CN104048955A

CN104048955A - 高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒

Info

Publication number: CN104048955A
Application number: CN201310075759.1A
Authority: CN
Inventors: 曾宪亮
Original assignee: Ao Lin Bio Tech Ltd Nanjing
Current assignee: Ao Lin Bio Tech Ltd Nanjing
Priority date: 2013-03-11
Filing date: 2013-03-11
Publication date: 2014-09-17

Abstract

本发明涉及一种高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，该试剂盒是由试剂R₁和试剂R₂组成的液体型双试剂，其中试剂R₁组成和浓度为：偶联剂（DSBmT）0.5-4.0mmol/L，胆固醇氧化酶（CHOD）3500-8500U/L，过氧化物酶（POD）1000-4000U/L，表面活性剂0.5-1.5g/L，缓冲液（pH6.0）50-160mmol/L；试剂R₂组成和浓度为：4-氨基替吡啉（4-AAP）1.0-4.5mmol/L，胆固醇酯酶700-1300U/L，表面活性剂0.5-1.5g/L，缓冲液（pH6.0）50-160mmol/L。本发明高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒特异性更好，抗干扰能力更强，可以抗血红蛋白、抗胆红素、抗坏血酸、rntralipos的干扰，线性更高等优点，适用于全自动生化分析仪，有较大的临床应用价值，试剂稳定性可达2年，本发明的设计合理，实用性强，适于广泛使用和推广。

Description

高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒

技术领域

本发明涉及一种高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，属于生物制剂领域。

背景技术

胆固醇等脂质在血清中与脱辅蛋白质配合生成脂蛋白，还会结合到脂蛋白的结构中，并以乳糜微粒（CM）、极低密度脂蛋白（VLDL）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）等形式存在。1977年Frammingham大规模的流行病学调查表明，血浆高密度脂蛋白胆固醇（血浆HDL-C）下降是缺血性心脏病的主要危险因素，自此以后，HDL-C的测定日益受到临床上的普遍重视。HDL是由动脉硬化所引起的心脏疾病的预防因子，因此 HDL-C的测定在动脉硬化症发病方面有重要的预测作用，这在临床上具有重要的意义。

直接法根据反应原理分为选择性PEG 修饰酶法、选择性抑制法及PEG/抗体包裹法。酶修饰法和PEG/抗体包裹法虽然临床应用较多，但价格较高，而选择性抑制法精密度高，线性范围可达1500mg/L，回收率90%~110%，但在抗干扰方面尚存在缺陷。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术存在的缺陷，提供一种高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒。

实现本发明目的的技术方案是：一种高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，该试剂盒由试剂R₁和试剂R₂以体积比为3：1混合组成，其中试剂组成和浓度为：

试剂R₁：

偶联剂（DSBmT） 0.5-4.0mmol/L

胆固醇氧化酶（CHOD） 3500-8500U/L

过氧化物酶（POD） 1000-4000U/L

表面活性剂 0.5-1.5g/L

缓冲液（pH6.0） 50-160mmol/L

试剂R₂：

4-氨基替吡啉（4-AAP） 1.0-4.5mmol/L

胆固醇酯酶 700-1300U/L

表面活性剂 0.5-1.5g/L

缓冲液（pH6.0） 50-160mmol/L

本发明高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒优选为：

试剂R₁：

偶联剂（DSBmT） 1.0-3.0mmol/L

胆固醇氧化酶（CHOD） 4500-7500U/L

过氧化物酶（POD） 1500-3000U/L

表面活性剂 0.8-1.3g/L

缓冲液（pH6.0） 80-120mmol/L

试剂R₂：

4-氨基替吡啉（4-AAP） 2.0-3.0mmol/L

胆固醇酯酶 850-1200U/L

表面活性剂 0.8-1.3g/L

缓冲液（pH6.0） 80-120mmol/L

本发明高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒最优选为：

试剂R₁：

偶联剂（DSBmT） 2.0mmol/L

胆固醇氧化酶（CHOD） 6600U/L

过氧化物酶（POD） 2500U/L

表面活性剂 1g/L

缓冲液（pH6.0） 100mmol/L

试剂R₂：

4-氨基替吡啉（4-AAP） 2.5mmol/L

胆固醇酯酶 1000U/L

表面活性剂 1g/L

缓冲液（pH6.0） 100mmol/L

本发明高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒中R₁和 R₂的原料选择依据是：

DSBmT和4-氨基替吡啉（4-AAP）：利于紫红色色素的快速形成。

胆固醇氧化酶（CHOD）和过氧化物酶（POD）：起氧化HDL-C的作用。

表面活性剂：第一步反应中阴离子表面活性剂包被HDL-C，第二部反应中阳离子表面活性剂释放HDL-C。

缓冲液（pH6.0）：利于试剂中各种成分的分散，可提高试剂的稳定性。

本发明试剂盒试剂R₁和试剂R₂的制备采用常规方法混合搅匀即可。

本发明的试剂盒通过下列方法测定高密度脂蛋白胆固醇：用两种不同的表面活性剂及多阴离子，根据脂蛋白的酶反应选择性，直接测定HDL-C，第一反应中，加入多阴离子和分散型表面活性剂，LDL、VLDL和CM先在多阴离子下聚集，由于反应抑制剂与LDL、VLDL和CM的疏水性基因具有高度亲和力，故其吸附在聚集的脂蛋白颗粒表面形成遮蔽圈，同时在HDL表面也吸附有少量反应抑制剂，但由于亲和力较弱，其结合是可逆的。第二反应中，与胆固醇酶试剂一起加入可溶性表面活性剂，可溶性表面活性剂对HDL颗粒中亲水性基团具有亲和力，由于可溶性表面活性剂对HDL可溶性的强特异性作用，可置换其表面吸附的少量反应抑制剂，从而与酶试剂反应，达到无需沉淀分离直接测定HDL-C的目的。

应用本发明高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒测定样本中HDL的测定方法如下：样本加试剂R₁混匀，30~40℃反应3~5min后读取吸光度A₁，加入试剂R₂混匀，30~40℃反应3~5min后读取吸光度A₂，根据公式HDL=样本吸光度(A₂-A₁)×标准液浓度/标准液吸光度 (A₂-A₁)，得出HDL的含量，其中，样品用量3μL，试剂R₁用量200-300μL，试剂R₂用量30-120μL。

本发明具有积极的效果：特异性更好，抗干扰能力更强，可以抗血红蛋白、抗胆红素、抗坏血酸、rntralipos的干扰，线性更高等优点，适用于全自动生化分析仪，有较大的临床应用价值，试剂稳定性可达2年，本发明的设计合理，实用性强，适于广泛使用和推广。

附图说明

为了使本发明的内容更容易被清楚地理解，下面根据具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中

图1 本发明试剂盒测定高密度脂蛋白胆固醇的实时反映曲线图。

图2 是对比试剂盒测定高密度脂蛋白胆固醇的实时反映曲线图。

图1、图2中横坐标为日立7060全自动生化分析仪反应监测的时刻，按10分钟分为31个点，每个点都有吸光度反应的时间点，纵坐标为吸光度A。

具体实施方式

下面结合图1、图2和表格对本发明高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒与对比试剂盒的性能进行比较。

实施例1：

实施例2：

实施例3：

实施例4：

实施例5：

对比例

对比例试剂盒为一种国内市售的高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，其成分及配方为

试剂R₁ 抗坏血酸氧化酶5000U/L

3,5-二氯-2-羟基苯磺酸钠盐（DHBS）1.16mmol/L

试剂R₂ 胆固醇氧化酶8000U/L

胆固醇酯酶 2000U/L

过氧化物酶 3000U/L

4-氨基安替比林 1.5mmol/L

本发明高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒的性能测试如下：

试验1：线性范围

配制0，0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0mmol/L高密度脂蛋白胆固醇标准溶液。分别用本发明高密度脂蛋白胆固醇试剂盒和对比试剂盒来测定其浓度，结果见表1。

本发明高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒和对比试剂盒测定样本中高密度脂蛋白胆固醇的测定方法如下：样本加试剂R₁混匀，30~40℃反应3~5min后读取吸光度A₁，加入试剂R₂混匀，30~40℃反应3~5min后读取吸光度A₂，根据公式高密度脂蛋白胆固醇=样本吸光度(A₂-A₁)×标准液浓度/标准液吸光度 (A₂-A₁)，得出高密度脂蛋白胆固醇的含量，其中，样品用量3μL，试剂R₁用量200-300μL，试剂R₂用量30-120μL。

表1 本发明试剂盒和对比试剂盒测定线性范围对比

本发明试剂盒的线性范围较对比试剂盒的高160%。在高密度脂蛋白胆固醇浓度大于3.0mmol/L时，对比试剂盒不能检出，线性范围过小，由此可见本发明试剂盒具有较大的线性测试范围。

试验2：准确度

以罗氏校准品定标，分别用本发明试剂盒和对比试剂盒来测定朗道高、低值质控。测试方法同试验1。结果见表2。

表2 本发明试剂盒和对比试剂盒准确度测定结果对比

从表2上可以看出，虽然本发明试剂盒的测定均在1SD以内，而对比试剂盒的测定值高值在1SD以内，低值在2SD以内，本发明的准确性比对比试剂准确性稍高，对大量的临床样本进行测试，从相关性上来看，本发明试剂盒的相关性更好。

试验3：精密度试验

批内精密度：选择高值和低值样本，重复测定测定20次，计算其CV%值。测定方法同试验1。结果见表3。

批间精密度：选择2个样本，每天测定4遍，连续测定5天，共计40次结果。测定方法同试验1。结果见表4。

表3 本发明试剂盒和对比试剂盒批内测定结果对比

表4 本发明试剂盒和对比试剂盒测定批间精密度结果对比

从表3、4可以看出，本发明的批内和批间精密度均高于比对试剂盒。

试验4：干扰性试验

在定值混合血清（1.28mmol/L）中加入血红蛋白、维生素C、Intralipos 、甘油三酯四种干扰物，再分别用本发明试剂盒和对比试剂盒进行测定及比较，结果见表5。测定方法同试验1。

表5 本发明试剂盒和对比试剂盒测定抗干扰能力结果对比

从表5可以看出，本发明试剂盒抗干扰能力更强。

以上所述的具体实施例，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施例而已，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒是由试剂R₁和试剂R₂组成的液体型双试剂，其中试剂组成和浓度为：

试剂R₁：

试剂R₂：

2.根据权利要求1所述的高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，其特征在于：

试剂R₁：

试剂R₂：

3.根据权利要求1所述的高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，其特征在于：

试剂R₁：

试剂R₂：

4.根据权利要求1至3中任一项所述的高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R₁和试剂R₂的体积比为R₁ ：R₁=3：1。