KR101394802B1 - 소립자 저비중 리포 단백의 정량 시약 - Google Patents

소립자 저비중 리포 단백의 정량 시약 Download PDF

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Abstract

본 발명은 검체의 전처리 조작을 하지 않고, 신속하고 또한 간편한 자동 분석 장치 대응의 small, dense LDL의 분별 측정용 시약을 제공한다. 본 발명은 콜레스테롤에스테라제 및 소립자 저비중 리포 단백 이외의 리포 단백에 작용하는 계면 활성제 0.05 내지 1.0 g/L의 존재 하에서 피검체 시료 중의 소립자 저비중 리포 단백 이외의 리포 단백을 소거하는 제1 공정과, 이어서 상기 제1 공정에서 잔존한 소립자 저비중 리포 단백 중의 콜레스테롤을 정량하는 제2 공정을 포함하는, 피검체 시료 중의 소립자 저비중 리포 단백 중의 콜레스테롤 정량 방법에 관한 것이다.
콜레스테롤에스테라제, 콜레스테롤옥시다아제, 카탈라아제, 소립자 저비중 리포 단백 이외의 리포 단백, 계면 활성제, 소립자 저비중 리포 단백 중의 콜레스테롤,

Description

소립자 저비중 리포 단백의 정량 시약{REAGENT FOR DETERMINATION OF QUANTITY OF SMALL DENSE LOW-DENSITY LIPOPROTEIN}
본 발명은 동맥 경화의 진단에 중요한 small, dense LDL 중의 콜레스테롤 측정 시약에 관한 것이다.　
저비중 리포 단백(LDL)은 혈액 내에 있어서의 콜레스테롤 운반의 주역으로서, 동맥 경화성 질환의 위험 인자인 LDL 중에서도 특히 입자 크기가 작고 평균적인 LDL보다 고비중인 소립자 LDL(small, dense LDL)은 동맥 경화 야기성이 통상의LDL보다 수배 높은 것이 알려져 있다.　 small, dense LDL의 증가는 동맥 경화성 질환의 주요한 위험 인자의 하나로서, 분별 측정하는 것은 임상상 매우 중요하다.
종래의 small, dense LDL 측정법은 초원심법, 전기 영동법, 고속 액체 크로마토그래피를 이용하는 방법 등이 있지만, 이 방법은 비싼 설비를 필요로 하고, 측정에 상당한 시간을 요하기 때문에 간편하지 않다.　
자동 분석 장치를 이용하여 small, dense LDL을 측정하는 방법으로서는, 이온 강도의 차에 의해 소립자 LDL을 혼탁 또는 용해시키고 흡광도의 차에 의해 소립자 LDL을 측정하는 방법이 있다(특허 문헌　 1을　 참조). 그러나, 이 방법에서는 탁도에 의한 흡광도차를 측정하고 있기 때문에, 특이성이나 정밀도가 불충분하였 다.　
또한, small, dense LDL 중의 콜레스테롤이나 중성 지방을 폴리 음이온과 이가 양이온으로 이루어지는 분리제와 자동 분석 장치 대응의 시약과 조합하여 측정하는 방법이 알려져 있다(특허 문헌　 2를　 참조). 이 방법에서는, 초원심법이나 전기 영동법과 비교하여 간편하게 small, dense LDL 중의 지질 성분을 측정할 수 있어, 특이성이나 정밀도가 우수하지만, 검체를 전처리하여 LDL을 small, dense LDL과 그것 이외의 LDL로 분리하는 조작이 필요하였다.　
특허 문헌 1: 일본 특허 공개 제2003-28882호 공보
특허 문헌 2: WO2004/053500호 공보
[발명의 개시]
[발명이 해결하고자 하는 과제]
본 발명의 목적은, 검체의 전처리 조작을 하지 않고, 신속하고 또한 간편한 자동 분석 장치 대응의 small, dense LDL의 분별 측정용 시약을 제공하는 것이다.　
[과제를 해결하기 위한 수단]
본 발명자들은 예의 연구의 결과, 다양한 리포 단백을 함유하는 피검체 시료 중의 콜레스테롤을 콜레스테롤에스테라제 및 콜레스테롤옥시다아제 또는 콜레스테롤데히드로게나아제로 측정할 때, 특정한 계면 활성제를 특정한 농도로 이용함으로써, 효소의 small, dense LDL에 대한 반응 속도와 그것 이외의 리포 단백에 대한 반응 속도를 바꿀 수 있고, 그 결과, small, dense LDL 이외의 리포 단백을 반응계 밖으로 유도할 수 있는 것을 발견하였다.　 이 계면 활성제를 특정한 농도로 자동 분석 장치용 시약의 제1 공정에 이용한 경우, 효소의 small, dense LDL에 대한 반응 속도가 저하되어, small, dense LDL과 효소의 반응이 지연된다.　 한편, 상기 특정 농도의 특정한 계면 활성제는 small, dense LDL 이외의 리포 단백에 작용하기 때문에, 이들을 효소와 반응시킴으로써 반응계 밖으로 유도할 수 있다.　 본 발명자 등은 또한 콜레스테롤에스테라제의 농도를 규정함으로써 이 효소의 small, dense LDL에 대한 반응 속도를 저하시켜 효소 반응을 지연시키는 데 비하여, 효소의 small, dense LDL 이외의 리포 단백에 대한 반응 속도가 상승하는 것을 발견하였다.　 이와 같이, 제1 공정에서 small, dense LDL 이외의 리포 단백을 반응계 밖으로 유도한 후, 남은 small, dense LDL을 제2 공정에서 효소와 반응시켜 small, dense LDL 중의 콜레스테롤을 측정하는 것에 성공하여, 본 발명을 완성시키기에 이르렀다.　
즉, 본 발명은 이하와 같다.　
[1] 콜레스테롤에스테라제 및 소립자 저비중 리포 단백 이외의 리포 단백에 작용하는 계면 활성제 0.05 내지 1.0 g/L의 존재 하에서 피검체 시료 중의 소립자 저비중 리포 단백 이외의 리포 단백을 소거하는 제1 공정과, 이어서 상기 제1 공정에서 잔존한 소립자 저비중 리포 단백 중의 콜레스테롤을 정량하는 제2 공정을 포함하는, 피검체 시료 중의 소립자 저비중 리포 단백 중의 콜레스테롤 정량 방법.
[2] 제1 공정에서 소립자 저비중 리포 단백 이외의 리포 단백에 작용하는 계면 활성제가 폴리옥시에틸렌알킬에테르, 폴리옥시에틸렌알킬페닐에테르, 폴리옥시에틸렌알킬아민 및 라우릴알코올알콕시레이트로 이루어지는 군에서 선택되는 비이 온 계면 활성제, 폴리옥시에틸렌알킬에테르황산염, 알킬황산염, 아미드에테르황산염, 알킬타우린산염 및 인산에스테르형으로 이루어지는 군에서 선택되는 음이온 계면 활성제, 알킬메틸암모늄염, 제4급 암모늄염 및 모노 직쇄 알킬형으로 이루어지는 군에서 선택되는 양이온 계면 활성제, 또는 라우릴베타인, 디메틸알킬베타인, 아미드베타인형, 이미다졸린형 및 알킬디아미노에틸글리신나트륨으로 이루어지는 군에서 선택되는 양쪽성 계면 활성제인 것을 특징으로 하는, [1]의 소립자 저비중 리포 단백 중의 콜레스테롤 정량 방법.
[3] 제1 공정에서 이용하는 콜레스테롤에스테라제의 농도가 0.6 내지 3.0 U/mL인 것을 특징으로 하는, [1] 또는 [2]의 소립자 저비중 리포 단백 중의 콜레스테롤 정량 방법.
[4] 제1 공정에서, 콜레스테롤옥시다아제 및 카탈라아제를 더 첨가하는, [1] 내지 [3] 중 어느 하나의 소립자 저비중 리포 단백 중의 콜레스테롤 정량 방법.
[5] 제1 공정에서, 콜레스테롤옥시다아제 및 4아미노안티피린을 더 첨가하는, [1] 내지 [3] 중 어느 하나의 소립자 저비중 리포 단백 중의 콜레스테롤 정량 방법.
[6] 제2 공정에서, 적어도 소립자 저비중 리포 단백에 작용하는 계면 활성제의 존재 하에 콜레스테롤 측정용 효소가 첨가되는 것을 특징으로 하는, [1] 내지 [5] 중 어느 하나의 피검체 시료 중의 소립자 저비중 리포 단백 중의 콜레스테롤 정량 방법.
[7] 제2 공정에서 이용되는 적어도 소립자 저비중 리포 단백에 작용하는 계 면 활성제가 모든 리포 단백에 작용하는 계면 활성제인 것을 특징으로 하는, [6]의 소립자 저비중 리포 단백 중의 콜레스테롤 정량 방법.
[8] 제2 공정에서 이용되는 적어도 소립자 저비중 리포 단백에 작용하는 계면 활성제가 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체 또는 그의 유도체, 또는 폴리알킬렌옥시드 유도체인 것을 특징으로 하는, [6] 또는 [7]의 소립자 저비중 리포 단백 중의 콜레스테롤 정량 방법.
[9] 제2 공정에서 이용되는 적어도 소립자 저비중 리포 단백에 작용하는 계면 활성제를 리포프로테인리파아제의 존재 하에서 이용하는 것을 특징으로 하는, [6] 내지 [8] 중 어느 하나의 소립자 저비중 리포 단백 중의 콜레스테롤 정량 방법.
[10] 콜레스테롤에스테라제 및 소립자 저비중 리포 단백 이외의 리포 단백에 작용하는 계면 활성제 0.05 내지 1.0 g/L를 조합하여 이루어지는 것을 특징으로 하는, 피검체 시료 중의 소립자 저비중 리포 단백 이외의 리포 단백의 소거제.
[11] 콜레스테롤에스테라제의 농도가 0.6 내지 3.0 U/mL인, [10]의 소립자 저비중 리포 단백 이외의 리포 단백의 소거제.
[12] 콜레스테롤에스테라제, 소립자 저비중 리포 단백 이외의 리포 단백에 작용하는 계면 활성제 0.05 내지 1.0 g/L, 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체 또는 그의 유도체, 또는 폴리알킬렌옥시드 유도체를 조합하여 이루어지는 것을 특징으로 하는, 소립자 저비중 리포 단백 정량용 시약.
[13] 제1 시약 조성물 및 제2 시약 조성물을 포함하는, [12]의 소립자 저비 중 리포 단백 정량용 시약으로서, 제1 시약 조성물에 콜레스테롤에스테라제 및 소립자 저비중 리포 단백 이외의 리포 단백에 작용하는 계면 활성제 0.05 내지 1.0 g/L가 포함되고, 제2 시약 조성물 중에 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체 또는 그의 유도체, 또는 폴리알킬렌옥시드 유도체가 포함되는 소립자 저비중 리포 단백 정량용 시약.
[발명의 효과]
본 발명의 특정한 계면 활성제를 포함하는 시약을 리포 단백질을 포함하는 피검체 시료에 첨가함으로써 리포 단백 중의 small, dense LDL을 필터나 원심 분리를 이용한 분리 조작을 하지 않고, 직접, 선택적으로 측정할 수 있다.　
본 명세서는 본원의 우선권의 기초인 일본국 특허 출원 제2007-49533호의 명세서 및/또는 도면에 기재되는 내용을 포함한다.　
도 1은 실시예 1에 있어서의 small, dense LDL을 선택적으로 작용시키기 전에 small, dense LDL 이외의 리포 단백 중 콜레스테롤을 small, dense LDL 콜레스테롤 정량 반응계 밖으로 유도하는 것을 도시하는, 제1 시약 반응에 있어서의 각 리포 단백의 반응성을 도시한 도면이다.　
도 2는 제1 공정의 계면 활성제의 농도에 대한 sd LDL, Large LDL의 반응성을 도시한 도면이다.　
도 3은 콜레스테롤에스테라제 활성을 변동시킨 경우의, Large LDL 및 small, dense LDL에 대한 반응성을 도시한 도면이다.　
[발명을 실시하기 위한 최선의 형태]
이하, 본 발명에 관해서 상세히 설명한다.　
리포 단백질은 크게 VLDL, LDL 및 HDL의 분획으로 나누어지고, LDL은 다시 small, dense LDL과 그것 이외의 아분획으로 나누어진다.　 small, dense LDL을 소립자 LDL, SLDL(small LDL), dense LDL, sd LDL이라고 부르는 경우도 있고, 또한 그것 이외의 LDL을 LLDL(large LDL), Light LDL라고 부르는 경우도 있다.　 이들 분획 및 아분획은 입자 크기 또는 비중에 따라 구별할 수 있다.　 그 입자 크기의 직경은 보고자에 따라 다르지만 VLDL이 30 nm 내지 80 nm(30 nm 내지 75 nm)이고, LDL이 22 nm 내지 28 nm(19 nm 내지 30 nm), HDL이 직경 7 내지 10 nm이다.　 비중은 VLDL이 1.006 이하, LDL이 1.019 내지 1.063, HDL이 1.063 내지 1.21이다.　 LDL 입자 직경은 그래디언트 겔 전기 영동(GGE)(JAMA, 260, p.1917-21, 1988), NMR(HANDBOOK OF LIPOPROTEIN TESTING 2nd Edition, Nader Rifai 등 편, p.609-623, AACC PRESS: TheFats of Life Summer 2002, LVDD 15 YEAR ANNIVERSARY ISSUE, Volume AVI No.3, p.15-16)에 의해 측정할 수 있고, 비중은 초원심 분리에 의한 분석(Atherosclerosis, 106, p.241-253, 1994: Atherosclerosis, 83, p.59, 1990)에 기초하여 결정할 수 있다.　
본 발명의 방법으로 측정하려고 하는 small, dense LDL은 일반적으로는 LDL 분획 중 직경이 약 22.0 내지 약 25.5 nm의 아분획, 비중 1.040 내지 1.063의 아분획을 가리킨다.　 LDL을 크기에 따라 아분획으로 나누고 있는 것은, LDL 중 입경이 작은 것이 동맥 경화 야기성이 높아, LDL 중에서도 보다 악성도가 높기 때문에, LDL 중에서도 작은 것을 분별 측정할 필요가 있었기 때문이다.　 LDL 내에서 직경 분포나 비중 분포는 연속해 있고, 비중이 어느 정도 이상인 것이 특히 악성도가 높다고 하는 것과 같이 명확히 구별할 수 있는 것이 아니다.　 따라서, 상기한 비중 1.040 내지 1.063라고 하는 값도 small, dense LDL의 특성으로서 확립한 것이 아니고, 널리 이용되고 있고 확립한 값이라고 할 수 있는 LDL의 비중 범위 1.019 내지 1.063를 중앙점에서 나눈 것이다.　 예를 들면, 별도의 보고에서는 1.044 내지 1.060으로 분획된다(Atherosclerosis: 106 241-253 1994). small, dense LDL의 비중을 어떤 범위로 할지는 보고자에 따라 약간의 차이가 있지만, 모두 그 범위에서 분별한 경우의 small, dense LDL의 존재가 임상적인 악성도와 관련하고 있다.　
본 발명에 있어서, small, dense LDL이라고 하는 경우, LDL 중 비중이 작은 것으로서, 임상적으로 동맥 경화 야기성이 그것 이외의 LDL보다도 큰 것, 바람직하게는 LDL의 비중 범위 중 중앙점보다 위의 비중 범위에 속하는 것, 더욱 바람직하게는 비중 1.040 내지 1.063의 범위에 속하는 LDL을 말한다.　
본 발명의 방법은 통상 자동 분석 장치 내에서 행해진다.　 본 발명의 방법에서는 제1 공정에서 small, dense LDL 이외의 LDL(이하 Large LDL 또는 LLDL이라고 하는 경우가 있음)나 그 밖의 VLDL, HDL 등의 리포 단백에 작용하는 계면 활성제를 콜레스테롤에스테라제의 존재 하에서 피검체 시료에 작용시키고, 리포 단백으로부터의 유리에 의해 생긴 콜레스테롤을 콜레스테롤옥시다아제, 콜레스테롤데히드로게나아제 등의 콜레스테롤과 반응하는 효소의 존재 하에서 이 효소와 반응시켜 반응계 밖으로 유도한다.　 여기서, 「계면 활성제가 작용한다」란 계면 활성제가 리포 단백을 분해하여, 리포 단백 중의 콜레스테롤이 유리하는 것을 말한다.　 「소립자 저비중 리포 단백 이외의 리포 단백에 작용하는 계면 활성제」라고 하는 경우, 계면 활성제에 소립자 저비중 리포 단백에 전혀 작용하지 않을 것은 요구되지 않고, 주로 소립자 저비중 리포 단백 이외의 리포 단백에 작용하면 된다.　 예를 들면, 소립자 저비중 리포 단백 이외의 리포 단백에 작용하는 계면 활성제는 소립자 저비중 리포 단백에의 작용이 소립자 저비중 리포 단백 이외의 리포 단백에의 작용보다도 작다.　
상기 제1 공정에서 small, dense LDL 이외의 LDL(이하 Large LDL이라 함)이나 그 밖의 VLDL, HDL 등의 리포 단백과 반응하는 계면 활성제로서는, 비이온 계면 활성제로서 폴리옥시에틸렌알킬에테르, 폴리옥시에틸렌알킬페닐에테르, 폴리옥시에틸렌알킬아민, 라우릴알코올알콕시레이트가, 음이온 계면 활성제로서 폴리옥시에틸렌알킬에테르황산염, 알킬황산염, 아미드에테르황산염, 알킬타우린산염, 인산에스테르형, 양이온 계면 활성제로서 알킬메틸암모늄염, 제4급 암모늄염, 모노 직쇄 알킬형, 양쪽성 계면 활성제로서 라우릴베타인, 디메틸알킬베타인, 아미드베타인형, 이미다졸린형, 알킬디아미노에틸글리신나트륨 등을 들 수 있다.　 상기 계면 활성제의 구체예로서, 비이온 계면 활성제로서는 에멀겐 120, 에멀겐 920, 에멀겐 B-66,에멀겐 A-90(이상 카오사 제조), 노니온 HS-220, 노니온 HS-215, 노니온 K-230, 노니온 NS-220, 노니온 NS-230, 나이민 F-215, 나이민 L-207, 아데카톨 LB-1520(이상 아사히 덴카사 제조), 음이온 계면 활성제로서 에말 20CM, 에말 20T, 에말 E27C, 레베놀 WX(이상 카오사 제조), 산아미드 CF-3, 산아미드 CF-10, 다이아폰 K, 다이아폰 F, 다이아폰 K-SF, 파소프트 EF, 파소프트 EFT, 파소프트 EL, 파소프트 EP, 파소프트 EK, 파소프트 SL, 폴리스타 OMP, 아데카콜 PS-440E, 트랙스 K-40(이상 아사히 덴카사 제조), 양이온 계면 활성제로서 코타민 24P(카오사 제조), 아데카민 MAC-30(아사히 덴카사 제조), 양쪽성 계면 활성제로서 안히톨 24B(카오사 제조), 닛산아논 LG, 닛산아논 BDF-R, 닛산아논 BF, 닛산아논 BL, 닛산아논 BL-SF, 닛산아논 GLM-R-LV 등을 들 수 있다.　 상기 계면 활성제를 일정한 농도 범위에서 이용한 경우, small, dense LDL 이외의 리포 단백에 선택적으로 작용하여, 결과적으로 콜레스테롤에스테라제의 small, dense LDL 중의 콜레스테롤에의 작용을 억제한다.　
Small, dense LDL과 그것 이외의 리포 단백을 차별화하여, small, dense LDL 이외의 리포 단백을 선택적으로 반응시키기 위해서 상기 계면 활성제의 농도를 규정하는 것이 유효하다.　 상기 계면 활성제의 제1 공정 중 농도로서 0.05 g/L 내지 1.0 g/L가 바람직하고, 0.1 g/L 내지 0.8 g/L가 보다 바람직하고, 0.3 g/L 내지 0.6 g/L가 더욱 바람직하다.　 상기 계면 활성제의 농도가 1.5 g/L 이상의 경우, 제1 공정에서 계면 활성제가 small, dense LDL에 작용하기 때문에, small, dense LDL과 그것 이외의 리포 단백을 차별화하는 것이 어려워진다.　
제1 공정에서 상기 계면 활성제 및 콜레스테롤에스테라제와 작용·반응한 리포 단백 중의 콜레스테롤을 콜레스테롤옥시다아제 또는 콜레스테롤데히드로게나아제 등의 콜레스테롤 반응 효소의 존재 하에서 이들 효소와 반응시켜 반응계 밖으로 유도할 수 있다.　 본 발명에 있어서, 「반응계 밖으로 유도한다」란 HDL이나 VLDL, Large LDL 등에 포함되는 콜레스테롤이 small, dense LDL 콜레스테롤의 정량에 영향을 미치지 않도록, HDL, VLDL, Large LDL 등에 포함되는 콜레스테롤을 소거, 응집시키거나, 후의 공정에서 반응하지 않도록 저해하거나 하는 등의 것을 말한다.　 Large LDL이나 그 밖의 VLDL, HDL 등의 리포 단백 중의 콜레스테롤을 반응계 밖으로 유도함으로써, 다음 공정에서 small, dense LDL만이 잔존하게 된다.　 본 발명에 있어서는, 이와 같이 small, dense LDL 이외의 리포 단백을 반응계 밖으로 유도하고, 다음 공정에서 small, dense LDL 이외의 리포 단백의 콜레스테롤을 검출할 수 없도록 하는 것을, 「small, dense LDL과 그것 이외의 리포 단백을 차별화한다」라고 하는 경우가 있다.　
본 발명에 있어서, 「소거」란 피검체 시료 중의 물질을 분해하고, 그 분해물이 다음 공정에서 검출되지 않도록 하는 것을 의미한다.　 즉, 「제1 공정에서 피검체 시료 중의 소립자 저비중 리포 단백 이외의 리포 단백을 소거한다」란 피검체 시료 중의 소립자 저비중 리포 단백 이외의 리포 단백을 분해하고, 그 분해 산물인 소립자 저비중 리포 단백 이외의 리포 단백 유래의 콜레스테롤이 그 후의 제2 공정에서 검출되지 않도록 하는 것을 말한다.　 소거하기 위한 방법으로서는, 콜레스테롤에스테라제, 콜레스테롤옥시다아제를 작용시켜 발생한 과산화수소를, 카탈라아제를 이용하여 물과 산소로 분해하는 방법, 및 페르옥시다아제를 이용하여 수소 공여체와 과산화수소를 반응시켜 무색 퀴논으로 전화하는 방법을 들 수 있지만, 이것에 한정되는 것은 아니다.　
또한, 상기 계면 활성제의 존재 하에서의 콜레스테롤에스테라제의 농도를 규정함으로써, 추가로 small, dense LDL 이외의 리포 단백의 선택적 소거가 가능하게 된다.　 제1 공정 중의 시약에 포함되는 콜레스테롤에스테라제의 농도가 상승함에 따라서, 제1 공정 중에서는 우선 LDL 중에서도 Large LDL의 효소와의 반응성이 상승하여 반응계 밖으로 유도되는데, small, dense LDL의 효소와의 반응성은 상승하지 않는다.　 또한 농도가 상승하면 제1 공정에서의 small, dense LDL의 효소와의 반응성이 상승한다.　 이것은, Large LDL과 효소와의 반응성이 높아지고, small, dense LDL의 효소와의 반응성이 낮아지는 농도에서 콜레스테롤에스테라제를 이용하면 선택적으로 small, dense LDL을 측정할 수 있는 것을 의미한다.　 따라서, 콜레스테롤에스테라제의 농도를 규정함으로써, 보다 선택적으로 small, dense LDL을 측정할 수 있다.　 콜레스테롤에스테라제의 제1 공정의 반응계에서의 농도로서 0.6 U/mL 내지 3.0 U/mL가 바람직하고, 0.9 U/mL 내지 2.4 U/mL가 더욱 바람직하고, 1.2 U/mL 내지 1.5 U/mL가 특히 바람직하다.　 본 발명에 있어서의 콜레스테롤에스테라제로서는 콜레스테롤에스테르를 가수분해하는 효소이면 특별히 한정되지 않으며, 동물 또는 미생물 유래의 콜레스테롤에스테라제를 사용할 수 있다.　
콜레스테롤옥시다아제로서는, 콜레스테롤을 산화하는 능력을 갖는 효소이면 특별히 한정되지 않으며, 동물 또는 미생물 유래의 콜레스테롤옥시다아제를 사용할 수 있다.　 콜레스테롤옥시다아제의 농도는 0.01 내지 20 U/mL가 바람직하고, 0.1 내지 1 U/mL가 특히 바람직하다.　
콜레스테롤데히드로게나아제로서는 콜레스테롤을 산화하여 산화형 조효소를 환원하는 능력을 갖는 효소이면 특별히 한정되지 않으며, 동물 또는 미생물 유래의 콜레스테롤데히드로게나아제를 사용할 수 있다.　 콜레스테롤데히드로게나아제의 농도는 0.01 내지 200 U/mL가 바람직하고, 0.1 내지 100 U/mL가 특히 바람직하다.　
또한, 제1 공정의 반응액 중에는, 각종 리포 단백에 대한 작용을 조정하기 위해서, 임의적으로 리포 단백 분해 효소를 첨가할 수도 있다.　 리포 단백 분해 효소로서는 포스포리파아제 및/또는 리포프로테인리파아제를 사용할 수 있다.　
포스포리파아제로서는 포스포리파아제 A2, 포스포리파아제 C, 포스포리파아제 D, 리소포스포리파아제 등을 사용할 수 있고, 사용 농도는 0.01 내지 10 U/mL가 바람직하고, 0.01 내지 5 U/mL가 더욱 바람직하고, 0.01 내지 1 U/mL가 특히 바람직하다.　
리포프로테인리파아제는 리포 단백질을 분해하는 능력을 갖는 효소이면 특별히 한정되지 않으며 동물 또는 미생물 유래의 리포프로테인리파아제를 사용할 수 있다.　 리포프로테인리파아제의 사용 농도는 0.01 내지 10 U/mL가 바람직하고, 0.01 내지 5 U/mL가 더욱 바람직하고, 0.01 내지 1 U/mL가 특히 바람직하다.　
본 발명의 제2 공정에서는 제1 공정에서 반응하지 않고서 잔존한 small, dense LDL 중의 콜레스테롤을 정량하면 된다.　 제1 공정에서 반응하지 않고서 잔존한 small, dense LDL 중의 콜레스테롤을 정량하기 위해서는, 종래의 LDL의 정량 방법을 사용할 수 있고, 예를 들면, LDL 응집제를 첨가하여 형성된 LDL 특이적 응집물의 함유량을 비탁 측정에 의해서 정량하는 방법, LDL 특이적인 항체에 의한 항원항체 반응을 이용하는 방법, 효소를 이용하여 분해 생성물을 정량하는 방법 등이 있다.　 이 중, 콜레스테롤에스테라제, 콜레스테롤옥시다아제 또는 콜레스테롤데히드로게나아제 등의 콜레스테롤 측정용 효소를 첨가하고 그 반응 생성물을 정량하는 방법이 바람직하다.　 Small, dense LDL 중의 콜레스테롤을 정량하기 위해서는, 적어도 small, dense LDL에 작용하는 계면 활성제를 이용하면 된다.　 적어도 small, dense LDL에 작용하는 계면 활성제란 small, dense LDL에만 작용하는 계면 활성제일 수도 있고, small, dense LDL 이외에 다른 리포 단백에도 작용하는 계면 활성제 또는 모든 리포 단백에 작용하는 계면 활성제일 수도 있다.
Small, dense LDL에 반응하는 계면 활성제로서는 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체 또는 그의 유도체를 바람직하게 사용할 수 있다.　 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체 또는 그의 유도체로서, 예를 들면 플루로닉 17R-4, 플루로닉 L-64, 플루로닉 PE3100, 플루로닉 P-85, 플루로닉 F-88, 플루로닉 P-103, 플루로닉 F-127 등의 플루로닉(등록상표)계 계면 활성제(BASF사, 아사히 덴카 고교가부시끼가이샤) 등을 들 수 있다.　
모든 리포 단백에 작용하는 계면 활성제로서는 총콜레스테롤 측정용 시약 등에 이용되고 있는 계면 활성제이면 어느 것이라도 사용할 수가 있고, 바람직한 예로서 HLB가 11 이상 13 미만, 바람직하게는 12 이상 13 미만인 폴리알킬렌옥시드 유도체를 들 수 있다.　
또한, 상기한 small, dense LDL 이외의 LDL(이하 Large LDL이라 함)이나 그 밖의 VLDL, HDL 등의 리포 단백과 반응하는 계면 활성제를 일정한 농도 이상의 농도로 이용할 수도 있다.　 일정한 농도 이상의 농도란 예를 들면 1.5 g/L 이상이다.
제2 공정에서 이용되는 계면 활성제의 농도는 바람직하게는 0.1 내지 100 g/L 정도이고, 더욱 바람직하게는 1 내지 50 g/L 정도이다.　
콜레스테롤에 반응하는 콜레스테롤 측정용 효소로서 콜레스테롤에스테라제 및 콜레스테롤옥시다아제를 이용하는 경우, 효소 반응에 의해 과산화수소가 생성된다.　 발생한 과산화수소는 페르옥시다아제의 존재 하에서 수소 공여체와 수소 수용체와의 커플링 반응에 의해 형성되는 색소(유색 퀴논)에 의해 파장 400 내지 700 nm에서 측정함으로써 정량할 수 있다.　
수소 공여체로서는 아닐린 유도체가 바람직하고, 아닐린 유도체로서는 N-에틸-N-(2-히드록시-3-술포프로필)-3-메틸아닐린(TOOS), N-에틸-N-(2-히드록시-3-술포프로필)-3,5-디메틸아닐린(MAOS), N-에틸-N-(3-술포프로필)-3-메틸아닐린(TOPS), N-(2-히드록시-3-술포프로필)-3,5-디메톡시아닐린(HDAOS), N-(3-술포프로필)아닐린(HALPS), N-(3-술포프로필)-3-메톡시-5-아닐린(HMMPS) 등을 들 수 있다.　 수소 공여체의 사용 농도는 최종 농도로 0.1 내지 1.5 mmol/L가 바람직하다.　
수소 수용체로서는 4-아미노안티피린이나 메틸벤조티아졸론히드라존 등을 사용할 수 있다.　
콜레스테롤 측정용 효소로서 콜레스테롤에스테라제 및 콜레스테롤데히드로게나아제를 이용하는 경우, 효소 반응에 의해 NAD(P)로부터 NAD(P)H가 발생한다.　 발생한 NAD(P)H는 330 내지 400 nm에서의 흡광도를 측정함으로써 정량할 수 있다.　
본 발명에는 이온 강도 조정제로서 1가의 양이온 및/또는 2가의 양이온 또는 그의 염을 사용할 수 있다.　 이온 강도 조정제를 첨가함으로써, small, dense LDL과 Large LDL을 차별화하기 쉬워진다.　 구체적으로는 염화나트륨, 염화칼륨, 염화마그네슘, 염화망간, 염화칼슘, 염화리튬, 염화암모늄, 황산마그네슘, 황산칼륨, 황산리튬, 황산암모늄, 아세트산마그네슘 등을 사용할 수 있다.　 농도는 0 내지 100 mmol/L로 사용된다.　
반응 온도는 2℃ 내지 45℃로 행하는 것이 바람직하고, 25℃ 내지 40℃로 행하는 것이 더욱 바람직하다.　
반응 시간은 1 내지 30분간 행하는 것이 바람직하고, 3 내지 15분에서 행하는 것이 더욱 바람직하다.　
본 발명의 피검체 시료로서 혈청, 혈장을 사용할 수가 있지만, 이것에 한정되는 것은 아니다.　
본 발명에서 이용하는 자동 분석 장치로서, 예를 들면, TBA-120FR·200FR(도시바), JCA-BM1250·1650·2250(니혼 덴시), HITACHI7180·7700(히다치), AU2700(올림푸스(OLYMPUS)) 등을 들 수 있다.　
본 발명의 측정 방법을 실시함에 있어서, 이용하는 시약을 복수의 시약 조성물로 나눌 수도 있다. 본 발명에 있어서는, 시약으로서는 small, dense LDL 이외의 LDL이나 그 밖의 VLDL, HDL 등의 리포 단백과 반응하는 계면 활성제, 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체 또는 그의 유도체, 콜레스테롤에스테라제나 콜레스테롤옥시다아제 등의 콜레스테롤 측정용 효소, 계면 활성제, 과산화수소를 분해하는 카탈라아제, 과산화수소로부터 커플링 반응에 의해 색소를 형성시키기 위한 페르옥시다아제, 수소 공여체, 완충액 등이 이용된다.　 이들 시약의 각 시약 조성물에의 분배는 시약의 안정성 등을 고려하여 적절하게 분배된다.　 예를 들면, 시약을 제1 시약 조성물과 제2 시약 조성물의 2개로 나누고, 제1 시약 조성물에 small, dense LDL 이외의 LDL이나 그 밖의 VLDL, HDL 등의 리포 단백과 반응하는 계면 활성제, 콜레스테롤에스테라제나 콜레스테롤옥시다아제 등의 콜레스테롤 측정용 효소 등을 포함시키고, 제2 시약 조성물에 Small, dense LDL에 반응하는 계면 활성제나 모든 리포 단백에 작용하는 계면 활성제, 예를 들면 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체 또는 그의 유도체, 콜레스테롤 측정용 효소의 활성을 상승시키기 위한 계면 활성제 등을 포함할 수 있다.　 제2 시약 조성물에는, 추가로 포스포리파아제 또는 리포프로테인리파아제를 포함하게 할 수도 있다.　 이러한 2개의 시약 조성물을 이용하는 경우, 피검체 시료에 제1 시약 조성물을 첨가하고, 1 내지 10분간, 바람직하게는 5분간 정도 반응시킨 후, 제2 시약 조성물을 첨가하고, 또한 1 내지 10분간, 바람직하게는 5분간 정도 반응시키고, 형성된 색소를 정량하면 된다.　 이 경우, 제1 시약 조성물을 첨가하여 small, dense LDL 이외의 LDL(이하 Large LDL이라 함)이나 그 밖의 VLDL, HDL 등의 리포 단백을 계면 활성제에 작용시키고, 효소와 반응시키는 공정이 제1 공정이고, 이어서 제2 시약 조성물을 첨가하여 small, dense LDL을 계면 활성제에 작용시켜 효소와 반응시키고, small, dense LDL 중의 콜레스테롤을 측정하는 공정이 제2 공정이다.　
이하, 본 발명을 실시예에 기초하여 구체적으로 설명하지만, 본 발명은 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.　
[실시예 1]
small, dense LDL 이외의 리포 단백에 작용하는 계면 활성제를 포함하는 시약의 예로서 하기의 조성을 갖는 제1 시약 조성물을 제조하였다.　
제1 시약 조성물
PIPES 완충액, pH7.0 50 mmol/L
콜레스테롤에스테라제 0.6 U/mL
콜레스테롤옥시다아제 0.5 U/mL
폴리옥시에틸렌디스티렌화페닐에테르
에멀겐 A-90 0.3 g/L
소혈청 알부민 0.5％
TOOS 2.0 mmol/L
4-아미노안티피린 4.0 mmol/L
페르옥시다아제 12.0 단위/mL
상기 시약 조성물 중, 폴리옥시에틸렌디스티렌화페닐에테르인 에멀겐 A-90이 small, dense LDL 이외의 리포 단백에 작용하는 계면 활성제이다.　
본 실시예에서는, 제1 시약 조성물의 사용에 의해 small, dense LDL 이외의 리포 단백 중의 콜레스테롤이 정량 반응계 밖으로 유도되었음을 밝히기 위해서 TOOS, 4-아미노안티피린의 발색기질, 페르옥시다아제 효소 등 퀴논 색소 형성에 필요한 성분을 제1 시약 조성물에 첨가하고, 흡광도를 측정하였다.　 따라서 본 실시예에서는, 본 발명의 측정 방법에 있어서의 제1 공정에서의 small, dense LDL 시약 의 반응 상태를 확인하였다.　
초원심법에 의해 분리한 콜레스테롤 함유량 100 mg/dL의 카이로미크론 내지 IDL 분획, small, dense LDL 분획, small, dense LDL 이외의 LDL 분획, HDL 분획, 각 4μL에 제1 시약 300 μL를 첨가하고, 37℃에서 5분간 반응시켰을 때의 각 시간에 있어서의 흡광도(반응 타임 코스)를 측정하였다.　
그 결과를 도 1에 도시하였다.　
도 1에 도시된 바와 같이, 본 실시예에서는 계면 활성제의 작용에 의해 반응액 내의 최초의 5분간 카이로미크론 내지 IDL 분획, small, dense LDL 이외의 LDL 분획(Large LDL) 및 HDL 분획과는 높은 반응성을 나타내지만, small, dense LDL과의 반응성은 낮다.　 즉 small, dense LDL 콜레스테롤 정량을 행할 때, small, dense LDL을 선택적으로 작용시키는 반응의 전단층인 제1 공정에서, 본 실시예에서 이용한 계면 활성제를 콜레스테롤과 반응하는 효소 등과 함께 이용함으로써, 미리 small, dense LDL 이외의 리포 단백을 효소와 반응시키고, 그 콜레스테롤을 소거하여, 반응계 밖으로 유도하는 것이 가능해진다.　
[실시예 2]
제1 시약 조성물 중에 small, dense LDL 이외의 리포 단백에 작용하는 계면 활성제를 포함하는, 하기의 조성을 갖는 제1 및 제2 시약 조성물을 제조하였다.　
제1 시약 조성물
PIPES 완충액, pH7.0 50 mmol/L
콜레스테롤에스테라제[아사히 카세이사 제조] 0.6 U/mL
콜레스테롤옥시다아제[도요 보우사 제조] 0.5 U/mL
카탈라아제 600 U/mL
폴리옥시에틸렌벤질페닐에테르 0 내지 1.2 g/L
소혈청 알부민 1.0％
TOOS 2.0 mmol/L
제2 시약 조성물
PIPES 완충액, pH7.0 50 mmol/L
폴리옥시에틸렌알킬페닐에테르 10 g/L
4-아미노안티피린 4.0 mmol/L
페르옥시다아제 4.0 단위/mL
아지드화나트륨 0.05％
제1 시약 조성물 중, 폴리옥시에틸렌벤질페닐에테르가 small, dense LDL 이외의 리포 단백에 작용하는 계면 활성제이고, 0 내지 1.2 g/L로 이용하여, 각각의 농도에서 small, dense LDL에 작용하는가 아닌가를 확인하였다.　
또한, 제2 시약 조성물 중의 폴리옥시에틸렌알킬페닐에테르는 10 g/L라는 고농도로 포함되고, small, dense LDL에 작용한다.　
초원심법에 의해 분리한 콜레스테롤 함유량 100 mg/dL의 small, dense LDL 분획, 또는 Large LDL 분획에 제1 시약 조성물 300 μL를 첨가하고, 37℃에서 5분간 반응시킨(제1 공정) 후에, 제2 시약 조성물 100 μL를 첨가하여 5분간 반응시키고(제2 공정), 600 nm에서의 흡광도를 측정하였다.　 대조군 시약으로서 small, dense LDL, 및 Large LDL 양쪽에 반응하는 시약으로서, LDL-EX N「세이켄(生硏)」을 사용하였다.　
그 결과를 도 2에 도시하였다.　
도 2에 도시된 바와 같이 계면 활성제를 저농도로 첨가한 경우, small, dense LDL의 흡광도가 Large LDL의 흡광도보다도 높다.　 농도를 상승시킴에 따라서 Large LDL의 흡광도도 상승하여 차가 보이지 않게 되어 간다.　 이것은, 계면 활성제 농도가 낮은 경우, 제1 공정에서 small, dense LDL 이외의 리포 단백이 반응계 밖으로 유도되어, 결과적으로 small, dense LDL을 정확하게 측정할 수 있는 것을 나타낸다.　 이것은 실시예 1에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 방법의 제1 공정에서, 계면 활성제 농도를 저농도로 사용한 경우, small, dense LDL보다도 Large LDL 쪽이 선택적으로 소거되어 반응계 밖으로 유도되고, 계면 활성제 농도를 상승함으로써 Large LDL의 소거량이 감소하여, small, dense LDL과 동등해지는 것을 나타내고 있다.　 이것은, 계면 활성제의 제1 공정 중의 농도를 바람직하게는 0.05 내지 0.9 g/L, 보다 바람직하게는 0.3 내지 0.6 g/L의 농도로 이용함으로써 small, dense LDL 중의 콜레스테롤을 선택적으로 측정할 수 있는 것을 나타낸다.　
[실시예 3]
제1 시약 조성물 중에 small, dense LDL 이외의 리포 단백에 작용하는 각종 계면 활성제를 포함하는 하기의 조성을 갖는 제1 및 제2 시약 조성물을 제조하였다.　
제1 시약 조성물
PIPES 완충액, pH7.0 50 mmol/L
콜레스테롤에스테라제[아사히 카세이사 제조] 1.2 U/mL
콜레스테롤옥시다아제[도요 보우사 제조] 0.5 U/mL
카탈라아제 600 U/mL
각종 계면 활성제 0.3 g/L 또는 0.6 g/L
소혈청 알부민 1.0％
TOOS 2.0 mmol/L
제2 시약 조성물
PIPES 완충액, pH7.0 50 mmol/L
폴리옥시에틸렌알킬페닐에테르 10 g/L
4-아미노안티피린 4.0 mmol/L
페르옥시다아제 4.0 단위/mL
아지드화나트륨 0.05％
초원심법에 의해 분리한 콜레스테롤 함유량 100 mg/dL의 small, dense LDL 분획, 또는 Large LDL 분획에 제1 시약 조성물 300 μL를 첨가하고, 37℃에서 5분간 반응시킨(제1 공정) 후에, 제2 시약 조성물 100 μL를 첨가하여 5분간 반응시키고(제2 공정), 600 nm에서의 흡광도를 측정하였다.　 대조군 시약으로서 small, dense LDL, 및 Large LDL 양쪽에 반응하는 시약으로서 LDL-EX N 「세이켄」을 사용하였다.　
제1 시약 조성물 중에 포함시킨 각종 계면 활성제와 각각의 결과를 표 1에 나타내었다.　 제1 공정에서 계면 활성제가 Large LDL에 특이적으로 작용하여, 반응계 밖으로 유도된 경우, 표 중의 Large LDL의 흡광도가 낮아진다.　 또한, 제1 공정에서 계면 활성제가 small, dense LDL에 작용하지 않은 경우, 표 중의 small, dense LDL의 흡광도가 높아진다.
표 1에 나타낸 바와 같이, 본 실시예에서 이용한 계면 활성제로는 제1 공정에서 Large LDL에 특이적으로 작용하여, Large LDL이 반응계 밖으로 유도되어 있기 때문에, small, dense LDL이 선택적으로 측정되어 있는 것을 알 수 있다.　
표 1은 각종 계면 활성제를 이용한 경우의, small, dense LDL, Large LDL에 대한 반응성을 나타내는 표이다.　
Figure 112009059136805-pct00001
[실시예 4]
리포 단백에 작용시키는 콜레스테롤에스테라제 효소 활성(효소 농도)를 변화시킨 이하의 시약 조성물을 제조하였다.
제1 시약 조성물
PIPES 완충액, pH7.0 50 mmol/L
콜레스테롤에스테라제[아사히 카세이사 제조] 0.6 내지 3.0 U/mL
콜레스테롤옥시다아제[도요 보우사 제조] 0.5 U/mL
카탈라아제 600 U/mL
폴리옥시에틸렌디스티렌화페닐에테르 0.03％
[카오사 제조]
소혈청 알부민 0.5％
TOOS 2.0 mmol/L
제2 시약 조성물
PIPES 완충액, pH7.0 50 mmol/L
폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체
플루로닉 17R-4[아사히 덴카사 제조] 0.3％
4-아미노안티피린 4.0 mmol/L
페르옥시다아제 4.0 단위/mL
아지드화나트륨 0.05％
초원심법에 의해 분리한 콜레스테롤 함유량 100 mg/dL의 small, dense LDL 분획, Large LDL 분획, 각 4μL에 제1 시약 300 μL를 첨가하고, 37℃에서 5분간 반응시킨 후에, 제2 시약 100 μL를 첨가하여 5분간 반응시켜, 600 nm에서의 흡광도를 측정하였다.　
그 결과를 도 3에 도시하였다.　
도 3에 도시된 바와 같이, 시약 중의 콜레스테롤에스테라제 활성이 증가함에 따라서, 우선 Large LDL의 흡광도가 저하되고, 또한 콜레스테롤에스테라제 활성이 증가하면, 지연되어 small, dense LDL의 흡광도가 저하된다.　 따라서, 적당한 콜레스테롤에스테라제 농도를 규정함으로써 small, dense LDL 중의 콜레스테롤을 효율적으로 측정할 수 있다.　 콜레스테롤에스테라제의 제1 공정 중의 농도를 바람직하게는 0.6 내지 3.0 U/mL, 보다 바람직하게는 0.9 내지 2.4 U/mL, 더욱 바람직하게는 0.9 내지 1.5 U/mL의 농도로 이용함으로써 small, dense LDL 중의 콜레스테롤을 선택적으로 측정할 수 있다.　
본 명세서에서 인용한 모든 간행물, 특허 및 특허 출원을 그대로 참고로서 본 명세서에 받아들이는 것으로 한다.　

Claims (13)

  1. 콜레스테롤에스테라제 및 소립자 저비중 리포 단백 이외의 리포 단백에 작용하는 계면 활성제 0.05 내지 1.0 g/L의 존재 하에서 피검체 시료 중의 소립자 저비중 리포 단백 이외의 리포 단백을 소거하는 제1 공정과, 이어서 상기 제1 공정에서 잔존한 소립자 저비중 리포 단백 중의 콜레스테롤을 정량하는 제2 공정을 포함하는, 피검체 시료 중의 소립자 저비중 리포 단백 중의 콜레스테롤 정량 방법.
  2. 제1항에 있어서, 제1 공정에서 소립자 저비중 리포 단백 이외의 리포 단백에 작용하는 계면 활성제가 폴리옥시에틸렌알킬에테르, 폴리옥시에틸렌알킬페닐에테르, 폴리옥시에틸렌알킬아민 및 라우릴알코올알콕시레이트로 이루어지는 군에서 선택되는 비이온 계면 활성제, 폴리옥시에틸렌알킬에테르황산염, 알킬황산염, 아미드에테르황산염, 알킬타우린산염 및 인산에스테르형으로 이루어지는 군에서 선택되는 음이온 계면 활성제, 알킬메틸암모늄염, 제4급 암모늄염, 모노 직쇄 알킬형으로 이루어지는 군에서 선택되는 양이온 계면 활성제, 또는 라우릴베타인, 디메틸알킬베타인, 아미드베타인형, 이미다졸린형 및 알킬디아미노에틸글리신나트륨으로 이루어지는 군에서 선택되는 양쪽성 계면 활성제인 것을 특징으로 하는, 소립자 저비중 리포 단백 중의 콜레스테롤 정량 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 제1 공정에서 이용하는 콜레스테롤에스테라제의 농도가 0.6 내지 3.0 U/mL인 것을 특징으로 하는, 소립자 저비중 리포 단백 중의 콜레스테롤 정량 방법.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 제1 공정에서, 콜레스테롤옥시다아제 및 카탈라아제를 더 첨가하는, 소립자 저비중 리포 단백 중의 콜레스테롤 정량 방법.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서, 제1 공정에서, 콜레스테롤옥시다아제 및 4아미노안티피린을 더 첨가하는, 소립자 저비중 리포 단백 중의 콜레스테롤 정량 방법.
  6. 제1항 또는 제2항에 있어서, 제2 공정에서, 적어도 소립자 저비중 리포 단백에 작용하는 계면 활성제의 존재 하에 콜레스테롤 측정용 효소가 첨가되는 것을 특징으로 하는, 피검체 시료 중의 소립자 저비중 리포 단백 중의 콜레스테롤 정량 방법.
  7. 제6항에 있어서, 제2 공정에서 이용되는 적어도 소립자 저비중 리포 단백에 작용하는 계면 활성제가 모든 리포 단백에 작용하는 계면 활성제인 것을 특징으로 하는, 소립자 저비중 리포 단백 중의 콜레스테롤 정량 방법.
  8. 제6항에 있어서, 제2 공정에서 이용되는 적어도 소립자 저비중 리포 단백에 작용하는 계면 활성제가 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체 또는 그의 유도체, 또는 폴리알킬렌옥시드 유도체인 것을 특징으로 하는, 소립자 저비중 리포 단백 중의 콜레스테롤 정량 방법.
  9. 제6항에 있어서, 제2 공정에서 이용되는 적어도 소립자 저비중 리포 단백에 작용하는 계면 활성제를 리포프로테인리파아제의 존재 하에서 이용하는 것을 특징으로 하는, 소립자 저비중 리포 단백 중의 콜레스테롤 정량 방법.
  10. 콜레스테롤에스테라제 및 소립자 저비중 리포 단백 이외의 리포 단백에 작용하는 계면 활성제 0.05 내지 1.0 g/L를 조합하여 이루어지는 것을 특징으로 하는, 피검체 시료 중의 소립자 저비중 리포 단백 이외의 리포 단백의 소거제.
  11. 제10항에 있어서, 콜레스테롤에스테라제의 농도가 0.6 내지 3.0 U/mL인, 소립자 저비중 리포 단백 이외의 리포 단백의 소거제.
  12. 콜레스테롤에스테라제, 소립자 저비중 리포 단백 이외의 리포 단백에 작용하는 계면 활성제 0.05 내지 1.0 g/L, 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체 또는 그의 유도체, 또는 폴리알킬렌옥시드 유도체를 조합하여 이루어지는 것을 특징 으로 하는, 소립자 저비중 리포 단백 정량용 시약.
  13. 제1 시약 조성물 및 제2 시약 조성물을 포함하는 제12항 기재의 소립자 저비중 리포 단백 정량용 시약으로서, 제1 시약 조성물에 콜레스테롤에스테라제 및 소립자 저비중 리포 단백 이외의 리포 단백에 작용하는 계면 활성제 0.05 내지 1.0 g/L가 포함되고, 제2 시약 조성물 중에 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체 또는 그의 유도체, 또는 폴리알킬렌옥시드 유도체가 포함되는 소립자 저비중 리포 단백 정량용 시약.
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