CN111893163A - 一种高密度脂蛋白3胆固醇检测试剂盒、制备方法及用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种高密度脂蛋白3胆固醇检测试剂盒,属于疾病检测试剂领域,包括试剂1和试剂2,试剂1包括:Good’s缓冲液、4‑氨基安替比林、Proclin 300、胆固醇脂酶、胆固醇氧化酶、磷脂酶、过氧化氢酶、抗坏血酸氧化酶和环糊精;试剂2包括:Good’s缓冲液、叠氮钠、TOOS、亚铁氰化钾、α‑淀粉酶和过氧化物酶。该试剂盒能提高HDL3‑c检测的准确度,并且不影响其它性能,如:精密度、线性、稳定性。本发明还提供了一种高密度脂蛋白3胆固醇检测试剂盒的制备方法及用途。
Description
技术领域
本发明属于疾病检测试剂领域,涉及一种高密度脂蛋白3胆固醇检测试剂盒、制备方法及用途。
背景技术
高密度脂蛋白胆固醇(Highdensity lipoprotein cholesterol,HDL)是主要的抗动脉粥样硬化脂肪蛋白,能够降低心血管疾病发病。根据密度不同,可将HDL成分分为两种主要亚型:HDL2-胆固醇(HDL2-c)和较小的HDL3-胆固醇(HDL3-c)。
高密度脂蛋白在生理上起着将肝外组织的胆固醇运送到肝脏的运载工具的作用,因而可以防止游离胆固醇在肝外组织细胞上的沉积。高密度脂蛋白胆固醇对冠心病的临床诊断是一个重要的参考指标。它的降低是临床冠心病保护因子之一,并能防治和延缓动脉粥样硬化的发展。HDL2-c具有抗动脉硬化的作用,由于肝脂酶活性的降低HDL3-c不会变化为HDL2-c,HDL3-c就会增加,暗示了由于HDL3-c的增加导致的冠状动脉疾病的发病率的增加。
因动脉硬化会导致血清HDL3-c值上升,所以检测血清中HDL3-c的含量可以作为心血管疾病的一项重要的检测指标。
目前高密度脂蛋白3胆固醇的检测试剂盒通常使用清除法测定HDL3-c,该法采用双试剂、通过清除非HDL3-c以达到测定HDL3-c的目的。但是表面活性剂难以对小颗粒进行准确识别、造成错误地清除HDL3-c导致检测结果偏低的问题。
发明内容
为了解决现有HDL3-c检测试剂盒准确度低的技术问题,本发明提供了一种高密度脂蛋白3胆固醇检测试剂盒,该试剂盒能提高HDL3-c检测的准确度,并且不影响其它性能,如:精密度、线性、稳定性。
本发明还提供了一种高密度脂蛋白3胆固醇检测试剂盒的制备方法及用途。
本发明通过以下技术方案实现:
一种高密度脂蛋白3胆固醇检测试剂盒,包括试剂1和试剂2,试剂1包括:Good’s缓冲液、4-氨基安替比林、Proclin 300、胆固醇脂酶、胆固醇氧化酶、磷脂酶、过氧化氢酶、抗坏血酸氧化酶和环糊精;
试剂2包括:Good’s缓冲液、叠氮钠、TOOS、亚铁氰化钾、α-淀粉酶和过氧化物酶。
其中,所述试剂1中各组分浓度为:
Good’s缓冲液:50-100mmol/L、4-氨基安替比林:0.1-0.5g/L、Proclin 300:0.5-1g/L、胆固醇脂酶:1-5KU/L、胆固醇氧化酶:1-5KU/L、磷脂酶:20-50KU/L、过氧化氢酶:200-500KU/L、抗坏血酸氧化酶:2-5KU/L、环糊精:0.5-1g/L,pH:6.6-7.5。
优选的,所述试剂1中各组分浓度为:Good’s缓冲液:100mmol/L、4-氨基安替比林:0.5g/L、Proclin 300:1g/L、胆固醇脂酶:5KU/L、胆固醇氧化酶:5KU/L、磷脂酶:50KU/L、过氧化氢酶:500KU/L、抗坏血酸氧化酶:5KU/L、环糊精:1g/L,pH:7.5。
进一步的,所述试剂2中各组分浓度为:Good’s缓冲液:50-100mmol/L、叠氮钠:0.5-1g/L、TOOS:0.5-1g/L、亚铁氰化钾:0.05g/L、α-淀粉酶:10KU/L、过氧化物酶:2-5KU/L,pH:6.6-7.5。
优选的,所述试剂2中各组分浓度为:Good’s缓冲液:50mmol/L、叠氮钠:1g/L、TOOS:1g/L、亚铁氰化钾:0.05g/L、α-淀粉酶:10KU/L、过氧化物酶:5KU/L,pH:7.0。
进一步的,所述环糊精采用α-环糊精或β-环糊或γ-环糊精。
一种高密度脂蛋白3胆固醇检测试剂盒的制备方法,包括:
称取试剂1所需原料:Good’s缓冲液、4-氨基安替比林、Proclin 300、胆固醇脂酶、胆固醇氧化酶、磷脂酶、过氧化氢酶、抗坏血酸氧化酶和环糊精;
将原料Good’s缓冲液、4-氨基安替比林、Proclin 300、胆固醇脂酶、胆固醇氧化酶、磷脂酶、过氧化氢酶、抗坏血酸氧化酶和环糊精配制成溶液,并通过酸液或碱液调节pH,得到的试剂1各组分浓度为:
Good’s缓冲液:50-100mmol/L、4-氨基安替比林:0.1-0.5g/L、Proclin 300:0.5-1g/L、胆固醇脂酶:1-5KU/L、胆固醇氧化酶:1-5KU/L、磷脂酶:20-50KU/L、过氧化氢酶:200-500KU/L、抗坏血酸氧化酶:2-5KU/L、环糊精:0.5-1g/L,pH:7.5;
所述试剂2的组分包括Good’s缓冲液、叠氮钠、TOOS、亚铁氰化钾、α-淀粉酶和过氧化物酶;
将原料Good’s缓冲液、叠氮钠、TOOS、亚铁氰化钾、α-淀粉酶和过氧化物酶配制成溶液,并通过酸液或碱液调节pH,得到的试剂2各组分浓度为:
Good’s缓冲液:50-100mmol/L、叠氮钠:0.5-1g/L、TOOS:0.5-1g/L、亚铁氰化钾:0.05g/L、α-淀粉酶:10KU/L、过氧化物酶:2-5KU/L,pH:7.0。
进一步的,所述酸液为盐酸,所述碱液为氢氧化钠。
进一步的,所述Good’s缓冲液中,有效浓度为50-100mmol/L。
一种高密度脂蛋白3胆固醇检测试剂盒在高密度脂蛋白3胆固醇测定中的用途。
本发明实施例中的一个或多个技术方案,至少具有如下技术效果或优点:
本发明一种高密度脂蛋白3胆固醇检测试剂盒,通过在试剂1中加入环糊精,从而提高试剂检测的准确度,测高密度脂蛋白3胆固醇的标准品的偏差在4%及以下,并且对一般干扰物质也有抗干扰能力,且不影响其它性能,如精密度、线性相关系数、功能灵敏度。
具体实施方式
下文将结合具体实施方式和实施例,具体阐述本发明,本发明的优点和各种效果将由此更加清楚地呈现。本领域技术人员应理解,这些具体实施方式和实施例是用于说明本发明,而非限制本发明。
在整个说明书中,除非另有特别说明,本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。因此,除非另有定义,本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员的一般理解相同的含义。若存在矛盾,本说明书优先。
除非另有特别说明,本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等,均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。
本发明实施例提供的技术方案为解决上述技术问题,总体思路如下:
目前,高密度脂蛋白3胆固醇的检测试剂盒通常使用清除法测定HDL3-c,由于该法采用双试剂、先用表面活性剂将HDL3-c包裹起来,通过清除非HDL3-c以达到测定HDL3-c的目的。但是表面活性剂难以对小颗粒-直径小于25.5nm的脂蛋白胆固醇进行准确识别、造成错误地清除HDL3-c导致检测结果偏低的问题。
对此,本发明一种高密度脂蛋白3胆固醇检测试剂盒,包括试剂1和试剂2,试剂1包括:Good’s缓冲液、4-氨基安替比林、Proclin 300、胆固醇脂酶、胆固醇氧化酶、磷脂酶、过氧化氢酶、抗坏血酸氧化酶和环糊精;
试剂2包括:Good’s缓冲液、叠氮钠、TOOS、亚铁氰化钾、α-淀粉酶和过氧化物酶。
本发明的检测原理是:
第一步:在胆固醇脂酶、胆固醇氧化酶、磷脂酶、环糊精和过氧化氢酶的作用下,先清除非HDL3-c成份。第二步:在α-淀粉酶的作用下,HDL3-c被释放出来,在胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶作用下,生成过氧化氢,过氧化氢在过氧化物酶的作用下,与色原生成紫红色的醌类物质,进而检测HDL3-c的浓度。
本发明通过在试剂1中加入环糊精,特异性的将HDL3-c包裹起来,R2中的α-淀粉酶会降解环糊精,然后将HDL3-c再释放出来,由于环糊精对小颗粒识别的准确性会比普通的表面活性剂更高,从而提高试剂检测的准确度。此方法不仅能提高试剂的检测的准确度,而且不影响其它性能(如:精密度、线性、稳定性)等。
下面将结合实施例、对照例及实验数据对本申请一种高密度脂蛋白3胆固醇检测试剂盒进行详细说明。
实施例
1.本发明设置5个实施例和1个对照例,实施例1和对照例1的组分如表1所示,
实施例2:在实施例1的基础上,α-环糊精的浓度为0.5g/L,其它的组分不变;
实施例3:在实施例1的基础上,α-淀粉酶的浓度为20KU/L,其它的组分不变;
实施例4:在实施例1的基础上,α-环糊精替换为β-环糊精,其它的组分不变;
实施例5:在实施例1的基础上,α-环糊精替换为γ-环糊精,其它的组分不变;
表1 实施例1和对照例1试剂配制表
2.对实施例1-5和对照例1进行性能评价
评价指标及评价方法如下:
(1)精密度:重复测定同一血清样本或控制物质样本10次,计算CV(%),CV≤5%算满足要求;
(2)线性范围:测定0.10mmol/L-3.00mmol/L范围样本,计算相关系数,r≥0.990算满足要求;
(3)准确度:测第三方质控品,计算测定平均值与靶值的偏差,相对偏差不超过±10%算满足要求;
(4)功能灵敏度:测定低浓度样本,日间重复CV为20%时对应检测限样本具有的平均浓度。
(5)稳定性:将试剂在37度放置7天,再评价以上指标:精密度、线性范围、准确度、功能灵敏度;
(6)干扰评价:
用纯化水稀释干扰物质,按照1∶9的比例分别添加到空白对照血清中(空白对照血清为正常人混合血清,不加入任何干扰物质,其值在医学决定水平附近),使得加入血清后的最终浓度满足为要评价的浓度,再用对照例1和实施例1试剂,分别测定空白血清和加入不同浓度干扰物质的血清,每份样本测定3次,计算均值,与空白对照血清测值计算偏差,即为干扰度。若干扰度小于±10%,则为抗干扰,否则为不抗干扰。
血清中的一般干扰物质及浓度为:抗坏血酸1.0g/L、胆红素0.5g/L、血红蛋白5.0g/L、甘油三酯≤10g/L。
3.评价结果及结论
3.1精密度、线性相关系数和功能灵敏度评价结果如表2所示:
表2 性能评价数据
3.2实施例1-5及对照例1的准确度评价结果如表3所示:
表3 准确度数据
3.3血清中一般干扰物质干扰偏差评价数据如表4所示:
表4 血清中一般干扰物质干扰偏差数据
由表2-4的数据可以看出,对照例1与实施例1-5所制备的HDL3-c试剂相比,对照例1测高密度脂蛋白3胆固醇的标准品的偏差都超过了10%,而实施例1-5测高密度脂蛋白3胆固醇的标准品的偏差都低于10%,且实施例1测高密度脂蛋白3胆固醇的标准品的偏差在3%及以下,说明改良后的试剂明显改善了试剂的准确度,对一般干扰物质也有抗干扰能力,且不影响其它性能(精密度、线性相关系数、功能灵敏度)等,
最后,还需要说明的是,术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含,从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素,而且还包括没有明确列出的其他要素,或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
尽管已描述了本发明的优选实施例,但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念,则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以,所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然,本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样,倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内,则本发明也意图包含这些改动和变型在内。
Claims (10)
1.一种高密度脂蛋白3胆固醇检测试剂盒,其特征在于,包括试剂1和试剂2,试剂1包括:Good’s缓冲液、4-氨基安替比林、Proclin 300、胆固醇脂酶、胆固醇氧化酶、磷脂酶、过氧化氢酶、抗坏血酸氧化酶和环糊精;
试剂2包括:Good’s缓冲液、叠氮钠、TOOS、亚铁氰化钾、α-淀粉酶和过氧化物酶。
2.根据权利要求1所述的一种高密度脂蛋白3胆固醇检测试剂盒,其特征在于,所述试剂1中各组分浓度为:Good’s缓冲液:50-100mmol/L、4-氨基安替比林:0.1-0.5g/L、Proclin300:0.5-1g/L、胆固醇脂酶:1-5KU/L、胆固醇氧化酶:1-5KU/L、磷脂酶:20-50KU/L、过氧化氢酶:200-500KU/L、抗坏血酸氧化酶:2-5KU/L、环糊精:0.5-1g/L,pH:6.6-7.5。
3.根据权利要求2所述的一种高密度脂蛋白3胆固醇检测试剂盒,其特征在于,所述试剂1中各组分浓度为:Good’s缓冲液:100mmol/L、4-氨基安替比林:0.5g/L、Proclin 300:1g/L、胆固醇脂酶:5KU/L、胆固醇氧化酶:5KU/L、磷脂酶:50KU/L、过氧化氢酶:500KU/L、抗坏血酸氧化酶:5KU/L、环糊精:1g/L,pH:7.5。
4.根据权利要求1所述的一种高密度脂蛋白3胆固醇检测试剂盒,其特征在于,所述试剂2中各组分浓度为:Good’s缓冲液:50-100mmol/L、叠氮钠:0.5-1g/L、TOOS:0.5-1g/L、亚铁氰化钾:0.05-0.1g/L、α-淀粉酶:10-20KU/L、过氧化物酶:2-5KU/L,pH:6.6-7.5。
5.根据权利要求4所述的一种高密度脂蛋白3胆固醇检测试剂盒,其特征在于,所述试剂2中各组分浓度为:Good’s缓冲液:50mmol/L、叠氮钠:1g/L、TOOS:1g/L、亚铁氰化钾:0.05g/L、α-淀粉酶:10KU/L、过氧化物酶:5KU/L,pH:7.0。
6.根据权利要求1所述的一种高密度脂蛋白3胆固醇检测试剂盒,其特征在于,所述环糊精采用α-环糊精或β-环糊或γ-环糊精。
7.一种如权利要求1-6中任一项所述的高密度脂蛋白3胆固醇检测试剂盒的制备方法,其特征在于,包括:
称取试剂1所需原料:Good’s缓冲液、4-氨基安替比林、Proclin 300、胆固醇脂酶、胆固醇氧化酶、磷脂酶、过氧化氢酶、抗坏血酸氧化酶和环糊精;
将原料Good’s缓冲液、4-氨基安替比林、Proclin 300、胆固醇脂酶、胆固醇氧化酶、磷脂酶、过氧化氢酶、抗坏血酸氧化酶和环糊精配制成溶液,并通过酸液或碱液调节pH,得到的试剂1具有如权利要求2或3所述的组分浓度;
所述试剂2的组分包括Good’s缓冲液、叠氮钠、TOOS、亚铁氰化钾、α-淀粉酶和过氧化物酶;
将原料Good’s缓冲液、叠氮钠、TOOS、亚铁氰化钾、α-淀粉酶和过氧化物酶配制成溶液,并通过酸液或碱液调节pH,得到的试剂2具有如权利要求4或5所述的组分浓度。
8.根据权利要求7所述的一种高密度脂蛋白3胆固醇检测试剂盒的制备方法,其特征在于,所述酸液为盐酸,所述碱液为氢氧化钠。
9.根据权利要求7所述的一种高密度脂蛋白3胆固醇检测试剂盒的制备方法,其特征在于,所述Good’s缓冲液中,有效浓度为50-100mmol/L。
10.如权利要求1-6中任一项所述的一种高密度脂蛋白3胆固醇检测试剂盒在高密度脂蛋白3胆固醇测定中的用途。
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