CN105527280A - Lgb-hrp定量注射检测水中二氧化氯和亚氯酸盐浓度的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及LGB-HRP定量注射检测水中二氧化氯和亚氯酸盐浓度的方法，LGB是一种染料，中文全称为丽丝胺绿B，能够专一性地被二氧化氯氧化褪色，吸光度稳定且基本不受其他物质干扰，因此二氧化氯浓度与LGB吸光度变化值有线性关系；HRP是一种生物催化酶，中文全称为辣根过氧化酶，能够专一性地催化亚氯酸盐为二氧化氯，从而间接地与LGB的吸光度变化值有定量线性关系。该方法是一种操作简便、精确度高、检测周期短的新型水质检测方法，准确检测出总浓度在0.2-2.2mg/L的二氧化氯和亚氯酸盐。

Description

LGB-HRP定量注射检测水中二氧化氯和亚氯酸盐浓度的方法

技术领域

本发明涉及水质检测技术领域，尤其是涉及一种LGB-HRP定量注射检测水中二氧化氯和亚氯酸盐浓度的方法。

背景技术

目前能够同时检测较清洁水体中的二氧化氯和亚氯酸盐的厂级检测方法主要有碘量法和DPD法两种。

碘量法是一种滴定操作技术，以硫代硫酸钠为滴定剂，淀粉溶液为显色剂，对水样进行滴定，二氧化氯、亚氯酸盐可氧化碘离子为单质碘，单质碘与淀粉共存时显蓝色，而硫代硫酸钠可还原单质碘使得蓝色褪去，因此硫代硫酸钠做滴定剂，通过显色变化以及二氧化氯、亚氯酸盐与硫代硫酸钠的化学计量关系实现二氧化氯和亚氯酸盐的同时测定。该方法存在的问题是测出一个水样的二氧化氯和亚氯酸盐指标，需要进行四次滴定操作，操作过程繁杂且专业性要求高、操作周期长；最低水样体积350ml，所需水样多；且对水中低浓度的二氧化氯、亚氯酸盐检测的准确度和精确度均较差，甚至无法检测到低浓度的二氧化氯和亚氯酸盐。

DPD法：是一种分光光度法，其原理是N，N-二乙基-对苯二胺(DPD)与二氧化氯、亚氯酸盐、余氯在不同pH条件下能反应生成红色化学物，在特定吸光度下可准确测定吸光度，通过不同条件下吸光度的值计算对应的二氧化氯和亚氯酸盐浓度。该方法主要存在的问题是测出一个水样的二氧化氯和亚氯酸盐指标，需要测量三次吸光度，由于红色化合物的稳定性不够好，对操作者的熟练程度和专业性要求高；操作周期较长；二氧化氯和亚氯酸盐浓度高于2.0mg/L时，检测的准确度和精确度差；水样中若有锰的氧化物、铁离子、碘化物等物质时，还会对检测产生干扰。

发明内容

本发明的目的是提供一种LGB-HRP定量注射检测水中二氧化氯和亚氯酸盐浓度的方法，利用LGB(丽丝胺绿B)-HRP(辣根过氧化酶)定量注射分光光度法解决现有技术中存在检测方法操作复杂、操作周期长、专业性要求高以及准确度和精确度差的问题。

本发明解决技术问题所采用的技术方案是：一种LGB-HRP定量注射检测水中二氧化氯和亚氯酸盐浓度的方法，包括步骤如下：

A、配制缓冲溶液：将柠檬酸三钠、柠檬酸氢二钠、甘氨酸和水配成pH为6.0～6.2缓冲溶液；

B、分别配制LGB待用液和HRP待用液：将LGB溶于水中，并加入步骤A配制的缓冲溶液使pH为6.0～6.2，得到LGB待用液，该LGB待用液以空白水样为基准测定的吸光度值为1.5±0.1；将HRP溶于水中，并加入步骤A配制的缓冲溶液使pH为6.0～6.2，得到HRP待用液，其中HRP的浓度为1.0g/L～1.4g/L；

C、配制LGB-HRP混合溶液：将所述LGB待用液与HRP待用液混合；

D、准备待测水样：将待测水样分成第一待测水样和第二待测水样，对所述第二待测水样进行曝气直至第二待测水样中黄绿色褪去为止；其中第一待测水样用于检测水中二氧化氯和亚氯酸盐的总浓度，曝气后的第二待测水样用于检测水中亚氯酸盐的浓度；

E、调配待测水样的pH：在第一待测水样和第二待测水样中分别混入步骤A配制的缓冲溶液使第一待测水样和第二待测水样pH均为6.0～6.2；

F、处理待测水样：在步骤E调配后的第一待测水样中抽取出1/25体积量的液体，再注射补入相同体积量步骤C配制的LGB-HRP混合溶液，第一待测水样中的二氧化氯和亚氯酸盐均被充分反应后得到第一检测溶液；在步骤E调配后的第二待测水样中抽取出1/25体积量的液体，再注射补入相同体积量步骤C配制的LGB-HRP混合溶液，第二待测水样中的亚氯酸盐被充分反应后得到第二检测溶液；

G、测定吸光度值：分别对第一检测溶液和第二检测溶液通过分光光度计测量得到第一吸光度值和第二吸光度值。

在本发明的LGB-HRP定量注射检测水中二氧化氯和亚氯酸盐浓度的方法中，在步骤A中，柠檬酸三钠、柠檬酸氢二钠、甘氨酸和水的质量比为9：5：1：125。

在本发明的LGB-HRP定量注射检测水中二氧化氯和亚氯酸盐浓度的方法中，在步骤B中，LGB溶于水中所用的水量与加入的缓冲溶液的体积比为15～24：1。

在本发明的LGB-HRP定量注射检测水中二氧化氯和亚氯酸盐浓度的方法中，在步骤B中，HRP溶于水中所用的水量与加入的缓冲溶液的体积比为15～24：1。

在本发明的LGB-HRP定量注射检测水中二氧化氯和亚氯酸盐浓度的方法中，在步骤B中，HRP待用液中HRP的浓度为1.2g/L。

在本发明的LGB-HRP定量注射检测水中二氧化氯和亚氯酸盐浓度的方法中，在步骤C中，所述LGB待用液与HRP待用液以体积比为1：1的比例混合。

在本发明的LGB-HRP定量注射检测水中二氧化氯和亚氯酸盐浓度的方法中，在步骤D中，对所述第二待测水样进行曝气的时间为10min～30min。

在本发明的LGB-HRP定量注射检测水中二氧化氯和亚氯酸盐浓度的方法中，在步骤E中，所述第一待测水样与缓冲溶液的体积配比比例为24：1；所述第二待测水样与缓冲溶液的体积配比比例为24：1。

在本发明的LGB-HRP定量注射检测水中二氧化氯和亚氯酸盐浓度的方法中，在步骤G中，检测第一吸光度值和第二吸光度值是将第一检测溶液和第二检测溶液分别装入1cm光程比色皿中，在633nm波长下进行检测。

实施本发明的LGB-HRP定量注射检测水中二氧化氯和亚氯酸盐浓度的方法，具有以下有益效果：本发明采用LGB-HRP定量注射分光光度法来同时检测水中二氧化氯和亚氯酸盐，该方法是一种操作简便、精确度高、检测周期短的新型水质检测方法；LGB是一种染料，中文全称为丽丝胺绿B，能够专一性地被二氧化氯氧化褪色，吸光度稳定且基本不受其他物质干扰，因此二氧化氯浓度与LGB吸光度变化值有线性关系；HRP是一种生物催化酶，中文全称为辣根过氧化酶，能够专一性地催化亚氯酸盐为二氧化氯，从而间接地与LGB的吸光度变化值有定量线性关系。该法能够在短时间内，通过独创的注射器定量注射药剂的简单操作，准确检测出总浓度在0.2-2.2mg/L的二氧化氯和亚氯酸盐；适用于二氧化氯做预氧化剂或消毒剂的饮用水净水工艺过程中，出水及过程水中二氧化氯和亚氯酸盐两个指标的同时检测；同时适用于大批量检测，如使用二氧化氯的相关实验研究过程中，反应过程或结束时的二氧化氯剩余量，以及亚氯酸盐的生成量。LGB-HRP定量注射分光光度法是一种对二氧化氯和亚氯酸盐选择性好，显色稳定的针对性检测方法，其主要优点(1)操作简便，专业性要求不高，通过注射器的定量注射和分光光度计检测操作即可完成；(2)检测周期短，单个样品检测过程不超过40min，设备简便，特别适合实验室批量检测及厂级日常检测；(3)精确度高，检测时LGB显色稳定，在0.2-2.2mg/L范围内，不需重复测定标准曲线，线性相关系数达到0.999以上；(4)干扰物质种类少，可有效屏蔽干扰物质，LGB与二氧化氯的反应具有专一性，HRP对亚氯酸盐的反应也具有专一性，不易受其他物质干扰，余氯可使用甘氨酸进行有效屏蔽；(5)需要的水样体积少，只需150ml左右即可完成检测。

附图说明

图1为本发明实施例1的标准曲线图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例，对本发明的LGB-HRP定量注射检测水中二氧化氯和亚氯酸盐浓度的方法作进一步说明：

本发明采用LGB-HRP定量注射分光光度法来同时检测水中二氧化氯和亚氯酸盐，该方法是一种操作简便、精确度高、检测周期短的新型水质检测方法，其中LGB是一种染料，中文全称为丽丝胺绿B，能够被专一性地被二氧化氯氧化褪色，吸光度稳定且基本不受其他物质干扰，因此二氧化氯浓度与LGB吸光度变化值有线性关系；HRP是一种生物催化酶，中文全称为辣根过氧化酶，能够专一性地催化亚氯酸盐为二氧化氯，从而间接地与LGB的吸光度变化值有定量线性关系。

本发明的LGB-HRP定量注射检测水中二氧化氯和亚氯酸盐浓度的方法包括步骤如下：

S1、配制缓冲溶液：将柠檬酸三钠、柠檬酸氢二钠、甘氨酸和水配成pH为6.0～6.2缓冲溶液，其中柠檬酸三钠、柠檬酸氢二钠、甘氨酸和水的质量比优选为9：5：1：125，使该缓冲溶液稳定的在pH6.0～6.2范围内，这是因为HRP在该pH范围内活性最大，有利于保证HRP快速催化亚氯酸盐为二氧化氯，加速检测过程，节省检测时间。

在上述缓冲溶液中甘氨酸不仅起到调适pH的作用，同时还能够屏蔽一些化学物质对检测的影响，如可以屏蔽游离Cl₂、ClO^-等，而选择柠檬酸三钠和柠檬酸氢二钠来制备缓冲溶液，是为了使LGB可以稳定存在，LGB在上述缓冲溶液中损失率小，达到稳定的时间较短，不易随时间延长而失色，且所测得的吸光度值较大，有利于检测的灵敏性，进而可以提高本发明检测方法的准确度和精确度。表1显示了2小时内LGB在不同缓冲溶液中的损失率，表明LGB在柠檬酸三钠和柠檬酸氢二钠形成的缓冲溶液中的损失率较小，虽然LGB在三羟甲基氨基甲烷缓冲液中的损失率也较小，但LGB的吸光度值较小，说明LGB在三羟甲基氨基甲烷缓冲液中进行检测时不灵敏，容易给检测结果造成误差。

表1：

S2、分别配制LGB待用液和HRP待用液。LGB待用液的配置：将LGB溶于水中，并加入适量步骤S1中配制的缓冲溶液使pH为6.0～6.2，得到LGB待用液，其中LGB溶于水时所用的水量与缓冲溶液的体积比优选为15～24：1，更优选地为24：1，可以使pH稳定在6.0左右。将LGB待用液中LGB的浓度控制在320mg/L～400mg/L，这样可以保证LGB待用液以空白水样为基准的吸光度值为1.5±0.1，可以提高检测的准确度和精确度，尤其是总浓度在0.2mg/L～2.2mg/L范围内的二氧化氯和亚氯酸盐可以准确、精确的测出，因此比传统检测方法的检测效果更佳，即使低至0.2mg/L或高至2.2mg/L的二氧化氯和亚氯酸盐都可以准确且精确的测出，所谓空白水样为去离子纯化水。其中LGB待用液中LGB的浓度通过下述方式确定，在25ml测样瓶中注满去离子纯水，用注射器抽出1ml去离子纯水，补入1ml步骤S1配制的缓冲溶液，摇匀；然后再从中去除1ml溶液，补入1ml配制的LGB待用液，摇匀，得到待测溶液；将待测溶液放在1cm吸光皿中在633nm波长下测定吸光度值，吸光度值在1.5±0.1时即为合适的LGB浓度溶液，需要说明的是上述确定LGB浓度的方法仅仅是示意性的，该方法应与下述检测过程中S5步骤、S6步骤中操作相同，彼此是平行操作的关系。

HRP待用液的配置：将HRP溶于水中，并加入适量步骤S1中配制的缓冲溶液使pH为6.0～6.2，得到HRP待用液，其中HRP溶于水时所用的水量与缓冲溶液的体积比优选为15～24：1，更优选地为24：1，可以使pH稳定在6.0左右。另外HRP的浓度为1.0g/L～1.4g/L，优选地HRP的浓度为1.2g/L，该浓度的HRP可以最快速的催化亚氯酸盐转化为二氧化氯同时又不浪费HRP。

S3、配制LGB-HRP混合溶液：将LGB待用液与HRP待用液相互混合，优选地以体积比1：1的比例混合。

S4、准备待测水样：取约100ml～150ml的待测水样，将待测水样分别装于测样瓶A中作为第一待测水样和测样瓶B中作为第二待测水样，对第二待测水样利用氮气罐通过曝气装置进行曝气，以溶液中黄绿色完全褪去为准，曝气的时间优选为10min～30min，目的是去除二氧化氯，以免影响亚氯酸盐的检测。第一待测水样用于检测水中二氧化氯和亚氯酸盐的总浓度，第二待测水样用于检测水中亚氯酸盐的浓度，则水中二氧化氯的浓度＝第一待测水样测定的总浓度-第二待测水样测定的亚氯酸盐的浓度。具体地，测样瓶A和测样瓶B均为25ml棕色顶空进样瓶，要求体积精准，并配有铁氟龙旋转盖和垫片，分别将25ml第一待测水样和25ml第二待测水样装满于25ml棕色顶空进样瓶中，以倒置无气泡为准。

S5、调配待测水样的pH：在第一待测水样和第二待测水样中分别混入步骤S1中配制的缓冲溶液使第一待测水样和第二待测水样pH均为6.0～6.2。

其中第一待测水样与缓冲溶液的体积配比比例优选为24：1，可以从步骤S4中的测样瓶A中使用注射器抽取1ml的第一待测水样并去除掉，同时补入1ml的缓冲溶液，当然也可以从一开始就直接以配比比例将第一待测水样与缓冲溶液混合并装满测样瓶A；同样第二待测水样与缓冲溶液的体积配比比例优选为24：1，以相同的方式从步骤S4中的测样瓶B中使用注射器抽取1ml的第二待测水样并去除掉，同时补入1ml的缓冲溶液，当然也可以从一开始就直接以配比比例将第二待测水样与缓冲溶液混合并装满测样瓶B。所使用的注射器要求体积精准，气密性好，最好选用钢制注射针头。

S6、处理待测水样：

从步骤S5调配后的第一待测水样中抽取该第一待测水样体积量的1/25并去除掉，并同时在剩余的第一待测水样中补入相同体积量的步骤S3中配制的LGB-HRP混合溶液，剩余的第一待测水样与LGB-HRP混合溶液充分反应后得到第一检测溶液，即抽取去除掉1ml第一待测水样，并补入1ml的LGB-HRP混合溶液；从步骤S5调配后的第二待测水样中抽取该第二待测水样体积量的1/25并去除掉，同时在剩余的第二待测水样中补入相同体积量的步骤S3中配制的LGB-HRP混合溶液，剩余的第二待测水样与LGB-HRP混合溶液反应后得到第二检测溶液，即抽取去除掉1ml第二待测水样，并补入1ml的LGB-HRP混合溶液。

其中剩余的第一待测水样和剩余的第二待测水样分别与LGB-HRP混合溶液在室温下反应15min～30min，优选地反应20min,即可进行测定吸光度值。

S7、测定吸光度值：在633nm波长条件下通过分光光度计使用1cm的比色皿分别对第一检测溶液和第二检测溶液测量得到第一吸光度值和第二吸光度值。

S8、绘制标准曲线：将亚氯酸盐溶于水中配制不同的浓度的亚氯酸盐溶液，重复S4-S6步骤，与第一待测水样并行操作，测定吸光度值，所测定的吸光度值和空白水样为基准的吸光度值之间的差值与亚氯酸盐的浓度呈线性关系，绘制标准曲线。

S9、计算待测水样中的二氯化氯和亚氯酸盐的浓度：将S7步骤的第一吸光度值和第二吸光度值分别与空白水样为基准的吸光度值之间的差值代入标准曲线中，第二检测溶液获取的浓度即为水中亚氯酸盐的浓度，水中二氧化氯浓度通过下式计算：

水中二氧化氯浓度＝第一检测溶液中二氧化氯和亚氯酸盐的总浓度-第二检测溶液中的亚氯酸盐浓度。

在上述检测过程除了待测水样，其它所用水均采用去离子水，以免对检测造成干扰。

该法能够在短时间内，通过独创的注射器定量注射药剂的简单操作，准确检测出总浓度在0.2-2.2mg/L的二氧化氯和亚氯酸盐；适用于二氧化氯做预氧化剂或消毒剂的饮用水净水工艺过程中，出水及过程水中二氧化氯和亚氯酸盐两个指标的同时检测；同时适用于大批量检测，如使用二氧化氯的相关实验研究过程中，反应过程或结束时的二氧化氯剩余量，以及亚氯酸盐的生成量。

下面通过不同实施例进行具体说明。

实施例1：

取18g柠檬酸三钠、10g柠檬酸二氢钠和2g甘氨酸加去离子水溶解，溶解后继续加去离子水在250ml容量瓶中定容至250ml，得到缓冲溶液，pH＝6.0，待用；取240mgLGB使用去离子水定容于250ml容量瓶中，使用磁力搅拌器搅拌24h后得到浓LGB溶液待用，从中取100ml浓LGB溶液和上述缓冲溶液15ml转移到250ml容量瓶中并使用去离子水定容，得到LGB待用液，pH＝6.0；取300mgHRP和上述缓冲溶液15ml，用去离子水溶解并定容至250ml容量瓶中，得到HRP待用液，pH＝6.0；将LGB待用液和HRP待用液全部倒入棕色试剂瓶中，得到LGB-HRP混合溶液，用前摇匀，至少放置一小时，即可使用，也可以加入10滴三氯甲烷，放入冰箱中，可保存两周。

在三个25ml测样瓶中分别注满去离子纯水，分别用注射器抽出1ml去离子纯水，再分别补入1ml的缓冲溶液，摇匀；然后再分别从中去除1ml溶液，补入1ml配制的LGB待用液，摇匀，分别得到三份待测溶液；将待测溶液放在1cm吸光皿中在633nm波长下分别测定吸光度值，吸光度值分别为1.4979、1.4218和1.463，即LGB待用液为以空白水样为基准的吸光度值。

取约100-150ml待测水样，将待测水样分成第一待测水样和第二待测水样，将第一待测水样装满25ml的测样瓶A，以倒置无气泡为准；将第二待测水样曝气15min，装满25ml的测样瓶B，以倒置无气泡为准；使用注射器分别从测样瓶A和测样瓶B中取出1ml待测水样，然后分别补注入1ml上述缓冲溶液，混合均匀，其中测样瓶A中pH＝6.1，测样瓶B中pH＝6.0；再使用注射器分别从测样瓶A和测样瓶B中取出加入缓冲溶液后的待测水样1ml，然后分别补注入1ml的LGB-HRP混合溶液，混合均匀后，室温条件下反应20min，在633nm条件下，使用光程1cm的比色皿测量吸光度值，其中测样瓶A中的吸光度值为1.0543，测样瓶B中的吸光度值为1.2900。

用去离子水配制浓度分别为0.2mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L、2.2mg/L的亚氯酸盐标准溶液，重复第一待测水样测定吸光度值的操作过程，与第一待测水样并行操作，测出的吸光度值及计算见表2-4；以亚氯酸盐的标准浓度为横坐标，以表3中计算的吸光度差值为纵坐标，绘制标准曲线如图1所示，其标准曲线公式为y＝0.2558x+0.1149。

表2：

亚氯酸盐浓度mg/L	0.2	0.5	1.0	1.5	2.2
						吸光度值	1.3011	1.2186	1.0825	0.9569	0.79

表3：

表3中的吸光度差值为空白水样所测吸光度值的平均值与亚氯酸盐吸光度值的差值。

表4：

表4中吸光度差值为空白水样所测吸光度值的平均值分别与测样瓶A和测样瓶B中所测吸光度值的差值。从表4数据显示，待测水样中二氧化氯浓度为0.9214mg/L，亚氯酸盐浓度为0.2189mg/L。

实施例2：

取20g柠檬酸三钠、12g柠檬酸二氢钠和2g甘氨酸加去离子水溶解，溶解后继续加去离子水在250ml容量瓶中定容至250ml，得到缓冲溶液，pH＝6.2,待用；取200mg的LGB使用去离子水定容于250ml容量瓶中，使用磁力搅拌器搅拌24h后得到浓LGB溶液待用，从中取100ml浓LGB溶液和上述缓冲溶液12ml转移到250ml容量瓶中并使用去离子水定容，得到LGB待用液，pH＝6.2；取250mgHRP和上述缓冲溶液12ml，用去离子水溶解并定容至250ml容量瓶中，得到HRP待用液，pH＝6.2；将LGB待用液和HRP待用液全部倒入棕色试剂瓶中，得到LGB-HRP混合溶液，用前摇匀，至少放置一小时，即可使用，也可以加入10滴三氯甲烷，放入冰箱中，可保存两周。

在三个25ml测样瓶中分别注满去离子纯水，分别用注射器抽出1ml去离子纯水，再分别补入1ml的缓冲溶液，摇匀；然后再分别从中去除1ml溶液，补入1ml配制的LGB待用液，摇匀，分别得到三份待测溶液；将待测溶液放在1cm吸光皿中在633nm波长下分别测定吸光度值，吸光度值分别为1.4876、1.4233和1.4521，即LGB待用液为以空白水样为基准的吸光度值。

取约100-150ml待测水样，将待测水样分成第一待测水样和第二待测水样，将第一待测水样装满25ml的测样瓶A，以倒置无气泡为准；将第二待测水样曝气10min，装满25ml的测样瓶B，以倒置无气泡为准；使用注射器分别从测样瓶A和测样瓶B中取出1ml待测水样，然后分别补注入1ml上述缓冲溶液，混合均匀，其中测样瓶A中pH＝6.0，测样瓶B中pH＝6.2；再使用注射器分别从测样瓶A和测样瓶B中取出加入缓冲溶液后的待测水样1ml，然后分别补注入1ml的LGB-HRP混合溶液，混合均匀后，室温条件下反应30min，在633nm条件下，使用光程1cm的比色皿测量吸光度值，其中测样瓶A中的吸光度值为1.1231，测样瓶B中的吸光度值为1.2256。

用去离子水配制浓度分别为0.2mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L、2.2mg/L的亚氯酸盐标准溶液，重复第一待测水样测定吸光度值的操作过程，与第一待测水样并行操作，与实施例1相同的计算方式得出标准曲线，然后将空白水样的平均吸光度值分别与测样瓶A和测样瓶B中吸光度值的差值代入标准曲线，与实施例1相同的方式计算出待测水样的二氧化氯浓度和亚氯酸盐浓度。

实施例3：

取15g柠檬酸三钠、8g柠檬酸二氢钠和1.8g甘氨酸加去离子水溶解，溶解后继续加去离子水在250ml容量瓶中定容至250ml，得到缓冲溶液，pH＝6.1，待用；取250mg的LGB使用去离子水定容于250ml容量瓶中，使用磁力搅拌器搅拌24h后得到浓LGB溶液待用，从中取100ml浓LGB溶液和上述缓冲溶液10ml转移到250ml容量瓶中并使用去离子水定容，得到LGB待用液，pH＝6.1；取350mgHRP和上述缓冲溶液10ml，用去离子水溶解并定容至250ml容量瓶中，得到HRP待用液，pH＝6.1；将LGB待用液和HRP待用液全部倒入棕色试剂瓶中，得到LGB-HRP混合溶液，用前摇匀，至少放置一小时，即可使用，也可以加入10滴三氯甲烷，放入冰箱中，可保存两周。

在三个25ml测样瓶中分别注满去离子纯水，分别用注射器抽出1ml去离子纯水，再分别补入1ml的缓冲溶液，摇匀；然后再分别从中去除1ml溶液，补入1ml配制的LGB待用液，摇匀，分别得到三份待测溶液；将待测溶液放在1cm吸光皿中在633nm波长下分别测定吸光度值，吸光度值分别为1.5012、1.5278和1.5832，即LGB待用液为以空白水样为基准的吸光度值。

取约100-150ml待测水样，将待测水样分成第一待测水样和第二待测水样，将第一待测水样装满25ml的测样瓶A，以倒置无气泡为准；将第二待测水样曝气30min，装满25ml的测样瓶B，以倒置无气泡为准；使用注射器分别从测样瓶A和测样瓶B中取出1ml待测水样，然后分别补注入1ml上述缓冲溶液，混合均匀，其中测样瓶A中pH＝6.2，测样瓶B中pH＝6.1；再使用注射器分别从测样瓶A和测样瓶B中取出加入缓冲溶液后的待测水样1ml，然后分别补注入1ml的LGB-HRP混合溶液，混合均匀后，室温条件下反应15min，在633nm条件下，使用光程1cm的比色皿测量吸光度值，其中测样瓶A中的吸光度值为1.0856，测样瓶B中的吸光度值为1.1938。

用去离子水配制浓度分别为0.2mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L、2.2mg/L的亚氯酸盐标准溶液，重复第一待测水样测定吸光度值的操作过程，与第一待测水样并行操作，与实施例1相同的计算方式得出标准曲线，然后将空白水样的平均吸光度值分别与测样瓶A和测样瓶B中吸光度值的差值代入标准曲线，与实施例1相同的方式计算出待测水样的二氧化氯浓度和亚氯酸盐浓度。

本发明主要优点：(1)操作简便，专业性要求不高，通过注射器的定量注射和分光光度计检测操作即可完成；(2)检测周期短，单个样品检测过程不超过40min，设备简便，特别适合实验室批量检测及厂级日常检测；(3)精确度高，检测时LGB显色稳定，在0.2-2.2mg/L范围内，不需重复测定标准曲线，线性相关系数达到0.999以上；(4)干扰物质种类少，可有效屏蔽干扰物质，LGB与二氧化氯的反应具有专一性，HRP对亚氯酸盐的反应也具有专一性，不易受其他物质干扰，余氯可使用甘氨酸进行有效屏蔽；(5)需要的水样体积少，只需150ml左右即可完成检测。

应当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，所有这些改进或变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种LGB-HRP定量注射检测水中二氧化氯和亚氯酸盐浓度的方法，其特征在于，包括步骤如下：

A、配制缓冲溶液：将柠檬酸三钠、柠檬酸氢二钠、甘氨酸和水配成pH为6.0～6.2缓冲溶液；

B、分别配制LGB待用液和HRP待用液：将LGB溶于水中，并加入步骤A配制的缓冲溶液使pH为6.0～6.2，得到LGB待用液，该LGB待用液以空白水样为基准测定的吸光度值为1.5±0.1；将HRP溶于水中，并加入步骤A配制的缓冲溶液使pH为6.0～6.2，得到HRP待用液，其中HRP的浓度为1.0g/L～1.4g/L；

C、配制LGB-HRP混合溶液：将所述LGB待用液与HRP待用液混合；

D、准备待测水样：将待测水样分成第一待测水样和第二待测水样，对所述第二待测水样进行曝气直至第二待测水样中黄绿色褪去为止；其中第一待测水样用于检测水中二氧化氯和亚氯酸盐的总浓度，曝气后的第二待测水样用于检测水中亚氯酸盐的浓度；

E、调配待测水样的pH：在第一待测水样和第二待测水样中分别混入步骤A配制的缓冲溶液使第一待测水样和第二待测水样pH均为6.0～6.2；

F、处理待测水样：在步骤E调配后的第一待测水样中抽取出1/25体积量的液体，再注射补入相同体积量步骤C配制的LGB-HRP混合溶液，第一待测水样中的二氧化氯和亚氯酸盐均被充分反应后得到第一检测溶液；在步骤E调配后的第二待测水样中抽取出1/25体积量的液体，再注射补入相同体积量步骤C配制的LGB-HRP混合溶液，第二待测水样中的亚氯酸盐被充分反应后得到第二检测溶液；

G、测定吸光度值：分别对第一检测溶液和第二检测溶液通过分光光度计测量得到第一吸光度值和第二吸光度值。

2.根据权利要求1所述的LGB-HRP定量注射检测水中二氧化氯和亚氯酸盐浓度的方法，其特征在于，在步骤A中，柠檬酸三钠、柠檬酸氢二钠、甘氨酸和水的质量比为9：5：1：125。

3.根据权利要求1所述的LGB-HRP定量注射检测水中二氧化氯和亚氯酸盐浓度的方法，其特征在于，在步骤B中，LGB溶于水中所用的水量与加入的缓冲溶液的体积比为15～24：1。

4.根据权利要求1所述的LGB-HRP定量注射检测水中二氧化氯和亚氯酸盐浓度的方法，其特征在于，在步骤B中，HRP溶于水中所用的水量与加入的缓冲溶液的体积比为15～24：1。

5.根据权利要求1所述的LGB-HRP定量注射检测水中二氧化氯和亚氯酸盐浓度的方法，其特征在于，在步骤B中，HRP待用液中HRP的浓度为1.2g/L。

6.根据权利要求5所述的LGB-HRP定量注射检测水中二氧化氯和亚氯酸盐浓度的方法，其特征在于，在步骤C中，所述LGB待用液与HRP待用液以体积比为1：1的比例混合。

7.根据权利要求1所述的LGB-HRP定量注射检测水中二氧化氯和亚氯酸盐浓度的方法，其特征在于，在步骤D中，对所述第二待测水样进行曝气的时间为10min～30min。

8.根据权利要求1所述的LGB-HRP定量注射检测水中二氧化氯和亚氯酸盐浓度的方法，其特征在于，在步骤E中，所述第一待测水样与缓冲溶液的体积配比比例为24：1；所述第二待测水样与缓冲溶液的体积配比比例为24：1。

9.根据权利要求1所述的LGB-HRP定量注射检测水中二氧化氯和亚氯酸盐浓度的方法，其特征在于，在步骤G中，检测第一吸光度值和第二吸光度值是将第一检测溶液和第二检测溶液分别装入1cm光程比色皿中，在633nm波长下进行检测。