JP4865880B2 - 低密度リポ蛋白中のコレステロールの定量方法 - Google Patents
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VLDL中のコレステロールは分解し消去されるが、他の蛋白、リン脂質等の残骸物は残る。そのため試料中のCM、VLDL濃度が高くなるにつれて、これら残骸物濃度も高くなり、一部の残骸物のLDLへの吸着も起こり始める。そして、吸着したLDLが、LDL以外のリポ蛋白と認識され消去が起こり始めることが明らかとなってきた。
第2工程で用いられる界面活性剤の濃度は、0.1〜100g/l程度が好ましく、さらに好ましくは1〜50g/l程度である。
次の組成からなるLDLコレステロール定量試薬を調製した。さらに第1試薬にウシ血清由来のアルブミンを1.0g/dL添加した試薬も調製し、2種類の試薬で効果の確認を行った(第2試薬は共通に使用)。
PIPES緩衝液 pH7.0 50 mmol/L
HDAOS 0.7 mmol/L
コレステロールエステラーゼ 0.8 U/mL
コレステロールオキシダーゼ 0.5 U/mL
カタラーゼ 80 U/mL
塩化マグネシウム 10 mmol/L
界面活性剤 エマルゲンB66(花王社製) 0.2 %
PIPES緩衝液 pH7.0 50 mmol/L
4−アミノアンチピリン 4.0 mmol/L
ペルオキシダーゼ 2.4 単位/mL
アジ化ナトリウム 0.1 %
TritonX100 3.0 %
CM試料として6種類調製、それぞれ6種類の試料は全てLDLコレステロール濃度を同じとし、CM濃度だけを変えたものとした(CMの濃度差はTG値として示した)。VLDL試料もCM試料と同様に6種類調製した。
試料各4μLに、あらかじめ37℃に加温した第1試薬300μLを混和し、37℃で5分間反応させた後に、第2試薬100μLを加え5分間反応させ600nmにおける吸光度を測定した。測定された吸光度から事前に測定していた既知濃度試料の吸光度と比較を行い、LDLコレステロール濃度を算出した。
(単位:mg/dL)
(単位:mg/dL)
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- アルブミンと、コレステロールオキシダーゼと、コレステロールエステラーゼと、低密度リポ蛋白以外のリポ蛋白に特異的に消去作用する界面活性剤と、過酸化水素を消去する試薬とを含む、低密度リポ蛋白中のコレステロールを測定するための前処理として被検試料中の低密度リポ蛋白以外のリポ蛋白中コレステロールを選択的に消去するための試薬。
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