓度范围为0～6μg/mL，所述显色体系中标准液的终浓度为4μg/mL
一种用于检测饮品总多酚含量试剂盒的制备方法，其特征在于制备过程包括以下步骤：
(1)测定波长的确定
用移液枪分别移取没食子酸标准液a和茶多酚标准液b，所述的没食子酸标准液a和茶多酚标准液b的取样体积均为0.16mL，分别置于标准管a和标准管b中；向两支标准管中均加入超纯水和10％福林酚试剂，所述的超纯水和10％福林酚试剂的取样体积分别为0.8mL、0.4mL；涡旋振荡，混匀静止3min后分别向两支标准管加入12％碳酸钠溶液，所述的碳酸钠溶液的体积均为0.64mL；最后用超纯水定容至4mL，35℃水浴反应1.5h后，用紫外分光光度计在400～800nm范围内扫描，选择最佳测定波长；
茶多酚标准液b为5mg茶多酚标准品溶解于50mL超纯水中，涡流震荡充分溶解而成；
(2)显色稳定剂和显色剂体积比的确定
显色稳定剂用量的确定：用移液枪分别移取7份没食子酸标准液a，所述超纯水和标准液的体积均为0.16mL，分别置于1支空白管和6支标准管中；向7支试管均加入超纯水和10％福林酚试剂，所述超纯水和10％福林酚试剂的取样体积分别为0.8mL、0.4mL；涡旋振荡，混匀静止3min后向7支试管加入12％碳酸钠溶液，所述的碳酸钠溶液的体积分别为0mL、0.16mL、0.32mL、0.48mL、0.64mL、0.8mL、0.96mL，最后7支试管均用超纯水定容至4mL，35℃水浴反应1.5h后，在696nm波长测定吸光度，以确定碳酸钠溶液的用量；
显色剂用量的确定：用移液枪分别移取7份没食子酸标准液a，所述标准液a的体积均为0.16mL，分别置于1支空白管和6支标准管中；7支试管均加入超纯水，所述超纯水的取样体积为0.8mL，而后向7支试管中均加入10％福林酚试剂，所述10％福林酚试剂的取样体积分别为0mL、0.08mL、0.16mL、0.24mL、0.32mL、0.4mL、0.48mL；涡旋振荡，混匀静止3min后向7支试管加入12％碳酸钠溶液，所述的碳酸钠溶液体积0.16mL，最后7支试管均用超纯水定容至4mL，35℃水浴反应1.5h后，在696nm波长测定吸光度，以确定10％福林酚溶液的用量；
(3)显色温度的确定
用移液枪分别移取5份超纯水和5份没食子酸标准液，所述超纯水和标准液的体积均为0.16mL，分别置于5支空白管和5支标准管中；向10支试管均加入蒸馏水和10％福林酚试剂，所述超纯水和10％福林酚试剂的取样体积分别为0.8mL和0.48mL；涡旋振荡，混匀静止3min后向10支试管加入12％碳酸钠溶液，所述的碳酸钠溶液体积为0.16mL，最后用超纯水定容至4mL，10支试管以1支空白管和一支标准管进行组合分为5组，分别在35℃、45℃、55℃、65℃、75℃水浴反应1.5h后，在696nm波长测定吸光度，以确定显色反应的最佳温度；
(4)显色时间的确定
用移液枪分别移取5份超纯水和5份没食子酸标准液，所述标准液的体积均为0.16mL，分别置于5支空白管和5支标准管中；向10支试管均加入超纯水和10％福林酚试剂，所述超纯水和10％福林酚试剂的取样体积分别为0.8mL和0.48mL；涡旋振荡，混匀静止3min后向10支试管加入12％碳酸钠溶液，所述的碳酸钠溶液体积为0.16mL，最后用超纯水定容至4mL，10支试管以1支空白管和一支标准管进行组合分为5组，于45℃分别水浴0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h后，在696nm波长测定吸光度，以确定显色反应完全所需最佳时间；
(5)没食子酸标准曲线的建立
根据以上优化的检测体系建立标准曲线：用移液枪移取0μL、20μL、40μL、60μL、80μL、100μL、120μL、140μL、160μL、180μL、200μL、220μL、240μL没食子酸标准液于13支具塞试管中，向13支试管均加入超纯水和10％福林酚试剂，所述超纯水和10％福林酚试剂的取样体积分别为0.8mL、0.48mL；涡旋振荡，混匀静止3min后向13支标准管加入12％碳酸钠溶液，所述的碳酸钠溶液体积为0.16mL，最后用超纯水定容至4mL，13支标准管于45℃水浴0.5h后，在696nm波长处测定吸光度。分别以以吸光度值和没食子酸浓度为纵、横坐标绘制标准曲线，并用最小二乘法得到拟合直线回归方程：y＝0.0694x+0.0019，R2＝0.9996。
所述的步骤(1)中优选地最佳测定波长为696nm；
步骤(2)中优选地显色稳定剂和显色剂的最佳体积比为1:3，显色稳定剂最佳体积为0.16mL，显色剂最佳体积为0.48mL；
步骤(3)中优选地最佳显色温度为45℃；
步骤(4)优选地最佳显色时间为0.5h；
步骤(5)优选地，所述标准曲线测量的检测体系中多酚终浓度范围为0～6μg/mL，确定试剂盒标准液的终浓度为4μg/mL。
使用权利要求1和权利要求3所述的试剂盒进行饮品总多酚含量检测方法，其特征在于测定步骤如下：
(1)用移液枪分别移取超纯水、标准液和液态待测样品，所述的超纯水、标准液和待测样品的取样体积均为0.16mL，分别置于试剂空白管、标准管和样品管中；
(2)在步骤(1)的试剂空白管、标准管和样品管中分别加入超纯水，所述的超纯水取样体积为0.8mL；
(3)避光状态，在步骤(2)的试剂空白管、标准管和样品管中分别加入显色剂，所述显色剂的取样体积为0.48mL，涡旋振荡，室温下避光静置3min；
(4)避光状态，在步骤(3)的试剂空白管、标准管和样品管中分别加入显色稳定剂，所述的显色稳定剂的取样体积均为0.16mL，3支管均用超纯水定容至4mL，所述的超纯水的取样体积为2.4mL，涡旋振荡充分混匀，45℃水浴30min后用紫外分光光度计或半自动生化分析仪测定；
(5)取步骤(4)所得各管的混合液在半自动生化分析仪上测定，测定遵循以下顺序：
a)在半自动生化分析仪上设定相关参数，波长(696nm)，温度(37℃)，延迟时间(2s)，测量时间(2s)，试剂空白(要)，标准值(4.0μg/mL),吸入量(1000μL)；
b)按半自动生化分析仪操作提示，依次吸入蒸馏水、试剂空白、标准液(定标)、样品进行测定，直接读取屏幕上显示的数值，即试剂空白吸光值、标准液吸光值、系数、样品液吸光值及样品液总多酚浓度；
(6)取步骤(4)所得各管的混合液用5mm比色皿在紫外分光光度计上测定，试剂空白调零，测定标准液和样品液吸光度值，按以下公式计算测定结果：
计算公式：
其中C样：样品液浓度；A样：样品液吸光度；A标：标准液吸光度值；C标：标准液浓度(已知)。
有益效果：本发明试剂盒在紫外分光光度计和半自动生化分析仪的应用简单易行、灵敏度高、无需制定标曲，大大缩短检测时间，尤以半自动生化分析仪的应用，可直观读取检测结果，降低检测难度。
本发明采用优化的Folio-Ciocalteu法，饮品样本与组合试剂在45℃水浴反应0.5h后显色，降低了显色反应时间；该检测试剂盒构造简单，操作迅速简便、廉价、检测时间短、灵敏度高，尤以在半自动生化分析仪上应用更为便捷，可直接读取样品的测定浓度，检测结果直观性好；还可同时对多个饮品样本进行显色和检测，高效、准确、快捷，易于批量检测。
附图说明
下面结合附图，用本发明的实例来进一步阐述本发明。应当理解，这些实例仅用于说明本发明而不是限制本发明的范围。
图1为没食子酸标准液和茶多酚标准液的光谱吸收曲线；
图2为12％碳酸钠用量对显色反应的影响；
图3为10％福林酚含量对显色反应的影响；
图4为温度对显色反应的影响；
图5为时间对显色反应的影响；
图6为没食子酸标准曲线。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
一种用于检测饮品总多酚含量的试剂盒，所述试剂盒包括：显色剂(氧化剂)、显色稳定剂，标准液；
其中所述显色剂(氧化剂)为福林酚试剂，体积浓度为10％；
所述显色稳定剂为碳酸钠溶液，质量体积浓度为12％；
所述标准液为没食子酸溶液，质量浓度为0.1mg/mL。
一种饮品总多酚含量检测方法，包括以下步骤：
(1)用移液枪分别移取超纯水、标准液和液态待测样品，所述的超纯水、标准液和待测样品的取样体积均为0.16mL，分别置于试剂空白管、标准管和样品管中；
(2)在步骤(1)的试剂空白管、标准管和样品管中分别加入超纯水，所述的超纯水取样体积为0.8mL。
(3)避光状态，在步骤(2)的试剂空白管、标准管和样品管中分别加入显色剂，所述的显色剂的取样体积为0.48mL，涡旋振荡，室温下避光静置3min；
(4)避光状态，在步骤(3)的试剂空白管、标准管和样品管中分别加入显色稳定剂，所述的显色稳定剂的取样体积均为0.16mL，3支管均用超纯水定容至4mL，所述的超纯水的取样体积为2.4mL，涡旋振荡充分混匀，45℃暗处水浴30min上机测定；
(5)取步骤(4)所得各管的混合液在半自动生化分析仪上测定，测定遵循以下顺序：
a)在半自动生化分析仪上设定相关参数，波长(696nm)，温度(37℃)，延迟时间(2s)，测量时间(2s)，试剂空白(要)，标准值(4.0μg/mL),吸入量(1000μL)；
b)按半自动生化分析仪操作提示，依次吸入超纯水、试剂空白、标准液(定标)、样品进行测定，直接读取屏幕上显示的数值，即试剂空白液吸光值、标准液的吸光值、系数、样品液吸光值及样品液浓度。
(6)取步骤(4)所得各管的混合液用紫外分光光度计测定，用5mm比色皿上机测定，试剂空白调零，测定标准液和样品液吸光度值，按以下公式计算测定结果：
计算公式：
C样：样品管浓度；A样：样品管吸光度；A标：标准管吸光度值；C标：标准液浓度(已知)。
实施例1：Folin-Ciocalteu检测体系的建立
本实施例的组合试剂为标准液a、标准液b、显色剂、显色稳定剂；
1、所用试剂的配置：
标准液a的配置：分子天平称取5mg没食子酸标准品，溶于50mL超纯水中，涡流振荡使其充分溶解，质量浓度为0.1mg/mL。
标准液b的配置：分子天平称取5mg茶多酚标准品，溶于50mL超纯水中，涡流振荡使其充分溶解，质量浓度为0.1mg/mL。
显色剂的配置：取1份福林酚试剂与9份蒸馏水混合，涡旋振荡混合均匀，体积浓度为10％。
显色稳定剂的配置：分子天平称取12mg碳酸钠粉末，溶于100mL超纯水中，涡流振荡使其充分溶解，质量体积百分比浓度为12％。
2、测定波长的确定
用移液枪分别移取没食子酸标准液a和茶多酚标准液b，所述的标准液a和标准液b的取样体积均为0.16mL，分别置于标准管a和标准管b中；向2支标准管中均加入超纯水和10％福林酚试剂，所述的超纯水和10％福林酚试剂的取样体积分别为0.8mL、0.4mL；涡旋振荡，混匀静止3min后分别向2支管加入12％碳酸钠溶液，所述的碳酸钠溶液的体积均为0.64mL；最后用超纯水定容至4mL，35℃水浴反应1.5h后，用紫外分光光度计在400～800nm范围内扫描，选择最佳测定波长，整个实验过程应避光操作，最佳测定波长为696nm(如图1所示)。
3、显色稳定剂和显色剂体积比的确定
(1)显色稳定剂用量的确定：用移液枪分别移取7份没食子酸标准液，所述超纯水和标准液的体积均为0.16mL，分别置于1支空白管和6支标准管中；向7支试管均加入超纯水和10％福林酚试剂，所述超纯水和10％福林酚试剂的取样体积分别为0.8mL、0.4mL；涡旋振荡，混匀静止3min后向7支试管加入12％碳酸钠溶液，所述的碳酸钠溶液的体积分别为0mL、0.16mL、0.32mL、0.48mL、0.64mL、0.8mL、0.96mL，最后7支试管均用超纯水定容至4mL，35℃水浴反应1.5h后，在696nm波长测定吸光度，以确定碳酸钠溶液的用量，整个实验过程应避光操作，显色稳定剂最佳体积为0.16mL(如图2所示)。
(2)显色剂用量的确定：用移液枪分别移取7份没食子酸标准液，所述标准液的体积均为0.16mL，分别置于1支空白管和6支标准管中；7支试管均加入超纯水，所述超纯水的取样体积为0.8mL，而后向7支试管中均加入10％福林酚试剂，所述10％福林酚试剂的取样体积分别为0mL、0.08mL、0.16mL、0.24mL、0.32mL、0.4mL、0.48mL；涡旋振荡，混匀静止3min后向7支试管加入12％碳酸钠溶液，所述的碳酸钠溶液体积0.16mL，最后7支试管均用超纯水定容至4mL，35℃水浴反应1.5h后，在696nm波长测定吸光度，以确定10％福林酚溶液的用量，整个实验过程应避光操作。显色剂最佳体积为0.48mL，显色稳定剂和显色剂的最佳体积比为1:3(如图3所示)。
4、显色温度的确定
用移液枪分别移取5份超纯水和5份没食子酸标准液，所述超纯水和标准液的体积均为0.16mL，分别置于5支空白管和5支标准管中；向10支试管均加入蒸馏水和10％福林酚试剂，所述超纯水和10％福林酚试剂的取样体积分别为0.8mL和0.48mL；涡旋振荡，混匀静止3min后向10支试管加入12％碳酸钠溶液，所述的碳酸钠溶液体积为0.16mL，最后用超纯水定容至4mL，10支试管以1支空白管和一支标准管进行组合分为5组，分别在35℃、45℃、55℃、65℃、75℃水浴反应1.5h后，在696nm波长测定吸光度，以确定显色反应的最佳温度，整个实验过程应避光操作，最佳显色温度为45℃(如图4所示)。
5、显色时间的确定
用移液枪分别移取5份超纯水和5份没食子酸标准液，所述标准液的体积均为0.16mL，分别置于5支空白管和5支标准管中；向10支试管均加入超纯水和10％福林酚试剂，所述超纯水和10％福林酚试剂的取样体积分别为0.8mL和0.48mL；涡旋振荡，混匀静止3min后向10支试管加入12％碳酸钠溶液，所述的碳酸钠溶液体积为0.16mL，最后用超纯水定容至4mL，10支试管以1支空白管和一支标准管进行组合分为5组，于45℃分别水浴0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h后，在696nm波长测定吸光度，以确定显色反应完全所需最佳时间(如图5所示)，整个实验过程应避光操作，最佳显色时间为0.5h(如图5所示)。
实施例2：没食子酸标准曲线的建立
根据实施例1优化的检测体系建立标准曲线：用移液枪移取0μL、20μL、40μL、60μL、80μL、100μL、120μL、140μL、160μL、180μL、200μL、220μL、240μL没食子酸标准液于13支具塞试管中，向13支试管均加入超纯水和10％福林酚试剂，所述超纯水和10％福林酚试剂的取样体积分别为0.8mL、0.48mL；涡旋振荡，混匀静止3min后向13支标准管加入12％碳酸钠溶液，所述的碳酸钠溶液体积为0.16mL，最后用超纯水定容至4mL，13支标准管于45℃水浴0.5h后，在696nm波长处测定吸光度，整个实验过程应避光操作。分别以以吸光度值和没食子酸浓度为纵、横坐标绘制标准曲线，并用最小二乘法得到拟合直线回归方程：y＝0.0694x+0.0019，R2＝0.9996。没食子酸标准溶液的质量浓度在0～6μg/mL范围内与吸光度有良好的线性关系，可用于饮料样品总多酚的测定(如图6所示)。
实施例3：Folin-Ciocalteu分析方法的评价
1、重复性评价
该分析方法的重复性评价以组间实验进行验证。分别取5份0.16mL稀释8倍的品牌1混合果汁样品(市购)、5份0.16mL稀释8倍的品牌2绿茶样品(市购)、5份0.16mL和品牌3果醋样品(市购)、5份0.16mL稀释8倍的品牌4桃汁样品(市购)于20支具塞试管中，按实施例1建立的显色体系测定吸光度，并根据实施例2建立的回归方程计算样品所含多酚含量。计算相对标准偏差，评价分析方法的精密度。4种样品的5个平行实验测定的相对标准偏差均远小于5％左右，表明该分析方法具有较高的精密度(如表1所示)。
表1精密度实验结果
2、稳定性评价
分别取0.16mL稀释8倍的品牌1混合果汁样品(市购)、0.16mL稀释8倍的品牌2绿茶样品(市购)、0.16mL品牌3果醋样品(市购)、0.16mL稀释8倍的品牌4桃汁样品(市购)各3个平行于12支具塞试管中，按实施例1建立的显色体系于反应后2.5h内每隔30min测定一次吸光度，并根据实施例1建立的回归方程计算样品所含多酚含量。计算相对标准偏差，评价分析方法的稳定性。随着时间延长，4种样品的多酚含量基本趋于稳定，测定的相对标准偏差均在1％左右，多小于1％，可见该分析方法稳定性高(如表2所示)。
表2稳定性实验结果
3、加标回收评价
取5份0.16mL稀释8倍的农夫果园30％混合果汁饮料样品(市购)，分别加入不同体积(0.016mL、0.032mL、0.048mL、0.064mL、0.08mL)的没食子酸标准液，按实施例1建立的显色体系测定吸光度，并根据实施例1建立的回归方程计算样品所含多酚含量。计算没食子酸的回收率和实验结果的相对标准偏差。另取5份0.16mL稀释8倍的康师傅绿茶样品(市购)、5份0.16mL和宜露苹果醋样品(市购)、5份0.16mL稀释8倍的汇源100％桃汁样品(市购)，操作与稀释8倍的农夫果园30％混合果汁饮料样品相同，计算其没食子酸回收率和实验结果的相对标准偏差，评价实验方法的可靠性。4种样品的没食子酸加标回收率均在97.5％～120％之间，平均回收率在100％～110％之间，相对标准偏差在3.4％～7.1％之间，表明该方法准确度较高，可用于饮料总多酚含量的测定(如表3所示)。
表3加标回收实验结果
实施例4：试剂盒的制备
1、试剂盒的组成：
(1)1×标准液，10mL，标准液浓度为0.1mg/mL。
(2)1×显色剂，75mL，显色剂体积浓度为10％。
(3)1×显色稳定剂，25mL，显色稳定剂质量体积浓度为12％。
所述的标准液为没食子酸标准液，显色剂为福林酚试剂，显色稳定剂为碳酸钠溶液。
2、试剂的配置：
标准液的配置：分子天平称取5mg没食子酸标准品，溶于50mL超纯水中，涡流振荡使其充分溶解，质量浓度为0.1mg/mL。
显色剂的配置：取1份福林酚试剂与9份超纯水混合，涡旋振荡混合均匀，体积浓度为10％。
显色稳定剂的配置：分子天平称取12mg碳酸钠粉末，溶于100mL超纯水中，涡流振荡使其充分溶解，质量体积百分比浓度为12％。
3、参考范围：0～6μg/mL
4、检验结果的解释：样品的含量超出可测线性范围上限时，需要进行确认实验，即：将该样品用超纯水稀释，测定结果乘以稀释倍数。
5、产品性能指标：
空白吸光度 A696nm<0.005
分析灵敏度 测试4.0μg/mL被测物时，吸光度变化为0.278～0.280
线性范围 ①0～6μg/mL，相关系数r>0.999
②线性偏差不超过5％
重复性 测量精密度(CV％)≤5％
批间差：相对偏差(R％)≤8.0％
6、半自动生化分析仪测定参数(见表4所示)：
表4半自动生化分析仪测定总多酚含量设定参数
测定时注意事项：
(1)本产品仅用于体外诊断，切勿服用。
(2)标准液防止污染，所有试剂均在2～8℃密封保存。
(3)在整个实验过程中(包括恒温孵育)应避免光线照射。
实施例5：本发明试剂盒的使用
1、用实施例4制备的试剂盒检测品牌1混合果汁(市购)中总多酚含量。
具体你检测步骤如下：
处理样品：取25μL混合果汁样品用0.175mL超纯水稀释，得到稀释8倍的备用样品液。
用移液枪移取0.16mL超纯水、标准液和混合果汁备用样品液，分别置于试剂空白管、标准管和样品管中；于暗处在3支管中均加入0.8mL超纯水和0.48mL显色剂，涡旋震荡，室温下避光静置3min；暗处分别加0.16mL显色稳定剂于3支管中，最后3支管均用超纯水稀释至4mL，涡旋振荡充分混匀，45℃水浴30min后在紫外分光光度计或半自动生化分析仪测定，整个实验过程应避光操作。
在半自动生化分析仪上测定时需先设定相关参数，波长(696nm)，温度(37℃)，延迟时间(2s)，测量时间(2s)，试剂空白(要)，标准值(4.0μg/mL),吸入量(1000uL)；按半自动生化分析仪操作提示，依次吸入超纯水、试剂空白、标准液(定标)、样品进行测定，直接读取屏幕上显示的数值，即试剂空白液吸光值、标准液的吸光值、系数、样品液吸光值及样品液浓度，结果见表5。
表5半自动生化分析仪呈现的品牌1混合果汁总多酚含量测定相关数值
紫外分光光度计测定时，用5mm比色皿上机测定，试剂空白调零，测定标准液和样品液吸光度值，按以下公式计算测定结果：
计算公式：
C样：样品管浓度；A样：样品管吸光度；A标：标准管吸光度值；C标：标准液浓度(已知)。
2、用实施例4制备的试剂盒检测品牌2绿茶(市购)中总多酚含量。
具体你检测步骤如下：
处理样品：取25μL绿茶样品用0.175mL超纯水稀释，得到稀释8倍的备用样品液。
用移液枪移取0.16mL超纯水、标准液和绿茶备用样品液，分别置于试剂空白管、标准管和样品管中；于暗处在3支管中均加入0.8mL超纯水和0.48mL显色剂，涡旋震荡，室温下避光静置3min；暗处分别加0.16mL显色稳定剂于3支管中，最后3支管均用超纯水稀释至4mL，涡旋振荡充分混匀，45℃水浴30min后在紫外分光光度计或半自动生化分析仪测定，整个实验过程应避光操作。
在半自动生化分析仪上测定时需先设定相关参数，波长(696nm)，温度(37℃)，延迟时间(2s)，测量时间(2s)，试剂空白(要)，标准值(4.0μg/mL),吸入量(1000uL)；按半自动生化分析仪操作提示，依次吸入超纯水、试剂空白、标准液(定标)、样品进行测定，直接读取屏幕上显示的数值，即试剂空白吸光值、标准液的吸光值、系数、样品液吸光值及样品液浓度，结果见表6。
表6半自动生化分析仪呈现的品牌2绿茶总多酚含量测定相关数值
紫外分光光度计测定时，用5mm比色皿上机测定，试剂空白调零，测定标准管和样品管吸光度值，按以下公式计算测定结果：
计算公式：
C样：样品管浓度；A样：样品管吸光度；A标：标准管吸光度值；C标：标准液浓度(已知)。
3、用实施例4制备的试剂盒检测品牌3果醋(市购)中总多酚含量。
具体你检测步骤如下：
用移液枪移取0.16mL超纯水、标准液和品牌3果醋样液，分别置于试剂空白管、标准管和样品管中；于暗处在3支管中均加入0.8mL超纯水和0.48mL显色剂，涡旋震荡，室温下避光静置3min；暗处分别加0.16mL显色稳定剂于3支管中，最后3支管均用超纯水稀释至4mL，涡旋振荡充分混匀，45℃水浴30min后在紫外分光光度计或半自动生化分析仪测定，整个实验过程应避光操作。
在半自动生化分析仪上测定时需先设定相关参数，波长(696nm)，温度(37℃)，延迟时间(2s)，测量时间(2s)，试剂空白(要)，标准值(4.0μg/mL),吸入量(1000uL)；按半自动生化分析仪操作提示，依次吸入超纯水、试剂空白、标准液(定标)、样品进行测定，直接读取屏幕上显示的数值，即试剂空白吸光值、标准液的吸光值、系数、样品液吸光值及样品液浓度，结果见表7。
表7半自动生化分析仪呈现的品牌3果醋总多酚含量测定相关数值
紫外分光光度计测定时，用5mm比色皿上机测定，试剂空白调零，测定标准液和样品液吸光度值，按以下公式计算测定结果：
计算公式：
C样：样品管浓度；A样：样品管吸光度；A标：标准管吸光度值；C标：标准液浓度(已知)。
4、用实施例4制备的试剂盒检测品牌4桃汁(市购)中总多酚含量。
具体你检测步骤如下：
处理样品：取25μL品牌4桃汁样品用0.175mL超纯水稀释，得到稀释8倍的备用样品液。
用移液枪移取0.16mL超纯水、标准液和桃汁备用样品液，分别置于试剂空白管、标准管和样品管中；于暗处在3支管中均加入0.8mL超纯水和0.48mL显色剂，涡旋震荡，室温下避光静置3min；暗处分别加0.16mL显色稳定剂于3支管中，最后3支管均用超纯水稀释至4mL，涡旋振荡充分混匀，45℃水浴30min后在紫外分光光度计或半自动生化分析仪测定，整个实验过程应避光操作。
在半自动生化分析仪上测定时需先设定相关参数，波长(696nm)，温度(37℃)，延迟时间(2s)，测量时间(2s)，试剂空白(要)，标准值(4.0μg/mL),吸入量(1000uL)；按半自动生化分析仪操作提示，依次吸入超纯水、试剂空白、标准液(定标)、样品进行测定，直接读取屏幕上显示的数值，即试剂空白吸光值、标准液的吸光值、系数、样品液吸光值及样品液浓度，结果见表8。
表8半自动生化分析仪呈现的品牌4桃汁总多酚含量测定相关数值
紫外分光光度计测定时，用5mm比色皿上机测定，试剂空白调零，测定标准液和样品液吸光度值，按以下公式计算测定结果：
计算公式：
C样：样品管浓度；A样：样品管吸光度；A标：标准管吸光度值；C标：标准液浓度(已知)。
Claims (5)
1.一种用于检测饮品总多酚含量的试剂盒，其特征在于试剂盒包括显色剂(氧化剂)、显色稳定剂和标准液；
其中所述显色剂为氧化剂，显色剂采用福林酚试剂，体积浓度为10％；
所述显色稳定剂为碳酸钠溶液，质量体积浓度为12％；
所述标准液为没食子酸溶液，质量浓度为0.1mg/mL。
2.根据权利要求1所述的用于检测饮品总多酚含量的试剂盒，其特征在于试剂盒检测体系中优选地的多酚终浓度范围为0～6μg/mL，所述显色体系中标准液的终浓度为4μg/mL 。
3.一种用于检测饮品总多酚含量试剂盒的制备方法，其特征在于制备过程包括以下步骤：
(1)测定波长的确定
用移液枪分别移取没食子酸标准液a和茶多酚标准液b，所述的没食子酸标准液a和茶多酚标准液b的取样体积均为0.16mL，分别置于标准管a和标准管b中；向两支标准管中均加入超纯水和10％福林酚试剂，所述的超纯水和10％福林酚试剂的取样体积分别为0.8mL、0.4mL；涡旋振荡，混匀静止3min后分别向两支标准管加入12％碳酸钠溶液，所述的碳酸钠溶液的体积均为0.64mL；最后用超纯水定容至4mL，35℃水浴反应1.5h后，用紫外分光光度计在400～800nm范围内扫描，选择最佳测定波长；
茶多酚标准液b为5mg茶多酚标准品溶解于50mL超纯水中，涡流震荡充分溶解而成；
(2)显色稳定剂和显色剂体积比的确定
显色稳定剂用量的确定：用移液枪分别移取7份没食子酸标准液a，所述超纯水和标准液的体积均为0.16mL，分别置于1支空白管和6支标准管中；向7支试管均加入超纯水和10％福林酚试剂，所述超纯水和10％福林酚试剂的取样体积分别为0.8mL、0.4mL；涡旋振荡，混匀静止3min后向7支试管加入12％碳酸钠溶液，所述的碳酸钠溶液的体积分别为0mL、0.16mL、0.32mL、0.48mL、0.64mL、0.8mL、0.96mL，最后7支试管均用超纯水定容至4mL，35℃水浴反应1.5h后，在696nm波长测定吸光度，以确定碳酸钠溶液的用量；
显色剂用量的确定：用移液枪分别移取7份没食子酸标准液a，所述标准液a的体积均为0.16mL，分别置于1支空白管和6支标准管中；7支试管均加入超纯水，所述超纯水的取样体积为0.8mL，而后向7支试管中均加入10％福林酚试剂，所述10％福林酚试剂的取样体积分别为0mL、0.08mL、0.16mL、0.24mL、0.32mL、0.4mL、0.48mL；涡旋振荡，混匀静止3min后向7支试管加入12％碳酸钠溶液，所述的碳酸钠溶液体积0.16mL，最后7支试管均用超纯水定容至4mL，35℃水浴反应1.5h后，在696nm波长测定吸光度，以确定10％福林酚溶液的用量；
(3)显色温度的确定
用移液枪分别移取5份超纯水和5份没食子酸标准液，所述超纯水和标准液的体积均为0.16mL，分别置于5支空白管和5支标准管中；向10支试管均加入蒸馏水和10％福林酚试剂，所述超纯水和10％福林酚试剂的取样体积分别为0.8mL和0.48mL；涡旋振荡，混匀静止3min后向10支试管加入12％碳酸钠溶液，所述的碳酸钠溶液体积为0.16mL，最后用超纯水定容至4mL，10支试管以1支空白管和一支标准管进行组合分为5组，分别在35℃、45℃、55℃、65℃、75℃水浴反应1.5h后，在696nm波长测定吸光度，以确定显色反应的最佳温度；
(4)显色时间的确定
用移液枪分别移取5份超纯水和5份没食子酸标准液，所述标准液的体积均为0.16mL，分别置于5支空白管和5支标准管中；向10支试管均加入超纯水和10％福林酚试剂，所述超纯水和10％福林酚试剂的取样体积分别为0.8mL和0.48mL；涡旋振荡，混匀静止3min后向10支试管加入12％碳酸钠溶液，所述的碳酸钠溶液体积为0.16mL，最后用超纯水定容至4mL，10支试管以1支空白管和一支标准管进行组合分为5组，于45℃分别水浴0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h后，在696nm波长测定吸光度，以确定显色反应完全所需最佳时间；
(5)没食子酸标准曲线的建立
根据以上优化的检测体系建立标准曲线：用移液枪移取0μL、20μL、40μL、60μL、80μL、100μL、120μL、140μL、160μL、180μL、200μL、220μL、240μL没食子酸标准液于13支具塞试管中，向13支试管均加入超纯水和10％福林酚试剂，所述超纯水和10％福林酚试剂的取样体积分别为0.8mL、0.48mL；涡旋振 荡，混匀静止3min后向13支标准管加入12％碳酸钠溶液，所述的碳酸钠溶液体积为0.16mL，最后用超纯水定容至4mL，13支标准管于45℃水浴0.5h后，在696nm波长处测定吸光度。分别以以吸光度值和没食子酸浓度为纵、横坐标绘制标准曲线，并用最小二乘法得到拟合直线回归方程：y＝0.0694x+0.0019，R2＝0.9996。
4.根据权利要求3所述的用于检测饮品总多酚含量试剂盒的制备方法，其特征在于
步骤(1)中优选地最佳测定波长为696nm；
步骤(2)中优选地显色稳定剂和显色剂的最佳体积比为1:3，显色稳定剂最佳体积为0.16mL，显色剂最佳体积为0.48mL；
步骤(3)中优选地最佳显色温度为45℃；
步骤(4)优选地最佳显色时间为0.5h；
步骤(5)优选地，所述标准曲线测量的检测体系中多酚终浓度范围为0～6μg/mL，确定试剂盒标准液的终浓度为4μg/mL。
5.使用权利要求1和权利要求3所述的试剂盒进行饮品总多酚含量检测方法，其特征在于测定步骤如下：
(1)用移液枪分别移取超纯水、标准液和液态待测样品，所述的超纯水、标准液和待测样品的取样体积均为0.16mL，分别置于试剂空白管、标准管和样品管中；
(2)在步骤(1)的试剂空白管、标准管和样品管中分别加入超纯水，所述的超纯水取样体积为0.8mL；
(3)避光状态，在步骤(2)的试剂空白管、标准管和样品管中分别加入显色剂，所述显色剂的取样体积为0.48mL，涡旋振荡，室温下避光静置3min；
(4)避光状态，在步骤(3)的试剂空白管、标准管和样品管中分别加入显色稳定剂，所述的显色稳定剂的取样体积均为0.16mL，3支管均用超纯水定容至4mL，所述的超纯水的取样体积为2.4mL，涡旋振荡充分混匀，45℃水浴30min后用紫外分光光度计或半自动生化分析仪测定；
(5)取步骤(4)所得各管的混合液在半自动生化分析仪上测定，测定遵循以下顺序：
a)在半自动生化分析仪上设定相关参数，波长(696nm)，温度(37℃)，延迟时间(2s)，测量时间(2s)，试剂空白(要)，标准值(4.0μg/mL),吸入量(1000μL)；
b)按半自动生化分析仪操作提示，依次吸入蒸馏水、试剂空白、标准液(定标)、样品进行测定，直接读取屏幕上显示的数值，即试剂空白吸光值、标准液吸光值、系数、样品液吸光值及样品液总多酚浓度；
(6)取步骤(4)所得各管的混合液用5mm比色皿在紫外分光光度计上测定，试剂空白调零，测定标准液和样品液吸光度值，按以下公式计算测定结果：
计算公式：
其中C样：样品液浓度；A样：样品液吸光度；A标：标准液吸光度值；C标：标准液浓度(已知)。
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|---|---|
| CN (1) | CN105021608A (zh) |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106124428A (zh) * | 2016-06-14 | 2016-11-16 | 安徽平唐微食疗科技有限公司 | 一种总多酚含量检测方法 |
| CN107190050A (zh) * | 2016-03-14 | 2017-09-22 | 华东理工大学 | 一种hrp活性测定及h2o2浓度检测的试剂盒及其应用 |
| CN108169146A (zh) * | 2017-11-20 | 2018-06-15 | 湖北大学 | 一种在制备芳氧基含磷化合物中定性和定量测定酚的方法 |
| AT520055A1 (de) * | 2017-06-12 | 2018-12-15 | Omnignostica Forschungs Gmbh & Co Kg | Verfahren zur kolorimetrischen Bestimmung von Polyphenolen in biologischen Fluiden |
| CN109253979A (zh) * | 2018-10-26 | 2019-01-22 | 河北工业大学 | 一种陶瓷易洁性能的检测方法 |
| CN111220604A (zh) * | 2019-12-06 | 2020-06-02 | 东北农业大学 | 一种肉制品中总淀粉含量的测定方法 |
| CN111795963A (zh) * | 2020-07-29 | 2020-10-20 | 福建警察学院 | 一种显色检验哌嗪类新精神活性物质的方法 |
| CN112730294A (zh) * | 2021-02-06 | 2021-04-30 | 内蒙古大唐国际克什克腾煤制天然气有限责任公司 | 一种快速测定稀酚水中总酚含量的方法 |
| CN112924441A (zh) * | 2021-01-15 | 2021-06-08 | 上海晓创检测技术有限公司 | 一种化妆品中phmb的检测方法及其应用 |
| CN114235522A (zh) * | 2021-12-08 | 2022-03-25 | 中国科学院东北地理与农业生态研究所 | 一种检测植物中酰脲含量和尿囊酸含量的试剂盒及其方法 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101852729A (zh) * | 2010-05-20 | 2010-10-06 | 中国科学院西北高原生物研究所 | 黑果枸杞果汁质量控制方法 |
| CN101865835A (zh) * | 2010-06-10 | 2010-10-20 | 中国科学院西北高原生物研究所 | 白刺果汁质量控制方法 |
| CN101995403A (zh) * | 2010-08-18 | 2011-03-30 | 南京农业大学 | 梨果实加工能力评价的生理标记方法 |
| CN103558214A (zh) * | 2013-11-04 | 2014-02-05 | 北京林业大学 | 缺苞箭竹中多酚类物质含量的测定方法 |
| CN103585497A (zh) * | 2013-10-23 | 2014-02-19 | 浙江农林大学 | 一种竹叶中多酚的提取和检测方法 |
| CN103585498A (zh) * | 2013-10-23 | 2014-02-19 | 浙江农林大学 | 一种竹笋中多酚的提取和检测方法 |
| CN104535513A (zh) * | 2014-12-17 | 2015-04-22 | 广州白云山敬修堂药业股份有限公司 | 一种九节茶提取物及其制剂的检测方法 |
-
2015
- 2015-08-20 CN CN201510512454.1A patent/CN105021608A/zh active Pending
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101852729A (zh) * | 2010-05-20 | 2010-10-06 | 中国科学院西北高原生物研究所 | 黑果枸杞果汁质量控制方法 |
| CN101865835A (zh) * | 2010-06-10 | 2010-10-20 | 中国科学院西北高原生物研究所 | 白刺果汁质量控制方法 |
| CN101995403A (zh) * | 2010-08-18 | 2011-03-30 | 南京农业大学 | 梨果实加工能力评价的生理标记方法 |
| CN103585497A (zh) * | 2013-10-23 | 2014-02-19 | 浙江农林大学 | 一种竹叶中多酚的提取和检测方法 |
| CN103585498A (zh) * | 2013-10-23 | 2014-02-19 | 浙江农林大学 | 一种竹笋中多酚的提取和检测方法 |
| CN103558214A (zh) * | 2013-11-04 | 2014-02-05 | 北京林业大学 | 缺苞箭竹中多酚类物质含量的测定方法 |
| CN104535513A (zh) * | 2014-12-17 | 2015-04-22 | 广州白云山敬修堂药业股份有限公司 | 一种九节茶提取物及其制剂的检测方法 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| ANDRESSA BLAINSKI ET AL.: "Application and Analysis of the Folin Ciocalteu Method for the Determination of the Total Phenolic Content from Limonium Brasiliense L.", 《MOLECULES》 * |
| 居正英 等: "Folin—Ciocalteu比色法测定黑莓多酚的含量", 《食品研究与开发》 * |
| 李文仙 等: "Folin-Ciocalteu 比色法应用于蔬菜和水果总多酚含量测定的研究", 《营养学报》 * |
| 李雅江 等: "《临床生物化学检验实验》", 28 February 2014 * |
| 赵晓娟 等: "Folin-Ciocalteu法测定苹果醋饮料的总多酚含量", 《食品科学》 * |
Cited By (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107190050B (zh) * | 2016-03-14 | 2020-10-27 | 华东理工大学 | 一种hrp活性测定及h2o2浓度检测的试剂盒及其应用 |
| CN107190050A (zh) * | 2016-03-14 | 2017-09-22 | 华东理工大学 | 一种hrp活性测定及h2o2浓度检测的试剂盒及其应用 |
| CN106124428A (zh) * | 2016-06-14 | 2016-11-16 | 安徽平唐微食疗科技有限公司 | 一种总多酚含量检测方法 |
| AT520055A1 (de) * | 2017-06-12 | 2018-12-15 | Omnignostica Forschungs Gmbh & Co Kg | Verfahren zur kolorimetrischen Bestimmung von Polyphenolen in biologischen Fluiden |
| AT17526U1 (de) * | 2017-06-12 | 2022-06-15 | Omnignostica Forschungs Gmbh & Co Kg | Verfahren zur kolorimetrischen Bestimmung von Polyphenolen in veterinären oder humanen Fluiden |
| CN108169146A (zh) * | 2017-11-20 | 2018-06-15 | 湖北大学 | 一种在制备芳氧基含磷化合物中定性和定量测定酚的方法 |
| CN109253979B (zh) * | 2018-10-26 | 2021-03-16 | 河北工业大学 | 一种陶瓷易洁性能的检测方法 |
| CN109253979A (zh) * | 2018-10-26 | 2019-01-22 | 河北工业大学 | 一种陶瓷易洁性能的检测方法 |
| CN111220604A (zh) * | 2019-12-06 | 2020-06-02 | 东北农业大学 | 一种肉制品中总淀粉含量的测定方法 |
| CN111220604B (zh) * | 2019-12-06 | 2022-03-15 | 东北农业大学 | 一种肉制品中总淀粉含量的测定方法 |
| CN111795963A (zh) * | 2020-07-29 | 2020-10-20 | 福建警察学院 | 一种显色检验哌嗪类新精神活性物质的方法 |
| CN112924441A (zh) * | 2021-01-15 | 2021-06-08 | 上海晓创检测技术有限公司 | 一种化妆品中phmb的检测方法及其应用 |
| CN112924441B (zh) * | 2021-01-15 | 2023-11-17 | 上海晓创检测技术有限公司 | 一种化妆品中phmb的检测方法及其应用 |
| CN112730294A (zh) * | 2021-02-06 | 2021-04-30 | 内蒙古大唐国际克什克腾煤制天然气有限责任公司 | 一种快速测定稀酚水中总酚含量的方法 |
| CN114235522A (zh) * | 2021-12-08 | 2022-03-25 | 中国科学院东北地理与农业生态研究所 | 一种检测植物中酰脲含量和尿囊酸含量的试剂盒及其方法 |
| CN114235522B (zh) * | 2021-12-08 | 2023-05-02 | 中国科学院东北地理与农业生态研究所 | 一种检测植物中酰脲含量和尿囊酸含量的试剂盒及其方法 |
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