JPH1156395A - コレステロールの定量法 - Google Patents
コレステロールの定量法Info
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- JPH1156395A JPH1156395A JP9244821A JP24482197A JPH1156395A JP H1156395 A JPH1156395 A JP H1156395A JP 9244821 A JP9244821 A JP 9244821A JP 24482197 A JP24482197 A JP 24482197A JP H1156395 A JPH1156395 A JP H1156395A
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/60—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving cholesterol
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 遠心分離などの前処理の必要がなく、簡便な
操作で効率よく測定することができ、種々の自動分析装
置に適用できるＨＤＬ中のコレステロールの定量法を提
供すること。 【解決手段】 血清に対し、ポリオキシエチレンアルキ
レンフェニルエーテル及びポリオキシエチレンアルキレ
ントリベンジルフェニルエーテルから選ばれる界面活性
剤、ならびにコレステロール測定用酵素試薬を添加し、
リポタンパク質のうち、ＨＤＬ中のコレステロールが優
先的にコレステロール測定用酵素試薬と反応する時間内
にそのコレステロールの反応量を測定するＨＤＬコレス
テロールの定量法および更に血清リポタンパク質中のコ
レステロールとコレステロール測定用酵素試薬との反応
を阻害する効果を有する物質を加えたＨＤＬコレステロ
ールの定量法。
操作で効率よく測定することができ、種々の自動分析装
置に適用できるＨＤＬ中のコレステロールの定量法を提
供すること。 【解決手段】 血清に対し、ポリオキシエチレンアルキ
レンフェニルエーテル及びポリオキシエチレンアルキレ
ントリベンジルフェニルエーテルから選ばれる界面活性
剤、ならびにコレステロール測定用酵素試薬を添加し、
リポタンパク質のうち、ＨＤＬ中のコレステロールが優
先的にコレステロール測定用酵素試薬と反応する時間内
にそのコレステロールの反応量を測定するＨＤＬコレス
テロールの定量法および更に血清リポタンパク質中のコ
レステロールとコレステロール測定用酵素試薬との反応
を阻害する効果を有する物質を加えたＨＤＬコレステロ
ールの定量法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、遠心分離などの操
作の必要がなく、少ない試料で簡便な操作により効率良
く高比重リポタンパク（ＨＤＬ）中のコレステロールと
ＨＤＬ以外のリポタンパク中のコレステロールとを分離
定量する方法に関する。
作の必要がなく、少ない試料で簡便な操作により効率良
く高比重リポタンパク（ＨＤＬ）中のコレステロールと
ＨＤＬ以外のリポタンパク中のコレステロールとを分離
定量する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】コレステロール等の脂質は、血清中にお
いてアポタンパクと結合し、リポタンパク質を形成して
いる。リポタンパク質は物理的な性状の違いにより、カ
イロミクロン、超低比重リポタンパク（ＶＬＤＬ）、低
比重リポタンパク（ＬＤＬ）、高比重リポタンパク（Ｈ
ＤＬ）等に分類される。これらのリポタンパク質のう
ち、ＬＤＬは動脈硬化を引き起こす原因物質の一つであ
り、一方ＨＤＬは抗動脈硬化作用を示す事が知られてい
る。
いてアポタンパクと結合し、リポタンパク質を形成して
いる。リポタンパク質は物理的な性状の違いにより、カ
イロミクロン、超低比重リポタンパク（ＶＬＤＬ）、低
比重リポタンパク（ＬＤＬ）、高比重リポタンパク（Ｈ
ＤＬ）等に分類される。これらのリポタンパク質のう
ち、ＬＤＬは動脈硬化を引き起こす原因物質の一つであ
り、一方ＨＤＬは抗動脈硬化作用を示す事が知られてい
る。
【０００３】疫学的には、ＨＤＬ中のコレステロール値
は動脈硬化性疾患の発症頻度と逆相関を示す事が知られ
ており、今日では、虚血性心疾患の予防や診断を目的と
してＨＤＬ中のコレステロールの測定が広く行われてい
る。ＨＤＬ中のコレステロールの測定法としては、たと
えば超遠心分離によってＨＤＬを、他のリポタンパクと
分離した後、コレステロール測定に供する方法や、電気
泳動によって分離した後に脂質の染色を行って、その発
色強度を測定する方法が知られている。しかしながら、
これらの方法は、いずれも、操作が煩雑であったり、多
数の検体を処理できないなどの問題があり、日常的にほ
とんど用いられていなかった。
は動脈硬化性疾患の発症頻度と逆相関を示す事が知られ
ており、今日では、虚血性心疾患の予防や診断を目的と
してＨＤＬ中のコレステロールの測定が広く行われてい
る。ＨＤＬ中のコレステロールの測定法としては、たと
えば超遠心分離によってＨＤＬを、他のリポタンパクと
分離した後、コレステロール測定に供する方法や、電気
泳動によって分離した後に脂質の染色を行って、その発
色強度を測定する方法が知られている。しかしながら、
これらの方法は、いずれも、操作が煩雑であったり、多
数の検体を処理できないなどの問題があり、日常的にほ
とんど用いられていなかった。
【０００４】現在臨床検査の領域で一般に広く用いられ
ている、ＨＤＬ中のコレステロールの測定方法は、検体
に沈殿剤を加えてＨＤＬ以外のリポタンパクを凝集さ
せ、これを遠心分離によって取り除き、分離されたＨＤ
Ｌのみを含む上清中のコレステロールを測定する沈殿法
である。 この方法は、超遠心法や電気泳動法に比較し
て簡便であるものの、沈殿剤を加えて分離する操作を含
むために、比較的多量の検体量を要し、又、分析誤差を
生じる可能性も高く、全分析工程を完全に自動化するこ
とはできなかった。
ている、ＨＤＬ中のコレステロールの測定方法は、検体
に沈殿剤を加えてＨＤＬ以外のリポタンパクを凝集さ
せ、これを遠心分離によって取り除き、分離されたＨＤ
Ｌのみを含む上清中のコレステロールを測定する沈殿法
である。 この方法は、超遠心法や電気泳動法に比較し
て簡便であるものの、沈殿剤を加えて分離する操作を含
むために、比較的多量の検体量を要し、又、分析誤差を
生じる可能性も高く、全分析工程を完全に自動化するこ
とはできなかった。
【０００５】一方、酵素的にＨＤＬ中のコレステロール
を分別定量する方法も検討されている。たとえば、胆汁
酸塩及び非イオン系界面活性剤の存在下に、酵素反応を
行う方法（特開昭６３−１２６４９８号公報）が知られ
ている。この方法は、反応初期の酵素反応はＬＤＬ濃度
に比例し、その後ＨＤＬ中のコレステロール濃度に比例
することを利用したものであるが、ＨＤＬ中のコレステ
ロールと他のリポタンパク質の中のコレステロールの反
応を完全に分別することはできず、正確性に問題があっ
た。
を分別定量する方法も検討されている。たとえば、胆汁
酸塩及び非イオン系界面活性剤の存在下に、酵素反応を
行う方法（特開昭６３−１２６４９８号公報）が知られ
ている。この方法は、反応初期の酵素反応はＬＤＬ濃度
に比例し、その後ＨＤＬ中のコレステロール濃度に比例
することを利用したものであるが、ＨＤＬ中のコレステ
ロールと他のリポタンパク質の中のコレステロールの反
応を完全に分別することはできず、正確性に問題があっ
た。
【０００６】また、ＨＤＬ以外のリポタンパク質をあら
かじめ凝集させておき、ＨＤＬ中のコレステロールのみ
を酵素的に反応させた後に、酵素を失活させると同時に
凝集を再溶解して吸光度を測定するという方法（特開平
６−２４２１１０号）が知られている。しかしながら、
この方法は少なくとも３回の試薬を添加する操作が必要
であるため、限定された自動分析装置にしか適用でき
ず、汎用性の点で問題があった。又、沈殿の再溶解に際
しては、高濃度の塩を使う等、分析器機に対するダメー
ジや試薬廃棄の点でも満足できるものではなかった。
かじめ凝集させておき、ＨＤＬ中のコレステロールのみ
を酵素的に反応させた後に、酵素を失活させると同時に
凝集を再溶解して吸光度を測定するという方法（特開平
６−２４２１１０号）が知られている。しかしながら、
この方法は少なくとも３回の試薬を添加する操作が必要
であるため、限定された自動分析装置にしか適用でき
ず、汎用性の点で問題があった。又、沈殿の再溶解に際
しては、高濃度の塩を使う等、分析器機に対するダメー
ジや試薬廃棄の点でも満足できるものではなかった。
【０００７】更に、特許第２６０００６５号では、通常
の沈殿法に用いられる、ＨＤＬ以外のリポタンパクを沈
殿させる沈殿試薬と一般的なコレステロール測定試薬を
組み合わせて使用し、沈殿しないＨＤＬ中のコレステロ
ールを測定する方法が開示されるが、沈殿剤の効果によ
って生じる濁りが測定系に妨害を与え、また、一般的な
コレステロール試薬では沈殿するＨＤＬ以外のリポタン
パク中のコレステロールとも反応してしまうなど、精度
の点では不十分な測定法であった。
の沈殿法に用いられる、ＨＤＬ以外のリポタンパクを沈
殿させる沈殿試薬と一般的なコレステロール測定試薬を
組み合わせて使用し、沈殿しないＨＤＬ中のコレステロ
ールを測定する方法が開示されるが、沈殿剤の効果によ
って生じる濁りが測定系に妨害を与え、また、一般的な
コレステロール試薬では沈殿するＨＤＬ以外のリポタン
パク中のコレステロールとも反応してしまうなど、精度
の点では不十分な測定法であった。
【０００８】
【発明が解決しようとする問題】したがって、本発明の
目的は、遠心分離などの前処理の必要がなく、簡便な操
作で効率よく測定することができ、種々の自動分析装置
に適用できるＨＤＬ中のコレステロールの定量法を提供
することにある。
目的は、遠心分離などの前処理の必要がなく、簡便な操
作で効率よく測定することができ、種々の自動分析装置
に適用できるＨＤＬ中のコレステロールの定量法を提供
することにある。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明者等は血清中のリ
ポタンパク中のコレステロールの測定について種々検討
していたところ、リポタンパクを溶解する特定の界面活
性剤の存在下で血清とコレステロール測定用酵素試薬と
の反応を行えば、まず最初にＨＤＬコレステロールのみ
が反応し、次いでＨＤＬの反応に遅れてＶＬＤＬ中のコ
レステロールが反応し、最後にかなり遅れてＬＤＬ中の
コレステロールが反応することを知った。
ポタンパク中のコレステロールの測定について種々検討
していたところ、リポタンパクを溶解する特定の界面活
性剤の存在下で血清とコレステロール測定用酵素試薬と
の反応を行えば、まず最初にＨＤＬコレステロールのみ
が反応し、次いでＨＤＬの反応に遅れてＶＬＤＬ中のコ
レステロールが反応し、最後にかなり遅れてＬＤＬ中の
コレステロールが反応することを知った。
【００１０】そして、更に研究を行った結果、最初のＨ
ＤＬコレステロール濃度に依存する反応を測定できるよ
う測定ポイントを適宜選択することにより、ＨＤＬコレ
ステロールのみを測定できること、および系内に血清リ
ポタンパク内のコレステロールとコレステロール測定用
酵素との反応を阻害する物質を存在せしめることによ
り、ＨＤＬコレステロールの濃度のみに依存した反応を
長時間にわたって維持できること、更にこれらの方法は
自動分析装置にも適用できることを見出し、本発明を完
成した。
ＤＬコレステロール濃度に依存する反応を測定できるよ
う測定ポイントを適宜選択することにより、ＨＤＬコレ
ステロールのみを測定できること、および系内に血清リ
ポタンパク内のコレステロールとコレステロール測定用
酵素との反応を阻害する物質を存在せしめることによ
り、ＨＤＬコレステロールの濃度のみに依存した反応を
長時間にわたって維持できること、更にこれらの方法は
自動分析装置にも適用できることを見出し、本発明を完
成した。
【００１１】すなわち、本発明は、血清に対し、ポリオ
キシエチレンアルキレンフェニルエーテル及びポリオキ
シエチレンアルキレントリベンジルフェニルエーテルか
ら選ばれる界面活性剤、ならびにコレステロール測定用
酵素試薬を添加し、リポタンパク質のうち、ＨＤＬ中の
コレステロールが優先的にコレステロール測定用酵素試
薬と反応する時間内にそのコレステロールの反応量を測
定することを特徴とするＨＤＬコレステロールの定量法
を提供するものである。
キシエチレンアルキレンフェニルエーテル及びポリオキ
シエチレンアルキレントリベンジルフェニルエーテルか
ら選ばれる界面活性剤、ならびにコレステロール測定用
酵素試薬を添加し、リポタンパク質のうち、ＨＤＬ中の
コレステロールが優先的にコレステロール測定用酵素試
薬と反応する時間内にそのコレステロールの反応量を測
定することを特徴とするＨＤＬコレステロールの定量法
を提供するものである。
【００１２】また、本発明は、上記ＨＤＬコレステロー
ルの定量法において、更に血清リポタンパク質中のコレ
ステロールとコレステロール測定用酵素試薬との反応を
阻害する効果を有する物質を加えた方法を提供するもの
である。
ルの定量法において、更に血清リポタンパク質中のコレ
ステロールとコレステロール測定用酵素試薬との反応を
阻害する効果を有する物質を加えた方法を提供するもの
である。
【００１３】
【発明の実施の形態】本発明方法で用いられるポリオキ
シエチレンアルキレンフェニルエーテル及びポリオキシ
エチレンアルキレントリベンジルフェニルエーテルから
選ばれる界面活性剤（以下、「溶解促進性活性剤」とい
う）は、リポタンパク質を溶解する作用を有する界面活
性剤である。 このうち前者の市販品の例としてはエマ
ルゲンＡ−６０（花王社製）などが、後者の市販品の例
としてはエマルゲンＢ６６（花王社製）等があげられ
る。 かかる界面活性剤は、単独で又は２種以上を組み
合わせて用いる事ができる。 またその使用量は化合物
によって異なり、特に制限されるものではないが、試薬
を適用すべき分析装置毎に、望ましい測定時間内にＨＤ
Ｌコレステロールが検出できる感度となるよう、実験的
に定めることができ、通常は０.０１−５重量％の濃度
にて使用するのが好ましい。
シエチレンアルキレンフェニルエーテル及びポリオキシ
エチレンアルキレントリベンジルフェニルエーテルから
選ばれる界面活性剤（以下、「溶解促進性活性剤」とい
う）は、リポタンパク質を溶解する作用を有する界面活
性剤である。 このうち前者の市販品の例としてはエマ
ルゲンＡ−６０（花王社製）などが、後者の市販品の例
としてはエマルゲンＢ６６（花王社製）等があげられ
る。 かかる界面活性剤は、単独で又は２種以上を組み
合わせて用いる事ができる。 またその使用量は化合物
によって異なり、特に制限されるものではないが、試薬
を適用すべき分析装置毎に、望ましい測定時間内にＨＤ
Ｌコレステロールが検出できる感度となるよう、実験的
に定めることができ、通常は０.０１−５重量％の濃度
にて使用するのが好ましい。
【００１４】また、本発明の測定方法においては、血清
リポタンパク質のコレステロールとコレステロール測定
用酵素試薬との反応を阻害する効果を有する物質（以
下、「反応阻害物質」）の存在下で行うことが好まし
く、そうすることにより存在しない場合に比較して、よ
り長時間ＨＤＬコレステロールの濃度のみに依存した反
応を維持することができる。
リポタンパク質のコレステロールとコレステロール測定
用酵素試薬との反応を阻害する効果を有する物質（以
下、「反応阻害物質」）の存在下で行うことが好まし
く、そうすることにより存在しない場合に比較して、よ
り長時間ＨＤＬコレステロールの濃度のみに依存した反
応を維持することができる。
【００１５】本発明で用いられる反応阻害物質として
は、リポタンパク質に結合親和性を示す物質やリポタン
パク質を溶解しない界面活性剤が挙げられ、それぞれ単
独であるいは複数の物質を組み合わせて用いることがで
きる。
は、リポタンパク質に結合親和性を示す物質やリポタン
パク質を溶解しない界面活性剤が挙げられ、それぞれ単
独であるいは複数の物質を組み合わせて用いることがで
きる。
【００１６】リポタンパク質に結合親和性を示す物質
（以下、「結合性物質」という）の例としては、ポリア
ニオンと２価金属塩を生成する物質の組み合わせを挙げ
ることができるが、これはＨＤＬとも結合し沈殿を生じ
るような物質であってもかまわない。 具体的なポリア
ニオンの例としては、デキストラン硫酸、リンタングス
テン酸、ヘパリン等が、２価金属塩を生成する物質の例
としては、ＭｇＣｌ2、ＣａＣｌ2、ＭｎＣｌ2、ＮｉＣ
ｌ2等の２価金属の塩化物やこれらの水和物等が挙げら
れる。 これらの結合性物質は、単独で又は２種以上を
組み合わせて用いることができ、またその使用量は物質
の種類によって異なり、特に限定されるものではない
が、反応終濃度として、ポリアニオンの場合には０.０
０２−１０重量％、２価金属塩を生成する物質の場合に
は０.０１−５重量％となる範囲で用いるのが望まし
い。
（以下、「結合性物質」という）の例としては、ポリア
ニオンと２価金属塩を生成する物質の組み合わせを挙げ
ることができるが、これはＨＤＬとも結合し沈殿を生じ
るような物質であってもかまわない。 具体的なポリア
ニオンの例としては、デキストラン硫酸、リンタングス
テン酸、ヘパリン等が、２価金属塩を生成する物質の例
としては、ＭｇＣｌ2、ＣａＣｌ2、ＭｎＣｌ2、ＮｉＣ
ｌ2等の２価金属の塩化物やこれらの水和物等が挙げら
れる。 これらの結合性物質は、単独で又は２種以上を
組み合わせて用いることができ、またその使用量は物質
の種類によって異なり、特に限定されるものではない
が、反応終濃度として、ポリアニオンの場合には０.０
０２−１０重量％、２価金属塩を生成する物質の場合に
は０.０１−５重量％となる範囲で用いるのが望まし
い。
【００１７】また、リポタンパク質を溶解しない界面活
性剤（以下、「溶解阻害性活性剤」という）としては、
例えばポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキ
シエチレンアルキルフェニルーテル、ポリオキシエチレ
ン−ポリオキシプロピレン縮合物、ポリオキシエチレン
アルキルエーテル硫酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸
塩等から選ばれる界面活性剤が挙げられる。
性剤（以下、「溶解阻害性活性剤」という）としては、
例えばポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキ
シエチレンアルキルフェニルーテル、ポリオキシエチレ
ン−ポリオキシプロピレン縮合物、ポリオキシエチレン
アルキルエーテル硫酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸
塩等から選ばれる界面活性剤が挙げられる。
【００１８】これらのうち、ポリオキシエチレンアルキ
ルエーテルとしては、ポリオキシエチレンセチルエーテ
ル（市販品としてはエマルゲン２２０（花王社製）等）
が；ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテルとし
ては、ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル（市
販品としてはエマルゲン９１３（花王社製）等）が；ポ
リオキシエチレン−ポリオキシプロピレン縮合物として
はプルロニックＦ−８８（旭電化社製）が；ポリオキシ
エチレンアルキルエーテル硫酸塩としてはポリオキシエ
チレンラウリルエーテル硫酸ナトリウム（市販品として
はエマール２０Ｃ（花王社製）等）が；アルキルベンゼ
ンスルホン酸塩としてはドデシルベンゼンスルホン酸ナ
トリウムが好ましい。
ルエーテルとしては、ポリオキシエチレンセチルエーテ
ル（市販品としてはエマルゲン２２０（花王社製）等）
が；ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテルとし
ては、ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル（市
販品としてはエマルゲン９１３（花王社製）等）が；ポ
リオキシエチレン−ポリオキシプロピレン縮合物として
はプルロニックＦ−８８（旭電化社製）が；ポリオキシ
エチレンアルキルエーテル硫酸塩としてはポリオキシエ
チレンラウリルエーテル硫酸ナトリウム（市販品として
はエマール２０Ｃ（花王社製）等）が；アルキルベンゼ
ンスルホン酸塩としてはドデシルベンゼンスルホン酸ナ
トリウムが好ましい。
【００１９】これらの溶解阻害性活性剤は、１種又は２
種以上を組み合わせて用いる事ができ、その使用量は特
に限定されないが、試料と混合したときの濃度が０.０
１−５重量％、特に０.０５−１重量％になるような範
囲で用いるのが望ましい。
種以上を組み合わせて用いる事ができ、その使用量は特
に限定されないが、試料と混合したときの濃度が０.０
１−５重量％、特に０.０５−１重量％になるような範
囲で用いるのが望ましい。
【００２０】溶解促進性活性剤とコレステロール測定用
酵素試薬（以下、「コレステロール試薬」という）を検
体である血清へ添加するに際しては、それぞれを別途添
加しても、また混合物として同時に添加してもよい。
また、反応阻害物質は、溶解促進性活性剤とコレステロ
ール試薬のいずれかまたはこれらの混合物に添加して用
いることができる。更に、複数の反応阻害物質を使用す
る場合は、混合して単独の場合と同様に用いられるほ
か、溶解促進性活性剤とコレステロール試薬にそれぞれ
別に添加して用いてもよい。
酵素試薬（以下、「コレステロール試薬」という）を検
体である血清へ添加するに際しては、それぞれを別途添
加しても、また混合物として同時に添加してもよい。
また、反応阻害物質は、溶解促進性活性剤とコレステロ
ール試薬のいずれかまたはこれらの混合物に添加して用
いることができる。更に、複数の反応阻害物質を使用す
る場合は、混合して単独の場合と同様に用いられるほ
か、溶解促進性活性剤とコレステロール試薬にそれぞれ
別に添加して用いてもよい。
【００２１】本発明のコレステロールの測定のために用
いるコレステロール試薬としては、公知の酵素試薬、例
えばコレステロールエステラーゼ及びコレステロールオ
キシダーゼの組み合わせ、コレステロールエステラーゼ
及びコレステロールデヒドロゲナーゼの組み合わせ等が
挙げられる。これらのうち、コレステロールエステラー
ゼ及びコレステロールオキシダーゼの組み合わせが好ま
しい。
いるコレステロール試薬としては、公知の酵素試薬、例
えばコレステロールエステラーゼ及びコレステロールオ
キシダーゼの組み合わせ、コレステロールエステラーゼ
及びコレステロールデヒドロゲナーゼの組み合わせ等が
挙げられる。これらのうち、コレステロールエステラー
ゼ及びコレステロールオキシダーゼの組み合わせが好ま
しい。
【００２２】更に、これらのコレステロール試薬を添加
した後、最終的にコレステロールの反応量を測定するた
めに用いる方法は特に制限されず、例えばパーオキシダ
ーゼと色原体をさらに組み合わせて行う吸光度分析、補
酵素や過酸化水素を直接検出する方法等が挙げられる。
した後、最終的にコレステロールの反応量を測定するた
めに用いる方法は特に制限されず、例えばパーオキシダ
ーゼと色原体をさらに組み合わせて行う吸光度分析、補
酵素や過酸化水素を直接検出する方法等が挙げられる。
【００２３】本発明方法においては、ＨＤＬのコレステ
ロールが優先的にコレステロール測定用酵素試薬と反応
する時間内にその反応を検出する必要があるが、そのた
めには溶解促進性活性剤とコレステロール試薬と試料と
を混合した後の、進行する反応を動力学的にモニターす
る方法や、ＨＤＬコレステロールの反応を反応終末点法
で測定してブランク値にて補正する方法（２ポイント
法）等を用いることができる。また、ＨＤＬの反応をよ
り長くモニターする必要がある場合には、反応阻害物質
を添加し、コレステロールの検出反応を遅延させる事に
よって、ＨＤＬコレステロール濃度のみに依存する反応
を延長させることができる。
ロールが優先的にコレステロール測定用酵素試薬と反応
する時間内にその反応を検出する必要があるが、そのた
めには溶解促進性活性剤とコレステロール試薬と試料と
を混合した後の、進行する反応を動力学的にモニターす
る方法や、ＨＤＬコレステロールの反応を反応終末点法
で測定してブランク値にて補正する方法（２ポイント
法）等を用いることができる。また、ＨＤＬの反応をよ
り長くモニターする必要がある場合には、反応阻害物質
を添加し、コレステロールの検出反応を遅延させる事に
よって、ＨＤＬコレステロール濃度のみに依存する反応
を延長させることができる。
【００２４】本発明方法を有利に実施するために利用さ
れる試薬ないし試薬キットとしては、例えば次のものを
挙げることができる。 （１）次の２成分（イ）および（ロ）を含有するもの。 （イ）溶解促進性活性剤 （ロ）コレステロール試薬 （２）次の成分（イ）〜（ハ）、 （イ）溶解促進性活性剤 （ロ）反応阻害物質（結合性物質、溶解阻害性活性剤） （ハ）コレステロール試薬
れる試薬ないし試薬キットとしては、例えば次のものを
挙げることができる。 （１）次の２成分（イ）および（ロ）を含有するもの。 （イ）溶解促進性活性剤 （ロ）コレステロール試薬 （２）次の成分（イ）〜（ハ）、 （イ）溶解促進性活性剤 （ロ）反応阻害物質（結合性物質、溶解阻害性活性剤） （ハ）コレステロール試薬
【００２５】このような試薬や試薬キットには、前記の
溶解促進性活性剤、コレステロール試薬（コレステロー
ルエステラーゼ、コレステロールオキシダーゼ、コレス
テロールエステラーゼ、コレステロールデヒドロゲナー
ゼ等）、反応阻害物質（結合性物質、溶解阻害性活性
剤）、パーオキシダーゼ、色原体、補酵素等の他、適当
なｐＨ緩衝剤、酸化防止剤、担体等を組み合わせること
ができる。 また、試薬や試薬キットの形状としても、
液体状のものの他、これを凍結乾燥したもの等が利用で
きる。
溶解促進性活性剤、コレステロール試薬（コレステロー
ルエステラーゼ、コレステロールオキシダーゼ、コレス
テロールエステラーゼ、コレステロールデヒドロゲナー
ゼ等）、反応阻害物質（結合性物質、溶解阻害性活性
剤）、パーオキシダーゼ、色原体、補酵素等の他、適当
なｐＨ緩衝剤、酸化防止剤、担体等を組み合わせること
ができる。 また、試薬や試薬キットの形状としても、
液体状のものの他、これを凍結乾燥したもの等が利用で
きる。
【００２６】
【発明の効果】本発明によれば、遠心分離などの前処理
の必要がなく、簡便な操作で効率良くＨＤＬ中のコレス
テロールを定量する事ができる。 また、少ない試料
で、簡便な操作により、特異的な測定が可能であるた
め、種々の自動分析装置に適用でき、臨床検査の領域に
おいて極めて有用である。
の必要がなく、簡便な操作で効率良くＨＤＬ中のコレス
テロールを定量する事ができる。 また、少ない試料
で、簡便な操作により、特異的な測定が可能であるた
め、種々の自動分析装置に適用でき、臨床検査の領域に
おいて極めて有用である。
【００２７】
【実施例】次に、実施例を挙げて本発明をさらに説明す
るが、本発明はこれに何ら制約されるものではない。
るが、本発明はこれに何ら制約されるものではない。
【００２８】実 施 例 １ リポタンパク質を含む５０例の血清検体について、以下
の本発明方法及び従来の沈殿法により、ＨＤＬ中のコレ
ステロールを定量し、これらの測定値を比較した。本発
明方法は、各血清検体３μｌに、１００ｍＭのＭＥＳ緩
衝液（第一試薬；ｐＨ６.５）３００μｌを添加し、約
５分後に、エマルゲンＢ−６６ １％、コレステロール
エステラーゼ １Ｕ／ｍｌ、コレステロールオキシダー
ゼ １Ｕ／ｍｌ、パーオキシダーゼ ５Ｕ／ｍｌ及びジス
ルフホブチルメタトルイジン ０.０４％、４−アミノア
ンチピリン ０.００４％を含む１００ｍＭのＭＥＳ緩衝
液（ｐＨ６.５）からなるコレステロール測定試薬（第
二試薬）１００μｌを加え、第二試薬直前と添加後５分
後の６００ｎｍ（副波長 ７００ｎｍ）における吸光度
を測定し、その差より血清検体中のＨＤＬコレステロー
ル濃度を求めた（２ポイント法）。 また、較正用物質
として濃度既知のコントロール血清を用いた。 なお、
以上の操作は、日立７１５０型自動分析装置を用いて行
った。
の本発明方法及び従来の沈殿法により、ＨＤＬ中のコレ
ステロールを定量し、これらの測定値を比較した。本発
明方法は、各血清検体３μｌに、１００ｍＭのＭＥＳ緩
衝液（第一試薬；ｐＨ６.５）３００μｌを添加し、約
５分後に、エマルゲンＢ−６６ １％、コレステロール
エステラーゼ １Ｕ／ｍｌ、コレステロールオキシダー
ゼ １Ｕ／ｍｌ、パーオキシダーゼ ５Ｕ／ｍｌ及びジス
ルフホブチルメタトルイジン ０.０４％、４−アミノア
ンチピリン ０.００４％を含む１００ｍＭのＭＥＳ緩衝
液（ｐＨ６.５）からなるコレステロール測定試薬（第
二試薬）１００μｌを加え、第二試薬直前と添加後５分
後の６００ｎｍ（副波長 ７００ｎｍ）における吸光度
を測定し、その差より血清検体中のＨＤＬコレステロー
ル濃度を求めた（２ポイント法）。 また、較正用物質
として濃度既知のコントロール血清を用いた。 なお、
以上の操作は、日立７１５０型自動分析装置を用いて行
った。
【００２９】一方、沈殿法によりＨＤＬ中のコレステロ
ールを測定するには、デキストラン硫酸 ０.３％及び塩
化マグネシウム ２％を含む水溶液 ２００μｌを検体
２００μｌと混和し、３０００ｒｐｍで１０分間遠心分
離を行った。 この上清５０μｌを採取し、Ｔｒｉｔｏ
ｎＸ−１００ １％、コレステロールエステラーゼ １Ｕ
／ｍｌ、コレステロールオキシダーゼ １Ｕ／ｍｌ、パ
ーオキシダーゼ ５Ｕ／ｍｌ及びジスルフホブチルメタ
トルイジン ０.０４％、４−アミノアンチピリン０.０
０４％を含む１００ｍＭのＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６.５）
からなるコレステロール測定試薬３ｍｌと混合し、３７
℃で１０分間インキュベートした後、６００ｎｍにおけ
る吸光度を測定し、ＨＤＬ中のコレステロール濃度を求
めた。
ールを測定するには、デキストラン硫酸 ０.３％及び塩
化マグネシウム ２％を含む水溶液 ２００μｌを検体
２００μｌと混和し、３０００ｒｐｍで１０分間遠心分
離を行った。 この上清５０μｌを採取し、Ｔｒｉｔｏ
ｎＸ−１００ １％、コレステロールエステラーゼ １Ｕ
／ｍｌ、コレステロールオキシダーゼ １Ｕ／ｍｌ、パ
ーオキシダーゼ ５Ｕ／ｍｌ及びジスルフホブチルメタ
トルイジン ０.０４％、４−アミノアンチピリン０.０
０４％を含む１００ｍＭのＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６.５）
からなるコレステロール測定試薬３ｍｌと混合し、３７
℃で１０分間インキュベートした後、６００ｎｍにおけ
る吸光度を測定し、ＨＤＬ中のコレステロール濃度を求
めた。
【００３０】本発明法と沈殿法による結果の相関図を図
１に示すが、本発明方法は簡便な操作であるにもかかわ
らず、従来の沈殿法と極めて良好な相関を示していた。
１に示すが、本発明方法は簡便な操作であるにもかかわ
らず、従来の沈殿法と極めて良好な相関を示していた。
【００３１】実 施 例 ２ 第二試薬中のエマルゲンＢ−６６の代わりにエマルゲン
Ａ−６０ １％を添加した以外は実施例１と同一の試薬
を用い、同一の方法でリポタンパク質を含む５０例の血
清検体について、ＨＤＬ中のコレステロールを定量し
た。即ち、検体３μｌに第一試薬３００μｌを添加し、
約５分後、第二試薬１００μｌを加えた。 第２試薬添
加後、１２秒後から２４秒後までの５４６ｎｍ（副波長
６６０ｎｍ）における吸光度変化を測定し、血清検体
中のＨＤＬコレステロール濃度を求めた。 また、較正
用物質としては濃度既知の２種類のコントロール血清
（低濃度と高濃度）を使用した。 なお、以上の操作
は、日立７１５０型自動分析装置を用いて行った。ま
た、同じ検体について、従来の沈殿法で実施例１と同様
に、ＨＤＬ中のコレステロールを定量し、これらの測定
値を比較した。 この結果を図２に示す。
Ａ−６０ １％を添加した以外は実施例１と同一の試薬
を用い、同一の方法でリポタンパク質を含む５０例の血
清検体について、ＨＤＬ中のコレステロールを定量し
た。即ち、検体３μｌに第一試薬３００μｌを添加し、
約５分後、第二試薬１００μｌを加えた。 第２試薬添
加後、１２秒後から２４秒後までの５４６ｎｍ（副波長
６６０ｎｍ）における吸光度変化を測定し、血清検体
中のＨＤＬコレステロール濃度を求めた。 また、較正
用物質としては濃度既知の２種類のコントロール血清
（低濃度と高濃度）を使用した。 なお、以上の操作
は、日立７１５０型自動分析装置を用いて行った。ま
た、同じ検体について、従来の沈殿法で実施例１と同様
に、ＨＤＬ中のコレステロールを定量し、これらの測定
値を比較した。 この結果を図２に示す。
【００３２】図２の結果から、本発明方法は簡便な操作
であるにもかかわらず、従来の沈殿法と良好な相関を示
した。
であるにもかかわらず、従来の沈殿法と良好な相関を示
した。
【００３３】実 施 例 ３ 実施例２において用いたのと同一の第二試薬と、下記の
第一試薬を用い、リポタンパク質を含む５０例の血清検
体について、本発明方法及び従来の沈殿法により、ＨＤ
Ｌ中のコレステロールを定量し、これらの測定値を比較
した。 なお、第一試薬Ａ（実施例２と同じ）は対照と
して加えた。
第一試薬を用い、リポタンパク質を含む５０例の血清検
体について、本発明方法及び従来の沈殿法により、ＨＤ
Ｌ中のコレステロールを定量し、これらの測定値を比較
した。 なお、第一試薬Ａ（実施例２と同じ）は対照と
して加えた。
【００３４】［ 第一試薬 ］ 第一試薬Ａ：１００ｍＭのＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６.５） 第一試薬Ｂ：プルロニックＦ−８８（旭電化社製）０.
２％水溶液 第一試薬Ｃ：リンタングステン酸ナトリウム ０.２％及
び塩化マグネシウム １００ｍＭを含む水溶液（ｐＨ６.
４） 第一試薬Ｄ：プルロニックＦ−８８ ０.２％、リンタン
グステン酸ナトリウム ０.２％及び塩化マグネシウム
１００ｍＭを含む水溶液（ｐＨ６.４）
２％水溶液 第一試薬Ｃ：リンタングステン酸ナトリウム ０.２％及
び塩化マグネシウム １００ｍＭを含む水溶液（ｐＨ６.
４） 第一試薬Ｄ：プルロニックＦ−８８ ０.２％、リンタン
グステン酸ナトリウム ０.２％及び塩化マグネシウム
１００ｍＭを含む水溶液（ｐＨ６.４）
【００３５】吸光度の測定は、反応阻害物質の添加の効
果を確認するため、日立７１５０を用いて第二試薬添加
後１２秒から２４秒後、１２秒後から１６８秒後及び１
２秒後から３１２秒後のそれぞれ異なる測光時間を用い
て測定を行った。一方、沈殿法によるＨＤＬの測定は実
施例１と同様に行い、各条件での本発明方法との相関関
係を調べた。 この相関係数を表１に示す。
果を確認するため、日立７１５０を用いて第二試薬添加
後１２秒から２４秒後、１２秒後から１６８秒後及び１
２秒後から３１２秒後のそれぞれ異なる測光時間を用い
て測定を行った。一方、沈殿法によるＨＤＬの測定は実
施例１と同様に行い、各条件での本発明方法との相関関
係を調べた。 この相関係数を表１に示す。
【００３６】
【表１】
【００３７】この結果に示されるように、反応阻害物質
を含まない第一試薬では、反応初期の吸光度測定でのみ
良好な結果を示した。 一方、反応阻害物質を含むプル
ロニックＦ−８８（旭電化社製）０.２％水溶液、リン
タングステン酸ナトリウム ０.２％及び塩化マグネシウ
ム １００ｍＭを含む水溶液（ｐＨ６.４）並びにプルロ
ニックＦ−８８ ０.２％、リンタングステン酸ナトリウ
ム ０.２％及び塩化マグネシウム １００ｍＭを含む水
溶液（ｐＨ６.４）をそれぞれ第一試薬として用いた測
定結果では、長時間の測定でいずれも良好な相関（１に
近いほど相関性が高い）を示し、反応阻害物質が、ＨＤ
Ｌコレステロール量に依存する反応を延長する効果があ
ることが確認された。
を含まない第一試薬では、反応初期の吸光度測定でのみ
良好な結果を示した。 一方、反応阻害物質を含むプル
ロニックＦ−８８（旭電化社製）０.２％水溶液、リン
タングステン酸ナトリウム ０.２％及び塩化マグネシウ
ム １００ｍＭを含む水溶液（ｐＨ６.４）並びにプルロ
ニックＦ−８８ ０.２％、リンタングステン酸ナトリウ
ム ０.２％及び塩化マグネシウム １００ｍＭを含む水
溶液（ｐＨ６.４）をそれぞれ第一試薬として用いた測
定結果では、長時間の測定でいずれも良好な相関（１に
近いほど相関性が高い）を示し、反応阻害物質が、ＨＤ
Ｌコレステロール量に依存する反応を延長する効果があ
ることが確認された。
【図１】実施例１における本発明方法と沈殿法の分析値
の相関関係を示す図面
の相関関係を示す図面
【図２】実施例２における本発明方法と沈殿法の分析値
の相関関係を示す図面 以 上
の相関関係を示す図面 以 上
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 真鍋 満久 茨城県竜ヶ崎市向陽台３−３−１ 第一化 学薬品株式会社つくば開発研究所内
Claims (5)
- 【請求項１】 血清に対し、ポリオキシエチレンアルキ
レンフェニルエーテル及びポリオキシエチレンアルキレ
ントリベンジルフェニルエーテルから選ばれる界面活性
剤、ならびにコレステロール測定用酵素試薬を添加し、
リポタンパク質のうち、高比重リポタンパク質中のコレ
ステロールが優先的にコレステロール測定用酵素試薬と
反応する時間内にそのコレステロールの反応量を測定す
ることを特徴とする高比重リポタンパク質コレステロー
ルの定量法。 - 【請求項２】 血清に対し、ポリオキシエチレンアルキ
レンフェニルエーテル及びポリオキシエチレンアルキレ
ントリベンジルフェニルエーテルから選ばれる界面活性
剤、血清リポタンパク質中のコレステロールとコレステ
ロール測定用酵素試薬との反応を阻害する効果を有する
物質、ならびにコレステロール測定用酵素試薬を添加
し、リポタンパク質のうち、高比重リポタンパク質中の
コレステロールが優先的にコレステロール測定用酵素試
薬と反応する時間内にそのコレステロールの反応量を測
定することを特徴とする高比重リポタンパク質コレステ
ロールの定量法。 - 【請求項３】 血清リポタンパク質中のコレステロール
とコレステロール測定用酵素試薬との反応を阻害する効
果を有す物質がリポタンパク質を溶解しない界面活性剤
又はポリアニオンと２価金属イオンを生成する物質の組
み合わせである請求項２記載の高比重リポタンパク質コ
レステロールの定量法。 - 【請求項４】 次の成分（イ）および（ロ）、 （イ）ポリオキシエチレンアルキレンフェニルエーテル
及びポリオキシエチレンアルキレントリベンジルフェニ
ルエーテルから選ばれる界面活性剤 （ロ）コレステロール測定用酵素試薬 を含有する高比重リポ蛋白質コレステロール測定用試薬
もしくは試薬キット。 - 【請求項５】 次の成分（イ）〜（ハ）、 （イ）ポリオキシエチレンアルキレンフェニルエーテル
及びポリオキシエチレンアルキレントリベンジルフェニ
ルエーテルから選ばれる界面活性剤 （ロ）血清リポタンパク質中のコレステロールとコレス
テロール測定用酵素との反応を阻害する効果を有する物
質 （ハ）コレステロール測定用酵素試薬 を含有する高比重リポ蛋白質コレステロール測定用試薬
もしくは試薬キット。
Priority Applications (14)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9244821A JPH1156395A (ja) | 1997-08-27 | 1997-08-27 | コレステロールの定量法 |
| EP09004707A EP2080810B1 (en) | 1997-08-27 | 1998-08-25 | Methods for quantitating high-density lipoprotein cholesterol |
| PCT/JP1998/003771 WO1999010526A1 (fr) | 1997-08-27 | 1998-08-25 | Methodes de quantification de cholesterol des lipoproteines de haute densite |
| EP98938983A EP1046716B1 (en) | 1997-08-27 | 1998-08-25 | Methods for quantitating high-density lipoprotein cholesterol |
| CA2301873A CA2301873C (en) | 1997-08-27 | 1998-08-25 | Methods for quantitating high-density lipoprotein cholesterol |
| DE69841576T DE69841576D1 (de) | 1997-08-27 | 1998-08-25 | Verfahren zur quantifizierung von lipoprotein-cholesterol hoher dichte |
| TW087114002A TW571096B (en) | 1997-08-27 | 1998-08-25 | Methods for quantitating high-density lipoprotein cholesterol |
| DE69842126T DE69842126D1 (de) | 1997-08-27 | 1998-08-25 | Verfahren zur Quantifizierung von hochdichtem Lipoproteincholesterol |
| KR1020007001768A KR100560437B1 (ko) | 1997-08-27 | 1998-08-25 | 고비중 리포단백질 콜레스테롤의 정량법 |
| CNB988085402A CN1134544C (zh) | 1997-08-27 | 1998-08-25 | 用于定量高密度脂蛋白胆固醇的方法 |
| AU87509/98A AU757184B2 (en) | 1997-08-27 | 1998-08-25 | Methods for quantitating high-density lipoprotein cholesterol |
| AT98938983T ATE462015T1 (de) | 1997-08-27 | 1998-08-25 | Verfahren zur quantifizierung von lipoprotein- cholesterol hoher dichte |
| AT09004707T ATE497544T1 (de) | 1997-08-27 | 1998-08-25 | Verfahren zur quantifizierung von hochdichtem lipoproteincholesterol |
| AU2003204024A AU2003204024B2 (en) | 1997-08-27 | 2003-05-05 | Methods for quantitating high-density lipoprotein cholesterol |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9244821A JPH1156395A (ja) | 1997-08-27 | 1997-08-27 | コレステロールの定量法 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2007202821A Division JP2007295935A (ja) | 2007-08-03 | 2007-08-03 | コレステロールの定量法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1156395A true JPH1156395A (ja) | 1999-03-02 |
Family
ID=17124463
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9244821A Pending JPH1156395A (ja) | 1997-08-27 | 1997-08-27 | コレステロールの定量法 |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (2) | EP1046716B1 (ja) |
| JP (1) | JPH1156395A (ja) |
| KR (1) | KR100560437B1 (ja) |
| CN (1) | CN1134544C (ja) |
| AT (2) | ATE497544T1 (ja) |
| AU (2) | AU757184B2 (ja) |
| CA (1) | CA2301873C (ja) |
| DE (2) | DE69841576D1 (ja) |
| TW (1) | TW571096B (ja) |
| WO (1) | WO1999010526A1 (ja) |
Cited By (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000052480A1 (fr) * | 1999-03-01 | 2000-09-08 | International Reagents Corporation | Dosage de composant d'un echantillon biologique |
| JP2001224397A (ja) * | 2000-02-17 | 2001-08-21 | Denka Seiken Co Ltd | 低密度リポ蛋白中のコレステロールの定量方法 |
| JP2001286297A (ja) * | 1999-06-21 | 2001-10-16 | Dai Ichi Pure Chem Co Ltd | コレステロール定量用試料の前処理方法およびこれを利用する特定のリポ蛋白中のコレステロール定量法 |
| US6939682B2 (en) | 2000-11-08 | 2005-09-06 | Arkray, Inc. | Test piece for assaying high density lipoprotein (HDL) cholesterol |
| US6979552B2 (en) | 2000-11-14 | 2005-12-27 | Daiichi Pure Chemicals Co., Ltd. | Method of lipid assay and reagent for use therein |
| JPWO2004055204A1 (ja) * | 2002-12-13 | 2006-04-20 | デンカ生研株式会社 | 低密度リポ蛋白中コレステロールのマルチ定量法 |
| JP2007195443A (ja) * | 2006-01-25 | 2007-08-09 | Sysmex Corp | 高密度リポタンパク質中コレステロール測定試薬キット及び測定方法 |
| JPWO2005100591A1 (ja) * | 2004-04-15 | 2008-03-06 | 協和メデックス株式会社 | 高密度リポ蛋白中のコレステロールの測定方法 |
| EP2065708A1 (en) | 2007-11-28 | 2009-06-03 | Fujifilm Corporation | Method for measuring high-density lipoprotein cholesterol |
| JP2009125049A (ja) * | 2007-11-28 | 2009-06-11 | Fujifilm Corp | 高密度リポ蛋白コレステロールの測定方法 |
| US7682831B2 (en) | 2002-11-27 | 2010-03-23 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Method of measuring lipid in specific lipoprotein |
| JP2010148526A (ja) * | 2010-04-05 | 2010-07-08 | Denka Seiken Co Ltd | 低密度リポ蛋白中のコレステロールの定量方法 |
| JP2010172346A (ja) * | 1999-06-21 | 2010-08-12 | Sekisui Medical Co Ltd | コレステロール定量用試料の前処理方法およびこれを利用する特定のリポ蛋白中のコレステロール定量法 |
| JP4544751B2 (ja) * | 1999-03-24 | 2010-09-15 | 積水メディカル株式会社 | コレステロールの定量法 |
| CN101880556A (zh) * | 2010-05-11 | 2010-11-10 | 李珍发 | 环保型甲醇汽油多功能增效剂 |
| WO2019189642A1 (ja) | 2018-03-28 | 2019-10-03 | デンカ生研株式会社 | リポ蛋白コレステロールの定量方法、定量試薬及び定量キット |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4708531B2 (ja) * | 2000-06-07 | 2011-06-22 | シスメックス株式会社 | Ｈｄｌ亜画分中のコレステロールの測定法 |
| US7074581B2 (en) * | 2002-08-09 | 2006-07-11 | Sysmex Corporation | Reagent for assaying lipid |
| US7851174B2 (en) | 2002-10-16 | 2010-12-14 | Kyowa Medex Co., Ltd. | Method for quantitatively determining cholesterol in high density lipoproteins and reagents therefor |
| CN100408691C (zh) * | 2002-11-27 | 2008-08-06 | 第一化学药品株式会社 | 特定脂蛋白中的脂质测定法 |
| EP2325639B1 (en) * | 2008-08-22 | 2016-03-30 | Denka Seiken Co., Ltd. | Cystatin c adsorption inhibitor |
| CN103080748B (zh) * | 2010-07-23 | 2015-05-27 | 电化生研株式会社 | 高密度脂蛋白3中的胆固醇的定量方法 |
| JP6054051B2 (ja) * | 2012-04-11 | 2016-12-27 | デンカ生研株式会社 | 高密度リポ蛋白（ｈｄｌ）中のコレステロール（−ｃ）の亜分画定量方法 |
| JP6182008B2 (ja) * | 2013-07-24 | 2017-08-16 | デンカ生研株式会社 | 高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法及び定量試薬 |
| CN104076158B (zh) * | 2014-07-10 | 2016-08-17 | 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 | 一种用于测定高密度脂蛋白胆固醇的试剂盒 |
| CN105543336B (zh) * | 2015-12-22 | 2019-03-12 | 山东博科生物产业有限公司 | 一种稳定、抗干扰能力强的血清磷脂检测试剂及检测方法 |
| CN106191211B (zh) * | 2016-08-19 | 2019-12-24 | 威海威仕泰医疗科技有限公司 | 一种用于高密度脂蛋白胆固醇检测试剂的稳定剂 |
| CN112695071B (zh) * | 2020-12-16 | 2022-12-30 | 浙江伊利康生物技术有限公司 | 一种高密度脂蛋白3的测定试剂、方法和试剂盒 |
Family Cites Families (8)
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|---|---|---|---|---|
| DE3533288A1 (de) * | 1985-09-18 | 1987-03-26 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagenz zur spezifischen bestimmung von hdl-cholesterin im serum |
| DE3636851A1 (de) * | 1986-10-29 | 1988-05-11 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagenz zur spezifischen bestimmung des cholesterins der hdl-fraktion |
| JPH02210265A (ja) * | 1989-02-10 | 1990-08-21 | Konica Corp | 分析素子 |
| JP3107474B2 (ja) | 1993-02-17 | 2000-11-06 | 国際試薬株式会社 | リポ蛋白分画中の成分の定量方法 |
| JP2600065B2 (ja) | 1994-03-08 | 1997-04-16 | 協和メデックス株式会社 | 高密度リポ蛋白中のコレステロールの定量法 |
| JP2653755B2 (ja) * | 1994-03-08 | 1997-09-17 | 協和メデックス株式会社 | 高密度リポ蛋白中のコレステロールの定量法 |
| JP3614514B2 (ja) * | 1995-06-21 | 2005-01-26 | 国際試薬株式会社 | 高比重リポ蛋白分画中のコレステロールの定量方法及び定量用試薬キット |
| JP3193634B2 (ja) * | 1996-05-29 | 2001-07-30 | 第一化学薬品株式会社 | Ｌｄｌコレステロールの定量方法 |
-
1997
- 1997-08-27 JP JP9244821A patent/JPH1156395A/ja active Pending
-
1998
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- 1998-08-25 AT AT98938983T patent/ATE462015T1/de not_active IP Right Cessation
- 1998-08-25 CA CA2301873A patent/CA2301873C/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-25 WO PCT/JP1998/003771 patent/WO1999010526A1/ja active IP Right Grant
- 1998-08-25 KR KR1020007001768A patent/KR100560437B1/ko not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-05-05 AU AU2003204024A patent/AU2003204024B2/en not_active Expired
Cited By (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000052480A1 (fr) * | 1999-03-01 | 2000-09-08 | International Reagents Corporation | Dosage de composant d'un echantillon biologique |
| JP4547095B2 (ja) * | 1999-03-01 | 2010-09-22 | シスメックス株式会社 | 生体試料成分の測定方法 |
| US7208287B2 (en) | 1999-03-01 | 2007-04-24 | Sysmex Corporation | Reagent set and method for detecting cholesterol in a high-density lipoprotein or low density lipoprotein |
| JP4544751B2 (ja) * | 1999-03-24 | 2010-09-15 | 積水メディカル株式会社 | コレステロールの定量法 |
| JP2010172346A (ja) * | 1999-06-21 | 2010-08-12 | Sekisui Medical Co Ltd | コレステロール定量用試料の前処理方法およびこれを利用する特定のリポ蛋白中のコレステロール定量法 |
| JP2001286297A (ja) * | 1999-06-21 | 2001-10-16 | Dai Ichi Pure Chem Co Ltd | コレステロール定量用試料の前処理方法およびこれを利用する特定のリポ蛋白中のコレステロール定量法 |
| JP2001224397A (ja) * | 2000-02-17 | 2001-08-21 | Denka Seiken Co Ltd | 低密度リポ蛋白中のコレステロールの定量方法 |
| JP4519239B2 (ja) * | 2000-02-17 | 2010-08-04 | デンカ生研株式会社 | 低密度リポ蛋白中のコレステロールの定量方法 |
| US6939682B2 (en) | 2000-11-08 | 2005-09-06 | Arkray, Inc. | Test piece for assaying high density lipoprotein (HDL) cholesterol |
| US7575884B2 (en) | 2000-11-08 | 2009-08-18 | Arkray, Inc. | Test piece for measuring high-density lipoprotein (HDL) cholesterol |
| US6979552B2 (en) | 2000-11-14 | 2005-12-27 | Daiichi Pure Chemicals Co., Ltd. | Method of lipid assay and reagent for use therein |
| EP2194142A1 (en) | 2002-11-27 | 2010-06-09 | Daiichi Pure Chemicals Co., Ltd. | Method of measuring cholesterol in high density lipoproteins |
| US7682831B2 (en) | 2002-11-27 | 2010-03-23 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Method of measuring lipid in specific lipoprotein |
| JPWO2004055204A1 (ja) * | 2002-12-13 | 2006-04-20 | デンカ生研株式会社 | 低密度リポ蛋白中コレステロールのマルチ定量法 |
| JPWO2005100591A1 (ja) * | 2004-04-15 | 2008-03-06 | 協和メデックス株式会社 | 高密度リポ蛋白中のコレステロールの測定方法 |
| JP4796489B2 (ja) * | 2004-04-15 | 2011-10-19 | 協和メデックス株式会社 | 高密度リポ蛋白中のコレステロールの測定方法 |
| JP2007195443A (ja) * | 2006-01-25 | 2007-08-09 | Sysmex Corp | 高密度リポタンパク質中コレステロール測定試薬キット及び測定方法 |
| JP2009125049A (ja) * | 2007-11-28 | 2009-06-11 | Fujifilm Corp | 高密度リポ蛋白コレステロールの測定方法 |
| EP2065708A1 (en) | 2007-11-28 | 2009-06-03 | Fujifilm Corporation | Method for measuring high-density lipoprotein cholesterol |
| JP2010148526A (ja) * | 2010-04-05 | 2010-07-08 | Denka Seiken Co Ltd | 低密度リポ蛋白中のコレステロールの定量方法 |
| CN101880556A (zh) * | 2010-05-11 | 2010-11-10 | 李珍发 | 环保型甲醇汽油多功能增效剂 |
| WO2019189642A1 (ja) | 2018-03-28 | 2019-10-03 | デンカ生研株式会社 | リポ蛋白コレステロールの定量方法、定量試薬及び定量キット |
| KR20200139154A (ko) | 2018-03-28 | 2020-12-11 | 덴카 주식회사 | 리포 단백 콜레스테롤의 정량 방법, 정량 시약, 및 정량 키트 |
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