CN1344371A - 定量胆固醇的方法 - Google Patents

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Abstract

公开了选择性定量胆固醇的方法,包括在与样本中的非测量脂蛋白具有较强亲合性的化合物、对测量脂蛋白表现较强作用的表面活性剂和胆固醇测定试剂的存在下,测定样本中的测量脂蛋白部分中胆固醇的量;选择性测定胆固醇的量的方法,包括在与样本中的测量脂蛋白具有较强亲合性的化合物、对非测量脂蛋白表现较强作用的表面活性剂和胆固醇测定试剂的存在下,优先使存在于样本中非测量脂蛋白中的胆固醇反应,再测定剩余测量脂蛋白中胆固醇的量;和胆固醇的定量测定试剂,单独或作为混合物包含用于进行上述方法的与样本中脂蛋白之一具有较强亲合性的化合物、对其他脂蛋白表现较强作用的表面活性剂和胆固醇测定试剂。该方法和试剂确保通过简单操作有效地定量测定特殊脂蛋白部分中的胆固醇,无需离心等预处理。该方法和试剂能够适用于各种类型的自动分析仪。

Description

定量胆固醇的方法
技术领域
本发明涉及胆固醇的定量测定方法，该方法能够区分地定量测定特定脂蛋白部分中的胆固醇含量，利用少量样本经过简单操作即可实现。
背景技术
胆固醇等脂质在血清中与脱辅基蛋白质结合形成脂蛋白。根据它们的物理性质，脂蛋白分为乳糜微粒、极低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)。在这些脂蛋白中，LDL是引起动脉硬化的物质之一，而HDL已知表现出抗动脉硬化作用。
从流行病学观点来看，LDL中的胆固醇值与动脉硬化发生频率具有正向的相互关系，而HDL中的胆固醇值已知与动脉硬化发生频率具有反向的相互关系。当今，经常出于缺血性心脏病的预防和诊断目的而测量HDL和LDL中的胆固醇值。已知作为测量HDL和LDL中的胆固醇的方法，例如通过超速离心从其他脂蛋白中各分离HDL和LDL后测量胆固醇的方法、通过电泳分离HDL和LDL、对脂质进行染色再测量颜色强度的方法。
不过，这些已知方法中没有一种用于每天的实践，其原因例如操作复杂、不能处理大量样本等。
广泛用在临床检查领域中的测量HDL中的胆固醇的方法是一种沉淀方法，包括向样本中加入沉淀剂，引起除HDL以外的脂蛋白聚集，通过离心除去聚集物，测量仅含有HDL的上清液中的胆固醇。尽管与超离心方法和电泳分析相比，这种方法简单易行，不过该方法不仅由于要加入沉淀剂进行分离操作而要求比较大量的样本，而且涉及巨大风险的分析误差。因此，全部分析操作的完全自动化已是不可能的。
已经研究了HDL中的胆固醇的区分酶测定方法。例如，在胆汁盐和非离子表面活性剂的存在下的酶反应是已知的(日本专利申请公开No.126498/1988)。这种方法利用酶反应的进行在最初阶段与LDL胆固醇浓度成比例而在后面阶段与HDL胆固醇浓度成比例这一性质。不过，该方法的分析精度是有问题的，因为完全区分HDL中的胆固醇反应与其他脂蛋白中的胆固醇反应是不可能的。
另一种本领域已知的方法包括预先聚集除HDL以外的脂蛋白，仅使HDL中的胆固醇进行酶反应，灭活酶，与此同时重新溶解聚集物，测量吸光度(日本专利申请公开No.242110/1994)。不过，这种方法仅能适用于有限的自动分析仪，因为要求试剂至少加入三次。因此，该方法的普遍性是有限的。从对分析仪器的损害和试剂的处理等观点来看，该方法也是不令人满意的，因为沉淀的重新溶解要求使用高浓度盐等。
日本专利No.2600065公开了使用常规沉淀法所用的用于沉淀除HDL以外的脂蛋白的沉淀试剂和常用于胆固醇测量的试剂测量HDL中还没有沉淀出来的胆固醇的方法。所公开的具体实例是改性酶与硫酸α-环糊精的组合。
其他方法包括使用表面活性剂降低沉淀剂干扰的方法(日本专利申请公开No.116996/1996)、代替常规沉淀试剂而使用用于沉淀除HDL以外的脂蛋白的抗体的方法(日本专利申请公开No.96637/1997)、使用角叉菜胶的方法(日本专利申请公开No.121895/1997)和使用糖化合物的方法(日本专利申请公开No.301636/1995)。这些方法所具有的问题例如即使在混合正常血清的情况下也会因聚集作用而形成浑浊，要求聚集除HDL以外的脂蛋白(LDL、VLDL等)，而它们的测量是不必要的等。作为临床检查领域广泛接受的测量LDL中的胆固醇的方法，Friedwald的方法(《临床化学》18卷459-502页(1972))是已知的。按照这种方法，利用由酶方法所测定的总胆固醇、HDL胆固醇和甘油三酯的量测定LDL胆固醇的量。不过，当甘油三酯的浓度超过400mg/dl时，不能适用这种方法。
因此，本发明的目的是提供特定部分中的胆固醇的定量测定方法，该方法不要求离心等预处理，通过简单操作即可进行，能够适用于各种类型的自动分析仪。
发明的公开
作为深入研究的结果，本发明的发明人已经发现，如果在与样本中脂蛋白之一具有较强亲合性的化合物和对样本中其他脂蛋白表现较强作用的表面活性剂的存在下进行胆固醇测定酶试剂的反应，则有可能提供样本中特定脂蛋白所含有的胆固醇的反应与包括在其他脂蛋白中的胆固醇的反应之间的显著性差异，由此能够区分并测定目标脂蛋白中的胆固醇，基本上具有足够高的精度。
具体而言，本发明提供选择性定量胆固醇的方法，包括在与样本中的非测量脂蛋白具有较强亲合性的化合物、对测量脂蛋白表现较强作用的表面活性剂和胆固醇测定试剂的存在下，测定在样本中的测量脂蛋白部分中的胆固醇的量。
本发明进一步提供选择性测定胆固醇的量的方法，包括在与样本中的测量脂蛋白具有较强亲合性的化合物、对非测量脂蛋白表现较强作用的表面活性剂和胆固醇测定试剂的存在下，优先使存在于样本中非测量脂蛋白中的胆固醇反应，再测定剩余测量脂蛋白中胆固醇的量。
本发明进一步提供测定不同脂蛋白中胆固醇浓度的方法，包括在与样本中第一种测量脂蛋白具有较强亲合性的化合物、与第一种脂蛋白相比对第二种脂蛋白表现相对更强作用的表面活性剂和胆固醇测定试剂的存在下，优先使存在于样本中第二种测量脂蛋白中的胆固醇反应，测定剩余第一种测量脂蛋白中胆固醇的量，再从所得剩余第一种测量脂蛋白中胆固醇的量和总胆固醇浓度测定每种脂蛋白中的胆固醇浓度。
本发明更进一步提供胆固醇的定量测定试剂，单独或作为混合物包含用于进行上述方法的与样本中脂蛋白之一具有较强亲合性的化合物、对其他脂蛋白表现较强作用的表面活性剂和胆固醇测定试剂。
附图的简要说明
图1显示实施例4方法与常规沉淀法之间的相互关系。
图2显示实施例5方法与常规沉淀法之间的相互关系。
图3显示实施例6方法与常规沉淀法之间的相互关系。
图4显示实施例7方法与常规沉淀法之间的相互关系。
实施发明的最佳方式
本发明中，在脂蛋白中的胆固醇与胆固醇测定试剂之间的反应之前，必须加入与样本中脂蛋白之一具有较强亲合性的化合物(以下称之为“选择性亲合剂”)和对其他脂蛋白表现较强作用的表面活性剂(以下称之为“选择性活化剂”)。
其中，选择性亲合剂与无需反应或测定的脂蛋白表现相互作用，抑制或禁止这些脂蛋白与胆固醇测定试剂之间的反应。另一方面，当所要反应或测定的脂蛋白和无需反应或测定的脂蛋白存在于相同的系统中时，选择性活化剂对所要反应或测定的脂蛋白表现强烈的作用，加速所要反应或测定的那些脂蛋白与胆固醇测定试剂之间的反应。
本发明中的选择性亲合剂与一种脂蛋白的亲合性和选择性活化剂对其他脂蛋白的作用必须是相对强的，但不必是绝对强的。其原因是因为当使用它们之一时可能是显著的相对误差当使用二者时能够降低到不发生实际问题的水平。
作为用在本发明中的选择性亲合剂，可以是与形成无需反应或测定的脂蛋白的脂蛋白表面层的组分表现亲合性的化合物。形成脂蛋白表面层的组分可以是胆固醇、磷脂和脱辅基蛋白质等。
作为这样一种选择性亲合剂的实例，可以是皂甙、多烯、胆固醇衍生物、肽、外源凝集素和磷脂衍生物等。作为与胆固醇表现亲合性的皂甙，例如可以是毛地黄皂甙、番茄素(tomatine)等；
作为多烯，可以是制霉菌素、非律平、pimacillyn、戊霉素、曲古霉素、制霉色基素、表霉素、两性霉素、etoluscomycin、伯霉素、candigin等；
作为胆固醇衍生物，可以是[N-[2-(胆固烯基羧基氨基)乙基]氨基甲酰基甲基]-支链淀粉(缩写为“Chol-AECM-支链淀粉”)等；
作为肽，可以是杆菌肽、多粘菌素、铃鹿菌素(suzucasylin)、短杆菌肽等；
作为外源凝集素，可以是刀豆球蛋白A、蓖麻外源凝集素、花生外源凝集素等；
作为磷脂衍生物，可以是L-α-磷脂酰甘油二棕榈酰等。
当含有脂蛋白的样本与一些上述选择性亲合剂混合时，反应混合物可能变为浑浊，因试剂组成条件而异。这可能是由脂蛋白聚集物的产生所引起的。不过，非测量脂蛋白的聚集在本发明中不是不可缺少的。
例如，当毛地黄皂甙(皂甙衍生物)、Chol-AECM-支链淀粉(胆固醇衍生物)、非律平(多烯化合物)、L-α-磷脂酰甘油二棕榈酰(磷脂衍生物)等与含有脂蛋白的样本在能够表现本发明效果的条件下混合时，没有观察到浑浊。
对本发明的选择性亲合剂来说重要的是以这样一种方式吸附或结合形成脂蛋白表面层的组分，其中脂蛋白中的胆固醇与酶之间的反应被抑制或禁止了。脂蛋白聚集是绝对不必要的。
这些选择性亲合剂可以单独使用，或者两种或更多组合使用。尽管不作具体限制，选择性亲合剂的用量因化合物而异，通常在1nM至0.1M(1×10-7％至10％)的范围内，优选为10nM至0.1M(1×10-6％至10％)。乙醇等有机溶剂、表面活性剂和磷脂可以用于溶解这些化合物。这些溶剂等可以单独使用，或者两种或更多组合使用。用量因所要溶解的化合物类型而异，但是不作具体限制。
另一方面，可以使用离子或非离子的选择性活化剂，只要这样一种选择性活化剂对所要反应或测定的脂蛋白所表现的作用在程度上不同于选择性活化剂对无需反应或测定的脂蛋白所表现的作用。作为实例可以是聚氧乙烯(10)辛基苯基醚、聚氧乙烯高级醇醚、聚氧乙烯亚烷基苯基醚和聚氧乙烯亚烷基三苄基苯基醚等。特别优选的选择性活化剂是聚氧乙烯亚烷基苯基醚和聚氧乙烯亚烷基三苄基苯基醚，已知在单独与特殊脂蛋白反应时，它们是与这些脂蛋白表现强烈的反应性的表面活性剂(日本专利申请公开No.313200/1997)。作为这些选择性活化剂的商业上可得到的产品实例，可以是Triton X-100、Emulgen 709、EmulgenA-60、Emulgen B-66、庚烷磺酸和辛烷磺酸等。
这些选择性活化剂可以单独使用，或者两种或更多组合使用。尽管不作具体限制，选择性活化剂的用量因化合物而异，在0.0001-5％的范围内，优选为0.001-5％。
这些选择性亲合剂和选择性活化剂可以单独或并行作为混合物加入到样本血清中。胆固醇的测定可以采用任意已知的酶方法。实例包括结合使用胆固醇酯酶与胆固醇氧化酶作为酶试剂的方法、结合使用胆固醇酯酶与胆固醇脱氢酶的方法等。其中，结合使用胆固醇酯酶与胆固醇氧化酶的方法是优选的。
在加入这些胆固醇测定酶试剂之后，对最后测定胆固醇的方法没有具体限制。例如，另外使用过氧化酶与着色物质的组合的吸光度分析、直接检测辅酶与过氧化氢的方法等。
本发明优选的具体实施方式如下：
(1)在与样本中非测量脂蛋白具有较强亲合性的化合物、对测量脂蛋白表现较强作用的表面活性剂和胆固醇测定试剂的存在下，选择性测定样本中测量脂蛋白中的胆固醇的量的方法。
(2)选择性测定胆固醇的量的方法，包括在与样本中测量脂蛋白具有较强亲合性的化合物、对非测量脂蛋白表现较强作用的表面活性剂和胆固醇测定试剂的存在下，优先使存在于样本中非测量脂蛋白中的胆固醇反应，再测定剩余测量脂蛋白中的胆固醇的量。
(3)测定不同脂蛋白中胆固醇浓度的方法，包括在与样本中第一种测量脂蛋白具有较强亲合性的化合物、与第一种脂蛋白相比对第二种脂蛋白表现相对更强作用的表面活性剂和胆固醇测定试剂的存在下，优先使存在于样本中第二种测量脂蛋白中的胆固醇反应，测定剩余第一种测量脂蛋白中胆固醇的量，再从所得剩余第一种测量脂蛋白中胆固醇的量和总胆固醇浓度测定每种脂蛋白中的胆固醇浓度。
在实施上述方法时，宜使用用于胆固醇定量测定的试剂，其中单独或作为混合物包含选择性亲合剂、选择性活化剂和胆固醇测定试剂。在上述方法中用于胆固醇定量测定的试剂如下：
上述方法(1)所用试剂：
用于胆固醇定量测定的试剂，单独或作为混合物包含与样本中非测量脂蛋白具有较强亲合性的化合物、对测量脂蛋白表现较强作用的表面活性剂和胆固醇测定试剂。
上述方法(2)所用试剂：
用于胆固醇定量测定的试剂，单独或作为混合物包含与样本中测量脂蛋白具有较强亲合性的化合物、对非测量脂蛋白表现较强作用的表面活性剂和胆固醇测定试剂。
上述方法(3)所用试剂：
用于胆固醇定量测定的试剂，单独或作为混合物包含与样本中第一种测量脂蛋白具有较强亲合性的化合物、与第一种测量脂蛋白相比对第二种测量脂蛋白表现相对更强作用的表面活性剂和胆固醇测定试剂。
可以向上述用于胆固醇定量测定的试剂中加入常用的缓冲溶液，例如磷酸盐缓冲液、Good缓冲液等。对溶解定量测定试剂的溶液的pH没有具体限制，只要酶试剂不受影响即可。另外，还可以使用无机盐(例如氯化钠)、添加剂(例如用于稳定酶活性的白蛋白)、二价金属盐、充当防腐剂的化合物等。
利用上述本发明的方法，能够通过简单操作有效地定量测定胆固醇，无需离心等预处理。另外，因为该方法允许利用少量样本通过简单方法进行特殊测定，该方法能够适用于各种类型的自动分析仪。该方法因此在临床诊断领域中是极为有用的。
实施例
下列实施例将对本发明进行更为详细的描述，它们不应被解释为限制本发明。
实施例1
按照给于样本制备中的下列方法制备含有脂蛋白的样本。通过给于测量方法中的下列方法测定每种脂蛋白部分中的胆固醇的量，以比较反应性。结果如表1所示。
(样本的制备)
将人血清超离心分离为VLDL、LDL和HDL，制备样本。
(测量方法)
向3μl样本中加入300μl第一试剂、含有0.005％毛地黄皂甙的50mM磷酸盐缓冲液(pH6.5)。5分钟后，加入100μl胆固醇测定试剂(第二试剂)，它是含有0.2％Triton X-100、1U/ml胆固醇酯酶、1U/ml胆固醇氧化酶、5U/ml过氧化酶、0.04％二磺基丁基间甲苯胺和0.004％4-氨基安替比林的50mM磷酸盐缓冲液(pH6.5)。
就在胆固醇测定试剂加入之前和加入后五分钟测量样本在600nm和700nm下的吸光度，比较脂蛋白部分之间的反应性差异(两点法)。利用日立7150自动分析仪(日立有限公司制造)进行上述操作。
(结果)
表1
样本 没有加入选择性亲合剂 加入0.005％毛地黄皂甙
HDL部分LDL部分VLDL部分 0.104(100％)0.315(100％)0.267(100％) 0.099(95％)0.218(69％)0.136(51％)
                                                                                                (吸光度数值)
从表1可以看出，如果存在毛地黄皂甙的话，HDL中的胆固醇能够优先于LDL中的胆固醇和VLDL中的胆固醇与酶反应。
实施例2
按与实施例1相同方法测定胆固醇的量并作比较，但是使用0.005％Chol-AECM-支链淀粉代替毛地黄皂甙作为第一试剂，第二试剂中的表面活性剂(Triton X-100)用1％Emulgen B-66代替。结果如表2所示。
表2
样本  没有加入选择性亲合剂  加入0.005％Chol-AECM-支链淀粉
HDL部分LDL部分VLDL部分  0.133(100％)0.028(100％)0.025(100％)  0.132(99％)0.019(67％)0.013(50％)
                                                                                               (吸光度数值)从表2可以看出，如果存在Chol-AECM-支链淀粉的话，HDL中的胆固醇能够优先于LDL中的胆固醇和VLDL中的胆固醇与酶反应。
实施例3
按与实施例1相同的方法制备样本。利用下示组成的试剂，按照与实施例1相同的方法测定每种脂蛋白部分中的胆固醇的量，以比较反应性。结果如表3所示。
(所用试剂)
第一试剂：
含有5mM L-α-磷脂酰甘油二棕榈酰和0.5％ Triton X-100的50mM PIPES缓冲液
胆固醇测定试剂
含有1U/ml胆固醇酯酶、1U/ml胆固醇氧化酶、5U/ml过氧化酶、0.04％二磺基丁基间甲苯胺和0.004％4-氨基安替比林的50mM PIPES缓冲液(pH 6.5)
(结果)
表3
样本  没有加入选择性亲合剂  加入5mM L-α-磷脂酰甘油二棕榈酰
HDL部分LDL部分VLDL部分  111.8(100％)328.6(100％)161.9(100％)  107.2(96％)200.4(61％)59.6(37％)
                                                                                               (吸光度数值)
从表3可以看出，如果存在L-α-磷脂酰甘油二棕榈酰的话，HDL中的胆固醇能够优先于LDL中的胆固醇和VLDL中的胆固醇与酶反应。
实施例4
按本发明方法和常规沉淀法测定含有脂蛋白的25份血清样本中HDL中的胆固醇，并比较这些方法的测定值。
具体地说，向3μl样本中加入300μl第一试剂、含有0.005％(40μm)毛地黄皂甙的50mM MES缓冲液(pH6.5)。5分钟后，加入100μl胆固醇测定试剂(第二试剂)，它是含有1％Emulgen B-66、1U/ml胆固醇酯酶、1U/ml胆固醇氧化酶、5U/ml过氧化酶、0.04％二磺基丁基间甲苯胺和0.004％4-氨基安替比林的50mM磷酸盐缓冲液(pH 6.5)。
就在胆固醇测定试剂加入之前和加入后五分钟测量样本在600nm和700nm下的吸光度，从吸光度数值上的差异测定HDL胆固醇浓度(两点法)。使用具有已知浓度的对照血清作为校准标准。利用日立7150自动分析仪(日立有限公司制造)进行上述操作。
另一方面，如下用沉淀法(对比方法)进行HDL中的胆固醇测定。将含有0.3％磷钨酸钠和2％氯化镁的200μl水溶液与200μl样本混合。混合物在3000rpm下离心10分钟。将50μl上清液溶液与3ml胆固醇测定试剂混合，后者是含有1％Triton X-100、1U/ml胆固醇酯酶、1U/ml胆固醇氧化酶、5U/ml过氧化酶、0.04％二磺基丁基间甲苯胺和0.004％4-氨基安替比林的100mM MES缓冲溶液(pH6.5)。混合物在37℃下恒温10分钟，测量600nm下的吸光度，据此测定HDL中的胆固醇。结果如表4和图1所示。
(结果)
              表4
样本编号   沉淀方法(mg/dl) 本发明方法(mg/dl)
    12345678910111213141516171819202122232425     99.691.881.678.671.970.367.670.166.664.564.560.960.354.655.050.750.949.247.045.741.037.939.694.888.5   103.695.286.680.174.471.972.472.170.167.467.463.262.655.056.951.052.751.248.747.441.840.240.398.493.3
相关系数  0.999
  倾角  1.052
  截距 -0.921
从表4和图1可以看出，本发明的方法尽管操作简单，也与常规的沉淀方法显示非常良好的相关性。
实施例5
利用含有脂蛋白的25份血清样本，按本发明方法和常规沉淀法测定HDL中的胆固醇。遵循实施例4所用的本发明方法，但是第一试剂中的毛地黄皂甙用0.1％多粘菌素和0.005％刀豆球蛋白A代替。结果如表5和图2所示。
(结果)
                表5
样本编号    沉淀方法(mg/dl) 本发明方法(mg/dl)
    12345678910111213141516171819202122232425     113.8100.396.991.686.583.983.779.078.274.772.572.370.466.565.962.758.052.549.745.642.339.039.838.234.2   112.4104.098.997.389.187.287.482.079.678.374.071.973.268.468.764.859.754.452.147.845.940.740.838.436.7
相关系数 0.998
  倾角 1.007
  截距 1.775
从表5和图2可以看出，本发明的方法尽管操作简单，也与常规的沉淀方法显示非常良好的相关性。
实施例6
利用含有脂蛋白的25份血清样本，按本发明方法和常规沉淀法测定HDL中的胆固醇。遵循实施例4所用的本发明方法，但是第一试剂中的毛地黄皂甙用0.005％(76μM)非律平代替。结果如表6和图3所示。
(结果)
                表6
样本编号     沉淀方法(mg/dl)  本发明方法(mg/dl)
    12345678910111213141516171819202122232425      113.8100.396.991.686.583.983.779.078.274.772.572.370.466.565.962.758.052.549.745.642.339.039.838.234.2    120.7111.7105.6102.090.293.090.580.080.780.980.172.973.167.967.065.359.458.055.848.045.641.241.740.741.1
 相关系数    0.993
   倾角    1.075
   截距    0.473
从表6和图3可以看出，本发明的方法尽管操作简单，也与常规的沉淀方法显示非常良好的相关性。
实施例7
利用含有脂蛋白的30份血清样本，按本发明方法和常规沉淀法测定HDL中的胆固醇。
向2μl样本中加入含有选择性亲合剂的260μl胆固醇测定试剂，由含有0.0075％(60μM)毛地黄皂甙，0.25％Emulgen B-66、0.25U/ml胆固醇酯酶、0.25U/ml胆固醇氧化酶、1.25U/ml过氧化酶、0.01％二磺基丁基间甲苯胺和0.005％4-氨基安替比林的50mM PIPES缓冲溶液(pH6.5)组成。
在含有选择性亲合剂的胆固醇测定试剂加入后两分钟和七分钟测量样本在600nm和700nm下的吸光度，从吸光度数值上的差异测定HDL胆固醇(两点法)。使用具有已知浓度的对照血清作为校准标准。利用日立7150自动分析仪(日立有限公司制造)进行上述操作。
根据沉淀法，使用与实施例3相同的方法进行HDL中的胆固醇测定(对比方法)。结果如表7和图4所示。
(结果)
            表7
样本编号   沉淀方法(mg/dl) 本发明方法(mg/dl)
    123456789101112131415161718192021222324252627282930     103.291.889.483.482.780.678.977.076.274.976.177.667.565.769.066.562.361.357.353.954.952.147.446.441.739.138.632.331.826.5   103.791.691.688.684.282.379.777.679.176.472.979.468.669.071.965.464.063.256.855.454.552.447.144.642.342.138.633.533.232.4
相关系数   0.995
  倾角   0.995
  截距   1.485
从表7和图4可以看出，本发明的方法尽管操作简单，也与常规的沉淀方法显示非常良好的相关性。

Claims (30)

1、选择性定量胆固醇的方法，包括在与样本中的非测量脂蛋白具有较强亲合性的化合物、对测量脂蛋白表现较强作用的表面活性剂和胆固醇测定试剂的存在下，测定在样本中的测量脂蛋白部分中胆固醇的量。
2、根据权利要求1的方法，其中与样本中的非测量脂蛋白具有较强亲合性的化合物与组成这些脂蛋白的脂蛋白表面层的组分具有亲合性。
3、根据权利要求2的方法，其中组成非测量脂蛋白的脂蛋白表面层的组分是胆固醇。
4、根据权利要求2的方法，其中组成非测量脂蛋白的脂蛋白表面层的组分是磷脂。
5、根据权利要求2的方法，其中组成非测量脂蛋白的脂蛋白表面层的组分是脱辅基蛋白质。
6、根据权利要求1的方法，其中与样本中的非测量脂蛋白具有较强亲合性的化合物是至少一种这样的化合物，选自由皂甙、多烯、胆固醇衍生物、肽、外源凝集素和磷脂衍生物组成的组。
7、根据权利要求1或权利要求6的方法，其中与样本中的非测量脂蛋白具有较强亲合性的化合物是皂甙。
8、根据权利要求7的方法，其中该皂甙是甾类皂甙。
9、根据权利要求7或权利要求8的方法，其中该皂甙是毛地黄皂甙或番茄素。
10、根据权利要求1或权利要求6的方法，其中与样本中的非测量脂蛋白具有较强亲合性的化合物是多烯。
11、根据权利要求10的方法，其中该多烯是抗生素。
12、根据权利要求10或权利要求11的方法，其中该多烯选自由制霉菌素、非律平、pimacyllin、戊霉素、曲古霉素、制霉色基素、表霉素、两性霉素、etoluscomycin、伯霉素和candigin组成的组。
13、根据权利要求1或权利要求6的方法，其中与样本中的非测量脂蛋白具有较强亲合性的化合物是肽。
14、根据权利要求13的方法，其中该肽是杆菌肽、多粘菌素、铃鹿菌素或短杆菌肽。
15、根据权利要求1或权利要求6的方法，其中与样本中的非测量脂蛋白具有较强亲合性的化合物是外源凝集素。
16、根据权利要求15的方法，其中该外源凝集素是刀豆球蛋白A、蓖麻外源凝集素或花生外源凝集素。
17、根据权利要求1的方法，其中与样本中的非测量脂蛋白具有较强亲合性的化合物是甾体结合性化合物。
18、胆固醇的定量测定试剂，单独或作为混合物包含与样本中的非测量脂蛋白具有较强亲合性的化合物、对测量脂蛋白表现较强作用的表面活性剂和胆固醇测定试剂。
19、选择性测定胆固醇的量的方法，包括在与样本中的测量脂蛋白具有较强亲合性的化合物、对非测量脂蛋白表现较强作用的表面活性剂和胆固醇测定试剂的存在下，优先使存在于样本中非测量脂蛋白中的胆固醇反应，再测定剩余测量脂蛋白中胆固醇的量。
20、根据权利要求19的方法，其中与样本中的测量脂蛋白具有较强亲合性的化合物与组成这些脂蛋白的脂蛋白表面层的组分具有亲合性。
21、根据权利要求20的方法，其中组成测量脂蛋白的脂蛋白表面层的组分是胆固醇。
22、根据权利要求20的方法，其中组成测量脂蛋白的脂蛋白表面层的组分是磷脂。
23、根据权利要求20的方法，其中组成测量脂蛋白的脂蛋白表面层的组分是脱辅基蛋白质。
24、胆固醇的定量测定试剂，单独或作为混合物包含与样本中的测量脂蛋白具有较强亲合性的化合物、对非测量脂蛋白表现较强作用的表面活性剂和胆固醇测定试剂。
25、测定每种脂蛋白中胆固醇浓度的方法，包括在与样本中第一种测量脂蛋白具有较强亲合性的化合物、与第一种脂蛋白相比对第二种脂蛋白表现相对更强作用的表面活性剂和胆固醇测定试剂的存在下，优先使存在于样本中第二种测量脂蛋白中的胆固醇反应，测定剩余第一种测量脂蛋白中胆固醇的量，再从所得剩余第一种测量脂蛋白中胆固醇的量和总胆固醇浓度测定每种脂蛋白中的胆固醇浓度。
26、根据权利要求25的方法，其中与样本中第一种测量脂蛋白具有较强亲合性的化合物与组成这些脂蛋白的脂蛋白表面层的组分具有亲合性。
27、根据权利要求26的方法，其中组成第一种测量脂蛋白的脂蛋白表面层的组分是胆固醇。
28、根据权利要求26的方法，其中组成第一种测量脂蛋白的脂蛋白表面层的组分是磷脂。
29、根据权利要求26的方法，其中组成第一种测量脂蛋白的脂蛋白表面层的组分是脱辅基蛋白质。
30、用于胆固醇定量测定的试剂，单独或作为混合物包含与样本中第一种测量脂蛋白具有较强亲合性的化合物、与第一种测量脂蛋白相比对第二种测量脂蛋白表现更强作用的表面活性剂和胆固醇测定试剂。
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