CN109813918A - 一种总胆红素测定试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种总胆红素测定试剂盒。本发明是由试剂R1和试剂R2组成的液体；选择柠檬酸可很好的保证标本预处理整个体系酸碱度；EDTA‑Na2排除二价金属离子对测试过程的干扰；添加了月桂基甜菜碱、聚氧乙烯月桂醚、十六烷基三甲基溴化铵、十四烷基三甲基溴化铵四种表面活性剂，在试剂中添加盐酸联氨进一步排除非胆红素的干扰，避免检测数据的假阳性；添加亚硝酸钠将胆红素直接氧化成胆绿素，但选择的量非常小能够确保整个反应过程中既能够完全反应胆红素又没有太多剩余以免过剩的亚硝酸钠和其他物质反应；添加氯化钠调节离子浓度，控制反应速度；添加的Prolin 300为生物防腐剂，既不会和反应物质形成干扰又能防止细菌将亚硝酸盐转换成硝酸盐。
Description
技术领域
本发明涉及一种总胆红素测定试剂盒。
背景技术
总胆红素是人体内由血红素代谢产生的结合和非结合型胆红素的总称，主要用来诊断是否有肝脏疾病或胆道是否发生异常，总胆红素偏低的原因有可能是因为缺铁性贫血。因此，对人体的血清、血浆和尿液中总胆红素的测定，是医学检验最常规的项目之一。
总胆红素测定是肝、胆功能检查中的一项重要检测项目。目前测定血清胆红素的方法主要有重氮法、酶法。重氮法试剂不稳定，必须由亚硝酸钠和氨基磺酸临时配制，且保存时间较短；二是重氮试剂与间接胆红素和直接胆红素(DBIL)反应的特异性不佳，在一定条件下测定DBIL时，有少量的间接胆红素参与反应，如果反应时间延长，参与的更多，导致测定值不准。酶法价格较贵，而其中的胆红素氧化酶也易发生活性下降，影响测定的准确性。
化学氧化法有钒酸盐氧化法和亚硝酸盐氧化法。钒酸氧化法具有试剂稳定、反应稳定、抗干扰(Hb)能力强等特点，但釩酸盐法易受ALT\AST等离子的干扰，且釩离子为重金属，易污染环境。亚硝酸盐氧化法较钒酸氧化法更能减少因氧化反应产生的干扰。但钒酸盐法和亚硝酸盐法受间胆，如游离胆红素、δ-胆红素等的干扰，在临床上容易出现假阳性。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种总胆红素测定试剂盒，本发明旨在优化现有的重氮法试剂盒，使其检测更加精准。
为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：一种总胆红素测定试剂盒，其特征在于该试剂盒是由试剂R1和试剂R2组成的液体；所述试剂R1的各组分及浓度范围为：
用pH调节剂调节pH值为2.9-3.1，用去离子水定容；
所述试剂R2的各组分及浓度范围为：
用pH调节剂调节pH值为6.95-7.05，用去离子水定容；
所述pH调节剂为NaOH或HC1。
进一步的技术方案在于，所述试剂R1的各组分及浓度范围为：
用pH调节剂调节pH值为3，用去离子水定容；
所述试剂R2的各组分及浓度范围为：
用pH调节剂调节pH值为7，用去离子水定容；
所述pH调节剂为NaOH或HC1。
进一步的技术方案在于所述Prolin 300的主要成分为2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(MCI)和5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(CMCI)。
采用上述技术方案所产生的有益效果在于：本发明试剂R1中选择柠檬酸作为缓冲液，很好的保证标本预处理整个体系pH值在3.0左右。添加了EDTA-Na2排除二价金属离子对测试过程的干扰；添加了月桂基甜菜碱、聚氧乙烯月桂醚、十六烷基三甲基溴化铵、十四烷基三甲基溴化铵四种表面活性剂，对不同种类的物质分别做了表面活性处理，使得样本处理更精细化，达到样本处理更优秀的结果；法在试剂中添加盐酸联氨进一步排除非胆红素的干扰，避免检测数据的假阳性；添加亚硝酸钠将胆红素直接氧化成胆绿素，但选择的量非常小(0.17g)能够确保整个反应过程中既能够完全反应胆红素又没有太多剩余以免过剩的亚硝酸钠和其他物质反应；添加氯化钠调节离子浓度，控制反应速度；添加的Prolin 300为生物防腐剂，既不会和反应物质形成干扰又能防止细菌将亚硝酸盐转换成硝酸盐。
附图说明
图1为优化后的总胆红素测定试剂盒检测曲线；
图2为重氮法的总胆红素测定试剂盒检测曲线。
具体实施方式
下面结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
本发明阐述了一种总胆红素测定试剂盒，该试剂盒是由试剂R1和试剂R2组成的液体；所述试剂R1的各组分及浓度范围为：
用pH调节剂调节pH值为2.9-3.1，用去离子水定容；
所述试剂R2的各组分及浓度范围为：
用pH调节剂调节pH值为6.95-7.05，用去离子水定容；
所述pH调节剂为NaOH或HC1。
本发明优选实施例中，所述试剂R1的各组分及浓度范围为：
用pH调节剂调节pH值为3，用去离子水定容；
所述试剂R2的各组分及浓度范围为：
用pH调节剂调节pH值为7，用去离子水定容；
所述pH调节剂为NaOH或HC1。
本发明优选实施例中，所述Prolin 300的主要成分为2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(MCI)和5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(CMCI)。
实施例
该试验检测总胆红素测定试剂盒的方法，包括如下步骤：
1)实验所使用仪器为日立7600全自动生化仪(灵敏度0.001及以上,其恒温装置的温度变化范围在±0.1℃)，水在未注明其他要求时，均不低于GB/T 6682-2008中三级水的要求。
2)编辑实验参数：反应方式：两点终点法；主波长：450nm；反应温度：37℃；样本量：8.0μl；试剂R1：240μl；试剂R2：60μl反应时间：10min；反应方向：向上。
3)将按上述标准优化后的总胆红素测定试剂盒装载入日立7600生化仪。
4)以校准血清进行校准。
5)检测质控血清确定检测的准确度。
6)取临床血液标本离心，分离血清用总胆红素测定试剂盒检测其结果。结果见表1，图1。
表1标准配制的总胆红素测定试剂盒检测结果
| 项目名称 | 校准浓度(μmol/L) | 质控浓度(μmol/L) | 临床血清检测结果(μmol/L) |
| TBIL | 87.1 | 29.3 | 15.3 |
| TBIL | 87.1 | 29.2 | 15.7 |
| TBIL | 87.1 | 29.5 | 14.9 |
7)将重氮法的总胆红素测定试剂盒装载入日立7600生化仪。
8)以校准血清进行校准。
9)检测质控血清确定检测的准确度。
10)取临床血液标本离心，分离血清用重氮法的总胆红素测定试剂盒检测其结果。结果见表2，图2。
表2重氮法的总胆红素测定试剂盒检测结果
| 项目名称 | 校准浓度(μmol/L) | 质控浓度(μmol/L) | 临床血清检测结果(μmol/L) |
| TBIL | 87.1 | 28.4 | 23.3 |
| TBIL | 87.1 | 30.2 | 21.4 |
| TBIL | 87.1 | 31.7 | 28.7 |
实验结果表明：我公司发明的改良型总胆红素测定试剂盒，稳定性好，精密度高，准确性良，并且具有很好的特异性，在临床检测过程中能更为准确的人体血清中总胆红素的含量。进而更好的为临床服务，具有很好的社会效应和经济效益。
Claims (3)
1.一种总胆红素测定试剂盒，其特征在于该试剂盒是由试剂R1和试剂R2组成的液体；所述试剂R1的各组分及浓度范围为：
用pH调节剂调节pH值为2.9-3.1，用去离子水定容；
所述试剂R2的各组分及浓度范围为：
用pH调节剂调节pH值为6.95-7.05，用去离子水定容；
所述pH调节剂为NaOH或HC1。
2.根据权利要求1所述的一种总胆红素测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R1的各组分及浓度范围为：
用pH调节剂调节pH值为3，用去离子水定容；
所述试剂R2的各组分及浓度范围为：
用pH调节剂调节pH值为7，用去离子水定容；
所述pH调节剂为NaOH或HC1。
3.根据权利要求1或2所述的一种总胆红素测定试剂盒，其特征在于，所述Prolin300的主要成分为2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(MCI)和5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(CMCI)。
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