JP6022165B2 - 高密度リポタンパク質3中のコレステロールの定量方法 - Google Patents
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Description
HDL2分画とHDL3分画は、以下の様にして画分した。HDLを含む被検試料、すなわち、血清に塩化ナトリウム及び臭化ナトリウムを用いた溶液を用いて、超遠心によりHDL2とHDL3との境目の比重(1.125)で別れるように画分し、それぞれの画分を回収した。
BES緩衝液 (pH6.6) 100mmol/L
TOOS 1.5mmol/L
プルロニックF88 0.05w/v%
カタラーゼ 600U/mL
コレステロールオキシダーゼ 0.8U/mL
コレステロールエステラーゼ 2.0U/mL
スフィンゴミエリナーゼ 0.5U/mL
BES緩衝液 (pH7.0) 100mmol/L
アジ化ナトリウム 0.1%
各種界面活性剤※ 2.0w/v%
4−アミノアンチピリン 4.0mmol/L
ペルオキシダーゼ 3.5U/mL
※2種類以上を組み合わせている場合は合わせて2.0w/v%
超遠心を用いてCM〜VLDL分画、LDL分画、HDL2分画、HDL3分画を画分し、下記試薬Cを反応させ、さらに、下記試薬Dを添加し、測定を行った。測定は、各分画2μLに試薬Cを150μL添加し、5分加温反応の後、試薬Dを50μL添加しさらに5分加温反応させ、主波長600nm、副波長700nmの吸光度を測定した。
BES緩衝液 (pH6.6) 100mmol/L
HDAOS 0.56mmol/L
ノニオンOT−221 0.01w/v%
カタラーゼ 600U/mL
コレステロールオキシダーゼ 0.8U/mL
コレステロールエステラーゼ 2.8U/mL
BES緩衝液 (pH7.0) 100mmol/L
アジ化ナトリウム 0.1%
Newcol−610 2.0w/v%
4−アミノアンチピリン 4.0mmol/L
ペルオキシダーゼ 3.5U/mL
ヒト血清試料に、上記試薬Aを反応させ、さらに、下記試薬Eを添加し、測定を行った。測定は、血清2μLに試薬Aを150μL添加し、5分加温反応の後、試薬Eを50μL添加しさらに単位時間加温反応させ、主波長600nm、副波長700nmの吸光度を測定してHDL3コレステロールとし、また、別に測定した総HDLコレステロールをもとに計算によりHDL2コレステロールを求めた。
BES緩衝液 (pH7.0) 100mmol/L
アジ化ナトリウム 0.1%
Newcol−710 2.0w/v%
4−アミノアンチピリン 4.0mmol/L
ペルオキシダーゼ 3.5U/mL
ヒト血清試料に、下記試薬Fを反応させ、さらに、上記試薬Eを添加し、測定を行った。測定は、血清2μLに試薬Fを150μL添加し、5分加温反応の後、試薬Eを50μL添加しさらに単位時間加温反応させ、主波長600nm、副波長700nmの吸光度を測定してHDL3コレステロールとし、また、別に測定した総HDLコレステロールをもとに計算によりHDL2コレステロールを求めた。
BES緩衝液 (pH6.6) 100mmol/L
HDAOS 0.56mmol/L
ノニオンOT−221 0.01w/v%
カタラーゼ 600U/mL
コレステロールオキシダーゼ 0.8U/mL
コレステロールエステラーゼ 2.0U/mL
スフィンゴミエリナーゼ 0.5U/mL
Claims (1)
- 被検試料に高密度リポタンパク質3と特異的に反応する界面活性剤を反応させ、コレステロールを定量することを含み、前記界面活性剤が、ポリオキシエチレン多環フェニルエーテル及びポリオキシエチレンスチレン化フェニルエーテルから成る群より選ばれる少なくとも一種である、高密度リポタンパク質3中のコレステロールの定量方法(ただし、被検試料にホスフォリパーゼC及び/又はスフィンゴミエリナーゼを作用させ、コレステロールエステラーゼ及びコレステロールオキシダーゼを含む消去系によりコレステロールを消去する第1工程と、反応系内に残存するコレステロールを定量する第2工程を含む、高密度リポタンパク質3中のコレステロールの定量方法であって、前記第2工程を、少なくとも高密度リポタンパク質3と反応する界面活性剤の存在下で行い、第2工程で用いられる界面活性剤が、ポリオキシエチレンジスチレン化フェニルエーテル、ポリオキシエチレントリベンジルフェニルエーテル、ポリオキシアルキレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン多環フェニルエーテル及びポリオキシエチレンクミルフェニルエーテルから成る群より選ばれる少なくとも1種の、HLBが11〜14の間の非イオン界面活性剤である方法を除く)。
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