TW201536921A - 高密度脂蛋白３中之膽固醇的定量方法及定量試藥 - Google Patents

高密度脂蛋白３中之膽固醇的定量方法及定量試藥 Download PDF

Info

Publication number
TW201536921A
TW201536921A TW103125258A TW103125258A TW201536921A TW 201536921 A TW201536921 A TW 201536921A TW 103125258 A TW103125258 A TW 103125258A TW 103125258 A TW103125258 A TW 103125258A TW 201536921 A TW201536921 A TW 201536921A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
cholesterol
surfactants
surfactant
hdl3
reagent
Prior art date
Application number
TW103125258A
Other languages
English (en)
Other versions
TWI627282B (zh
Inventor
Noriyuki Sato
Yasuki Itoh
Original Assignee
Denka Seiken Kk
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Denka Seiken Kk filed Critical Denka Seiken Kk
Publication of TW201536921A publication Critical patent/TW201536921A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI627282B publication Critical patent/TWI627282B/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C43/00—Ethers; Compounds having groups, groups or groups
    • C07C43/02—Ethers
    • C07C43/20—Ethers having an ether-oxygen atom bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C43/00—Ethers; Compounds having groups, groups or groups
    • C07C43/02—Ethers
    • C07C43/20—Ethers having an ether-oxygen atom bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring
    • C07C43/215—Ethers having an ether-oxygen atom bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring having unsaturation outside the six-membered aromatic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/60—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving cholesterol
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/92—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving lipids, e.g. cholesterol, lipoproteins, or their receptors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2405/00—Assays, e.g. immunoassays or enzyme assays, involving lipids

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本發明係揭示不需要繁雜操作即可定量受檢試料中之HDL3的方法及試藥。本發明所提供的高密度脂蛋白3中之膽固醇的定量方法，係包括使與高密度脂蛋白3進行特異性反應的1種或2種以上界面活性劑與受檢試料進行反應，而定量膽固醇。當界面活性劑係1種的情況，界面活性劑便係從HLB為12.5~15的聚氧乙烯多環苯醚所構成之群組中選擇1種。當界面活性劑係2種以上的情況，界面活性劑之至少1種係從聚氧乙烯多環苯醚所構成之群組中選擇至少1種，且依2種以上界面活性劑全體的HLB成為12.5~15的方式組合2種以上的界面活性劑。

Description

高密度脂蛋白3中之膽固醇的定量方法及定量試藥
本發明係關於高密度脂蛋白3(以下亦稱「HDL3」)中之膽固醇(以下亦將HDL3中的膽固醇稱「HDL3膽固醇」或「HDL3-C」)的定量方法及定量試藥。
高密度脂蛋白(HDL)膽固醇係為了從包含動脈硬化管壁的各組織接收膽固醇，而關係到囤積於細胞內的膽固醇之除去作用，因此亦稱為「反向膽固醇運輸系統」(reverse cholesterol transport)。已知其與冠動脈硬化等動脈硬化疾病間有負相關，且已知HDL偏低值係屬於血脂異常症之一所設計的低值極限，有效使用作為動脈硬化的指標。
HDL係由脫輔基蛋白質及磷脂質、膽固醇、中性脂肪構成。HDL的比重係d=1.063~1.210，更進一步分類為d=1.063~1.125的HDL2、與d=1.125~1.210的HDL3 2個組分。從脂蛋白的分佈曲線在d=1.125部分處發現缺口，從此處將比重較重的部分設為HDL3。又，就HDL中的脫輔基蛋白質中脫輔基脂蛋白E含有量差的觀點而言，亦存在有將脂蛋白E含有量較多的HDL設為脂蛋白E-rich HDL的亞組分的分類方式。
已知不僅習知的HDL蛋白全體，HDL2及HDL3各自之亞組分亦呈現不同的作用。臨床上已知因CETP缺乏，會使HDL不被代謝為LDL或IDL，導致HDL膽固醇量增加。因CETP缺乏而增加的HDL係屬於HDL2。據說HDL2具有抗動脈硬化作用。又，據說因CETP缺乏而導致脂蛋白E-rich HDL上升，脂蛋白E-rich HDL的膽固醇去除能力強、且具有抗血小板作用，據說在HDL中屬於較有益蛋白。又，因卵磷脂：膽固醇轉醯酶(LCAT)活性(lecithin：cholesterol acyltransferase)降低，導致HDL3不變化為HDL2，HDL3增加。暗示因HDL3的增加而造成冠動脈疾病發病率的增加。可預期從該等傾向分別測定HDL亞組分，係有助於判斷動脈硬化疾病之有無或原因。又，目前各製造商基於該等HDL亞組分的作用，正進行抑制CETP的作用、減少LDL膽固醇量、增加HDL膽固醇量的治療藥的開發。
確立HDL亞組分的簡便測定方法有關係到詳細的作用闡明、或該等的治療效果的可能性。
截至目前為止已知作為HDL亞組分的測定法已知有超離心法、高速液相色層分析(HPLC)法、HDL3沉澱法(專利文獻1)、NMR法等。
超離心係藉由離心並利用脂蛋白的比重差進行分組的方法，會有必須對操作熟練、耗費時日、以及費用亦高的缺點。岡崎等人所提出之使用HPLC分離HDL2與HDL3的方法，在操作上需要時間、且需要特別的機器。HDL3沉澱法係利用含有2價金屬離子及葡聚糖硫酸的 試藥，使HDL3以外凝聚，並利用離心回收上清部分的HDL3，再利用自動分析裝置進行測定的方法。但仍舊必需對操作熟練，且屬於手動方法，亦需要檢體的前處理操作，到測定為止會耗費一定時間的缺點，不具通用性。又，NMR法係利用核磁共振計測脂蛋白粒子數的方法，但需要特殊的機械，不具一般性。
另外，存在有HDL亞組分的分析方法(專利文獻2)。雖可利用通用自動分析裝置進行測定，但採用藉由使用界面活性劑，而從酵素的作用抑制HDL3以外的脂蛋白之方法，在HDL3反應中，會存在目的以外的脂蛋白，對測定造成影響，或在無法完全抑制的情況下，便會有測量到HDL3以外之脂蛋白的可能性。
取代此種方法需要可以簡便且更選擇性地定量膽固醇量的試藥的發明。
[先前技術文獻] [專利文獻]
[專利文獻1]日本專利特開2009-207463號公報
[專利文獻2]日本專利特開2001-346598號公報
本發明目的在於提供不需要繁雜操作即可定量受檢試料中之HDL3的方法及試藥。
本案發明者等人經深入鑽研的結果，發現與HDL3進行特異性反應的界面活性劑。並且，構想到藉由使受檢試料與此種界面活性劑產生反應，而定量膽固醇，便可定量受檢試料中的HDL3膽固醇，並實驗性地確認此想法的可能性，遂完成本發明。
即，本發明提供一種高密度脂蛋白3中之膽固醇的定量方法，其包括使與高密度脂蛋白3進行特異性反應的1種或2種以上界面活性劑與受檢試料進行反應，而定量膽固醇；其中，在上述界面活性劑係1種的情況下，該界面活性劑便係從HLB為12.5~15的聚氧乙烯多環苯醚所構成之群組中選擇1種；在上述界面活性劑係2種以上的情況下，該界面活性劑中之至少1種係從聚氧乙烯多環苯醚所構成之群組中選擇至少1種，且依2種以上界面活性劑全體的HLB成為12.5~15的方式，組合2種以上的界面活性劑。又，本發明提供一種高密度脂蛋白3中之膽固醇的定量試藥，其含有：與高密度脂蛋白3進行特異性反應的1種或2種以上界面活性劑；其中，在界面活性劑係1種的情況下，該界面活性劑係從HLB為12.5~15的聚氧乙烯多環苯醚所構成之群組中選擇1種；在上述界面活性劑係2種以上的情況下，該界面活性劑中之至少1種係從聚氧乙烯多環苯醚所構成之群組中選擇至少1種，且依2種以上界面活性劑全體的HLB成為12.5~15的方式，組合2種以上的界面活性劑。又，本發明係提供一種上述本發明試藥用於高密度脂蛋白3中的膽固醇定量之使用。
利用本發明，可在不需要諸如超離心或前處理等繁雜作業的情況下，利用自動分析裝置對受檢試料中的HDL3膽固醇進行特異性定量。又，藉由利用習知技術之受檢體中HDL總膽固醇定量法所獲得之總HDL膽固醇量，計算出HDL3膽固醇量的差，藉此亦可定量HDL2膽固醇量。
圖1係表示本發明實施例3所施行之包括聚氧乙烯苯乙烯化苯醚的各種聚氧乙烯多環苯醚之HLB、與HDL3/HDL2反應比的關係圖。
圖2係表示本發明實施例5所施行之利用本發明所求得之HDL3膽固醇、與利用沉澱法所求得之HDL3膽固醇的相關關係圖。
圖3係表示本發明實施例5所施行之從利用本發明所求得之HDL3膽固醇與總HDL膽固醇計算求得之HDL2膽固醇、與從利用沉澱法所求得之HDL3膽固醇與總膽固醇計算求得之HDL2膽固醇的相關關係圖。
圖4係表示本發明實施例6所施行之利用本發明所求得之HDL3膽固醇、與利用超離心法所求得之HDL3膽固醇的相關關係圖。
圖5係表示本發明實施例6所施行之從利用本發明所求得之HDL3膽固醇與總HDL膽固醇計算求得之HDL2膽固醇、與利用超離心法所求得之HDL2膽固醇的相關關係圖。
作為本發明方法所使用的受檢試料，只要係欲定量該試料中之HDL3膽固醇者即可，其餘並無特別的限定，較佳係血清、或血漿、或 該等的稀釋物，特佳係血清或其稀釋物。
當本發明中對界面活性劑使用「進行反應」的詞語時，係指界面活性劑使酵素容易對脂蛋白進行作用、或者依酵素無法對脂蛋白作用的方式進行保護。
本發明方法係使與HDL3進行特異性反應(幾乎不會與HDL3以外的脂蛋白進行反應)的界面活性劑與受檢試料進行反應。作為與HDL3進行特異性反應的界面活性劑係由聚氧乙烯多環苯醚構成的至少1種。聚氧乙烯多環苯醚之中，較佳係聚氧乙烯苯乙烯化苯醚、更佳係聚氧乙烯二苯乙烯化苯醚。
更具體而言，聚氧乙烯多環苯醚係可列舉：Newcol-610(商品名，日本乳化劑公司製；以下，公司名係指製造公司，合併記載公司名者係指所有商品名)、Newcol-710(日本乳化劑)、ADEKATOL® PC-10(ADEKA)、ADEKATOL® PC-13(ADEKA)、ADEKATOL® SP-12(ADEKA)，而聚氧乙烯多環苯醚之中，聚氧乙烯苯乙烯化苯醚係可列舉：EMULGEN A60(花王)、EMULGEN A90(花王)、BLAUNON DSP-12.5(青木油脂)、BLAUNON TSP-16(青木油脂)、NOIGEN EA-137(第一工業製藥)、NOIGEN EA-157(第一工業製藥)、NOIGEN EA-167(第一工業製藥)。該等之中，EMULGEN A60(花王)、EMULGEN A90(花王)、Newcol-710(日本乳化劑)係被歸類於聚氧乙烯二苯乙烯化苯醚。該等界面活性劑係可單獨使用、亦可組合2種以上使用。
與HDL3進行特異性反應的界面活性劑之HLB較佳係12.5~15、更佳係13.5~14.5。可為1種界面活性劑且HLB為12.5~15，亦可含有HLB非為12.5~15者並依2種以上界面活性劑全體的HLB成為12.5~15的方式組合。
與HDL3進行特異性反應的界面活性劑之濃度，最終濃度較佳係0.025~5.0%(w/v)、更佳係0.25~2.5%(w/v)。
本發明方法中，利用上述界面活性劑的反應而定量膽固醇。膽固醇的定量方法本身係屬周知，可採用周知之任一方法，下述實施例中亦有具體記載。例如對脂蛋白中的酯型膽固醇使用膽固醇酯脢進行水解，而生成游離型膽固醇與脂肪酸，再使用膽固醇氧化酶使生成的游離型膽固醇與原本脂蛋白中所存在的游離膽固醇產生膽甾烯酮與過氧化氫，使其在過氧化酶的存在下形成醌色素而進行定量。作為產生醌色素的化合物係可列舉例如：HDAOS(N-(2-羥基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺)、DAOS(N-乙基-N-(-2-羥基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺鈉)、或TOOS(N-乙基-N(-2-羥基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺鈉二水合物)、以及4-胺基安替比林，只要係能產生醌色素的組合即可，並不侷限於該等。當在後述前步驟中使用膽固醇酯脢及膽固醇氧化酶時，本發明的步驟(使與HDL3特異性界面活性劑進行反應的步驟)中，可直接使用前步驟所使用的膽固醇酯脢及膽固醇氧化酶，不需要重新添加。
產成醌色素的化合物濃度，例如，若係TOOS，則濃度較佳為0.5~3.0mmol/L左右，若係4-胺基安替比林，則較佳為0.1~8.0mmol/L， 又，過氧化酶的濃度較佳為0.4~40.0U/mL。
反應液中可使用能在通常生化學反應中所採用的各種緩衝液，較佳係pH在5~8間者。作為溶液，較佳係良緩衝液(Good's buffer)、托立斯緩衝液(tris buffer)、磷酸、甘胺酸的緩衝溶液，更佳係屬於良緩衝液的雙(2-羥乙基)亞胺基叁(羥乙基)甲烷(Bis-Tris)、哌-1,4-雙(2-乙磺酸)(PIPES)、哌-1,4-雙(2-乙磺酸)、1.5-鈉鹽、一水合物(PIPES1.5Na)、2-羥基-3-啉基丙磺酸(MOPSO)、N,N-雙(2-羥乙基)-2-胺基乙磺酸(BES)、2-[4-(2-羥乙基)-1-哌基]乙磺酸(HEPES)、及哌-1,4-雙(2-羥基-3-丙磺酸)(POPSO)。
反應溫度較佳係25~40℃左右、進而較佳係35~38℃、最佳係37℃。反應時間並無特別的限定，通常為2~10分鐘左右。
本發明的方法亦可使受檢試料直接與上述界面活性劑進行反應而實施，但若先施行將HDL或HDL3中之膽固醇以外的膽固醇移往反應系統外的前步驟，再對該前步驟後的試料施行上述本發明的方法，便可更正確地定量HDL3膽固醇，故較佳。
上述前步驟較佳係在與HDL以外的脂蛋白進行反應之界面活性劑、或與HDL3以外的脂蛋白進行反應之界面活性劑的存在下實施。
作為與HDL以外或HDL3以外的脂蛋白進行反應之界面活性劑，係可列舉：聚氧乙烯山梨糖醇酐衍生物、聚氧乙烯-聚氧丙烯縮合物、 聚氧乙烯硬脂胺等非離子界面活性劑；醯胺醚硫酸鹽(amide ether sulfate)、聚氧乙烯烷基醚硫酸鈉等陰離子界面活性劑；椰子油脂肪酸-醯胺丙基二甲基-胺基醋酸甜菜、烷基二甲基-胺基醋酸甜菜、月桂基甜菜等兩性界面活性劑；以及氯化月桂基三甲銨之類的陽離子界面活性劑，惟並不侷限於該等。
更具體而言，作為與HDL以外或HDL3以外的脂蛋白進行反應之界面活性劑的例，作為非離子界面活性劑係可列舉：屬於聚氧乙烯山梨糖醇酐單油酸酯的非離子OT-221(日油)、屬於聚氧乙烯-聚氧丙烯縮合物的Pluronic® F68(ADEKA)、Pluronic® F88(ADEKA)、Pluronic® F127(ADEKA)、Pluronic® P103(ADEKA)、Pluronic® P123(ADEKA)、屬於聚氧乙烯硬脂胺的NYMEEN® S210(日油)、EMULGEN A500(花王)；作為陰離子係可列舉：屬於醯胺醚硫酸鹽的SUNAMID® CF-10(日油)、屬於聚氧乙烯烷基醚硫酸鈉的LEVENOL® WX(花王)；作為兩性界面活性劑係可列舉：屬於椰子油脂肪酸-醯胺丙基二甲基-胺基醋酸甜菜的NISSAN ANON BDF-SF(日油)、屬於烷基二甲基-胺基醋酸甜菜的NISSAN ANON BF(日油)、屬於月桂基甜菜的AMPHITOL® 24B(花王)；作為陽離子界面活性劑係可列舉：屬於氯化月桂基三甲銨的Quartamin 24P(花王)。該等界面活性劑係可單獨使用、亦可組合2種以上使用。
前步驟所使用之界面活性劑的濃度，較佳係0.01~5.0%(w/v)、更佳係0.03~3.0%(w/v)左右。
前步驟係接受界面活性劑的反應，而將膽固醇移往反應系統外。此處，所謂「移往反應系統外」，係指藉由消退(extinguishing)或保護膽固醇及其酯，使在後續步驟中，使膽固醇及其酯處於不參與狀態。
此處，所謂「消退」，係指分解受檢試料中的脂蛋白之膽固醇，俾使在其後續步驟中，不會作用於膽固醇測定的反應。作為用於消退脂蛋白膽固醇的方法係可列舉將膽固醇酯脢及膽固醇氧化酶作用而產生的過氧化氫，使用過氧化氫酶分解為水與氧的方法。又，亦可使用過氧化酶，使氫施體(hydrogen donor)與所產生的過氧化氫反應並轉化為無色醌，惟並不侷限於該等。膽固醇消退的方法本身在該領域中已屬周知，下述實施例中亦有具體的記載。
所謂「保護」係指依受檢試料中的脂蛋白在其後續步驟中不會與膽固醇測定進行反應的方式進行保護。保護脂蛋白，係可列舉依各脂蛋白不會作用於膽固醇酯脢及膽固醇氧化酶的方式，使用特異性保護之界面活性劑的方法，惟並不侷限於該等。
當採取利用過氧化氫酶將前步驟所產生的過氧化氫進行分解的前步驟時，使用屬於過氧化氫酶之抑制劑的疊氮化鈉，添加於第2步驟的反應液中。此情況下的疊氮化鈉濃度通常係0.1g/L~1.0g/L左右。
本案發明者等人更進一步發現磷脂酶(phospholipase)及/或神經髓磷脂酶(sphingomyelinase)會作用於脂蛋白，但幾乎不會作用於HDL3。因此，除了上述界面活性劑以外，藉由使磷脂酶及/或神經髓磷脂酶(以 下有時將二者統稱為「磷脂酶等」)共存，便可更正確地定量HDL3膽固醇，故較佳。
作為磷脂酶係只要至少作用於卵磷脂(phosphatidylcholine)者即可，較佳係磷脂酶A、磷脂酶C及磷脂酶D，更佳係磷脂酶C及磷脂酶D。作為神經髓磷脂酶係只要至少作用於神經鞘磷脂(sphingomyelin)者即可。因為磷脂酶等已有市售，因而可較佳地使用市售物。磷脂酶等係可單獨使用、亦可組合使用2種以上。
磷脂酶等的最終濃度(使用2種以上的情況便為其合計濃度，以下亦同)較佳係0.1~100U/mL左右、更佳係0.2~50U/mL左右。
另外，即使在前步驟中使界面活性劑共存的情況下，反應條件(反應溫度、時間、緩衝液等)亦是如上述。
前步驟亦可藉由預先同時添加用於使膽固醇移往反應系統外的酵素系或界面活性劑，而將利用酵素進行的反應步驟、及利用界面活性劑進行的反應步驟作為單一步驟並同時實施。另外，第1步驟與第2步驟係可使用不同的界面活性劑。
前步驟中，在使用膽固醇酯脢及膽固醇氧化酶的情況下，膽固醇酯脢的濃度較佳係0.1~10.0U/mL左右、更佳係0.2~3.0U/mL左右。膽固醇氧化酶的濃度較佳係0.05~10.0U/mL左右、更佳係0.1~1.0U/mL左右。另外，膽固醇酯脢只要係能作用於酯型膽固醇者即可，其餘並 無特別的限制，可使用例如：旭化成公司製的膽固醇酯脢(CEBP)或東洋紡公司製的膽固醇酯脢(COE-311、COE-312)等市售物。又，膽固醇氧化酶只要係能作用於游離型膽固醇者即可，其餘並無特別的限制，可使用例如：旭化成公司製的膽固醇氧化酶(CONII)或東洋紡公司製的膽固醇氧化酶(COO-311、COO-321、COO-331)等市售物。
前步驟中，在使用過氧化酶的情況下，過氧化酶的濃度較佳係2.0~5.0U/mL左右、更佳係3.0~4.0U/mL左右。又，在使用轉化為無色醌的化合物的情況下，其濃度較佳係0.4~0.8mmol/L左右。
前步驟的其他條件(反應溫度、反應時間、緩衝液等)係可與上述本發明的方法相同。
以下，根據實施例更具體地說明本發明。惟，本發明並不侷限於下述實施例。
[實施例] [實施例1]
HDL2組分與HDL3組分係依如下述進行分組。使用含HDL的受檢試料，即血清中使用氯化鈉及溴化鈉的溶液，利用超離心依HDL2與HDL3的界線比重(1.125)分離的方式進行分組，回收各分組。
使用超離心，將CM~VLDL組分、LDL組分、HDL2組分、HDL3組分分組，並使下述試藥A進行反應，更進一步添加下述試藥B並施 行測定。測定係在各組分2μL中添加試藥A 150μL，經5分鐘加溫反應後，添加試藥B 50μL更進一步進行5分鐘加溫反應，測定主波長600nm、副波長700nm的吸光度。
試藥A
試藥B
※組合2種以上的情況係合計2.0w/v%
添加試藥B後，將經過單位時間後的各組分之吸光度變化量示於表1。可確認對HDL3進行特異性反應。
[實施例2]
使用超離心，將CM~VLDL組分、LDL組分、HDL2組分、HDL3組分分組，並使下述試藥C進行反應，更進一步添加下述試藥D並施行測定。測定係在各組分2μL中添加試藥C 150μL，經5分鐘加溫反應後，添加試藥D 50μL更進一步進行5分鐘加溫反應，測定主波長600nm、副波長700nm的吸光度。
試藥C
試藥D
添加試藥D後，將經過單位時間後的各組分之吸光度變化量示於表2。可確認對HDL3進行特異性反應。
[實施例3]
使用超離心，將CM~VLDL組分、LDL組分、HDL2組分、HDL3組分分組，並使下述試藥E進行反應，更進一步添加下述試藥F並施行測定。測定係在各組分2μL中添加試藥E 150μL，經5分鐘加溫反應後，添加試藥F 50μL更進一步進行5分鐘加溫反應，測定主波長600nm、副波長700nm的吸光度。
試藥E
神經髓磷脂酶 0.5U/mL
試藥F
※組合2種以上的情況係合計2.0w/v%
添加試藥F後，將經過單位時間後的各組分之吸光度變化量示於表3，將HDL3/HDL2反應比示於圖1。得知在包含聚氧乙烯苯乙烯化苯醚的聚氧乙烯多環苯醚之HLB為12~15、特別係13.5~14.5時，HDL3/HDL2反應比較高。
(單位：mAbs)
[實施例4]
使用超離心，將CM~VLDL組分、LDL組分、HDL2組分、HDL3組分分組，並使下述試藥E進行反應，更進一步添加下述試藥G並施行測定。測定係在各組分2μL中添加試藥E 150μL，經5分鐘加溫反應後，添加試藥G 50μL更進一步進行5分鐘加溫反應，測定主波長600nm、副波長700nm的吸光度。
試藥G
※組合2種以上的情況係合計濃度
添加試藥G後，將經過單位時間後的各組分之吸光度變化量示於表4。得知在包含聚氧乙烯苯乙烯化苯醚的聚氧乙烯多環苯醚之最終濃度為0.025~5.0w/v%、特別係0.25~2.5w/v%時，HDL3進行特異性反應。
[實施例5]
使人類血清試料與上述試藥A進行反應，更進一步添加下述試藥H並施行測定。測定係在血清2μL中添加試藥A 150μL，經5分鐘加溫反應後，添加試藥H 50μL，更進一步進行單位時間加溫反應，測定主波長600nm、副波長700nm的吸光度，作為HDL3膽固醇，且從另外測定的總HDL膽固醇計算求取HDL2膽固醇。
試藥H
將由試藥A與試藥H所求得之HDL3膽固醇、與依沉澱法(專利文獻1)所求得之HDL3膽固醇間之相關示於圖2，將從由試藥A與試藥H所求得之HDL3膽固醇、與總HDL膽固醇計算而求得之HDL2膽固醇，以及從依沉澱法所求得之HDL3膽固醇與總HDL膽固醇計算而求得之HDL2膽固醇間之相關示於圖3。不管HDL3與HDL2均可確認到本發明與沉澱法間具有較強的相關關係。
[實施例6]
使人類血清試料與下述試藥I進行反應，更進一步添加上述試藥H並施行測定。測定係在血清2μL中添加試藥I 150μL，經5分鐘加溫反應後，添加試藥E 50μL，更進一步進行單位時間加溫反應，測定主波長600nm、副波長700nm的吸光度，作為HDL3膽固醇，且從另外測定的總HDL膽固醇計算求取HDL2膽固醇。
試藥I
將由試藥I與試藥H所求得之HDL3膽固醇、與依超離心法所求得之HDL3膽固醇間之相關示於圖4，將從由試藥I與試藥H所求得之HDL3膽固醇、與總HDL膽固醇計算而求得之HDL2膽固醇，以及依超離心法所求得之HDL2膽固醇間之相關示於圖5。不管HDL3與HDL2均可確認到本發明與超離心法間具有較強的相關關係。

Claims (9)

  1. 一種高密度脂蛋白3中之膽固醇的定量方法，係包括使與高密度脂蛋白3進行特異性反應的1種或2種以上界面活性劑與受檢試料進行反應，而定量膽固醇；其中，當上述界面活性劑係1種的情況，該界面活性劑便係從HLB為12.5~15的聚氧乙烯多環苯醚所構成群組中選擇1種；在上述界面活性劑係2種以上的情況下，該界面活性劑中之至少1種係從聚氧乙烯多環苯醚所構成之群組中選擇至少1種，且依2種以上界面活性劑全體的HLB成為12.5~15的方式，組合2種以上的界面活性劑。
  2. 如申請專利範圍第1項之方法，其中，在上述界面活性劑係1種或2種以上的情況下，上述聚氧乙烯多環苯醚係從聚氧乙烯苯乙烯化苯醚所構成之群組中選擇至少1種。
  3. 如申請專利範圍第2項之方法，其中，在上述界面活性劑係1種或2種以上的情況下，上述聚氧乙烯苯乙烯化苯醚係從聚氧乙烯二苯乙烯化苯醚所構成之群組中選擇至少1種。
  4. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之方法，其中，在上述界面活性劑係1種的情況下，該界面活性劑的HLB係13.5~14.5，在上述界面活性劑係2種以上的情況下，該2種以上界面活性劑全體的HLB係13.5~14.5。
  5. 一種高密度脂蛋白3中之膽固醇的定量試藥，係含有：與高密度脂蛋白3進行特異性反應的1種或2種以上界面活性劑；其中，在界面活性劑係1種的情況下，該界面活性劑便係從HLB為12.5~15的聚氧乙烯多環苯醚所構成之群組中選擇1種；在上述界面活性劑係2種以上的情況下，該界面活性劑中之至少1種係從聚氧乙烯多環苯醚所 構成之群組中選擇至少1種，且依2種以上界面活性劑全體的HLB成為12.5~15的方式，組合2種以上的界面活性劑。
  6. 如申請專利範圍第5項之試藥，其中，在上述界面活性劑係1種或2種以上的情況下，上述聚氧乙烯多環苯醚係從聚氧乙烯苯乙烯化苯醚所構成之群組中選擇至少1種。
  7. 如申請專利範圍第6項之試藥，其中，在上述界面活性劑係1種或2種以上的情況下，上述聚氧乙烯苯乙烯化苯醚係從聚氧乙烯二苯乙烯化苯醚所構成之群組中選擇至少1種。
  8. 如申請專利範圍第5至7項中任一項之試藥，其中，在上述界面活性劑係1種的情況下，該界面活性劑的HLB係13.5~14.5，在上述界面活性劑係2種以上的情況下，該2種以上界面活性劑全體的HLB係13.5~14.5。
  9. 一種高密度脂蛋白3中之膽固醇的定量，係使用申請專利範圍第5至8項中任一項之試藥。
TW103125258A 2013-07-24 2014-07-24 高密度脂蛋白３中之膽固醇的定量方法及定量試藥 TWI627282B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2013153294A JP6182008B2 (ja) 2013-07-24 2013-07-24 高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法及び定量試薬
JP2013-153294 2013-07-24

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW201536921A true TW201536921A (zh) 2015-10-01
TWI627282B TWI627282B (zh) 2018-06-21

Family

ID=52393367

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW103125258A TWI627282B (zh) 2013-07-24 2014-07-24 高密度脂蛋白３中之膽固醇的定量方法及定量試藥

Country Status (7)

Country Link
US (2) US11041869B2 (zh)
EP (1) EP3026120B1 (zh)
JP (1) JP6182008B2 (zh)
KR (2) KR102336254B1 (zh)
CN (1) CN105555963A (zh)
TW (1) TWI627282B (zh)
WO (1) WO2015012334A1 (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109813921B (zh) * 2019-02-25 2022-04-19 安徽大千生物工程有限公司 基于多克隆抗体制备的hdl3免疫比浊法检测试剂盒及其制备使用方法
CN109837325B (zh) * 2019-03-15 2022-08-12 安徽大千生物工程有限公司 一种基于修饰鞘磷脂酶优化的hdl3比色法检测试剂盒及其制备使用方法
JP7455674B2 (ja) * 2020-06-02 2024-03-26 デンカ株式会社 キットおよび方法

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998026090A1 (fr) * 1996-12-09 1998-06-18 Denka Seiken Co., Ltd. Procede pour determiner la teneur en cholesterol des lipoproteines de haute densite
JP3288033B2 (ja) * 1996-12-09 2002-06-04 デンカ生研株式会社 高密度リポ蛋白中のコレステロール定量用試薬
JP3644490B2 (ja) * 1996-12-09 2005-04-27 デンカ生研株式会社 高密度リポ蛋白中のコレステロールの定量方法
US5902131A (en) 1997-05-09 1999-05-11 Ramtron International Corporation Dual-level metalization method for integrated circuit ferroelectric devices
JPH1156395A (ja) * 1997-08-27 1999-03-02 Dai Ichi Pure Chem Co Ltd コレステロールの定量法
JP4708531B2 (ja) 2000-06-07 2011-06-22 シスメックス株式会社 Ｈｄｌ亜画分中のコレステロールの測定法
EP1477570B1 (en) * 2002-01-30 2008-01-16 DENKA SEIKEN Co., Ltd. Method of quantifying cholesterol in high density lipoprotein and reagent compositions
CN100577812C (zh) * 2002-10-16 2010-01-06 协和梅迪克斯株式会社 高密度脂蛋白中的胆固醇的测定方法以及试剂
US7682831B2 (en) * 2002-11-27 2010-03-23 Sekisui Medical Co., Ltd. Method of measuring lipid in specific lipoprotein
US9360432B2 (en) * 2005-10-31 2016-06-07 Kyowa Medex Co., Ltd. Method for measuring triglyceride in low-density lipoprotein
JP5356656B2 (ja) * 2006-05-10 2013-12-04 富士フイルム株式会社 高密度リポ蛋白コレステロールの測定方法
CN101078729B (zh) 2006-05-10 2012-07-18 富士胶片株式会社 高密度脂蛋白胆固醇的测定方法
JP5500777B2 (ja) 2008-03-06 2014-05-21 デンカ生研株式会社 Ｈｄｌ３−ｃの測定方法及びｈｄｌ３−ｃ測定用試薬
CN103080332B (zh) * 2010-07-23 2014-11-12 电化生研株式会社 高密度脂蛋白3中的胆固醇的定量方法
DK2597468T3 (en) * 2010-07-23 2017-05-15 Denka Seiken Kk PROCEDURE FOR QUANTIFYING THE QUANTITY OF CHOLESTEROL IN HIGH DENSITY LIPOPROTEIN 3
US9151768B2 (en) * 2010-07-23 2015-10-06 Denka Seiken Co., Ltd. Method for quantifying the amount of cholesterol in high-density lipoprotein 3
JP6022165B2 (ja) * 2012-01-25 2016-11-09 デンカ生研株式会社 高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法
JP2021006595A (ja) * 2017-09-13 2021-01-21 日産化学株式会社 原油回収用薬液

Also Published As

Publication number Publication date
KR102336254B1 (ko) 2021-12-07
US20210278424A1 (en) 2021-09-09
KR20210022155A (ko) 2021-03-02
EP3026120A1 (en) 2016-06-01
JP2015023801A (ja) 2015-02-05
EP3026120A4 (en) 2017-02-22
TWI627282B (zh) 2018-06-21
JP6182008B2 (ja) 2017-08-16
CN105555963A (zh) 2016-05-04
KR20160030194A (ko) 2016-03-16
US11041869B2 (en) 2021-06-22
WO2015012334A1 (ja) 2015-01-29
EP3026120B1 (en) 2019-06-19
US20160161512A1 (en) 2016-06-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5706418B2 (ja) 高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法
CN101896620A (zh) 定量测定小而密ldl胆固醇的方法和试剂盒
JPWO2008105486A1 (ja) 小粒子低比重リポ蛋白の定量試薬
US20210278424A1 (en) Method and reagent for quantifying cholesterol in high density lipoprotein 3
JP5671029B2 (ja) 高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法
JP5653434B2 (ja) 高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法
US8906638B2 (en) Method for quantification of remnant-like lipoprotein cholesterol and kit for same
JP5956420B2 (ja) 高密度リポタンパク質２中のコレステロールの定量方法およびそのための試薬キット
JP2014030393A (ja) 高密度リポ蛋白（ｈｄｌ）中のコレステロールの定量方法
TWI597364B (zh) Quantitation of subcomponents of cholesterol (-C) in high density lipoprotein (HDL)
JP6022165B2 (ja) 高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法
JP4865880B2 (ja) 低密度リポ蛋白中のコレステロールの定量方法