JP6182008B2 - 高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法及び定量試薬 - Google Patents
高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法及び定量試薬 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6182008B2 JP6182008B2 JP2013153294A JP2013153294A JP6182008B2 JP 6182008 B2 JP6182008 B2 JP 6182008B2 JP 2013153294 A JP2013153294 A JP 2013153294A JP 2013153294 A JP2013153294 A JP 2013153294A JP 6182008 B2 JP6182008 B2 JP 6182008B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cholesterol
- reagent
- hdl3
- polyoxyethylene
- surfactants
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 title claims description 100
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims description 56
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 title claims description 50
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 46
- 108010021078 HDL3 Lipoproteins Proteins 0.000 title claims description 12
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 48
- 208000010152 Huntington disease-like 3 Diseases 0.000 claims description 46
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 claims description 39
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 claims description 39
- -1 polyoxyethylene Polymers 0.000 claims description 39
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 claims description 30
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 27
- USIUVYZYUHIAEV-UHFFFAOYSA-N diphenyl ether Chemical compound C=1C=CC=CC=1OC1=CC=CC=C1 USIUVYZYUHIAEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 claims description 21
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 claims description 21
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 14
- 125000003367 polycyclic group Chemical group 0.000 claims description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 6
- 238000011002 quantification Methods 0.000 claims description 3
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 claims 1
- 108010023302 HDL Cholesterol Proteins 0.000 description 34
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical compound CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 108010089254 Cholesterol oxidase Proteins 0.000 description 14
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 108010055297 Sterol Esterase Proteins 0.000 description 14
- 102000000019 Sterol Esterase Human genes 0.000 description 14
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 14
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 13
- AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 1,4-benzoquinone Chemical compound O=C1C=CC(=O)C=C1 AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 10
- 239000007992 BES buffer Substances 0.000 description 9
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 8
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 8
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 8
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 8
- ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trimethyl-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]benzenesulfonamide Chemical compound CC1=CC(C)=CC(C)=C1S(=O)(=O)NC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 7
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 7
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- 108010061312 Sphingomyelin Phosphodiesterase Proteins 0.000 description 6
- 102000011971 Sphingomyelin Phosphodiesterase Human genes 0.000 description 6
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 108010025628 Apolipoproteins E Proteins 0.000 description 4
- 102000013918 Apolipoproteins E Human genes 0.000 description 4
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N Betaine Natural products C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O N,N,N-trimethylglycinium Chemical compound C[N+](C)(C)CC(O)=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 4
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 4
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 4
- IRQRBVOQGUPTLG-UHFFFAOYSA-M sodium;3-(n-ethyl-3-methylanilino)-2-hydroxypropane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].[O-]S(=O)(=O)CC(O)CN(CC)C1=CC=CC(C)=C1 IRQRBVOQGUPTLG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 3
- 108700012841 Cholesteryl Ester Transfer Protein Deficiency Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- 241000047703 Nonion Species 0.000 description 3
- 229920002025 Pluronic® F 88 Polymers 0.000 description 3
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SVLRFMQGKVFRTB-UHFFFAOYSA-M sodium;3-(3,5-dimethoxyanilino)-2-hydroxypropane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].COC1=CC(NCC(O)CS([O-])(=O)=O)=CC(OC)=C1 SVLRFMQGKVFRTB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000006410 Apoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010083590 Apoproteins Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710171315 Peroxidase 30 Proteins 0.000 description 2
- 102000014190 Phosphatidylcholine-sterol O-acyltransferase Human genes 0.000 description 2
- 108010011964 Phosphatidylcholine-sterol O-acyltransferase Proteins 0.000 description 2
- 102000011420 Phospholipase D Human genes 0.000 description 2
- 108090000553 Phospholipase D Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000014384 Type C Phospholipases Human genes 0.000 description 2
- 108010079194 Type C Phospholipases Proteins 0.000 description 2
- 239000003093 cationic surfactant Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 235000019864 coconut oil Nutrition 0.000 description 2
- 239000003240 coconut oil Substances 0.000 description 2
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 2
- JHIVVAPYMSGYDF-UHFFFAOYSA-N cyclohexanone Chemical compound O=C1CCCCC1 JHIVVAPYMSGYDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- DDXLVDQZPFLQMZ-UHFFFAOYSA-M dodecyl(trimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C DDXLVDQZPFLQMZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 229940094506 lauryl betaine Drugs 0.000 description 2
- 108010022197 lipoprotein cholesterol Proteins 0.000 description 2
- DVEKCXOJTLDBFE-UHFFFAOYSA-N n-dodecyl-n,n-dimethylglycinate Chemical compound CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC([O-])=O DVEKCXOJTLDBFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- JHJLBTNAGRQEKS-UHFFFAOYSA-M sodium bromide Chemical compound [Na+].[Br-] JHJLBTNAGRQEKS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical class OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 2,2'-piperazine-1,4-diylbisethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCN1CCN(CCS(O)(=O)=O)CC1 IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AJTVSSFTXWNIRG-UHFFFAOYSA-N 2-[bis(2-hydroxyethyl)amino]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+](CCO)CCS([O-])(=O)=O AJTVSSFTXWNIRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LVQFQZZGTZFUNF-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-3-[4-(2-hydroxy-3-sulfonatopropyl)piperazine-1,4-diium-1-yl]propane-1-sulfonate Chemical compound OS(=O)(=O)CC(O)CN1CCN(CC(O)CS(O)(=O)=O)CC1 LVQFQZZGTZFUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HSXUNHYXJWDLDK-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1-sulfonic acid Chemical compound CC(O)CS(O)(=O)=O HSXUNHYXJWDLDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AOTXQRRUWFSXCN-UHFFFAOYSA-N 3-(3,5-dimethoxyanilino)-2-hydroxypropane-1-sulfonic acid Chemical compound COC1=CC(NCC(O)CS(O)(=O)=O)=CC(OC)=C1 AOTXQRRUWFSXCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NUFBIAUZAMHTSP-UHFFFAOYSA-N 3-(n-morpholino)-2-hydroxypropanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CC(O)CN1CCOCC1 NUFBIAUZAMHTSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KEWSCDNULKOKTG-UHFFFAOYSA-N 4-cyano-4-ethylsulfanylcarbothioylsulfanylpentanoic acid Chemical compound CCSC(=S)SC(C)(C#N)CCC(O)=O KEWSCDNULKOKTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ALZKUIHATFWRNE-UHFFFAOYSA-N 5-hydroxy-2,2,3-tris(2-hydroxyethyl)pentanamide Chemical compound OCCC(C(O)=N)(C(CCO)CCO)CCO ALZKUIHATFWRNE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100029470 Apolipoprotein E Human genes 0.000 description 1
- 101710095339 Apolipoprotein E Proteins 0.000 description 1
- 102100034808 CCAAT/enhancer-binding protein alpha Human genes 0.000 description 1
- 102100037637 Cholesteryl ester transfer protein Human genes 0.000 description 1
- 208000032928 Dyslipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 239000006173 Good's buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 101000945515 Homo sapiens CCAAT/enhancer-binding protein alpha Proteins 0.000 description 1
- 101000880514 Homo sapiens Cholesteryl ester transfer protein Proteins 0.000 description 1
- 238000008214 LDL Cholesterol Methods 0.000 description 1
- 208000017170 Lipid metabolism disease Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920002415 Pluronic P-123 Polymers 0.000 description 1
- 229920002057 Pluronic® P 103 Polymers 0.000 description 1
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000005215 alkyl ethers Chemical class 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 239000002280 amphoteric surfactant Substances 0.000 description 1
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 230000000702 anti-platelet effect Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005842 biochemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- HQPMKSGTIOYHJT-UHFFFAOYSA-N ethane-1,2-diol;propane-1,2-diol Chemical compound OCCO.CC(O)CO HQPMKSGTIOYHJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-N ethanesulfonic acid Chemical compound CCS(O)(=O)=O CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000852 hydrogen donor Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000004682 monohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 description 1
- 229920001992 poloxamer 407 Polymers 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920002503 polyoxyethylene-polyoxypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- HDARHUHTZKLJET-UHFFFAOYSA-M sodium;3-(n-ethyl-3,5-dimethoxyanilino)-2-hydroxypropane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].[O-]S(=O)(=O)CC(O)CN(CC)C1=CC(OC)=CC(OC)=C1 HDARHUHTZKLJET-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ZPCAZHPYLUKSMY-UHFFFAOYSA-M sodium;3-(n-ethyl-3-methylanilino)-2-hydroxypropane-1-sulfonate;dihydrate Chemical compound O.O.[Na+].[O-]S(=O)(=O)CC(O)CN(CC)C1=CC=CC(C)=C1 ZPCAZHPYLUKSMY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/92—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving lipids, e.g. cholesterol, lipoproteins, or their receptors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C43/00—Ethers; Compounds having groups, groups or groups
- C07C43/02—Ethers
- C07C43/20—Ethers having an ether-oxygen atom bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C43/00—Ethers; Compounds having groups, groups or groups
- C07C43/02—Ethers
- C07C43/20—Ethers having an ether-oxygen atom bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring
- C07C43/215—Ethers having an ether-oxygen atom bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring having unsaturation outside the six-membered aromatic rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/60—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving cholesterol
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2405/00—Assays, e.g. immunoassays or enzyme assays, involving lipids
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
本発明は、高密度リポタンパク質３（以下、「ＨＤＬ３」と呼ぶことがある）中のコレステロール（ＨＤＬ３中のコレステロールを以下、「ＨＤＬ３コレステロール」または「ＨＤＬ３−Ｃ」と呼ぶことがある）の定量方法及び定量試薬に関する。
高密度リポ蛋白（ＨＤＬ）コレステロールは動脈硬化壁を含めた各組織からコレステロールを受け取るため細胞内に蓄積したコレステロールの除去作用に関係し、そのためコレステロール逆転送系ともいわれている。冠動脈硬化などの動脈硬化疾患と負の相関があることが知られており、ＨＤＬが低値であることは脂質異常症の一つとして低値限界が設けられており、動脈硬化の指標として有用であることが知られている。
ＨＤＬはアポタンパク質とリン脂質、コレステロール、中性脂肪から構成されている。ＨＤＬは比重がｄ＝１．０６３〜１．２１０であり、さらにｄ＝１．０６３〜１．１２５であるＨＤＬ２とｄ＝１．１２５〜１．２１０であるＨＤＬ３の２つの分画に分類される。リポ蛋白の分布曲線によりｄ＝１．１２５部分にノッチが認められ、ここから比重の重い部分をＨＤＬ３とされる。また、ＨＤＬ中のアポタンパク質のうちアポリポ蛋白Ｅ含有量差から、アポＥの含有量の多いＨＤＬをアポＥ−ｒｉｃｈ ＨＤＬとする亜分画の分け方も存在する。
従来までのＨＤＬ蛋白全体だけではなく、ＨＤＬ２およびＨＤＬ３それぞれの亜分画において異なった働きを示すことが知られている。臨床において、ＣＥＴＰ欠損によりＨＤＬがＬＤＬやＩＤＬに代謝されず、ＨＤＬコレステロール量が増加することが知られている。ＣＥＴＰ欠損により増加したＨＤＬはＨＤＬ２である。ＨＤＬ２には抗動脈硬化作用があると言われている。また、ＣＥＴＰ欠損によりアポＥ−ｒｉｃｈ ＨＤＬが上昇するとも言われており、アポＥ−ｒｉｃｈ ＨＤＬはコレステロール引き抜き能が強く抗血小板作用があり、ＨＤＬの中でもより善玉であるとも言われている。また、レシチンコレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＬＣＡＴ）活性の低下によりＨＤＬ３がＨＤＬ２に変化せず、ＨＤＬ３が増加する。ＨＤＬ３の増加による冠動脈疾患の発症率の増加が示唆されている。これらの傾向からＨＤＬ亜分画それぞれを測定することは、動脈硬化疾患の有無や原因を判断する助けとなることが予想される。また、現在、これらＨＤＬ亜分画の働きを踏まえ、ＣＥＴＰの働きを阻害し、ＬＤＬコレステロール量を減少させ、ＨＤＬコレステロール量を増加させる治療薬の開発が各メーカーで進められている。
ＨＤＬ亜分画の簡便な測定方法を確立することは詳細な働きの解明や、これらの治療の効果へと繋がる可能性がある。
現在までにＨＤＬ亜分画の測定法として知られているものとしては、超遠心法、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）法、ＨＤＬ３沈殿法（特許文献１）、ＮＭＲ法、などが知られている。
超遠心は遠心によりリポ蛋白の比重の差を利用して画分する方法であり、作業に熟練が必要なこと、日数がかかること、また費用も高額となる欠点がある。岡崎らによるＨＰＬＣを用いたＨＤＬ２とＨＤＬ３とを分ける方法では、作業に時間を要し、特別な機器が必要である。ＨＤＬ３沈殿法は２価金属イオンおよびデキストラン硫酸を含む試薬によりＨＤＬ３以外を凝集させ、遠心により上清部分のＨＤＬ３を回収し自動分析装置で測定する方法である。やはり、作業に熟練が必要であること、また用手法であり検体の前処理操作が必要であることもあり、測定までにある程度の時間がかかるといった欠点があり、汎用的ではなかった。また、ＮＭＲ法は磁気共鳴によりリポ蛋白の粒子数を計測する方法であるが、特殊な機械が必要であり、一般的ではない。
なお、ＨＤＬ亜画分の分析方法（特許文献２）が存在する。汎用自動分析装置により測定が可能であるが、界面活性剤を使用することによりＨＤＬ３以外のリポ蛋白を酵素の作用から阻害する方法を用いており、ＨＤＬ３反応中において、目的以外のリポ蛋白質が存在していることなり、測定への影響、もしくは、阻害しきれなかった場合は、ＨＤＬ３以外のリポ蛋白を測りこむ恐れがある。
このような方法に変わり、簡便でかつコレステロール量をより選択的に定量できる試薬の発明が必要とされている。
本発明の目的は、煩雑な操作を必要とすることなく、被検試料中のＨＤＬ３を定量する方法及び試薬を提供することである。
本願発明者らは、鋭意研究の結果、ＨＤＬ３と特異的に反応する界面活性剤を見出した。そして、被検試料にこのような界面活性剤を反応させ、コレステロールを定量することにより被検試料中のＨＤＬ３コレステロールが定量可能であることに想到し、これが可能であることを実験的に確認して本発明を完成した。
すなわち、本発明は、被検試料に、ＨＤＬ又はＨＤＬ３以外のリポタンパク質中のコレステロールを反応系外に移行させる前工程を行い、該前工程後の被検試料に高密度リポタンパク質３と特異的に反応する２種以上の界面活性剤を反応させて、高密度リポタンパク質３中のコレステロールを定量する方法であって、該界面活性剤の少なくとも１種がポリオキシエチレン多環フェニルエーテルから成る群より選ばれる少なくとも１種であり、かつ、２種以上の界面活性剤全体のＨＬＢが１３．８〜１４．０になるように２種以上の界面活性剤を組み合わせる、高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法を提供する。また、本発明は、上記本発明の定量方法において使用する、高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量試薬であって、該高密度リポタンパク質３と特異的に反応する２種以上の界面活性剤を含み、該界面活性剤の少なくとも１種がポリオキシエチレン多環フェニルエーテルから成る群より選ばれる少なくとも１種であり、かつ、２種以上の界面活性剤全体のＨＬＢが１３．８〜１４．０になるように２種以上の界面活性剤を組み合わせた、高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量試薬を提供する。
本発明により、被検試料中のＨＤＬ３コレステロールを、超遠心や前処理といった煩雑な作業を必要とせずに自動分析装置で特異的に定量することが可能となった。また、従来技術である被検体中ＨＤＬ総コレステロール定量法により得られた総ＨＤＬコレステロール量よりＨＤＬ３コレステロール量の差を算出することによりＨＤＬ２コレステロール量を定量することも可能となった。
本発明の方法に供される被検試料としては、その試料中のＨＤＬ３コレステロールを定量しようとするものであれば特に限定されないが、好ましくは、血清若しくは血漿又はこれらの希釈物であり、特に血清又はその希釈物が好ましい。
本発明中において界面活性剤に対して「反応する」という言葉を用いる場合は、界面活性剤がリポ蛋白質に対して、反応系外に導くために酵素が作用しやすくする、もしくはリポ蛋白に対して酵素が作用できないよう保護することを意味する。
本発明の方法では、被検試料にＨＤＬ３と特異的に反応する（ＨＤＬ３以外のリポタンパク質とはほとんど反応しない）２種以上の界面活性剤を反応させる。ＨＤＬ３と特異的に反応する界面活性剤としては、ポリオキシエチレン多環フェニルエーテルから成る少なくとも１種である。ポリオキシエチレン多環フェニルエーテルの内、ポリオキシエチレンスチレン化フェニルエーテルが好ましく、さらにはポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテルがより好ましい。
より具体的には、ポリオキシエチレン多環フェニルエーテルとしてはＮｅｗｃｏｌ−６１０（商品名、日本乳化剤社製、以下、会社名は製造会社であり、会社名が併記されているものは全て商品名である）、Ｎｅｗｃｏｌ−７１０（日本乳化剤）、アデカトールＰＣ−１０（アデカ）、アデカトールＰＣ−１３（アデカ）、アデカトールＳＰ−１２（アデカ）、ポリオキシエチレン多環フェニルエーテルの内、ポリオキシエチレンスチレン化フェニルエーテルとしてはエマルゲンＡ６０（花王）、エマルゲンＡ９０（花王）、ブラウノンＤＳＰ−１２．５（青木油脂）、ブラウノンＴＳＰ−１６（青木油脂）、ノイゲンＥＡ−１３７（第一工業製薬）、ノイゲンＥＡ−１５７（第一工業製薬）、ノイゲンＥＡ−１６７（第一工業製薬）が挙げられる。これらのうち、エマルゲンＡ６０（花王）、エマルゲンＡ９０（花王）、Ｎｅｗｃｏｌ−７１０（日本乳化剤）はポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテルに分類される。これらの界面活性剤は、単独で用いることもできるし、２種以上を組み合わせて用いることもできる。
ＨＤＬ３と特異的に反応する界面活性剤のＨＬＢは１２．５〜１５が好ましく、さらには１３．５〜１４．５がより好ましい。１種の界面活性剤でＨＬＢが１２．５〜１５でも、ＨＬＢが１２．５〜１５でないものを含めて２種以上を界面活性剤全体のＨＬＢが１２．５〜１５に入るように組み合わせてもよい。
ＨＤＬ３と特異的に反応する界面活性剤の濃度は終濃度で０．０２５〜５.０％（ｗ／ｖ）が好ましく、さらには０．２５〜２．５％（ｗ／ｖ）が好ましい。
本発明の方法においては、上記界面活性剤の反応によりコレステロールを定量する。コレステロールの定量方法自体は周知であり、周知のいずれの方法をも採用することができ、下記実施例にも具体的に記載されている。例えば、リポ蛋白中のエステル型コレステロールにコレステロールエステラーゼを用いて加水分解し、遊離型コレステロールと脂肪酸が生じ、生じた遊離型コレステロールと元来リポ蛋白中に存在する遊離コレステロールとをコレステロールオキシダーゼを用いてコレステノンと過酸化水素を発生させ、これをペルオキシダーゼの存在下でキノン色素を形成させ定量する。キノン色素を発生させる化合物として、例えばＨＤＡＯＳ（Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニリン）、ＤＡＯＳ（Ｎ−エチル−Ｎ−（−２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニリンナトリウム）又はＴＯＯＳ（Ｎ−エチル−Ｎ（−２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３−メチルアニリンナトリウム二水和物）と４−アミノアンチピリンが挙げられるが、キノン色素を発生させることができる組み合わせであればこれらに限定されるものではない。後述する前工程でコレステロールエステラーゼ及びコレステロールオキシダーゼを用いる場合には、本発明の工程（ＨＤＬ３特異的界面活性剤を反応させる工程）では、前工程で用いたコレステロールエステラーゼ及びコレステロールオキシダーゼをそのまま用いることができ、新たに添加する必要はない。
キノン色素を発生させる化合物の濃度は、例えば、ＴＯＯＳであれば濃度は０．５〜３．０ｍｍｏｌ／Ｌ程度が好ましく、４−アミノアンチピリンであれば０．１〜８．０ｍｍｏｌ／Ｌが好ましく、また、ペルオキシダーゼの濃度は０．４〜４０．０Ｕ／ｍＬが好ましい。
反応液には通常の生化学反応に用いられる各種の緩衝液を使用することができ、ｐＨが５〜８の間であるのが好ましい。溶液としては、グッド、トリス、リン酸、グリシンの緩衝溶液が好ましく、グッド緩衝液であるビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシエチル）メタン（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）、ピペラジン−１、４−ビス（２−エタンスルフォン酸）（ＰＩＰＥＳ）、ピペラジン−１、４−ビス（２−エタンスルフォン酸）、１．５ナトリウム塩、一水和物（ＰＩＰＥＳ１．５Ｎａ）、２−ヒドロキシ−３−モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、Ｎ、Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルフォン酸（ＢＥＳ）、２−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル］エタンスルフォン酸（ＨＥＰＥＳ）およびピペラジン−１、４−ビス（２−ヒドロキシー３−プロパンスルフォン酸）（ＰＯＰＳＯ）が好ましい。
反応温度は２５〜４０℃程度が好ましく、さらに３５〜３８℃が好ましく、３７℃が最も好ましい。反応時間は特に限定されず、通常、２〜１０分程度である。
本発明の方法は、被検試料に上記界面活性剤をそのまま反応させて行うことも可能であるが、ＨＤＬ又はＨＤＬ３中のコレステロール以外のコレステロールを反応系外に移行させる前工程を先に行い、この前工程後の試料に対して上記した本発明の方法を行うとＨＤＬ３コレステロールをより正確に定量することができるので好ましい。
前記前工程は、ＨＤＬ以外のリポタンパク質と反応する界面活性剤又はＨＤＬ３以外のリポタンパク質と反応する界面活性剤の存在下で行うことが好ましい。
ＨＤＬ以外又はＨＤＬ３以外のリポタンパク質に反応する界面活性剤としては、ポリオキシエチレンソルビタン誘導体、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン縮合物、ポリオキシエチレンステアリルアミン等の非イオン界面活性剤；アミドエーテルサルフェート、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム等の陰イオン界面活性剤；ヤシ油脂肪酸−アミドプロピルジメチル−アミノ酢酸ベタイン、アルキルジメチル−アミノ酢酸ベタイン、ラウリルベタイン等の両性界面活性剤；並びにラウリルトリメチルアンモニウムクロライドのような陽イオン界面活性剤を挙げることができるがこれらに限定されるものではない。
より具体的には、ＨＤＬ以外又はＨＤＬ３以外のリポタンパク質に反応する界面活性剤の例として、非イオン界面活性剤としては、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレートであるノニオンＯＴ−２２１（日油）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン縮合物であるプルロニックＦ６８（アデカ）、プルロニックＦ８８（アデカ）、プルロニックＦ１２７（アデカ）、プルロニックＰ１０３（アデカ）、プルロニックＰ１２３（アデカ）、ポリオキシエチレンステアリルアミンであるナイミーンＳ２１０（日油）、エマルゲンＡ５００（花王）；陰イオンとしてはアミドエーテルサルフェートであるサンアミドＣＦ−１０（日油）、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウムであるレベノールＷＸ（花王）；両性界面活性剤としてはヤシ油脂肪酸−アミドプロピルジメチル−アミノ酢酸ベタインであるニッサンアノンＢＤＦ−ＳＦ（日油）、アルキルジメチル−アミノ酢酸ベタインであるニッサンアノンＢＦ（日油）、ラウリルベタインであるアンヒトール２４Ｂ（花王）；陽イオン界面活性剤としては、ラウリルトリメチルアンモニウムクロライドであるコータミン２４Ｐ（花王）、が挙げられる。これらの界面活性剤は単独で用いることもできるし、２種以上のものを組み合わせて用いることもできる。
前工程で用いる界面活性剤の濃度は、０．０１〜５.０％（ｗ／ｖ）が好ましく、０．０３〜３．０％（ｗ／ｖ）程度がより好ましい。
前工程では、界面活性剤の反応を受けてコレステロールを反応系外に移行させる。ここで、「反応系外に移行させる」とは、コレステロール及びそのエステルを消去又は保護することにより、その後の工程において、コレステロール及びそのエステルが関与しないようにすることを意味する。
ここで、「消去」とは、被検試料中のリポ蛋白のコレステロールを分解し、その後の工程において、コレステロール測定の反応に作用させないようにすることである。リポ蛋白コレステロールを消去するための方法としては、コレステロールエステラーゼ及びコレステロールオキシダーゼを作用させ発生した過酸化水素を、カタラーゼを用いて水と酸素に分解する方法が挙げられる。また、ペルオキシダーゼを用いて水素供与体と発生した過酸化水素を反応させ無色キノンに転化してもよいが、これらに限定されるものではない。コレステロールの消去の方法自体はこの分野において周知であり、下記実施例にも具体的に記載されている。
「保護」とは、被検試料中のリポ蛋白をその後の工程においてコレステロール測定に反応しないように、保護を行うことである。リポ蛋白を保護するのには、各リポ蛋白をコレステロールエステラーゼ及びコレステロールオキシダーゼが作用しないように特異的に保護する界面活性剤を用いる方法が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
前工程で発生した過酸化水素をカタラーゼで分解する前工程を用いる場合は、カタラーゼの阻害剤であるアジ化ナトリウムを使用し、第２工程の反応液中へ添加する。この場合のアジ化ナトリウムの濃度は、通常、０．１ｇ／Ｌ〜１．０ｇ／Ｌ程度である。
本願発明者らは、さらに、ホスフォリパーゼ及び／又はスフィンゴミエリナーゼがリポタンパク質に作用するが、ＨＤＬ３にはほとんど作用しないことを見出した。従って、上記した界面活性剤に加え、ホスフォリパーゼ及び／又はスフィンゴミエリナーゼ（以下、両者を総称して「ホスフォリパーゼ等」と呼ぶことがある）を共存させることにより、ＨＤＬ３コレステロールをさらに正確に定量できるので好ましい。
ホスフォリパーゼとしては、少なくともホスファチジルコリンに作用するものであればよく、ホスフォリパーゼＡ、ホスフォリパーゼＣ及びホスフォリパーゼＤが好ましく、特にホスフォリパーゼＣ及びホスフォリパーゼＤが好ましい。スフィンゴミエリナーゼとしては、少なくともスフィンゴミエリンに作用するものであればよい。ホスフォリパーゼ等は市販されているので、市販品を好ましく用いることができる。ホスフォリパーゼ等は単独で用いることもできるし、２種以上のものを組み合わせて用いることもできる。
ホスフォリパーゼ等の終濃度（２種類以上のものが用いられる場合にはその合計濃度、以下同じ）は０．１〜１００Ｕ／ｍＬ程度が好ましく、０．２〜５０Ｕ／ｍＬ程度がより好ましい。
なお、前工程に界面活性剤を共存させる場合でも、反応条件（反応温度、時間、緩衝液等）は上記の通りである。
前工程は、コレステロールを反応系外に移行させるための酵素系や界面活性剤を同時に添加しておくことにより、酵素による反応工程及び界面活性剤による反応工程を単一の工程として同時に行うこともできる。なお、第１工程と第２工程では異なる界面活性剤を用いる。
前工程において、コレステロールエステラーゼ及びコレステロールオキシダーゼを用いる場合、コレステロールエステラーゼの濃度は０．１〜１０．０Ｕ／ｍＬ程度が好ましく、０．２〜３．０Ｕ／ｍＬ程度がより好ましい。コレステロールオキシダーゼの濃度は０．０５〜１０．０Ｕ／ｍＬ程度が好ましく、０．１〜１．０Ｕ／ｍＬ程度がより好ましい。なお、コレステロールエステラーゼは、エステル型コレステロールに作用するものであれば、特に制限されるものではなく、例えば、旭化成社製のコレステロールエステラーゼ（ＣＥＢＰ）や東洋紡社製のコレステロールエステラーゼ（ＣＯＥ−３１１、ＣＯＥ−３１２）などの市販品を用いることができる。また、コレステロールオキシダーゼは、遊離型コレステロールに作用するものであれば、特に制限されるものではなく、例えば、旭化成社製のコレステロールオキシダーゼ（ＣＯＮＩＩ）や東洋紡社製のコレステロールオキシダーゼ（ＣＯＯ−３１１、ＣＯＯ−３２１、ＣＯＯ−３３１）などの市販品を用いることができる。
前工程において、ペルオキシダーゼを用いる場合、ペルオキシダーゼの濃度は２．０〜５．０Ｕ／ｍＬ程度が好ましく、さらに３．０〜４．０Ｕ/ｍL程度が好ましい。また、無色キノンに転化する化合物を用いる場合、その濃度は０．４〜０．８ｍｍｏｌ／Ｌ程度が好ましい。
前工程の他の条件（反応温度、反応時間、緩衝液等）は、上記した本発明の方法と同様であってよい。
以下、本発明を実施例に基づきより具体的に説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定されるものではない。
参考例１
ＨＤＬ２分画とＨＤＬ３分画は、以下の様にして画分した。ＨＤＬを含む被検試料、すなわち、血清に塩化ナトリウム及び臭化ナトリウムを用いた溶液を用いて、超遠心によりＨＤＬ２とＨＤＬ３との境目の比重（１．１２５）で別れるように画分し、それぞれの画分を回収した。
ＨＤＬ２分画とＨＤＬ３分画は、以下の様にして画分した。ＨＤＬを含む被検試料、すなわち、血清に塩化ナトリウム及び臭化ナトリウムを用いた溶液を用いて、超遠心によりＨＤＬ２とＨＤＬ３との境目の比重（１．１２５）で別れるように画分し、それぞれの画分を回収した。
超遠心を用いてＣＭ〜ＶＬＤＬ分画、ＬＤＬ分画、ＨＤＬ２分画、ＨＤＬ３分画を画分し、下記試薬Ａを反応させ、さらに、下記試薬Ｂを添加し、測定を行った。測定は、各分画２μＬに試薬Ａを１５０μＬ添加し、５分加温反応の後、試薬Ｂを５０μＬ添加しさらに５分加温反応させ、主波長６００ｎｍ、副波長７００ｎｍの吸光度を測定した。
試薬Ａ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ６．６） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
ＴＯＯＳ １．５ｍｍｏｌ／Ｌ
プルロニックＦ８８ ０．０５ｗ／ｖ％
カタラーゼ ６００Ｕ／ｍＬ
コレステロールオキシダーゼ ０．８Ｕ／ｍＬ
コレステロールエステラーゼ ２．０Ｕ／ｍＬ
スフィンゴミエリナーゼ ０．５Ｕ／ｍＬ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ６．６） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
ＴＯＯＳ １．５ｍｍｏｌ／Ｌ
プルロニックＦ８８ ０．０５ｗ／ｖ％
カタラーゼ ６００Ｕ／ｍＬ
コレステロールオキシダーゼ ０．８Ｕ／ｍＬ
コレステロールエステラーゼ ２．０Ｕ／ｍＬ
スフィンゴミエリナーゼ ０．５Ｕ／ｍＬ
試薬Ｂ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ７．０） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
アジ化ナトリウム ０．１％
各種界面活性剤※ ２．０ｗ／ｖ％
４−アミノアンチピリン ４．０ｍｍｏｌ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ３．５Ｕ／ｍＬ
※２種類以上を組み合わせている場合は合わせて２．０ｗ／ｖ％
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ７．０） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
アジ化ナトリウム ０．１％
各種界面活性剤※ ２．０ｗ／ｖ％
４−アミノアンチピリン ４．０ｍｍｏｌ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ３．５Ｕ／ｍＬ
※２種類以上を組み合わせている場合は合わせて２．０ｗ／ｖ％
試薬Ｂが添加されてから、単位時間経過後の各分画における吸光度変化量を表１に示す。ＨＤＬ３に対して特異的に反応することが確認できる。
参考例２
超遠心を用いてＣＭ〜ＶＬＤＬ分画、ＬＤＬ分画、ＨＤＬ２分画、ＨＤＬ３分画を画分し、下記試薬Ｃを反応させ、さらに、下記試薬Ｄを添加し、測定を行った。測定は、各分画２μＬに試薬Ｃを１５０μＬ添加し、５分加温反応の後、試薬Ｄを５０μＬ添加しさらに５分加温反応させ、主波長６００ｎｍ、副波長７００ｎｍの吸光度を測定した。
超遠心を用いてＣＭ〜ＶＬＤＬ分画、ＬＤＬ分画、ＨＤＬ２分画、ＨＤＬ３分画を画分し、下記試薬Ｃを反応させ、さらに、下記試薬Ｄを添加し、測定を行った。測定は、各分画２μＬに試薬Ｃを１５０μＬ添加し、５分加温反応の後、試薬Ｄを５０μＬ添加しさらに５分加温反応させ、主波長６００ｎｍ、副波長７００ｎｍの吸光度を測定した。
試薬Ｃ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ６．６） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
ＨＤＡＯＳ ０．５６ｍｍｏｌ／Ｌ
ノニオンＯＴ−２２１ ０．０１ｗ／ｖ％
カタラーゼ ６００Ｕ／ｍＬ
コレステロールオキシダーゼ ０．８Ｕ／ｍＬ
コレステロールエステラーゼ ２．８Ｕ／ｍＬ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ６．６） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
ＨＤＡＯＳ ０．５６ｍｍｏｌ／Ｌ
ノニオンＯＴ−２２１ ０．０１ｗ／ｖ％
カタラーゼ ６００Ｕ／ｍＬ
コレステロールオキシダーゼ ０．８Ｕ／ｍＬ
コレステロールエステラーゼ ２．８Ｕ／ｍＬ
試薬Ｄ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ７．０） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
アジ化ナトリウム ０．１％
ポリオキシエチレン多環フェニルエーテル（ＨＬＢ：１３．８） ２．０ｗ／ｖ％
４−アミノアンチピリン ４．０ｍｍｏｌ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ３．５Ｕ／ｍＬ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ７．０） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
アジ化ナトリウム ０．１％
ポリオキシエチレン多環フェニルエーテル（ＨＬＢ：１３．８） ２．０ｗ／ｖ％
４−アミノアンチピリン ４．０ｍｍｏｌ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ３．５Ｕ／ｍＬ
試薬Ｄが添加されてから、単位時間経過後の各分画における吸光度変化量を表２に示す。ＨＤＬ３に対して特異的に反応することが確認できる。
実施例３
超遠心を用いてＣＭ〜ＶＬＤＬ分画、ＬＤＬ分画、ＨＤＬ２分画、ＨＤＬ３分画を画分し、下記試薬Ｅを反応させ、さらに、下記試薬Ｆを添加し、測定を行った。測定は、各分画２μＬに試薬Ｅを１５０μＬ添加し、５分加温反応の後、試薬Ｆを５０μＬ添加しさらに５分加温反応させ、主波長６００ｎｍ、副波長７００ｎｍの吸光度を測定した。
超遠心を用いてＣＭ〜ＶＬＤＬ分画、ＬＤＬ分画、ＨＤＬ２分画、ＨＤＬ３分画を画分し、下記試薬Ｅを反応させ、さらに、下記試薬Ｆを添加し、測定を行った。測定は、各分画２μＬに試薬Ｅを１５０μＬ添加し、５分加温反応の後、試薬Ｆを５０μＬ添加しさらに５分加温反応させ、主波長６００ｎｍ、副波長７００ｎｍの吸光度を測定した。
試薬Ｅ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ６．６） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
ＴＯＯＳ １．５ｍｍｏｌ／Ｌ
プルロニックＦ８８ ０．０５ｗ／ｖ％
カタラーゼ １２００Ｕ／ｍＬ
コレステロールオキシダーゼ ０．３Ｕ／ｍＬ
コレステロールエステラーゼ ２．０Ｕ／ｍＬ
スフィンゴミエリナーゼ ０．５Ｕ／ｍＬ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ６．６） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
ＴＯＯＳ １．５ｍｍｏｌ／Ｌ
プルロニックＦ８８ ０．０５ｗ／ｖ％
カタラーゼ １２００Ｕ／ｍＬ
コレステロールオキシダーゼ ０．３Ｕ／ｍＬ
コレステロールエステラーゼ ２．０Ｕ／ｍＬ
スフィンゴミエリナーゼ ０．５Ｕ／ｍＬ
試薬Ｆ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ７．０） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
アジ化ナトリウム ０．１％
各種界面活性剤※ ２．０ｗ／ｖ％
４−アミノアンチピリン ４．０ｍｍｏｌ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ３０Ｕ／ｍＬ
※２種類以上を組み合わせている場合は合わせて２．０ｗ／ｖ％
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ７．０） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
アジ化ナトリウム ０．１％
各種界面活性剤※ ２．０ｗ／ｖ％
４−アミノアンチピリン ４．０ｍｍｏｌ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ３０Ｕ／ｍＬ
※２種類以上を組み合わせている場合は合わせて２．０ｗ／ｖ％
試薬Ｆが添加されてから、単位時間経過後の各分画における吸光度変化量を表３に、ＨＤＬ３／ＨＤＬ２反応比を図１に示す。ポリオキシエチレンスチレン化フェニルエーテルを包含するポリオキシエチレン多環フェニルエーテルの、ＨＬＢが１２〜１５、特に１３．５〜１４．５でＨＤＬ３／ＨＤＬ２反応比が高いことが分かる。
参考例４
超遠心を用いてＣＭ〜ＶＬＤＬ分画、ＬＤＬ分画、ＨＤＬ２分画、ＨＤＬ３分画を画分し、上記試薬Ｅを反応させ、さらに、下記試薬Ｇを添加し、測定を行った。測定は、各分画２μＬに試薬Ｅを１５０μＬ添加し、５分加温反応の後、試薬Ｇを５０μＬ添加しさらに５分加温反応させ、主波長６００ｎｍ、副波長７００ｎｍの吸光度を測定した。
超遠心を用いてＣＭ〜ＶＬＤＬ分画、ＬＤＬ分画、ＨＤＬ２分画、ＨＤＬ３分画を画分し、上記試薬Ｅを反応させ、さらに、下記試薬Ｇを添加し、測定を行った。測定は、各分画２μＬに試薬Ｅを１５０μＬ添加し、５分加温反応の後、試薬Ｇを５０μＬ添加しさらに５分加温反応させ、主波長６００ｎｍ、副波長７００ｎｍの吸光度を測定した。
試薬Ｇ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ７．０） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
アジ化ナトリウム ０．１％
界面活性剤※ ０．０１〜２０．０ｗ／ｖ％（終濃度０．００２５〜５．０ｗ／ｖ％）
４−アミノアンチピリン ４．０ｍｍｏｌ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ３０Ｕ／ｍＬ
※２種類以上を組み合わせている場合は合計の濃度
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ７．０） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
アジ化ナトリウム ０．１％
界面活性剤※ ０．０１〜２０．０ｗ／ｖ％（終濃度０．００２５〜５．０ｗ／ｖ％）
４−アミノアンチピリン ４．０ｍｍｏｌ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ３０Ｕ／ｍＬ
※２種類以上を組み合わせている場合は合計の濃度
試薬Ｇが添加されてから、単位時間経過後の各分画における吸光度変化量を表４に示す。ポリオキシエチレンスチレン化フェニルエーテルを含むポリオキシエチレン多環フェニルエーテルの終濃度が０．０２５〜５．０ｗ／ｖ％、特に０．２５〜２．５ｗ／ｖ％でＨＤＬ３が特異的に反応していることがわかる。
参考例５
ヒト血清試料に、上記試薬Ａを反応させ、さらに、下記試薬Ｈを添加し、測定を行った。測定は、血清２μＬに試薬Ａを１５０μＬ添加し、５分加温反応の後、試薬Ｈを５０μＬ添加しさらに単位時間加温反応させ、主波長６００ｎｍ、副波長７００ｎｍの吸光度を測定してＨＤＬ３コレステロールとし、また、別に測定した総ＨＤＬコレステロールをもとに計算によりＨＤＬ２コレステロールを求めた。
ヒト血清試料に、上記試薬Ａを反応させ、さらに、下記試薬Ｈを添加し、測定を行った。測定は、血清２μＬに試薬Ａを１５０μＬ添加し、５分加温反応の後、試薬Ｈを５０μＬ添加しさらに単位時間加温反応させ、主波長６００ｎｍ、副波長７００ｎｍの吸光度を測定してＨＤＬ３コレステロールとし、また、別に測定した総ＨＤＬコレステロールをもとに計算によりＨＤＬ２コレステロールを求めた。
試薬Ｈ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ７．０） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
アジ化ナトリウム ０．１％
ポリオキシエチレン多環フェニルエーテル（ＨＬＢ：１３．６） ２．０ｗ／ｖ％
４−アミノアンチピリン ４．０ｍｍｏｌ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ３．５Ｕ／ｍＬ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ７．０） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
アジ化ナトリウム ０．１％
ポリオキシエチレン多環フェニルエーテル（ＨＬＢ：１３．６） ２．０ｗ／ｖ％
４−アミノアンチピリン ４．０ｍｍｏｌ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ３．５Ｕ／ｍＬ
試薬Ａと試薬Ｈで求めたＨＤＬ３コレステロールと、沈殿法（特許文献１）で求めたＨＤＬ３コレステロールとの相関を図２に、試薬Ａと試薬Ｈで求めたＨＤＬ３コレステロールと総ＨＤＬコレステロールから計算により求めたＨＤＬ２コレステロールと、沈殿法で求めたＨＤＬ３コレステロールと総ＨＤＬコレステロールから計算により求めたＨＤＬ２コレステロールとの相関を図３に示す。ＨＤＬ３でも、ＨＤＬ２でも、本発明と沈殿法に強い相関関係があることが確認できる。
参考例６
ヒト血清試料に、下記試薬Ｉを反応させ、さらに、上記試薬Ｈを添加し、測定を行った。測定は、血清２μＬに試薬Ｉを１５０μＬ添加し、５分加温反応の後、試薬Ｅを５０μＬ添加しさらに単位時間加温反応させ、主波長６００ｎｍ、副波長７００ｎｍの吸光度を測定してＨＤＬ３コレステロールとし、また、別に測定した総ＨＤＬコレステロールをもとに計算によりＨＤＬ２コレステロールを求めた。
ヒト血清試料に、下記試薬Ｉを反応させ、さらに、上記試薬Ｈを添加し、測定を行った。測定は、血清２μＬに試薬Ｉを１５０μＬ添加し、５分加温反応の後、試薬Ｅを５０μＬ添加しさらに単位時間加温反応させ、主波長６００ｎｍ、副波長７００ｎｍの吸光度を測定してＨＤＬ３コレステロールとし、また、別に測定した総ＨＤＬコレステロールをもとに計算によりＨＤＬ２コレステロールを求めた。
試薬Ｉ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ６．６） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
ＨＤＡＯＳ ０．５６ｍｍｏｌ／Ｌ
ノニオンＯＴ−２２１ ０．０１ｗ／ｖ％
カタラーゼ ６００Ｕ／ｍＬ
コレステロールオキシダーゼ ０．８Ｕ／ｍＬ
コレステロールエステラーゼ ２．０Ｕ／ｍＬ
スフィンゴミエリナーゼ ０．５Ｕ／ｍＬ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ６．６） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
ＨＤＡＯＳ ０．５６ｍｍｏｌ／Ｌ
ノニオンＯＴ−２２１ ０．０１ｗ／ｖ％
カタラーゼ ６００Ｕ／ｍＬ
コレステロールオキシダーゼ ０．８Ｕ／ｍＬ
コレステロールエステラーゼ ２．０Ｕ／ｍＬ
スフィンゴミエリナーゼ ０．５Ｕ／ｍＬ
試薬Ｉと試薬Ｈで求めたＨＤＬ３コレステロールと、超遠心法で求めたＨＤＬ３コレステロールとの相関を図４に、試薬Ｉと試薬Ｈで求めたＨＤＬ３コレステロールと総ＨＤＬコレステロールから計算により求めたＨＤＬ２コレステロールと、超遠心法で求めたＨＤＬ２コレステロールとの相関を図５に示す。ＨＤＬ３でも、ＨＤＬ２でも、本発明と超遠心法に強い相関関係があることが確認できる。
Claims (6)
- 被検試料に、ＨＤＬ又はＨＤＬ３以外のリポタンパク質中のコレステロールを反応系外に移行させる前工程を行い、該前工程後の被検試料に高密度リポタンパク質３と特異的に反応する２種以上の界面活性剤を反応させて高密度リポタンパク質３中のコレステロールを定量する方法であって、該界面活性剤の少なくとも１種がポリオキシエチレン多環フェニルエーテルから成る群より選ばれる少なくとも１種であり、かつ、２種以上の界面活性剤全体のＨＬＢが１３．８〜１４．０になるように２種以上の界面活性剤を組み合わせる、高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法。
- 前記ポリオキシエチレン多環フェニルエーテルがポリオキシエチレンスチレン化フェニルエーテルから成る群より選ばれる少なくとも１種である請求項１記載の方法。
- 前記ポリオキシエチレンスチレン化フェニルエーテルがポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテルからなる群より選ばれる少なくとも１種である請求項２記載の方法。
- 請求項１に記載の定量方法において使用する、高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量試薬であって、該高密度リポタンパク質３と特異的に反応する２種以上の界面活性剤を含み、該界面活性剤の少なくとも１種がポリオキシエチレン多環フェニルエーテルから成る群より選ばれる少なくとも１種であり、かつ、２種以上の界面活性剤全体のＨＬＢが１３．８〜１４．０になるように２種以上の界面活性剤を組み合わせた、高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量試薬。
- 前記ポリオキシエチレン多環フェニルエーテルがポリオキシエチレンスチレン化フェニルエーテルから成る群より選ばれる少なくとも１種である請求項４記載の試薬。
- 前記ポリオキシエチレンスチレン化フェニルエーテルがポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテルからなる群より選ばれる少なくとも１種である請求項５記載の試薬。
Priority Applications (9)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2013153294A JP6182008B2 (ja) | 2013-07-24 | 2013-07-24 | 高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法及び定量試薬 |
| PCT/JP2014/069513 WO2015012334A1 (ja) | 2013-07-24 | 2014-07-24 | 高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法及び定量試薬 |
| KR1020167001896A KR20160030194A (ko) | 2013-07-24 | 2014-07-24 | 고밀도 리포단백질3 중의 콜레스테롤의 정량 방법 및 정량 시약 |
| US14/906,589 US11041869B2 (en) | 2013-07-24 | 2014-07-24 | Method and reagent for quantifying cholesterol in high density lipoprotein 3 |
| TW103125258A TWI627282B (zh) | 2013-07-24 | 2014-07-24 | 高密度脂蛋白３中之膽固醇的定量方法及定量試藥 |
| CN201480041686.7A CN105555963A (zh) | 2013-07-24 | 2014-07-24 | 高密度脂蛋白3中的胆固醇的定量方法和定量试剂 |
| EP14829002.6A EP3026120B1 (en) | 2013-07-24 | 2014-07-24 | Method and reagent for quantifying cholesterol in high density lipoprotein 3 |
| KR1020217005033A KR102336254B1 (ko) | 2013-07-24 | 2014-07-24 | 고밀도 리포단백질3 중의 콜레스테롤의 정량 방법 및 정량 시약 |
| US17/328,879 US12066447B2 (en) | 2013-07-24 | 2021-05-24 | Method and reagent for quantifying cholesterol in high density lipoprotein 3 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2013153294A JP6182008B2 (ja) | 2013-07-24 | 2013-07-24 | 高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法及び定量試薬 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2015023801A JP2015023801A (ja) | 2015-02-05 |
| JP6182008B2 true JP6182008B2 (ja) | 2017-08-16 |
Family
ID=52393367
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2013153294A Active JP6182008B2 (ja) | 2013-07-24 | 2013-07-24 | 高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法及び定量試薬 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US11041869B2 (ja) |
| EP (1) | EP3026120B1 (ja) |
| JP (1) | JP6182008B2 (ja) |
| KR (2) | KR20160030194A (ja) |
| CN (1) | CN105555963A (ja) |
| TW (1) | TWI627282B (ja) |
| WO (1) | WO2015012334A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109813921B (zh) * | 2019-02-25 | 2022-04-19 | 安徽大千生物工程有限公司 | 基于多克隆抗体制备的hdl3免疫比浊法检测试剂盒及其制备使用方法 |
| CN109837325B (zh) * | 2019-03-15 | 2022-08-12 | 安徽大千生物工程有限公司 | 一种基于修饰鞘磷脂酶优化的hdl3比色法检测试剂盒及其制备使用方法 |
| JP7455674B2 (ja) * | 2020-06-02 | 2024-03-26 | デンカ株式会社 | キットおよび方法 |
Family Cites Families (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3288033B2 (ja) * | 1996-12-09 | 2002-06-04 | デンカ生研株式会社 | 高密度リポ蛋白中のコレステロール定量用試薬 |
| JP3644490B2 (ja) * | 1996-12-09 | 2005-04-27 | デンカ生研株式会社 | 高密度リポ蛋白中のコレステロールの定量方法 |
| WO1998026090A1 (fr) * | 1996-12-09 | 1998-06-18 | Denka Seiken Co., Ltd. | Procede pour determiner la teneur en cholesterol des lipoproteines de haute densite |
| US5902131A (en) | 1997-05-09 | 1999-05-11 | Ramtron International Corporation | Dual-level metalization method for integrated circuit ferroelectric devices |
| JPH1156395A (ja) * | 1997-08-27 | 1999-03-02 | Dai Ichi Pure Chem Co Ltd | コレステロールの定量法 |
| JP4708531B2 (ja) | 2000-06-07 | 2011-06-22 | シスメックス株式会社 | Ｈｄｌ亜画分中のコレステロールの測定法 |
| ATE384135T1 (de) * | 2002-01-30 | 2008-02-15 | Denka Seiken Kk | Verfahren zur quantifizierung von cholesterin in hd-(high density)-lipoprotein und reagenszusammensetzungen |
| CA2502559C (en) * | 2002-10-16 | 2014-12-16 | Kyowa Medex Co., Ltd. | Method and reagent for measuring cholesterol in high density lipoprotein |
| AU2003284453A1 (en) | 2002-11-27 | 2004-06-18 | Daiichi Pure Chemicals Co., Ltd | Method of measuring lipid in specific lipoprotein |
| WO2007052646A1 (ja) * | 2005-10-31 | 2007-05-10 | Kyowa Medex Co., Ltd. | 低密度リポ蛋白中トリグリセリドの測定方法及び測定用キット |
| CN101078729B (zh) | 2006-05-10 | 2012-07-18 | 富士胶片株式会社 | 高密度脂蛋白胆固醇的测定方法 |
| JP5356656B2 (ja) * | 2006-05-10 | 2013-12-04 | 富士フイルム株式会社 | 高密度リポ蛋白コレステロールの測定方法 |
| JP5500777B2 (ja) | 2008-03-06 | 2014-05-21 | デンカ生研株式会社 | Ｈｄｌ３−ｃの測定方法及びｈｄｌ３−ｃ測定用試薬 |
| CN103124906B (zh) * | 2010-07-23 | 2016-08-17 | 电化生研株式会社 | 高密度脂蛋白3中的胆固醇的定量方法 |
| CN103080332B (zh) * | 2010-07-23 | 2014-11-12 | 电化生研株式会社 | 高密度脂蛋白3中的胆固醇的定量方法 |
| CN103080748B (zh) * | 2010-07-23 | 2015-05-27 | 电化生研株式会社 | 高密度脂蛋白3中的胆固醇的定量方法 |
| JP6022165B2 (ja) | 2012-01-25 | 2016-11-09 | デンカ生研株式会社 | 高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法 |
| JP2021006595A (ja) * | 2017-09-13 | 2021-01-21 | 日産化学株式会社 | 原油回収用薬液 |
-
2013
- 2013-07-24 JP JP2013153294A patent/JP6182008B2/ja active Active
-
2014
- 2014-07-24 CN CN201480041686.7A patent/CN105555963A/zh active Pending
- 2014-07-24 KR KR1020167001896A patent/KR20160030194A/ko not_active IP Right Cessation
- 2014-07-24 US US14/906,589 patent/US11041869B2/en active Active
- 2014-07-24 EP EP14829002.6A patent/EP3026120B1/en active Active
- 2014-07-24 TW TW103125258A patent/TWI627282B/zh active
- 2014-07-24 WO PCT/JP2014/069513 patent/WO2015012334A1/ja active Application Filing
- 2014-07-24 KR KR1020217005033A patent/KR102336254B1/ko active IP Right Grant
-
2021
- 2021-05-24 US US17/328,879 patent/US12066447B2/en active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| TW201536921A (zh) | 2015-10-01 |
| KR20160030194A (ko) | 2016-03-16 |
| WO2015012334A1 (ja) | 2015-01-29 |
| EP3026120A4 (en) | 2017-02-22 |
| EP3026120A1 (en) | 2016-06-01 |
| US11041869B2 (en) | 2021-06-22 |
| KR102336254B1 (ko) | 2021-12-07 |
| EP3026120B1 (en) | 2019-06-19 |
| JP2015023801A (ja) | 2015-02-05 |
| US20210278424A1 (en) | 2021-09-09 |
| TWI627282B (zh) | 2018-06-21 |
| KR20210022155A (ko) | 2021-03-02 |
| US12066447B2 (en) | 2024-08-20 |
| CN105555963A (zh) | 2016-05-04 |
| US20160161512A1 (en) | 2016-06-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5706418B2 (ja) | 高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法 | |
| US12066447B2 (en) | Method and reagent for quantifying cholesterol in high density lipoprotein 3 | |
| JP5671029B2 (ja) | 高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法 | |
| JP5653434B2 (ja) | 高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法 | |
| JP5956420B2 (ja) | 高密度リポタンパク質２中のコレステロールの定量方法およびそのための試薬キット | |
| JP6022165B2 (ja) | 高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法 | |
| JP2017209035A (ja) | トリグリセリドリッチリポ蛋白中のコレステロールの定量方法及び定量試薬 | |
| JP4865880B2 (ja) | 低密度リポ蛋白中のコレステロールの定量方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20160525 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20170418 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170616 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20170704 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20170721 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6182008 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313111 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |