CN104048928A - 直接胆红素检测试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种直接胆红素检测试剂盒，该试剂盒由试剂R₁和试剂R₂组成的液体型双试剂，其中试剂R₁组分及浓度为：酒石酸缓冲液100~300mmol/L，表面活性剂0.1-2g/L，间胆抑制剂0.2~3g/L；试剂R₂ 组分及浓度为：磷酸盐缓冲液4~20mmol/L，化学氧化剂2~12mmol/L。本发明直接胆红素检测试剂盒特异性更好，抗干扰能力更强，线性更高等优点，可以抗血红蛋白、脂血的干扰，基本能覆盖所有的临床标本，不管胆红素有多高，脂血有多高，线性均在800UMOL/L以上，适用于全自动生化分析仪，试剂稳定性可达2年，本发明的设计合理，实用性强，适于广泛使用和推广。

Description

直接胆红素检测试剂盒

技术领域

本发明涉及一种直接胆红素检测试剂盒，属于生物制剂领域。

背景技术

目前测定血清胆红素的方法主要有重氮法、酶法，重氮法试剂不稳定，必须由亚硝酸钠和氨基磺酸临时配制，且保存时间较短，而且重氮试剂与间接胆红素和直接胆红素反应的特异性不佳，在一定条件下测定直接胆红素时，有少量的间接胆红素参与反应,如果反应时间延长,参与的会更多，从而导致测定值不准，酶法价格较贵，而其中的胆红素氧化酶也易发生活性下降，影响测定的准确性。

化学氧化法有钒酸盐氧化法和亚硝酸盐氧化法，钒酸氧化法具有试剂稳定、反应稳定、抗干扰能力强等特点，但钒酸盐法易受ALT\AST等离子的干扰，且钒离子为重金属，易污染环境，亚硝酸盐氧虽能减少因氧化反应产生的干扰，但亚硝酸盐法和钒酸盐法都受间胆，如游离胆红素、δ-胆红素等的干扰，在临床上容易出现假阳性，影响测定的结果。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术存在的缺陷，提供一种直接胆红素检测试剂盒

实现本发明目的的技术方案是：一种直接胆红素检测试剂盒，该试剂盒由试剂R₁和试剂R₂以体积比为R₁：R₂=4：1混合组成，其中试剂组成和浓度为：

试剂R₁：

酒石酸缓冲液              100~300mmol/L

表面活性剂                0.1-2g/L

间胆抑制剂                0.2~3g/L

试剂R₂ ：

磷酸盐缓冲液              4~20mmol/L

化学氧化剂                2~12mmol/L

本发明直接胆红素检测试剂盒优选为：

试剂R₁：

酒石酸缓冲液              150~250mmol/L

表面活性剂                0.1~2g/L

间胆抑制剂                0.5~1.5g/L

试剂R₂ ：

磷酸盐缓冲液              6~12mmol/L

化学氧化剂                4~11mmol/L

本发明直接胆红素检测试剂盒最优选为：

试剂R₁：

酒石酸缓冲液              200mmol/L

表面活性剂                1g/L

间胆抑制剂                0.8g/L

试剂R₂ ：

磷酸盐缓冲液              10mmol/L

化学氧化剂                8mmol/L

本发明直接胆红素检测试剂盒R₁和试剂R₂中的原料选择依据是：

酒石酸缓冲液：利于试剂中各种成分的分散，可提高试剂的稳定性。

表面活性剂：包被胆红素，排除其他类型胆红素的干扰。

间胆抑制：去除游离胆红素、δ-胆红素等的干扰。

磷酸盐缓冲液：利于试剂中各种成分的分散，可提高试剂的稳定性。

化学氧化剂：一种综合氧化剂，在反应中作为主要的氧化物质，较一般氧化剂电子匹配能力更强。

本发明试剂盒试剂R₁和试剂R₂的制备采用常规方法混合搅匀即可。

本发明的试剂盒通过下列方法测定直接胆红素：直接胆红素在间胆抑制剂和表面活性剂的存在下，被化学氧化剂氧化，生成胆绿素，测定450nm处吸光度的减少量与直接胆红素的浓度成正比。

应用本发明直接胆红素检测试剂盒测定样本中直接胆红素的测定方法如下：样本加试剂R₁混匀，30~40℃反应3~5min后读取吸光度A₁，加入试剂R₂混匀，30~40℃反应3~5min后读取吸光度A₂，根据公式：直接胆红素=样本吸光度(A₂-A₁)×标准液浓度/标准液吸光度 (A₂-A₁)，得出直接胆红素的含量。其中，样品用量8μL，试剂R₁用量200-300μL，试剂R₂用量30-120μL。

本发明具有积极的效果：特异性更好，抗干扰能力更强，线性更高等优点，可以抗血红蛋白、脂血的干扰，基本能覆盖所有的临床标本，不管胆红素有多高，脂血有多高，线性均在800UMOL/L以上，适用于全自动生化分析仪，试剂稳定性可达2年，本发明的设计合理，实用性强，适于广泛使用和推广。

附图说明

为了使本发明的内容更容易被清楚地理解，下面根据具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中

图1 本发明试剂盒测定直接胆红素的实时反映曲线图。

图2 是对比试剂盒测定直接胆红素的实时反映曲线图。

图1、图2中横坐标为日立7060全自动生化分析仪反应监测的时刻，按10分钟分为31个点，每个点都有吸光度反应的时间点，纵坐标为吸光度A。

图3是本发明直接胆红素检测试剂盒测定值与真实值的线性示意图。

图4是对比试剂盒测定值与真实值的线性示意图。

具体实施方式

下面结合图1、图2、图3、图4和表格对本发明直接胆红素检测试剂盒与对比试剂盒的性能进行比较。

实施例1：

试剂R₁         酒石酸缓冲液100mmol/L

表面活性剂                0.1g/L

间胆抑制剂                0.2~3g/L

试剂R₂         磷酸盐缓冲液4mmol/L

化学氧化剂                2mmol/L

实施例2：

试剂R₁         酒石酸缓冲液300mmol/L

表面活性剂                2g/L

间胆抑制剂                3g/L

试剂R₂         磷酸盐缓冲液20mmol/L

化学氧化剂               12mmol/L

实施例3：

试剂R₁         酒石酸缓冲液150 mmol/L

表面活性剂                0.1 g/L

间胆抑制剂                0.5g/L

试剂R₂        磷酸盐缓冲液6 mmol/L

化学氧化剂                4mmol/L

实施例4：

试剂R₁         酒石酸缓冲液250mmol/L

表面活性剂                 2g/L

间胆抑制剂                 1.5g/L

试剂R₂         磷酸盐缓冲液12mmol/L

化学氧化剂                 11mmol/L

实施例5：

试剂R₁         酒石酸缓冲液200mmol/L

表面活性剂                1g/L

间胆抑制剂                0.8g/L

试剂R₂         磷酸盐缓冲液10mmol/L

化学氧化剂                8mmol/L

对比例

对比例试剂盒为一种国内市售的直接胆红素检测试剂盒，其成分及配方为:

试剂1          Good's酸缓冲液150mmol/L

反应促进剂、抗干扰剂

试剂1          氧化剂4.0mmol/L

非特异反应抑制剂                30.0mmol/L

本发明直接胆红素检测试剂盒的性能测试如下：

试验1：线性范围

配制0、100、200、300、400、500、600、700、800μmol/L直接胆红素标准溶液。分别用本发明直接胆红素试剂盒和对比试剂盒来测定其浓度，结果见表1。

本发明直接胆红素检测试剂盒和对比试剂盒测定样本中直接胆红素的测定方法如下：样本加试剂R₁混匀，30~40℃反应3~5min后读取吸光度A₁，加入试剂R₂混匀，30~40℃反应3~5min后读取吸光度A₂，根据公式直接胆红素=样本吸光度(A₂-A₁)×标准液浓度/标准液吸光度 (A₂-A₁)，得出直接胆红素的含量，其中，样品用量8μL，试剂R₁用量200-300μL，试剂R₂用量30-120μL。

表1 本发明试剂盒和对比试剂盒测定线性范围对比

本发明试剂盒的线性范围较对比试剂盒的高300.7%。在直接胆红素浓度大于500μmol/L时，对比试剂盒不能检出，线性范围过小，由此可见本发明试剂盒具有较大的线性测试范围。

试验2：灵敏度

如图1、2所示，通过试剂盒与待测胆红素样本的实时反应曲线来评价本发明试剂盒的灵敏度，并与对比试剂盒进行比较说明。测定方法同试验1。

从图上的反应曲线上来看，本发明试剂盒的反应曲线标准、规范，吸光度高，加入试剂R₂后下降速度明显，反应结束后吸光度基本趋于稳定。而对照试剂盒在加样本和入试剂R₁后吸光度较低，且加入试剂R₂后下降幅度较小，反应结束后仍继续游下降趋势。

因此得出本发明具有较高的灵敏度。

试验3：准确度

以罗氏校准品定标，分别用本发明试剂盒和对比试剂盒来测定罗氏高、低值质控。测试方法同试验1，结果见表2。

表2 本发明试剂盒和对比试剂盒测定结果对比

从表2上可以看出，虽然本发明和对比试剂盒的测定均在2SD以内，但本发明的准确度明显更高，对大量的临床样本进行测试，从相关性上来看，本发明试剂盒的相关性更好，具体如图3和图4。

试验4：精密度试验

批内精密度：选择高值和低值质控，重复测定测定20次，计算其CV%值。

批间精密度：选择2个样本，每天测定4遍，连续测定5天，共计40次结果。

测定方法同试验1。结果见表4，5。

表4 本发明试剂盒和对比试剂盒测定批内精密度结果对比

表5 本发明试剂盒和对比试剂盒测定批间精密度结果对比

从表4、5可以看出，本发明的批内和批间精密度均高于比对试剂盒。

试验5：干扰性试验

在定值混合血清(18.6μmol/L)中加入血红蛋白、维生素C、Intralipos 、甘油三酯四种干扰物，再分别用本发明试剂盒和对比试剂盒进行测定及比较，结果见表6。测定方法同试验1。

表6 本发明试剂盒和对比试剂盒测定抗干扰能力结果对比

从表6可以看出，本发明试剂盒抗干扰能力更强。

以上所述的具体实施例，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施例而已，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种直接胆红素检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒由试剂R₁和试剂R₂组成的液体型双试剂，其中试剂组成和浓度为：

试剂R₁：

酒石酸缓冲液              100~300mmol/L

表面活性剂                0.1-2g/L

间胆抑制剂                0.2~3g/L

试剂R₂ ：

磷酸盐缓冲液              4~20mmol/L

化学氧化剂                2~12mmol/L

2.根据权利要求1所述的直接胆红素检测试剂盒，其特征在于：

试剂R₁

酒石酸缓冲液              150~250mmol/L

表面活性剂                0.1-2g/L

间胆抑制剂                0.5~1.5g/L

试剂R₂ 

磷酸盐缓冲液              6~12mmol/L

化学氧化剂                4~11mmol/L

3.根据权利要求1所述的直接胆红素检测试剂盒，其特征在于：

试剂R₁

酒石酸缓冲液              200mmol/L

表面活性剂                1g/L

间胆抑制剂                0.8g/L

试剂R₂ 

磷酸盐缓冲液              10mmol/L

化学氧化剂                8mmol/L

4.根据权利要求1至3中任一项所述的直接胆红素检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R₁和R₂的体积比为R₁：R₂=4：1。