CN104406971A - 一种直接胆红素检测试剂 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种直接胆红素检测试剂。本发明的检测试剂包括体积比为4:1的试剂R1和试剂R2，其中试剂R1包括酒石酸缓冲液、盐酸肼、表面活性剂和Proclin300，试剂R2包括磷酸缓冲液、偏钒酸钠和Proclin300。本发明的直接胆红素检测试剂抗干扰能力强，准确度好，线性更高，稳定性强，可以消除干扰物质和间接胆红素的干扰，适用于全自动生化分析仪，具有很高的临床应用价值。
Description
技术领域
本发明属于临床体外检测技术领域，具体涉及一种直接胆红素检测试剂。
背景技术
直接胆红素又称结合胆红素。未结合胆红素在肝细胞内转化，与葡糖醛酸结合形成结合胆红素，结合胆红素用凡登伯定性试验呈直接反应，故将这种胆红素称为直接胆红素。测定直接胆红素主要用于鉴别黄疸的类型。引起直接胆红素高的原因虽然很多，但最常见的是由肝脏疾病引起的直接胆红素高。因此，发现直接胆红素高时，首先要考虑是不是得了肝脏疾病，结合患者的病史、症状等进行综合分析，选择合适的检查项目，确定引起直接胆红素高的原因，针对病因进行治疗。
目前测定血清胆红素的方法主要有重氮法、酶法和化学氧化法，重氮法试剂不稳定，必须由亚硝酸钠和氨基磺酸临时配制，且保存时间较短，而且重氮试剂与间接胆红素和直接胆红素反应的特异性不佳，在一定条件下测定直接胆红素时，有少量的间接胆红素参与反应, 如果反应时间延长, 参与的会更多，从而导致测定值不准，酶法价格较贵，而其中的胆红素氧化酶也易发生活性下降，影响测定的准确性。
化学氧化法有钒酸盐氧化法和亚硝酸盐氧化法，易受间接胆红素，如游离胆红素、δ-胆红素等的干扰，在临床上容易出现假阳性，影响检测结果的准确性，进而影响试剂在市场上的应用。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种抗干扰性强、准确度高直接胆红素检测试剂。
本发明的技术方案如下：
一种直接胆红素检测试剂包括体积比为4:1的试剂R1和试剂R2；
所述的，试剂R1包括以下含量的组分：
酒石酸缓冲液 0.05-0.1mol
盐酸肼 5-10mol
表面活性剂 1-10mL
Proclin300 1-10mL
去离子水加至1L；
所述的，试剂R2包括以下含量的组分：
磷酸缓冲液 50-100mmol
偏钒酸钠 1-10mmol
Proclin300 1-10mL
去离子水加至1L。
所述的，酒石酸缓冲液的pH值为2.0-4.0，所述磷酸缓冲液的pH值为6.0-7.5。
所述的，表面活性剂为十二烷基苯磺酸钠、脂肪醇酯-35、三乙醇胺和甜菜碱按照十二烷基苯磺酸钠：脂肪醇酯-35：三乙醇胺：甜菜碱=1:1:1:1的体积比组成的。
优选的，试剂R1包括以下含量的组分：
酒石酸缓冲液 0.07mol
盐酸肼 8mol
表面活性剂 5mL
Proclin300 6mL
去离子水加至1L。
优选的，试剂R2包括以下含量的组分：
磷酸缓冲液 75mmol
偏钒酸钠 8mmol
Proclin300 5mL
去离子水加至1L。
反应原理：在pH=3附近，将偏钒酸钠作用于样本，在表面活性剂的催化下样本中的直接胆红素被氧化成胆绿素，胆红素所特有的黄色减少，在波长450nm处检测其被钒酸盐氧化前后吸光度之差，其变化程度与样本中的直接胆红素（直接胆红素）的含量成正比。
酒石酸缓冲液：在pH值为2.0-4.0时，酒石酸对血清中的金属离子有一定的络合作用，可去除金属离子的干扰。
盐酸肼：屏蔽试剂对间接胆红素的氧化，提高检测试剂的准确性。
表面活性剂：通过乳化、洗涤等效果，去除溶血样本的干扰物质，同时消除间接胆红素的影响。
Proclin300：维持试剂稳定。
磷酸盐缓冲液：在pH值为6.0-7.5时，增强各组分的分散性，提高试剂的稳定性。
偏钒酸钠：氧化剂，在反应中作为主要的氧化物质。
本发明一种直接胆红素检测试剂的使用方法，包括配制试剂R1和试剂R2，将试剂R1和试剂R2按照体积比为4:1的比例放置到全自动生化分析仪对应的试剂位上，调整生化分析仪的参数，在样品盘的对应位置放置好蒸馏水、朗道校准品和样本，测定直接胆红素的含量。
本发明的积极效果：本发明的直接胆红素检测试剂抗干扰能力强，准确度好，线性更高，稳定性强，可以消除干扰物质和间接胆红素的干扰，基本能覆盖所有的临床标本，适用于全自动生化分析仪，具有很高的临床应用价值。
附图说明
图1为本发明实施例1制得的检测试剂的相关性检测结果；
图2为本发明实施例2制得的检测试剂的相关性检测结果；
图3为本发明实施例3制得的检测试剂的相关性检测结果；
图4为市售检测试剂的相关性检测结果。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1
一种直接胆红素检测试剂包括体积比为4:1的试剂R1和试剂R2；
试剂R1包括以下含量的组分：
酒石酸缓冲液(pH=2.0) 0.05mol
盐酸肼 10mol
表面活性剂 10mL
Proclin300 1mL
去离子水加至1L；
试剂R2包括以下含量的组分：
磷酸缓冲液(pH=7.5) 100mmol
偏钒酸钠 1mmol
Proclin300 1mL
去离子水加至1L。
表面活性剂为十二烷基苯磺酸钠：脂肪醇酯-35：三乙醇胺：甜菜碱=1:1:1:1的体积比组成的。
本实施例直接胆红素检测试剂的使用方法为：选用具有双试剂功能的东芝40全自动分析仪，配制试剂R1和试剂R2，将试剂R1和试剂R2按照4:1的体积比放置到对应的试剂位上，在样品盘的对应位置放置好蒸馏水、朗道校准品和样本，先通过检测蒸馏水和朗道校准品获得校准品检测的吸光度变化，根据朗道校准品直接胆红素试剂的靶值，得到试剂的K因子，之后根据全自动生化分析仪测定的样本的吸光度，就可以获得样本的直接胆红素浓度。具体操作如表1。
表1 直接胆红素检测试剂使用方法
计算：直接胆红素活力（μmol/L）＝（?A测定÷?A校准）×C校准
实施例2
一种直接胆红素检测试剂包括体积比为4:1的试剂R1和试剂R2；
试剂R1包括以下含量的组分：
酒石酸缓冲液(pH=3.0) 0.07mol
盐酸肼 8mol
表面活性剂 2mL
Proclin300 6mL
去离子水加至1L；
试剂R2包括以下含量的组分：
磷酸缓冲液(pH=6.5) 75mmol
偏钒酸钠 8mmol
Proclin300 5mL
去离子水加至1L。
表面活性剂为十二烷基苯磺酸钠：脂肪醇酯-35：三乙醇胺：甜菜碱=1:1:1:1的体积比组成的。
一种直接胆红素检测试剂的使用方法同实施例1。
实施例3
一种直接胆红素检测试剂包括体积比为4:1的试剂R1和试剂R2；
试剂R1包括以下含量的组分：
酒石酸缓冲液(pH=4.0) 0.1mol
盐酸肼 5mol
表面活性剂 1mL
Proclin300 10mL
去离子水加至1L；
试剂R2包括以下含量的组分：
磷酸缓冲液(pH=6.0) 50mmol
偏钒酸钠 10mmol
Proclin300 10mL
去离子水加至1L。
表面活性剂为十二烷基苯磺酸钠：脂肪醇酯-35：三乙醇胺：甜菜碱=1:1:1:1的体积比组成的。
一种直接胆红素检测试剂的使用方法同实施例1。
抗干扰性实验
取1份无溶血黄疸血清分成4份，其中3份加入不同浓度的血红蛋白（Hb）液，模拟溶血样本，剩余的1份无溶血，分别用实施例1、实施例2、实施例3、实施例4以及对比的市售检测试剂对该4个样本进行检测，检测结果如表2所示。
表2 抗干扰性实验结果
根据表2所示，随着血清中Hb浓度的增大，检测结果明显在升高，当Hb浓度在6g/L以下时，准确度偏差在10%以内；当Hb浓度大于6g/L时，市售试剂的检测结果远远高于实施例1至3制得的试剂的检测结果，所以市售试剂的抗干扰性在Hb≤6g/L。本发明的直接胆红素检测试剂中加入了表面活性剂，受到溶血的影响效果明显降低，抗干扰性大大增强，准确度好。
相关性实验
对同一直接胆红素高值溶血血清样本，该血清样本在检验机构确定样本中直接胆红素的浓度约为342μmol/L，该样本用生理盐水进行稀释，稀释梯度如表3所示。
表3 对样本梯度稀释体积比
| 样本浓度（X） | 1 | 0.8 | 0.6 | 0.4 | 0.2 | 0 |
| 生理盐水 | 0 | 0.2 | 0.4 | 0.6 | 0.8 | 1 |
| 浓度 | X | 0.8X | 0.6X | 0.4X | 0.2X | 0 |
分别利用实施例1至3制得的检测试剂和市售检测试剂对各浓度梯度样本进行检测，结果如图1-4所示。
如图1所示，实施例1至3制得的检测试剂随稀释浓度呈线性变化，相关系数分别为为0.9995、0.9997和0.9983，而市售检测试剂的相关系数仅为0.9736，说明本发明制得的检测试剂对于各个浓度的样本检测结果都比较准确，而且能够检测到342μmol/L的样本。市售检测试剂的线性相关性很差，主要原因是血清样本中存在大量的干扰物质，严重影响检测结果的准确性。
Claims (5)
1.一种直接胆红素检测试剂，其特征在于，它包括体积比为4:1的试剂R1和试剂R2；
所述试剂R1包括以下含量的组分：
酒石酸缓冲液 0.05-0.1mol
盐酸肼 5-10mol
表面活性剂 1-10mL
Proclin300 1-10mL
去离子水加至1L；
所述试剂R2包括以下含量的组分：
磷酸缓冲液 50-100mmol
偏钒酸钠 1-10mmol
Proclin300 1-10mL
去离子水加至1L。
2.根据权利要求1所述的直接胆红素检测试剂，其特征在于，所述酒石酸缓冲液的pH值为2.0-4.0，所述磷酸缓冲液的pH值为6.0-7.5。
3.根据权利要求1所述的直接胆红素检测试剂，其特征在于，所述表面活性剂为十二烷基苯磺酸钠、脂肪醇酯-35、三乙醇胺和甜菜碱按照十二烷基苯磺酸钠：脂肪醇酯-35：三乙醇胺：甜菜碱=1:1:1:1的体积比组成的。
4.根据权利要求1所述的直接胆红素检测试剂，其特征在于，所述试剂R1包括以下含量的组分：
酒石酸缓冲液 0.07mol
盐酸肼 8mol
表面活性剂 5mL
Proclin300 6mL
去离子水加至1L。
5.根据权利要求1所述的直接胆红素检测试剂，其特征在于，所述试剂R2包括以下含量的组分：
磷酸缓冲液 75mmol
偏钒酸钠 8mmol
Proclin300 5mL
去离子水加至1L。
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