JP5706418B2 - 高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法 - Google Patents
高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5706418B2 JP5706418B2 JP2012525431A JP2012525431A JP5706418B2 JP 5706418 B2 JP5706418 B2 JP 5706418B2 JP 2012525431 A JP2012525431 A JP 2012525431A JP 2012525431 A JP2012525431 A JP 2012525431A JP 5706418 B2 JP5706418 B2 JP 5706418B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- surfactant
- polyoxyethylene
- cholesterol
- group
- hdl3
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 title claims description 80
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 50
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 title claims description 40
- 108010021078 HDL3 Lipoproteins Proteins 0.000 title claims description 6
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 53
- -1 polyoxyethylene Polymers 0.000 claims description 42
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 claims description 27
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 claims description 22
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 claims description 22
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 108010089254 Cholesterol oxidase Proteins 0.000 claims description 17
- 108010055297 Sterol Esterase Proteins 0.000 claims description 17
- 102000000019 Sterol Esterase Human genes 0.000 claims description 17
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 17
- USIUVYZYUHIAEV-UHFFFAOYSA-N diphenyl ether Chemical class C=1C=CC=CC=1OC1=CC=CC=C1 USIUVYZYUHIAEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 claims description 15
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 15
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 claims description 10
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N Betaine Natural products C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O N,N,N-trimethylglycinium Chemical compound C[N+](C)(C)CC(O)=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims description 9
- 239000002280 amphoteric surfactant Substances 0.000 claims description 9
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 claims description 9
- 229920000259 polyoxyethylene lauryl ether Polymers 0.000 claims description 8
- 108010061312 Sphingomyelin Phosphodiesterase Proteins 0.000 claims description 7
- 102000011971 Sphingomyelin Phosphodiesterase Human genes 0.000 claims description 7
- 102000014384 Type C Phospholipases Human genes 0.000 claims description 7
- 108010079194 Type C Phospholipases Proteins 0.000 claims description 7
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 claims description 6
- 150000005215 alkyl ethers Chemical class 0.000 claims description 5
- DVEKCXOJTLDBFE-UHFFFAOYSA-N n-dodecyl-n,n-dimethylglycinate Chemical compound CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC([O-])=O DVEKCXOJTLDBFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 125000005037 alkyl phenyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- DDXLVDQZPFLQMZ-UHFFFAOYSA-M dodecyl(trimethyl)azanium;chloride Chemical group [Cl-].CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C DDXLVDQZPFLQMZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 229920002503 polyoxyethylene-polyoxypropylene Polymers 0.000 claims description 4
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000003093 cationic surfactant Substances 0.000 claims description 3
- LQZZUXJYWNFBMV-UHFFFAOYSA-N dodecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCO LQZZUXJYWNFBMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- MTNDZQHUAFNZQY-UHFFFAOYSA-N imidazoline Chemical compound C1CN=CN1 MTNDZQHUAFNZQY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229940094506 lauryl betaine Drugs 0.000 claims description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 3
- XPALGXXLALUMLE-UHFFFAOYSA-N 2-(dimethylamino)tetradecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCC(N(C)C)C(O)=O XPALGXXLALUMLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000003367 polycyclic group Chemical group 0.000 claims description 2
- 235000019864 coconut oil Nutrition 0.000 claims 1
- 239000003240 coconut oil Substances 0.000 claims 1
- 239000002563 ionic surfactant Substances 0.000 claims 1
- 208000010152 Huntington disease-like 3 Diseases 0.000 description 58
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 52
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 34
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 34
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical compound CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 13
- 239000007992 BES buffer Substances 0.000 description 12
- 108010023302 HDL Cholesterol Proteins 0.000 description 11
- AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 1,4-benzoquinone Chemical compound O=C1C=CC(=O)C=C1 AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 10
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 10
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 10
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 10
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 9
- SVLRFMQGKVFRTB-UHFFFAOYSA-M sodium;3-(3,5-dimethoxyanilino)-2-hydroxypropane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].COC1=CC(NCC(O)CS([O-])(=O)=O)=CC(OC)=C1 SVLRFMQGKVFRTB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 8
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 8
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 8
- ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trimethyl-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]benzenesulfonamide Chemical compound CC1=CC(C)=CC(C)=C1S(=O)(=O)NC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 7
- 102000011420 Phospholipase D Human genes 0.000 description 6
- 108090000553 Phospholipase D Proteins 0.000 description 6
- HQPMKSGTIOYHJT-UHFFFAOYSA-N ethane-1,2-diol;propane-1,2-diol Chemical compound OCCO.CC(O)CO HQPMKSGTIOYHJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 5
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 description 5
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 5
- 108010025628 Apolipoproteins E Proteins 0.000 description 4
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 4
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 4
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 102000013918 Apolipoproteins E Human genes 0.000 description 3
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 3
- 108700012841 Cholesteryl Ester Transfer Protein Deficiency Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 229920002057 Pluronic® P 103 Polymers 0.000 description 3
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 2,2'-piperazine-1,4-diylbisethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCN1CCN(CCS(O)(=O)=O)CC1 IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BGXNGARHYXNGPK-UHFFFAOYSA-N 2-[1-[(4-methoxyphenyl)methylsulfanyl]cyclohexyl]acetic acid Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1CSC1(CC(O)=O)CCCCC1 BGXNGARHYXNGPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 3-(N-morpholino)propanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCCN1CCOCC1 DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100029470 Apolipoprotein E Human genes 0.000 description 2
- 102000006410 Apoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010083590 Apoproteins Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 241000047703 Nonion Species 0.000 description 2
- 235000019482 Palm oil Nutrition 0.000 description 2
- 229920002415 Pluronic P-123 Polymers 0.000 description 2
- 229920002025 Pluronic® F 88 Polymers 0.000 description 2
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 108010022197 lipoprotein cholesterol Proteins 0.000 description 2
- 239000002540 palm oil Substances 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229920001992 poloxamer 407 Polymers 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- JHJLBTNAGRQEKS-UHFFFAOYSA-M sodium bromide Chemical compound [Na+].[Br-] JHJLBTNAGRQEKS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- LEVVMZZBTOYKSC-UHFFFAOYSA-N 1-amino-4-hydroxybutane-2-sulfonic acid Chemical compound NCC(S(O)(=O)=O)CCO LEVVMZZBTOYKSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LVQFQZZGTZFUNF-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-3-[4-(2-hydroxy-3-sulfonatopropyl)piperazine-1,4-diium-1-yl]propane-1-sulfonate Chemical compound OS(=O)(=O)CC(O)CN1CCN(CC(O)CS(O)(=O)=O)CC1 LVQFQZZGTZFUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HSXUNHYXJWDLDK-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1-sulfonic acid Chemical compound CC(O)CS(O)(=O)=O HSXUNHYXJWDLDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AOTXQRRUWFSXCN-UHFFFAOYSA-N 3-(3,5-dimethoxyanilino)-2-hydroxypropane-1-sulfonic acid Chemical compound COC1=CC(NCC(O)CS(O)(=O)=O)=CC(OC)=C1 AOTXQRRUWFSXCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KEWSCDNULKOKTG-UHFFFAOYSA-N 4-cyano-4-ethylsulfanylcarbothioylsulfanylpentanoic acid Chemical compound CCSC(=S)SC(C)(C#N)CCC(O)=O KEWSCDNULKOKTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ALZKUIHATFWRNE-UHFFFAOYSA-N 5-hydroxy-2,2,3-tris(2-hydroxyethyl)pentanamide Chemical compound OCCC(C(O)=N)(C(CCO)CCO)CCO ALZKUIHATFWRNE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-M Aminoacetate Chemical compound NCC([O-])=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101710095339 Apolipoprotein E Proteins 0.000 description 1
- 102100034808 CCAAT/enhancer-binding protein alpha Human genes 0.000 description 1
- 102100037637 Cholesteryl ester transfer protein Human genes 0.000 description 1
- 208000032928 Dyslipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 239000006173 Good's buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 102000019267 Hepatic lipases Human genes 0.000 description 1
- 108050006747 Hepatic lipases Proteins 0.000 description 1
- 101000945515 Homo sapiens CCAAT/enhancer-binding protein alpha Proteins 0.000 description 1
- 101000880514 Homo sapiens Cholesteryl ester transfer protein Proteins 0.000 description 1
- 238000008214 LDL Cholesterol Methods 0.000 description 1
- 208000017170 Lipid metabolism disease Diseases 0.000 description 1
- 239000007990 PIPES buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000702 anti-platelet effect Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005842 biochemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- JHIVVAPYMSGYDF-UHFFFAOYSA-N cyclohexanone Chemical compound O=C1CCCCC1 JHIVVAPYMSGYDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 125000003438 dodecyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 125000005313 fatty acid group Chemical group 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000000852 hydrogen donor Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 235000019626 lipase activity Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000004682 monohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- HDARHUHTZKLJET-UHFFFAOYSA-M sodium;3-(n-ethyl-3,5-dimethoxyanilino)-2-hydroxypropane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].[O-]S(=O)(=O)CC(O)CN(CC)C1=CC(OC)=CC(OC)=C1 HDARHUHTZKLJET-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- IRQRBVOQGUPTLG-UHFFFAOYSA-M sodium;3-(n-ethyl-3-methylanilino)-2-hydroxypropane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].[O-]S(=O)(=O)CC(O)CN(CC)C1=CC=CC(C)=C1 IRQRBVOQGUPTLG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ZPCAZHPYLUKSMY-UHFFFAOYSA-M sodium;3-(n-ethyl-3-methylanilino)-2-hydroxypropane-1-sulfonate;dihydrate Chemical compound O.O.[Na+].[O-]S(=O)(=O)CC(O)CN(CC)C1=CC=CC(C)=C1 ZPCAZHPYLUKSMY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MDYZKJNTKZIUSK-UHFFFAOYSA-N tyloxapol Chemical compound O=C.C1CO1.CC(C)(C)CC(C)(C)C1=CC=C(O)C=C1 MDYZKJNTKZIUSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/92—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving lipids, e.g. cholesterol, lipoproteins, or their receptors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/42—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving phosphatase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/44—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving esterase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/60—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving cholesterol
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/916—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1), e.g. phosphatases (3.1.3), phospholipases C or phospholipases D (3.1.4)
- G01N2333/918—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2405/00—Assays, e.g. immunoassays or enzyme assays, involving lipids
- G01N2405/04—Phospholipids, i.e. phosphoglycerides
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2405/00—Assays, e.g. immunoassays or enzyme assays, involving lipids
- G01N2405/08—Sphingolipids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/32—Cardiovascular disorders
- G01N2800/323—Arteriosclerosis, Stenosis
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
本発明は、高密度リポタンパク質３（以下、「HDL3」と呼ぶことがある）中のコレステロール（HDL3中のコレステロールを以下、「HDL3コレステロール」と呼ぶことがある）の定量方法に関する。
高密度リポ蛋白（ＨＤＬ）コレステロールは動脈硬化壁を含めた各組織からコレステロールを受け取るため細胞内に蓄積したコレステロールの除去作用に関係し、そのためコレステロール逆転送系ともいわれている。冠動脈硬化などの動脈硬化疾患と負の相関があることが知られており、ＨＤＬが低値であることは脂質異常症の一つとして低値限界が設けられており、動脈硬化の指標として有用であることが知られている。
ＨＤＬはアポタンパク質とリン脂質、コレステロール、中性脂肪から構成されている。ＨＤＬは比重がｄ＝１．０６３〜１．２１０ｇ／ｍＬであり、さらにｄ＝１．０６３〜１．１２５ｇ／ｍＬであるＨＤＬ２とｄ＝１．１２５〜１．２１０ｇ／ｍＬであるＨＤＬ３の２つの分画に分類される。リポ蛋白の分布曲線によりｄ＝１．１２５部分にノッチが認められ、ここから比重の重い部分をＨＤＬ３とされる。また、ＨＤＬ中のアポタンパク質のうちアポリポ蛋白Ｅ含有量差から、アポＥの含有量の多いＨＤＬをアポＥ−ｒｉｃｈ ＨＤＬとする亜分画の分け方も存在する。
従来までのＨＤＬ蛋白全体だけではなく、ＨＤＬ２およびＨＤＬ３それぞれの亜分画において異なった働きを示すことが知られている。臨床において、ＣＥＴＰ欠損によりＨＤＬがＬＤＬやＩＤＬに代謝されず、ＨＤＬコレステロール量が増加することが知られている。ＣＥＴＰ欠損により増加したＨＤＬはＨＤＬ２である。ＨＤＬ２には抗動脈硬化作用があると言われている。また、ＣＥＴＰ欠損によりアポＥ−ｒｉｃｈ ＨＤＬが上昇するとも言われており、Ａｐｏ−Ｅ―ｒｉｃｈｉ ＨＤＬはコレステロール引き抜き能が強く抗血小板作用があり、ＨＤＬの中でもより善玉であるとも言われている。また、肝性リパーゼ活性の低下によりＨＤＬ３がＨＤＬ２に変化せず、ＨＤＬ３が増加する。ＨＤＬ３の増加による冠動脈疾患の発症率の増加が示唆されている。これらの傾向からＨＤＬ亜分画それぞれを測定することは、動脈硬化疾患の有無や原因を判断する助けとなることが予想される。また、現在、これらＨＤＬ亜分画の働きを踏まえ、ＣＥＴＰの働きを阻害し、ＬＤＬコレステロール量を減少させ、ＨＤＬコレステロール量を増加させる治療薬の開発が各メーカーで進められている。
ＨＤＬ亜分画の簡便な測定方法を確立することは詳細な働きの解明や、これらの治療の効果へと繋がる可能性がある。
現在までにＨＤＬ亜分画の測定法として知られているものとしては、超遠心法、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）法、ＨＤＬ３沈殿法（特許文献１）、ＮＭＲ法、などが知られている。
超遠心は遠心によりリポ蛋白の比重の差を利用して画分する方法であり、作業に熟練が必要なこと、日数がかかること、また費用も高額となる欠点がある。岡崎らによるＨＰＬＣを用いたＨＤＬ２とＨＤＬ３とを分ける方法では、作業に時間を要し、特別な機器が必要である。ＨＤＬ３沈殿法は２価金属イオンおよびデキストラン硫酸を含む試薬によりＨＤＬ３以外を凝集させ、遠心により上清部分のＨＤＬ３を回収し自動分析装置で測定する方法である。やはり、作業に熟練が必要であること、また用手法であり検体の前処理操作が必要であることもあり、測定までにある程度の時間がかかるといった欠点があり、汎用的ではなかった。また、ＮＭＲ法は磁気共鳴によりリポ蛋白の粒子数を計測する方法であるが、特殊な機械が必要であり、一般的ではない。
なお、ＨＤＬ亜画分の分析方法(特許文献２)が存在する。汎用自動分析装置により測定が可能であるが、界面活性剤を使用することによりＨＤＬ３以外のリポ蛋白を酵素の作用から阻害する方法を用いており、ＨＤＬ３反応中において、目的以外のリポ蛋白質が存在していることなり、測定への影響、もしくは、阻害しきれなかった場合は、ＨＤＬ３以外のリポ蛋白を測りこむ恐れがある。
このような方法に変わり、簡便でかつコレステロール量をより選択的に定量できる試薬の発明が必要とされている。
本発明の目的は、煩雑な操作を必要とすることなく、被検試料中のHDL3を定量する方法を提供することである。
本願発明者らは、鋭意研究の結果、ホスフォリパーゼＣ及びスフィンゴミエリナーゼがリポタンパク質に作用するが、HDL3にはほとんど作用しないことを見出した。そして、被検試料にホスフォリパーゼＣ又はスフィンゴミエリナーゼを作用させ、コレステロールを消去し、次いで、残存するHDL3中のコレステロールを定量することにより被検試料中のHDL3コレステロールが定量可能であることに想到し、これが可能であることを実験的に確認して本発明を完成した。
すなわち、本発明は、被検試料にホスフォリパーゼＣ及び／又はスフィンゴミエリナーゼを作用させ、コレステロールエステラーゼ及びコレステロールオキシダーゼを含む消去系によりコレステロールを消去する第１工程と、反応系内に残存するコレステロールを定量する第２工程を含む、高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法を提供する。
本発明により、被検試料中のＨＤＬ３コレステロールを、超遠心や前処理といった煩雑な作業を必要とせずに自動分析装置で特異的に定量することが可能となった。また、従来技術である被検体中ＨＤＬ総コレステロール定量法により得られた総ＨＤＬコレステロール量よりＨＤＬ３コレステロール量の差を算出することによりＨＤＬ２コレステロール量を定量することも可能となった。
本発明の方法に供される被検試料としては、その試料中のHDL3コレステロールを定量しようとするものであれば特に限定されないが、好ましくは、血清若しくは血漿又はこれらの希釈物であり、特に血清又はその希釈物が好ましい。
本発明の第１工程では、被検試料にホスフォリパーゼＣ及び／又はスフィンゴミエリナーゼ（以下、両者を総称して「ホスフォリパーゼ等」と呼ぶことがある）を作用させる。ホスフォリパーゼ等は市販されているので、市販品を好ましく用いることができる。ホスフォリパーゼ等は単独で用いることもできるし、２種以上のものを組み合わせて用いることもできる。
ホスフォリパーゼ等の終濃度（２種類以上のものが用いられる場合にはその合計濃度、以下同じ）は０．１〜１００Ｕ／ｍＬ程度が好ましく、０．２〜５０Ｕ／ｍＬ程度がより好ましい。
被検試料にホスフォリパーゼ等を作用させると、HDL3はほとんど作用を受けず、HDL3以外のリポタンパク質は作用を受けてそのコレステロールが反応系外に移行される。
本発明の方法の第１工程では、ホスフォリパーゼ等の作用を受けてコレステロールを消去する。
ここで、「消去」とは、被検試料中のリポ蛋白のコレステロールを分解し、その後の工程において、コレステロール測定の反応に作用させないようにすることである。リポ蛋白コレステロールを消去するための方法としては、コレステロールエステラーゼ及びコレステロールオキシダーゼを作用させ発生した過酸化水素を、カタラーゼを用いて水と酸素に分解する方法が挙げられる。また、ペルオキシダーゼを用いて水素供与体と発生した過酸化水素を反応させ無色キノンに転化してもよいが、これらに限定されるものではない。コレステロールの消去の方法自体はこの分野において周知であり、下記実施例にも具体的に記載されている。
第１工程は、消去するための酵素系や界面活性剤を同時に添加しておくことにより、両工程を単一の工程として同時に行うこともできる。
第１工程において、コレステロールエステラーゼの濃度（本明細書において、濃度は特に断りがない限り終濃度を意味する）は０．１〜１０．０Ｕ／ｍＬ程度が好ましく、０．２〜２．０Ｕ／ｍＬ程度がより好ましい。コレステロールオキシダーゼの濃度は０．０５〜１０．０Ｕ／ｍＬ程度が好ましく、０．１〜１．０Ｕ／ｍＬ程度がより好ましい。なお、コレステロールエステラーゼは、エステル型コレステロールに作用するものであれば、特に制限されるものではなく、例えば、旭化成社製のコレステロールエステラーゼ(ＣＥＢＰ、ＣＥＮ)や東洋紡社製のコレステロールエステラーゼ(ＣＯＥ−３１１、ＣＯＥ−３１２)などの市販品を用いることができる。また、コレステロールオキシダーゼは、遊離型コレステロールに作用するものであれば、特に制限されるものではなく、例えば、旭化成社製のコレステロールオキシダーゼ(ＣＯＮII)や東洋紡社製のコレステロールオキシダーゼ（ＣＯＯ−３１１、ＣＯＯ−３２１、ＣＯＯ−３３１）などの市販品を用いることができる。
第１工程において、ペルオキシダーゼを用いる場合、ペルオキシダーゼの濃度は２．０〜５．０単位/ｍL程度が好ましく、さらに３．０〜４．０単位/ｍL程度が好ましい。また、無色キノンに転化する化合物を用いる場合、その濃度は０．４〜０．８ｍｍｏｌ／Ｌ程度が好ましい。
第一工程で用いる反応液には通常の生化学反応に用いられる各種の緩衝液を使用することができ、ｐＨが５〜８の間であるのが好ましい。溶液としては、グッド、トリス、リン酸、グリシンの緩衝溶液が好ましく、グッド緩衝液であるビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシエチル）メタン（Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ）、ピペラジンー１、４−ビス（２−エタンスルフォン酸）（ＰＩＰＥＳ）、ピペラジンー１、４−ビス（２−エタンスルフォン酸）、１．５ナトリウム塩、一水和物（ＰＩＰＥＳ１．５Ｎａ）、3-モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、Ｎ、Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）―２―アミノエタンスルフォン酸（ＢＥＳ）、２−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル］エタンスルフォン酸（ＨＥＰＥＳ）およびピペラジン−１、４−ビス（２−ヒドロキシー３−プロパンスルフォン酸）（ＰＯＰＳＯ）が好ましい。
第一工程の反応温度は２５〜４０℃程度が好ましく、さらに３５〜３８℃が好ましく、３７℃が最も好ましい。反応時間は特に限定されず、通常、２〜１０分程度である。
本願発明者らは、さらに、HDL3以外のリポタンパク質に反応する界面活性剤を見出した。第１工程は、界面活性剤の非存在下で行うことが可能であるが、HDLまたはHDL3以外のリポタンパク質に反応する界面活性剤の共存下で行うことにより、HDL3コレステロールをより正確に定量することが可能になるので好ましい。
本発明中において界面活性剤に対して「反応する」という言葉を用いる場合は、界面活性剤がリポ蛋白質に対して、反応系外に導くために酵素が作用しやすくする、もしくはリポ蛋白に対して酵素が作用できないよう保護することを意味する。
HDL以外のリポ蛋白に反応する界面活性剤としては、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウムのような陰イオン界面活性剤；及び／又はポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン縮合物、ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル、アミドノニオン、ＨＬＢ値が１４〜１７のポリオキシエチレン多環フェニルエーテルのような非イオン系界面活性剤を挙げることができるがこれらに限定されるものではない。より具体的には、プルロニックＰ１２３（旭電化）プルロニックＦ８８（旭電化）、レベノールＷＸ（花王)、ノニオンHS２２０(日本油脂) 、ナイミッドＭＴ−２１５（日本油脂）、Ｎｅｗｃｏｌ-７２３（日本乳化剤）、Ｎｅｗｃｏｌ−２６１４（日本乳化剤）、Ｎｅｗｃｏｌ−７１４（日本乳化剤）を挙げることができる。
HDL3以外のリポタンパク質に反応する界面活性剤としては、ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテル、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン縮合物、ポリオキシエチレン−ステアリルアミン等の非イオン界面活性剤；アミドエーテルサルフェート等の陰イオン界面活性剤；ヤシ油脂肪酸―アミドプロピルジメチル−アミノ酢酸ベタイン、アルキルジメチル−アミノ酢酸ベタイン及びラウリルベタイン等の両性界面活性剤；並びにラウリルトリメチルアンモニウムクロライドのような陽イオン界面活性剤を挙げることができるがこれらに限定されるものではない。より具体的には、非イオン界面活性剤としてはポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテルであるエマルゲンＡ５００（商品名、花王社製、以下、会社名は製造会社であり、会社名が併記されているものは全て商品名である）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン縮合物であるプルロニックＦ１２７（旭電化）、プルロニックＦ６８（旭電化）、プルロニックＰ１０３（旭電化）、ポリオキシエチレン−ステアリルアミンであるナイミーンＳ２１０（日本油脂）；陰イオン界面活性剤としてはアミドエーテルサルフェートであるサンアミドＣＦ−１０（日本油脂）、；両性界面活性剤としてはヤシ油脂肪酸―アミドプロピルジメチル−アミノ酢酸ベタインであるニッサンアノンＢＤＦ−ＳＦ（日本油脂）、アルキルジメチル−アミノ酢酸ベタインであるニッサンアノンＢＦ（日本油脂）、ラウリルベタインであるアンヒトール２４Ｂ（花王）；陽イオン界面活性剤としては、ラウリルトリメチルアンモニウムクロライドであるコータミン２４Ｐ（花王）が挙げられる。これらは単独で用いることもできるし、２種以上のものを組み合わせて用いることもできる。
HDL3以外のリポタンパク質に反応する界面活性剤の濃度は、０．０１〜５.０重量％が好ましく、０．０３〜３．０重量％程度がより好ましい。
なお、第１工程に界面活性剤を共存させる場合でも、反応条件（反応温度、時間、緩衝液等）は上記の通りである。
続く第２工程では、反応系内に残存するコレステロールを定量する。これは、少なくともHDL3と反応する界面活性剤を反応させ、コレステロールを定量することにより行うことができる。「少なくともHDL3と反応する界面活性剤」には、HDL3と特異的に反応する界面活性剤、HDLと特異的に反応する（すなわち、HDL2とHDL3に反応する）界面活性剤及び全てのリポタンパク質に反応する界面活性剤が包含される。
第２工程に用いることができる界面活性剤としては、ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテル、ポリオキシエチレンラウリルエーテル及びp-イソオクチルポリオキシエチレンフェノールホルムアルデヒドポリマー等の非イオン界面活性剤；ラウリルジメチル−アミノ酢酸ベタイン等の両性界面活性剤；脂肪酸族リン酸エステル等の陰イオン界面活性剤；ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテル、ポリオキシエチレントリベンジルフェニルエーテル、ポリオキシアルキレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン多環フェニルエーテル及びポリオキシエチレンクミルフェニルエーテル等の、ＨＬＢが１１〜１４の間の非イオン界面活性剤；イミダゾリン型の両性界面活性剤；ポリオキシエチレンラウリルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル及びポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、ラウリルアルコールアルコキシレート等の非イオン界面活性剤；ポリオキシエチレン−アルキルフェニルエーテル硫酸エステルナトリウム塩のような陰イオン界面活性剤を挙げることができる。これらは単独で用いることもできるし、２種以上のものを組み合わせて用いることもできる。
より具体的には、ＨＤＬ３に特異的に反応する界面活性剤の例としては、非イオン界面活性剤として、ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテルであるエマルゲンＡ９０（花王）、ポリオキシエチレンラウリルエーテルであるエマルゲン１２０（花王）、ｐ−イソオクチルポリオキシエチレンフェノールホルムアルデヒドポリマーであるＴｒｉｔｏｎ−ＷＲ−１３３９（ナカライ）、ポリオキシエチレンラウリルエーテルであるパーソフトＮＫ−１００（日本油脂）；両性界面活性剤として、ラウリルジメチル−アミノ酢酸ベタインであるニッサンアノンＢＬ−ＳＦ（日本油脂）；陰イオン界面活性剤として脂肪酸族リン酸エステルであるアデカコールＰＳ−４４０Ｅ（旭電化）が挙げられる。
ＨＤＬに特異的に反応する界面活性剤としては、ＨＬＢが１１〜１４の間の非イオン界面活性剤である、ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテル、ポリオキシエチレントリベンジルフェニルエーテル、ポリオキシアルキレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン多環フェニルエーテル、ポリオキシエチレンクミルフェニルエーテル、もしくは、両性界面活性剤のイミダゾリン型を用いることができる。具体的には、例えばエマルゲンＡ６０（花王）、エマルゲンＢ６６（花王）、エマルゲンＬＳ１１０（花王）、Ｎｅｗｃｏｌ−ＣＭＰ−１１（日本乳化剤）、Ｎｅｗｃｏｌ−７１０（日本乳化剤）、Ｎｅｗｃｏｌ−６１０（日本乳化剤）、Ｎｅｗｃｏｌ−２６０９（日本乳化剤）、ニッサンアノンＧＬＭ−Ｒ−ＬＶ（日本油脂）を使用することが可能である。
全てのリポ蛋白に特異的に反応する界面活性剤としては、非イオン界面活性剤としてポリオキシエチレンラウリルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、ラウリルアルコールアルコキシレートを使用することができる。陰イオン界面活性剤として、ポリオキシエチレンーアルキルフェニルエーテル硫酸エステルナトリウム塩を使用することができる。具体的には、例えばエマルゲン７０７（花王）、エマルゲン９０９（花王）、エマルゲン１０８（花王）、ナイミーンＬ２０７（日本油脂）、アデカトールＬＢ８３（旭電化）、アデカトールＬＢ１０３（旭電化）、Ｎｅｗｃｏｌ−７０７（日本乳化剤）を使用することが可能である。
第二工程における界面活性剤の濃度は０．０１〜５.０％（ｗ／ｖ）が好ましく、さらには０．０５〜２．０％（ｗ／ｖ）が好ましい。
第２工程においては、これらの界面活性剤の反応によりコレステロールを定量する。なお、第１工程と第２工程では異なる界面活性剤を用いる。コレステロールの定量方法自体は周知であり、周知のいずれの方法をも採用することができ、下記実施例にも具体的に記載されている。例えば、リポ蛋白中のエステル型コレステロールにコレステロールエステラーゼを用いて加水分解し、遊離型コレステロールと脂肪酸が生じ、生じた遊離型コレステロールと元来リポ蛋白中に存在する遊離コレステロールとをコレステロールオキシダーゼを用いてコレステノンと過酸化水素を発生させ、これをペルオキシダーゼの存在下でキノン色素を形成させ定量する。キノン色素を発生させる化合物として、例えばＨＤＡＯＳ(N-(2-ヒドロキシ-3-スルホプロピル）-3,5-ジメトキシアニリン）、ＤＡＯＳ(N-エチル-N(-2-ヒドロキシ-3-スルホプロピル)-3, 5-ジメトキシアニリンナトリウム)又はＴＯＯＳ(N-エチル-N(-2-ヒドロキシ- 3-スルホプロピル)-3-メチルアニリンナトリウム二水和物）と４−アミノアンチピリンが挙げられるが、キノン色素を発生させることができる組み合わせであればこれらに限定されるものではない。第１工程でコレステロールエステラーゼ及びコレステロールオキシダーゼを用いる場合には、第２工程では、第１工程で用いたコレステロールエステラーゼ及びコレステロールオキシダーゼをそのまま用いることができ、新たに添加する必要はない。
キノン色素を発生させる化合物の濃度は、例えば、ＨＤＡＯＳであれば濃度は０．５〜２．０ｍｍｏｌ／Ｌ程度が好ましく、４−アミノアンチピリンであれば０．１〜２．０ｍｍｏｌ／Ｌが好ましく、また、ペルオキシダーゼの濃度は０．４〜５．０Ｕ／ｍＬが好ましい。また、第一工程で発生した過酸化水素をカタラーゼで分解する工程ではカタラーゼの阻害剤であるアジ化ナトリウムを使用し、第二工程の反応液中へ添加する。この場合のアジ化ナトリウムの濃度は、通常、０．１ｇ／Ｌ〜１．０ｇ／Ｌ程度である。
第２工程の他の反応条件（反応温度、時間、緩衝液、ｐＨ等）は上記した第１工程の反応条件と同様でよい。
さらに、被検試料中のＨＤＬコレステロール量から第一工程と第二工程から得られたＨＤＬ３コレステロール量の差を算出し、被検試料中のＨＤＬ２コレステロール量を求めることも可能である。被検試料中のＨＤＬコレステロール量を求める方法は周知であり（例えば、特開2001-103998号公報）、そのためのキットも市販されているので、それらを用いて容易に定量することができる。
以下、本発明を実施例に基づきより具体的に説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定されるものではない。
参考例１
以下の試薬組成の試薬Ａと試薬Ｂを調製し、試薬Ａに各種界面活性剤を０．１％（ｗ／ｖ）または１．０％（Ｗ／Ｖ）濃度添加した試薬をそれぞれ調製した。測定直前に各種界面活性剤入りの下記試薬Ａと試薬Ｂを１：３の割合で混合し、ＨＤＬ２分画とＨＤＬ３分画のコレステロールを反応させ、主波長７００ｎｍ、副波長６００ｎｍでの終吸光度を測定し比較した。
以下の試薬組成の試薬Ａと試薬Ｂを調製し、試薬Ａに各種界面活性剤を０．１％（ｗ／ｖ）または１．０％（Ｗ／Ｖ）濃度添加した試薬をそれぞれ調製した。測定直前に各種界面活性剤入りの下記試薬Ａと試薬Ｂを１：３の割合で混合し、ＨＤＬ２分画とＨＤＬ３分画のコレステロールを反応させ、主波長７００ｎｍ、副波長６００ｎｍでの終吸光度を測定し比較した。
ＨＤＬ２分画とＨＤＬ３分画は、以下の様にして画分した。ＨＤＬを含む被検試料、すなわち、血清に塩化ナトリウム及び臭化ナトリウムを用いた溶液を用いて、超遠心によりＨＤＬ２とＨＤＬ３との境目の比重(1.125)で別れるように画分し、それぞれの画分を回収した。
下記表１には、ＨＤＬ２／ＨＤＬ３の率が０．７５以下で、ＣＭ〜ＩＤＬ／ＨＤＬ３、ＬＤＬ／ＨＤＬ３が０．７５以下である界面活性剤を示し、これらをＨＤＬ３に反応する界面活性剤とする。表２には、ＨＤＬ２／ＨＤＬ３の率が１．２５以上で、ＣＭ〜ＩＤＬ／ＨＤＬ２、ＬＤＬ／ＨＤＬ２の率が１．２５以上である界面活性剤を示し、これらをＨＤＬ３以外に反応する界面活性剤とする。表３には、ＨＤＬ２／ＨＤＬ３の率が０．７５〜１．２５間で、ＣＭ〜ＩＤＬ/ＨＤＬ２、ＬＤＬ/ＨＤＬ２、ＣＭ〜ＩＤＬ／ＨＤＬ３、ＬＤＬ／ＨＤＬ３の率が０．７５以下である界面活性剤を示し、これらをＨＤＬに反応する界面活性剤とする。表４には、ＨＤＬ２／ＨＤＬ３の率が０．７５〜１．２５間で、ＣＭ〜ＩＤＬ/ＨＤＬ２、ＬＤＬ/ＨＤＬ２、ＣＭ〜ＩＤＬ／ＨＤＬ３、ＬＤＬ／ＨＤＬ３の率が０．７５以上である界面活性剤を示し、これらを全てのリポ蛋白に反応する界面活性剤とする。表５には、上記にあてはまらない界面活性剤を示しこれらを、ＨＤＬ以外に反応する界面活性剤とする。
試薬Ａ
ＢＥＳ緩衝液 (ｐＨ７．０） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
ＨＤＡＯＳ ０．７ｍｍｏｌ／Ｌ
カタラーゼ ６００Ｕ／Ｌ
コレステロールオキシダーゼ １．４Ｕ／ｍＬ
コレステロールエステラーゼ ０．８Ｕ／ｍＬ
ＢＥＳ緩衝液 (ｐＨ７．０） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
ＨＤＡＯＳ ０．７ｍｍｏｌ／Ｌ
カタラーゼ ６００Ｕ／Ｌ
コレステロールオキシダーゼ １．４Ｕ／ｍＬ
コレステロールエステラーゼ ０．８Ｕ／ｍＬ
試薬Ｂ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ６．６） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
アジ化ナトリウム ０．１％
４−アミノアンチピリン ４．０ｍｍｏｌ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ２．４Ｕ／ｍＬ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ６．６） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
アジ化ナトリウム ０．１％
４−アミノアンチピリン ４．０ｍｍｏｌ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ２．４Ｕ／ｍＬ
エマルゲンA90、エマルゲン120、ニッサンアノンBL-SF、TritonWR-1339、パーソフトNK-100、アデカコールPS-440EがHDL３に特異的に反応する界面活性剤であった。
エマルゲンA500、ニッサンアノンBDF-SF、ニッサンアノンBF、ナイミーンS210、プルロニックP103、コータミン24P、サンアミドCF-10、アンヒトール２４B、プルロニックF68、プルロニックF127がHDL３以外に反応する界面活性剤であった。
エマルゲンB66、エマルゲンA60、エマルゲンLS110、Newcol-610、Newcol-2609、Newcol-CMP-11、ニッサンアノンGLM−RLV、Newcol-710がHDLに特異に反応する界面活性剤であった。
エマルゲン108、エマルゲン707、Newcol707、アデカトールLB83、アデカトールLB103、エマルゲン909が全てのリポ蛋白に特異に反応する界面活性剤であった。
Newcol−714、Newcol-723、Newcol-2614、ナイミーンS215、プルロニックP123、レベノールWX、ナイミッドMT215、ノニオンHS220、プルロニックF88がHDL以外に特異に反応する界面活性剤であった。
比較例１
超遠心を用いてＣＭ〜ＬＤＬ分画、ＨＤＬ２分画、ＨＤＬ３分画を画分し、参考例１で使用した試薬ＡにホスフォリパーゼＤ（ＰＬＤＰ）を加えた試薬Ｅとを反応させ、さらに、下記試薬Ｄを添加し、測定を行なった。測定は、血清２μＬに試薬Ｅを１５０μＬ添加し、５分加温反応の後、試薬Ｄを添加しさらに５分加温反応させ、主波長７００ｎｍ、副波長６００ｎｍの吸光度を測定した。
超遠心を用いてＣＭ〜ＬＤＬ分画、ＨＤＬ２分画、ＨＤＬ３分画を画分し、参考例１で使用した試薬ＡにホスフォリパーゼＤ（ＰＬＤＰ）を加えた試薬Ｅとを反応させ、さらに、下記試薬Ｄを添加し、測定を行なった。測定は、血清２μＬに試薬Ｅを１５０μＬ添加し、５分加温反応の後、試薬Ｄを添加しさらに５分加温反応させ、主波長７００ｎｍ、副波長６００ｎｍの吸光度を測定した。
試薬Ｅ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ７．０） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
ＨＤＡＯＳ ０．７ｍｍｏｌ／Ｌ
カタラーゼ ６００Ｕ／Ｌ
コレステロールオキシダーゼ １．４Ｕ／ｍＬ
コレステロールエステラーゼ ０．８Ｕ／ｍＬ
ホスフォリパーゼＤ ５．０Ｕ／ｍＬ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ７．０） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
ＨＤＡＯＳ ０．７ｍｍｏｌ／Ｌ
カタラーゼ ６００Ｕ／Ｌ
コレステロールオキシダーゼ １．４Ｕ／ｍＬ
コレステロールエステラーゼ ０．８Ｕ／ｍＬ
ホスフォリパーゼＤ ５．０Ｕ／ｍＬ
試薬Ｄ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ６．６） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
アジ化ナトリウム ０．１％
エマルゲンＢ６６ １．５％
４−アミノアンチピリン ４．０ｍｍｏｌ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ２．４Ｕ／ｍＬ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ６．６） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
アジ化ナトリウム ０．１％
エマルゲンＢ６６ １．５％
４−アミノアンチピリン ４．０ｍｍｏｌ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ２．４Ｕ／ｍＬ
試薬Ｄが添加されてからの各分画における吸光度の経時変化の結果を図１に示す。ＨＤＬ３に対して特異的に反応するのが見て取れる。
実施例２
参考例１で使用した試薬Ａに界面活性剤とスフィンゴミエリナーゼを加えた試薬Ｆと、試薬Ｆを反応させた産物中のＨＤＬ３を測定する工程の試薬Ｇを以下の組成で調製し、超遠心を用いてＣＭ〜ＩＤＬ間の分画、ＬＤＬ分画、ＨＤＬ２分画、ＨＤＬ３分画を画分し、測定を行なった。試薬の測定手順は比較例１と同様に実施し、それぞれの測定時間における吸光度を測定した。
参考例１で使用した試薬Ａに界面活性剤とスフィンゴミエリナーゼを加えた試薬Ｆと、試薬Ｆを反応させた産物中のＨＤＬ３を測定する工程の試薬Ｇを以下の組成で調製し、超遠心を用いてＣＭ〜ＩＤＬ間の分画、ＬＤＬ分画、ＨＤＬ２分画、ＨＤＬ３分画を画分し、測定を行なった。試薬の測定手順は比較例１と同様に実施し、それぞれの測定時間における吸光度を測定した。
試薬Ｆ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ７．０） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
ＨＤＡＯＳ ０．７ｍｍｏｌ／Ｌ
プルロニックＦ６８ ０．０３ｗ／ｖ％
カタラーゼ ６００Ｕ／Ｌ
コレステロールオキシダーゼ １．４Ｕ／ｍＬ
コレステロールエステラーゼ ０．８Ｕ／ｍＬ
スフィンゴミエリナーゼ ０．５Ｕ／ｍＬ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ７．０） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
ＨＤＡＯＳ ０．７ｍｍｏｌ／Ｌ
プルロニックＦ６８ ０．０３ｗ／ｖ％
カタラーゼ ６００Ｕ／Ｌ
コレステロールオキシダーゼ １．４Ｕ／ｍＬ
コレステロールエステラーゼ ０．８Ｕ／ｍＬ
スフィンゴミエリナーゼ ０．５Ｕ／ｍＬ
試薬Ｇ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ６．６） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
アジ化ナトリウム ０．１％
エマルゲンＡ９０ ２．０％
４−アミノアンチピリン ４．０ｍｍｏｌ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ２．４Ｕ／ｍＬ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ６．６） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
アジ化ナトリウム ０．１％
エマルゲンＡ９０ ２．０％
４−アミノアンチピリン ４．０ｍｍｏｌ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ２．４Ｕ／ｍＬ
試薬Ｇが添加されてからの各分画における吸光度の経時変化の結果を図２に示す。ＨＤＬ３に対して特異的に反応することが見て取れる。
実施例３
実施例２と同様の方法を用いて、比較例１で使用した試薬ＥのホスフォリパーゼをホスフォリパーゼＣに変更し界面活性剤を添加した試薬Ｈを用いて、吸光度を測定した。
実施例２と同様の方法を用いて、比較例１で使用した試薬ＥのホスフォリパーゼをホスフォリパーゼＣに変更し界面活性剤を添加した試薬Ｈを用いて、吸光度を測定した。
試薬Ｈ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ７．０） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
ＨＤＡＯＳ ０．７ｍｍｏｌ／Ｌ
プルロニックＦ６８ ０．０３ｗ／ｖ％
カタラーゼ ６００Ｕ／Ｌ
コレステロールオキシダーゼ １．４Ｕ／ｍＬ
コレステロールエステラーゼ ０．８Ｕ／ｍＬ
ホスフォリパーゼＣ ５．０Ｕ／ｍＬ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ７．０） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
ＨＤＡＯＳ ０．７ｍｍｏｌ／Ｌ
プルロニックＦ６８ ０．０３ｗ／ｖ％
カタラーゼ ６００Ｕ／Ｌ
コレステロールオキシダーゼ １．４Ｕ／ｍＬ
コレステロールエステラーゼ ０．８Ｕ／ｍＬ
ホスフォリパーゼＣ ５．０Ｕ／ｍＬ
試薬Ｈが添加されてからの各分画における吸光度の経時変化の結果を図３に示す。ＨＤＬ３に対して特異的に反応することが見て取れる。
比較例２
実施例２と同様の方法を用いて、実施例３で使用した試薬ＨのホスフォリパーゼをホスフォリパーゼＤ（ＰＬＤＰ）に変更し界面活性剤を添加した試薬Ｉを用いて、吸光度を測定した。
実施例２と同様の方法を用いて、実施例３で使用した試薬ＨのホスフォリパーゼをホスフォリパーゼＤ（ＰＬＤＰ）に変更し界面活性剤を添加した試薬Ｉを用いて、吸光度を測定した。
試薬Ｉ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ７．０） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
ＨＤＡＯＳ ０．７ｍｍｏｌ／Ｌ
プルロニックＦ６８ ０．０３ｗ／ｖ％
カタラーゼ ６００Ｕ／Ｌ
コレステロールオキシダーゼ １．４Ｕ／ｍＬ
コレステロールエステラーゼ ０．８Ｕ／ｍＬ
ホスフォリパーゼＤ ５．０Ｕ／ｍＬ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ７．０） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
ＨＤＡＯＳ ０．７ｍｍｏｌ／Ｌ
プルロニックＦ６８ ０．０３ｗ／ｖ％
カタラーゼ ６００Ｕ／Ｌ
コレステロールオキシダーゼ １．４Ｕ／ｍＬ
コレステロールエステラーゼ ０．８Ｕ／ｍＬ
ホスフォリパーゼＤ ５．０Ｕ／ｍＬ
試薬Ｉが添加されてからの各分画における吸光度の経時変化の結果を図４に示す。ＨＤＬ３に対して特異的に反応することが見て取れる。
比較例３
実施例２と同様の方法を用いて、下記に記載の組成の試薬Ｊおよび試薬Ｋを用いて、吸光度を測定した。
実施例２と同様の方法を用いて、下記に記載の組成の試薬Ｊおよび試薬Ｋを用いて、吸光度を測定した。
試薬Ｊ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ７．０） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
ＨＤＡＯＳ ０．７ｍｍｏｌ／Ｌ
プルロニックＰ１０３ ０．０３ｗ／ｖ％
カタラーゼ ６００Ｕ／Ｌ
コレステロールオキシダーゼ １．４Ｕ／ｍＬ
コレステロールエステラーゼ ０．８Ｕ／ｍＬ
ホスフォリパーゼＤ ５．０Ｕ／ｍＬ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ７．０） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
ＨＤＡＯＳ ０．７ｍｍｏｌ／Ｌ
プルロニックＰ１０３ ０．０３ｗ／ｖ％
カタラーゼ ６００Ｕ／Ｌ
コレステロールオキシダーゼ １．４Ｕ／ｍＬ
コレステロールエステラーゼ ０．８Ｕ／ｍＬ
ホスフォリパーゼＤ ５．０Ｕ／ｍＬ
試薬Ｋ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ６．６） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
アジ化ナトリウム ０．１％
エマルゲン１２０ １．０％
４−アミノアンチピリン ４．０ｍｍｏｌ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ２．４Ｕ／ｍＬ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ６．６） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
アジ化ナトリウム ０．１％
エマルゲン１２０ １．０％
４−アミノアンチピリン ４．０ｍｍｏｌ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ２．４Ｕ／ｍＬ
試薬Ｋが添加されてからの各分画における吸光度の経時変化の結果を図５に示す。ＨＤＬ３に対して特異的に反応することが見て取れる。
比較例４
実施例２と同様の方法を用いて、比較例３で使用した試薬Ｊと下記に記載の組成の試薬Ｌを用いて、吸光度を測定した。
実施例２と同様の方法を用いて、比較例３で使用した試薬Ｊと下記に記載の組成の試薬Ｌを用いて、吸光度を測定した。
試薬Ｌ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ６．６） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
アジ化ナトリウム ０．１％
エマルゲン９０９ １．０％
４−アミノアンチピリン ４．０ｍｍｏｌ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ２．４Ｕ／ｍＬ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ６．６） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
アジ化ナトリウム ０．１％
エマルゲン９０９ １．０％
４−アミノアンチピリン ４．０ｍｍｏｌ／Ｌ
ペルオキシダーゼ ２．４Ｕ／ｍＬ
試薬Ｌが添加されてからの各分画における吸光度の経時変化の結果を図６に示す。ＨＤＬ３に対して特異的に反応することが見て取れる。
比較例５
以下の試薬Ｍを調製し、試薬Ｄと組み合わせることにより被検試料中のＨＤＬ−Ｃ（Ｃはコレステロール、以下同様）を測定し、その値から、比較例２の試薬Ｉ、試薬Ｄを使用しＨＤＬ３−Ｃを測定した値を除する事によりＨＤＬ２−Ｃを算出した。それぞれの検体のＨＤＬ−Ｃ、ＨＤＬ３−Ｃ、ＨＤＬ２−Ｃ値を表６に示す。
以下の試薬Ｍを調製し、試薬Ｄと組み合わせることにより被検試料中のＨＤＬ−Ｃ（Ｃはコレステロール、以下同様）を測定し、その値から、比較例２の試薬Ｉ、試薬Ｄを使用しＨＤＬ３−Ｃを測定した値を除する事によりＨＤＬ２−Ｃを算出した。それぞれの検体のＨＤＬ−Ｃ、ＨＤＬ３−Ｃ、ＨＤＬ２−Ｃ値を表６に示す。
試薬Ｍ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ７．０） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
ＨＤＡＯＳ ０．７ｍｍｏｌ／Ｌ
プルロニックＰ８８ ０．１ｗ／ｖ％
カタラーゼ ６００Ｕ／Ｌ
コレステロールオキシダーゼ １．４Ｕ／ｍＬ
コレステロールエステラーゼ ０．８Ｕ／ｍＬ
ホスフォリパーゼＤ ５．０Ｕ／ｍＬ
ＢＥＳ緩衝液 （ｐＨ７．０） １００ｍｍｏｌ／Ｌ
ＨＤＡＯＳ ０．７ｍｍｏｌ／Ｌ
プルロニックＰ８８ ０．１ｗ／ｖ％
カタラーゼ ６００Ｕ／Ｌ
コレステロールオキシダーゼ １．４Ｕ／ｍＬ
コレステロールエステラーゼ ０．８Ｕ／ｍＬ
ホスフォリパーゼＤ ５．０Ｕ／ｍＬ
Claims (14)
- 被検試料にホスフォリパーゼＣ及び／又はスフィンゴミエリナーゼを作用させ、コレステロールエステラーゼ及びコレステロールオキシダーゼを含む消去系によりコレステロールを消去する第１工程と、反応系内に残存するコレステロールを定量する第２工程を含む、高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法。
- 前記第１工程を、高密度リポタンパク質３以外のリポタンパク質と反応する界面活性剤の存在下で行う請求項１記載の方法。
- 前記界面活性剤が、ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテルである少なくとも１種の非イオン界面活性剤である請求項２記載の方法。
- 前記界面活性剤が、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン縮合物、ポリオキシエチレン−ステアリルアミンから成る群より選ばれる少なくとも１種の非イオン界面活性剤及び／又はアミドエーテルサルフェートから成る群より選ばれる少なくとも１種の陰イオン界面活性剤である請求項２記載の方法。
- 前記界面活性剤が、ヤシ油脂肪酸―アミドプロピルジメチル−アミノ酢酸ベタイン、アルキルジメチル−アミノ酢酸ベタイン及びラウリルベタインから成る群より選ばれる少なくとも１種の両性界面活性剤である請求項２記載の方法。
- 前記界面活性剤が、ラウリルトリメチルアンモニウムクロライドである陽イオン界面活性剤である請求項２記載の方法。
- 前記第２工程を、少なくとも高密度リポタンパク質３と反応する界面活性剤の存在下で行う請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
- 第２工程で用いる界面活性剤が、ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテル、ポリオキシエチレンラウリルエーテル及びp-イソオクチルポリオキシエチレンフェノールホルムアルデヒドポリマーから成る群より選ばれる少なくとも１種の非イオン界面活性剤である請求項７記載の方法。
- 第２工程で用いる界面活性剤が、ラウリルジメチル−アミノ酢酸ベタインから成る群より選ばれる少なくとも１種の両性界面活性剤及び／又は、ポリオキシエチレンラウリルエーテルから成る群より選ばれる少なくとも１種の非イオン界面活性剤である請求項７記載の方法。
- 第２工程で用いる界面活性剤が、脂肪酸族リン酸エステルである少なくとも１種の陰イオン界面活性剤である請求項７記載の方法。
- 第２工程で用いられる界面活性剤が、ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテル、ポリオキシエチレントリベンジルフェニルエーテル、ポリオキシアルキレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン多環フェニルエーテル及びポリオキシエチレンクミルフェニルエーテルから成る群より選ばれる少なくとも１種の、ＨＬＢが１１〜１４の間の非イオン界面活性剤である請求項７記載の方法。
- 第２工程で用いる界面活性剤が、イミダゾリン型の少なくとも１種の両性界面活性剤である請求項７記載の方法。
- 第２工程で用いる界面活性剤が、ポリオキシエチレンラウリルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル及びポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテルから成る群より選ばれる少なくとも１種の非イオン界面活性剤である請求項７記載の方法。
- 第２工程で用いる界面活性剤が、ラウリルアルコールアルコキシレートから成る群より選ばれる少なくとも１種の非イオン界面活性剤及び／又はポリオキシエチレン−アルキルフェニルエーテル硫酸エステルナトリウム塩から成る群より選ばれる少なくとも１種の陰イオン界面活性剤である請求項７記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2012525431A JP5706418B2 (ja) | 2010-07-23 | 2011-07-22 | 高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法 |
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2010166317 | 2010-07-23 | ||
| JP2010166317 | 2010-07-23 | ||
| PCT/JP2011/066672 WO2012011554A1 (ja) | 2010-07-23 | 2011-07-22 | 高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法 |
| JP2012525431A JP5706418B2 (ja) | 2010-07-23 | 2011-07-22 | 高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPWO2012011554A1 JPWO2012011554A1 (ja) | 2013-09-09 |
| JP5706418B2 true JP5706418B2 (ja) | 2015-04-22 |
Family
ID=45496972
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2012525431A Active JP5706418B2 (ja) | 2010-07-23 | 2011-07-22 | 高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20130171674A1 (ja) |
| EP (1) | EP2597158B1 (ja) |
| JP (1) | JP5706418B2 (ja) |
| KR (1) | KR101833351B1 (ja) |
| CN (1) | CN103080332B (ja) |
| AU (1) | AU2011280487B2 (ja) |
| CA (1) | CA2809045C (ja) |
| DK (1) | DK2597158T3 (ja) |
| WO (1) | WO2012011554A1 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013152147A (ja) * | 2012-01-25 | 2013-08-08 | Denka Seiken Co Ltd | 高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法 |
| WO2021246426A1 (ja) | 2020-06-02 | 2021-12-09 | デンカ株式会社 | リポ蛋白コレステロールの定量方法およびキット |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101833350B1 (ko) * | 2010-07-23 | 2018-02-28 | 덴카 세이켄 가부시키가이샤 | 고밀도 리포단백질3 중의 콜레스테롤의 정량 방법 |
| DK2682476T3 (en) | 2011-02-28 | 2017-04-24 | Denka Seiken Kk | Method for Quantifying Cholesterol in High Density Lipoprotein 2 and Using a Reagent Kit for the Method |
| WO2014034823A1 (ja) * | 2012-08-31 | 2014-03-06 | 協和メデックス株式会社 | 高密度リポ蛋白中のコレステロールの測定方法 |
| JP6182008B2 (ja) | 2013-07-24 | 2017-08-16 | デンカ生研株式会社 | 高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法及び定量試薬 |
| CN107449748B (zh) * | 2017-08-10 | 2020-08-28 | 东软威特曼生物科技(南京)有限公司 | 高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒及其使用方法 |
| WO2019175881A1 (en) * | 2018-03-14 | 2019-09-19 | Technion Research & Development Foundation Limited | A prognostic biomarker in cancer |
| WO2019177093A1 (ja) * | 2018-03-15 | 2019-09-19 | デンカ生研株式会社 | 高密度リポ蛋白質中のコレステロールの定量方法 |
| JP7153460B2 (ja) * | 2018-03-30 | 2022-10-14 | シスメックス株式会社 | リポタンパク質の取り込み能を測定する方法及び試薬 |
| CN109813921B (zh) * | 2019-02-25 | 2022-04-19 | 安徽大千生物工程有限公司 | 基于多克隆抗体制备的hdl3免疫比浊法检测试剂盒及其制备使用方法 |
| CN109837325B (zh) * | 2019-03-15 | 2022-08-12 | 安徽大千生物工程有限公司 | 一种基于修饰鞘磷脂酶优化的hdl3比色法检测试剂盒及其制备使用方法 |
| JP7455674B2 (ja) | 2020-06-02 | 2024-03-26 | デンカ株式会社 | キットおよび方法 |
| CN111926057A (zh) * | 2020-08-14 | 2020-11-13 | 江西乐成生物医疗有限公司 | 高密度脂蛋白3胆固醇的定量方法、测定试剂及制备方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001346598A (ja) * | 2000-06-07 | 2001-12-18 | Internatl Reagents Corp | Ｈｄｌ亜画分の分析方法 |
| WO2009048143A1 (ja) * | 2007-10-10 | 2009-04-16 | Denka Seiken Co., Ltd. | small,dense LDLコレステロールの定量方法およびキット |
| JP2009207463A (ja) * | 2008-03-06 | 2009-09-17 | Denka Seiken Co Ltd | Ｈｄｌ３−ｃの測定方法及びｈｄｌ３−ｃ測定用試薬 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3288033B2 (ja) | 1996-12-09 | 2002-06-04 | デンカ生研株式会社 | 高密度リポ蛋白中のコレステロール定量用試薬 |
| JP4498143B2 (ja) * | 2002-10-16 | 2010-07-07 | 協和メデックス株式会社 | 高密度リポ蛋白中のコレステロールの測定方法および試薬 |
| EP1555327A4 (en) * | 2002-10-16 | 2006-08-02 | Kyowa Medex Co Ltd | PROCESS AND REAGENT FOR MEASURING CHOLESTEROL IN HIGH DENSITY LIPOPROTEINS |
| JP4796489B2 (ja) * | 2004-04-15 | 2011-10-19 | 協和メデックス株式会社 | 高密度リポ蛋白中のコレステロールの測定方法 |
| US20090181413A1 (en) * | 2005-09-30 | 2009-07-16 | Denka Seiken Co., Ltd. | Simultaneous and differential quantification of two target analytes in biological sample |
| GB0609493D0 (en) * | 2006-05-12 | 2006-06-21 | Oxford Biosensors Ltd | Cholesterol sensor |
| JP2009048143A (ja) * | 2007-08-23 | 2009-03-05 | Seiko Epson Corp | 液晶装置、液晶装置の製造方法、電子機器 |
-
2011
- 2011-07-22 EP EP11809724.5A patent/EP2597158B1/en active Active
- 2011-07-22 DK DK11809724.5T patent/DK2597158T3/en active
- 2011-07-22 KR KR1020137003546A patent/KR101833351B1/ko active IP Right Grant
- 2011-07-22 CN CN201180036040.6A patent/CN103080332B/zh active Active
- 2011-07-22 JP JP2012525431A patent/JP5706418B2/ja active Active
- 2011-07-22 WO PCT/JP2011/066672 patent/WO2012011554A1/ja active Application Filing
- 2011-07-22 CA CA2809045A patent/CA2809045C/en active Active
- 2011-07-22 AU AU2011280487A patent/AU2011280487B2/en active Active
- 2011-07-22 US US13/811,562 patent/US20130171674A1/en not_active Abandoned
-
2019
- 2019-01-17 US US16/250,850 patent/US20190154711A1/en active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001346598A (ja) * | 2000-06-07 | 2001-12-18 | Internatl Reagents Corp | Ｈｄｌ亜画分の分析方法 |
| WO2009048143A1 (ja) * | 2007-10-10 | 2009-04-16 | Denka Seiken Co., Ltd. | small,dense LDLコレステロールの定量方法およびキット |
| JP2009207463A (ja) * | 2008-03-06 | 2009-09-17 | Denka Seiken Co Ltd | Ｈｄｌ３−ｃの測定方法及びｈｄｌ３−ｃ測定用試薬 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| JPN6011047425; ＬＯＴＴＩＮ Ｈ．， ｅｔ ａｌ．: 'Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｇｌｙｃｅｒｏ- ａｎｄ ｓｐｈｉｎｇｏ-ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｌｙｓｉｓ ｏｎ ｈｕｍａｎ ｈｉｇｈ-ｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｆｌｕｉ' Ｂｉｏｃｈｉｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ａｃｔａ ｖｏｌ．１３０１， ｎｏ．１-２, 1996, ｐ．１２７-１３２ * |
| JPN6011047426; 三井田孝ほか: 'ＨＤＬ亜分画研究の最前線' 臨床病理 ｖｏｌ．５８， ｎｏ．６, 201006, ｐ．６０６-６１２ * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013152147A (ja) * | 2012-01-25 | 2013-08-08 | Denka Seiken Co Ltd | 高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法 |
| WO2021246426A1 (ja) | 2020-06-02 | 2021-12-09 | デンカ株式会社 | リポ蛋白コレステロールの定量方法およびキット |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20190154711A1 (en) | 2019-05-23 |
| CA2809045C (en) | 2019-01-08 |
| KR101833351B1 (ko) | 2018-02-28 |
| JPWO2012011554A1 (ja) | 2013-09-09 |
| WO2012011554A1 (ja) | 2012-01-26 |
| CN103080332A (zh) | 2013-05-01 |
| EP2597158B1 (en) | 2017-03-15 |
| CA2809045A1 (en) | 2012-01-26 |
| AU2011280487A1 (en) | 2013-03-14 |
| EP2597158A1 (en) | 2013-05-29 |
| DK2597158T3 (en) | 2017-05-22 |
| EP2597158A4 (en) | 2014-01-15 |
| KR20130043183A (ko) | 2013-04-29 |
| AU2011280487B2 (en) | 2016-01-14 |
| US20130171674A1 (en) | 2013-07-04 |
| CN103080332B (zh) | 2014-11-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5706418B2 (ja) | 高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法 | |
| JP5671029B2 (ja) | 高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法 | |
| US20210278424A1 (en) | Method and reagent for quantifying cholesterol in high density lipoprotein 3 | |
| JP5653434B2 (ja) | 高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法 | |
| JP5956420B2 (ja) | 高密度リポタンパク質２中のコレステロールの定量方法およびそのための試薬キット | |
| JP2014030393A (ja) | 高密度リポ蛋白（ｈｄｌ）中のコレステロールの定量方法 | |
| EP2837693B1 (en) | Method for quantifying subfraction of cholesterol (-c) in high-density lipoprotein (hdl) | |
| JP6022165B2 (ja) | 高密度リポタンパク質３中のコレステロールの定量方法 | |
| JP4865880B2 (ja) | 低密度リポ蛋白中のコレステロールの定量方法 | |
| JP2017060522A (ja) | 高密度リポ蛋白（ｈｄｌ）中のコレステロールの定量方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20140624 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140821 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20150210 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20150226 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5706418 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313111 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |