JPH04287695A - エタノール分析用組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、エタノール分析用の組
成物に関するものである。本発明の組成物は、酵素アル
コール　　デヒドロゲナーゼ、補酵素ニコチンアミド　
　アデニン　　ジヌクレオチドおよび式 　　　　Ｈ２　Ｎ−（ＣＨ２　）ｎ　−ＣＨＲ−ＣＨ２
　−ＮＨ２　　　　　　　　　　　　　　　Ｉ（式中、
Ｒは、Ｈ、ＣＨ３　またはＯＨであり、そしてｎは、０
、１、２、３または４である、ただしＲがＯＨである場
合には、ｎは０であることはできない。）で示される化
合物を含有する。式Ｉで示される適当な化合物は、１，
２−ジアミノエタン（Ｒ＝Ｈ、ｎ＝０）、１，２−ジア
ミノプロパン（Ｒ＝ＣＨ３　、ｎ＝０）、１，３−ジア
ミノプロパン（Ｒ＝Ｈ、ｎ＝１）、および１，３−ジア
ミノ−２−ヒドロキシプロパン（Ｒ＝ＯＨ、ｎ＝１）を
包含する。

【０００２】

【従来の技術】体液、たとえば唾液、血液および尿中の
エタノールの量を測定するための体液試験は、中でも、
安全および健康上の理由で重要である。酔いながら運転
している疑いがある場合の血中アルコール含有量の検出
とともに、アルコールの濫用およびその検出は、迅速で
かつまた信頼できるエタノール測定が重要である多くの
重要な分野のうちの二つである。

【０００３】体液のエタノール含有量の測定に有用な方
法では、酵素反応を使用する。この方法では、アルコー
ル　　デヒドロゲナーゼの作用によって、エタノールが
アセトアルデヒドに変換され、ここで補酵素として作用
するニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）
がその還元形態（ＮＡＤＨ）に変換される。この反応経
路は下記の式で示される：

【化３】 ＡＤＨはアルコール　　デヒドロゲナーゼを表わす。

【０００４】この反応の平衡はアルコールとＮＡＤの側
にある。しかしながら、この平衡は、反応がアルカリ性
条件の下に生起し、生成されたアセトアルデヒドが捕獲
された時には、右方向に移動する。この反応の過程およ
び程度は、３４０ナノメーターにおける分光光度分析に
よって測定することができる。この波長においては、Ｎ
ＡＤは紫外線を吸収しないが、ＮＡＤＨは紫外線を吸収
する。上記反応で生成されるＮＡＤＨの量は、存在する
エタノールの量に相当する。

【０００５】分析法として使用する場合には、この反応
は完了させなければならない。しかしながら、エタノー
ルがＮＡＤによってアセトアルデヒドに酸化された場合
には、この反応の平衡は好ましくないものとなるために
、ＮＡＤＨがエタノールに対して定量的に生成されるよ
うに、アセトアルデヒドをこの系から分離しなければな
らない。アセトアルデヒドを分離もしくは捕獲するため
の方法の一つでは、捕獲剤を使用する。さらにまた、大
部分の酵素反応の場合と同様に、分析系のｐＨを、特定
の酵素反応に最適の範囲内に維持するための緩衝剤が必
要である。

【０００６】現在使用されている捕獲剤がＡＤＨを不活
性化できることも知られている。現在の分析系は安定性
が低く、その安定性は一度混合されると室温（約２０℃
）で一日以下であり、冷蔵しても約３日である。新鮮な
分析試薬をしばしば調製しなくてはならない。低い安定
性はまた、精度を確保するために、既知のエタノール試
料を操作する必要性をさらに度々、導くことがある。

【０００７】エタノールの分析および試薬に現在使用さ
れている多くの捕獲剤、たとえばヒドラジンは、ＡＤＨ
を不活性にすることができ、この分析および試薬の貯蔵
安定性を制限している。

【０００８】従って、ＡＤＨを不活性化しない捕獲剤に
対する要求が存在している。ＡＤＨに対する酵素安定組
成物に関する要求もまた存在している。長期間安定性を
有する分析系に対する要求もまた、存在している。

【０００９】

【発明の開示】従って、本発明の目的は、エタノールを
分析するための、このような組成物を提供することにあ
る。本発明の組成物は、酵素アルコール　　デヒドロゲ
ナーゼ、補酵素ニコチンアミド　　アデニン　　ジヌク
レオチドおよび下記の式Ｉで示される化合物を含有する
：　　　　　　Ｈ２　Ｎ−（ＣＨ２　）ｎ　−ＣＨＲ−
ＣＨ２　−ＮＨ２　　　　　　　　　　　　　　　Ｉ式
中、Ｒは、Ｈ、ＣＨ３　またはＯＨであり、そしてｎは
、０、１、２、３または４である。ただしＲがＯＨであ
る場合には、ｎは０であることはできない。

【００１０】式Ｉで示される適当な化合物は、１，２−
ジアミノエタン（Ｒ＝Ｈ、ｎ＝０）、１，２−ジアミノ
プロパン（Ｒ＝ＣＨ３　、ｎ＝０）、１，３−ジアミノ
プロパン（Ｒ＝ＣＨ３　、ｎ＝１）、および１，３−ジ
アミノ−２−ヒドロキシプロパン（Ｒ＝ＯＨ、ｎ＝１）
を包含する。これらの化合物は公知であり、Ａｌｄｒｉ
ｃｈ（Ｓｔｅｉｎｈｅｉｍ／Ｇｅｒｍａｎｙ）および（
または）Ｓｉｇｍａ（Ｂｕｃｈｓ／Ｓｗｉｔｚｅｒｌａ
ｎｄ）などの化学品供給先から得ることができる。好ま
しくは、本発明の組成物はＡＤＨに対する酵素安定組成
物をさらに含有する。

【００１１】式Ｉで示される化合物は、水性溶液中で、
約９のｐＨにおいて効果的な緩衝剤である。このｐＨに
おいて、式Ｉで示される化合物は、良好な緩衝能力を示
すと同時に、前記した反応過程において生成されるアセ
トアルデヒドを捕獲するための良好な捕獲効果を示す。 １，３−ジアミノ−２−ヒドロキシプロパンはＡＤＨを
安定化する助けとなることが見い出された。

【００１２】本発明のもう一つの態様は、この組成物の
安定性を増大することにある。本発明が安定性の増大を
もたらすことが見いだされた。全く予想外に、本発明に
よって、４℃で少なくとも約６０日間の安定性を有する
、すなわちＡＤＨを不活性にしない、安定な組成物が生
成されることが見い出された。

【００１３】本発明はまた、試料中のエタノールを検出
するための診断的分析方法に関するものであり、この分
析方法は、試料を、 （１）（イ）酵素アルコール　　デヒドロゲナーゼ、（
ロ）補酵素ニコチンアミド　　アデニン　　ジヌクレオ
チド、および （ハ）　　式 　　　　　　　　　　　　Ｈ２　Ｎ−（ＣＨ２　）ｎ　
−ＣＨＲ−ＣＨ２　−ＮＨ２　　　　　　　　　　　Ｉ
（式中、Ｒは、Ｈ、ＣＨ３　またはＯＨであり、そして
ｎは、０、１、２、３または４である。ただしＲがＯＨ
である場合には、ｎは０であることはできない。）で示
される化合物、からなる組成物を混合し、次いで（２）
　　生成されるＮＡＤＨの量を測定する、ことからなる
。

【００１４】さらにまた、本発明は、下記の特徴を有す
る診断キットに関するものである：この分析もしくは診
断キットを構成する各成分は当技術で周知の慣用の方法
によって、一緒に合せることができる。たとえば、諸成
分を慣用の技術によって密に混合し、水溶液を形成する
ことができる。好適態様においては、２つの分離した試
薬、すなわち第一試薬と開始試薬とを先ず形成すること
によって、組成物の安定性を得ることができ、これらの
試薬は使用前に後で慣用の技術によって一緒に混合し、
分析用組成物を形成することができる。好ましくは、こ
の第一試薬は式Ｉで示される化合物も含有しており、そ
してこの開始試薬はＮＡＤ、ＡＤＨおよびＡＤＨに対す
る酵素安定剤組成物を含有する。第一試薬のｐＨは好ま
しくは、約８．５〜約９．５の範囲である。開始試薬の
ｐＨは好ましくは、約６．５〜約７．０の範囲である。

【００１５】本発明は下記のとおりに行なうことができ
る：予め選ばれた量の第一試薬を３つの分離した反応キ
ュベット中に入れる。一定量の試料を次いで、各キュベ
ットに入れる。第一のキュベットには水を加え、以下で
説明するように、後で開始試薬を添加し、この反応は試
薬ブランクとして用いる。第二のキュベットには、同一
量の既知エタノール標準溶液を加える。さらに、最後の
キュベットには、同一量のエタノール含有量が不明の試
料を加える。次いで、３４０ｎｍにおける吸収値を３つ
のキュベットのそれぞれについて測定し、試料ブランク
値を得る。

【００１６】この第一、第二および第三のキュベットの
それぞれに、予め選ばれた量の開始試薬を加える。好ま
しくは、第一試薬の量と開始試薬の量との割合は、約３
：１である。これらのキュベットを次いで、約２５℃〜
約４０℃の温度でインキュベートする。

【００１７】このインキュベーション中に、反応の終末
点が測定されるまで、分光光度測定を行なう。この反応
の終末点は全てのエタノールがアセトアルデヒドに酸化
される時点である。得られるデータを分析し、エタノー
ルを含有する試料液体中のエタノールの量を決定する。 本発明の分析用組成物は自動式試験装置に好適であるが
、約３２０ｎｍ〜約３８０ｎｍの範囲の紫外部吸収を測
定することができる分光光度計のいづれをも使用するこ
とができる。

【００１８】予め選ばれた量の第一試薬と開始試薬とを
手で予備混合することもでき、次いで自動式臨床用分析
機により、キュベット中にピペット添加する。使用する
第一試薬の量対開始試薬の量の割合は同一である。

【００１９】第一試薬および開始試薬は両方ともに、保
存剤を含有することができる。有用な保存剤は、６より
大きいかまたは６に等しいｐＨ環境内で微生物の増殖を
防止するのに有効なものであることは当業者にとって明
らかなことである。好適な保存剤はナトリウムアジドで
ある。

【００２０】第一試薬はまた、当該第一試薬の未調製ｐ
Ｈを約８．５〜約９．５の範囲のｐＨに減少させる酸を
含有することができる。このｐＨ範囲において、式Ｉで
示される化合物は、捕獲剤として働き、かつまた第一試
薬のための緩衝剤として働く。

【００２１】開始試薬はまた、前記した酵素安定組成物
（ＥＳＣ）を含有することができる。ＥＳＣは、ＡＤＨ
が変性しないように、ＡＤＨの活性形態の維持に有用で
ある。ＥＳＣは好ましくは、１種または２種以上の化合
物を含有する。ＡＤＨが亜鉛およびスルフヒドリル（す
なわち、チオールもしくは−ＳＨ）部分を含有すること
は周知であり、従って亜鉛および（または）スルフヒド
リル部分を含有する化合物は好適な候補化合物である。 好適には、亜鉛化合物、たとえば、亜鉛塩化化合物は、
イオン化して遊離の亜鉛イオンを生成することができる
。このような化合物の一例に、硫酸亜鉛がある。好まし
くは、スルフヒドリル含有化合物は有機基に結合してい
る、少なくとも１個のスルフヒドリル基を含有しており
、その種類および構造は当業者に充分に知られている。 このような化合物の一例には、１−チオグリセロールが
ある。

【００２２】さらにまた、ＥＳＣはアルカリ金属、たと
えばナトリウムまたはカリウム、あるいはアルカリ土類
金属、たとえばマグネシウムから誘導されるメタンスル
ホン酸の塩を含有することができる。ＥＳＣはまた、Ｄ
−マンニトールを含有することができる。

【００２３】ＥＳＣは場合により、ＡＤＨの安定化を助
ける、他の化合物を含有することもできる。この化合物
はまた、開始試薬の緩衝剤としても作用することができ
る。開始試薬は、ＡＤＨおよびＮＡＤの安定性が確実に
維持されるために、緩衝しなければならない。ＡＤＨが
約６．５〜約８．５のｐＨ範囲で酵素活性を保有するこ
とは公知である。ＮＡＤが酸性環境におけるよりも、ア
ルカリ性環境において、迅速に加水分解することも知ら
れている。従って、開始試薬のｐＨを約６．５〜約７．
０に、好ましくは約６．８のｐＨに維持することができ
る緩衝剤が好ましい。好ましくは、酸および塩基、ある
いは酸の塩を使用することができる。このような酸塩の
例には、クエン酸ナトリウムがある。

【００２４】第一試薬および開始試薬を構成する、好適
化合物および濃度範囲を以下に示す： 　　　　　　第一試薬　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　範　　　　囲　　式Ｉ
で示される化合物　　　　　　　　　　　　　　０．１
〜１．０モル／リットル　　ナトリウムアジド　　　　
　　　　　　　　　　　　　　０．０１〜１％　　　　
　　開始試薬 　　クエン酸ナトリウム　　　　　　　　　　　　　　
　　１．０〜１００．０ミリモル／リットル　　ナトリ
ウムアジド　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．
０１〜１％　　硫酸亜鉛　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　０〜１０．０ミリモル／リッ
トル　　１−チオグリセロール　　　　　　　　　　　
　　　０〜１．０モル／リットル　　メタンスルホン酸
ナトリウム塩　　　　　　０〜５．０モル／リットル　
　Ｄ−マンニトール　　　　　　　　　　　　　　　　
　　０〜１５．０％　　ＮＡＤ　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　４．０ミリモル／
リットルより大　　ＡＤＨ　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　１０．０ＫＵ１　／リ
ットルより大　　　１ＫＵ＝１０００単位

【００２５】

【実施例】本発明を下記の例でさらに充分に説明する。 この例は本発明の範囲を制限する意味を有するものでは
ない。別段の記載がないかぎり、パーセンテージはいづ
れも、重量／容量である。温度はいづれも、摂氏度であ
る。

【００２６】例１ この実験の目的は、試料液体中のエタノールの濃度を本
発明の組成物を使用して測定することにある。０．３モ
ル／リットルの濃度の１，３−ジアミノ−２−ヒドロキ
シプロパンおよび総溶液の０．１％の濃度のナトリウム
アジドを一緒に密に混合し、約９の調製ｐＨを有する第
一試薬を形成する。下記の化合物を一緒に混合し、開始
試薬を形成する： 　　（ａ）クエン酸ナトリウム　　　　　　　　　　　
　　　　　５０ミリモル／リットル　　（ｂ）ナトリウ
ムアジド　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．１
％　　（ｃ）硫酸亜鉛　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　１．０ミリモル／リットル　　
（ｄ）１−チオグリセロール　　　　　　　　　　　　
　　０．２５モル／リットル　　（ｅ）メタンスルホン
酸ナトリウム塩　　　　　　２．５モル／リットル　　
（ｆ）Ｄ−マンニトール　　　　　　　　　　　　　　
　　　　１０．０％　　（ｇ）ＮＡＤ　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３６．０ミ
リモル／リットル　　（ｈ）ＡＤＨ　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３６０ＫＵ／
リットルエタノール含有試料液体（「試料液体」）の分
析は、ＣＯＢＡＳ　　ＭＩＲＡ（登録名）臨床化学分析
機（これはＲｏｃｈｅ　　Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ　　
Ｉｎｃ．から入手できる）において、標準操作方法にし
たがい、行なった。

【００２７】この例では、第一試薬１２０マイクロリッ
トル、試料液体２マイクロリットルおよび試料プローベ
を浄化するための水９０マイクロリットルを反応キュベ
ット［ＣＯＢＡＳ　　ＭＩＲＡ（登録名）のＣｙｃｌ　
　１］中に、ピペットで加える。３４０ｎｍで吸収値を
読み取り、このデータは試料液体ブランク値とする。さ
らに、既知濃度のエタノールを含有するエタノール標準
液を、同一量の第一試薬とともにキュベット中にピペッ
トで加える。３４０ｎｍで吸収値を読み取り、このデー
タはエタノール標準のブランク値とする。次いで、各反
応キュベットに、開始試薬４０マイクロリットルおよび
水５５マイクロリットルを加える［ＣＯＢＡＳ　　ＭＩ
ＲＡ（登録名）のＣｙｃｌｅ　　２］。第一試薬１２０
マイクロリットル、水１４７マイクロリットルおよび開
始試薬４０マイクロリットルを含有する試薬ブランクを
また、キュベット中に形成する。これらのキュベットを
、３４０ｎｍにおける吸収が終末点に達するまで、すな
わちエタノールのアセトアルデヒドへの酸化が完了する
まで、さらに数サイクルの間、３７℃でインキュベート
する。 エタノール含有試料液体中のエタノールの計算は、Ｃｙ
ｃｌｅ　　１の終了点に読み取った吸収量とＣｙｃｌｅ
　　６の終了点に読み取った吸収値との間の差にもとづ
いている。１サイクルは２５秒に等しい。この吸収読み
取り値の差はエタノール含有試料液体中のエタノール濃
度に比例する。

【００２８】試薬ブランクは、０．４１の３４０ｎｍに
おける吸収（Ａ３４０　）を有し、そしてエタノール溶
液標準（３００ｍｇ／デシリットル）は１．９８のＡ３
４０　を有した。試料液体ブランクは０．００のＡ３４
０　を有した。 試料液体は０．８４のＡ３４０　を有していた。この試
料液体中のエタノール濃度は、ＣＯＢＡＳ　　ＭＩＲＡ
（登録名）により、８３ｍｇ／デシリットルであること
が計算された。ＣＯＢＡＳ　　ＭＩＲＡ（登録名）は、
エタノール標準の補正吸収値に対する被験試料液体の補
正吸収値の比を取り、得られた倍数をエタノール標準の
濃度と掛け算し、試料液体のエタノール濃度を得ること
によりエタノール濃度を計算する。この補正吸収値は、
試薬ブランクの吸収値および試料液体ブランクの吸収値
に関して補正されている絶対吸収値である。

【００２９】前記で説明したように、組成物の安定性の
増大が見い出された。組成物の安定性の増大はＣＯＢＡ
Ｓ　　ＭＩＲＡ（登録名）を用いて、下記のとおりにし
て測定した：第一試薬対開始試薬の３：１の割合の溶液
を調製し、単次操作試薬を形成する。この単次操作試薬
２００マイクロリットル、エタノール含有試料２マイク
ロリットルおよび稀釈剤（水）５０マイクロリットルを
反応キュベット中にピペットで入れる。Ａ３４０　を直
ちに読み取る（混合後の４．５秒の時点）。この読み取
り値は上記例における試料ブランクの読み取り値に等し
い。反応キュベットを、終末点に達するまで（約６分、
または１５サイクル）、３７℃でインキュベートする。 上記例の場合と同様に、試薬ブランクおよびエタノール
標準について行なう。

【００３０】３８０ｍｇ／デシリットルの濃度を有する
既知のエタノール含有試料を、単次操作試薬の試験の度
毎に、評価する。これらの試験の間で、この単次操作試
薬は冷蔵庫内で４℃に維持する。既知のエタノール含有
試料は、１７日目、３０日目、６０日目および９０日目
に評価する。試料が約３８０ｍｇ／デシリットルのエタ
ノール濃度を有するものと評価された（もしくはこの濃
度が採取された）場合には、この単次操作試薬の安定性
は保持されているものとする。

【００３１】この計算は、上記例で説明した方法と同一
の方法により、ＣＯＢＡＳ　　ＭＩＲＡ（登録名）で行
なった。この安定性の試験結果を以下に示す：４℃にお
ける一回操作試薬の安定性約３８０ｍｇ／デシリットル
の濃度の、エタノール含有試料を回収。

【表１】 　　４℃における日数　　　　　　　　　　１７　　　
　　　　　　　３０　　　　　　　　　　６０　　　　
　　　　　　９０　　　　　　（一回操作試薬） 　　分析値　　　　　　　　　　　　　　　　　　３８
１　　　　　　３８７　　　　　　３８３　　　　　　
３７１　　（ｍｇ／デシリットル）

Claims (17)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　下記の成分からなる組成物：（イ）　
   　酵素アルコール　　デヒドロゲナーゼ、（ロ）　　補
   酵素ニコチンアミド　　アデニン　　ジヌクレオチド、
   および （ハ）　　式 　　　　　　Ｈ２　Ｎ−（ＣＨ２　）ｎ　−ＣＨＲ−Ｃ
   Ｈ２　−ＮＨ２　　　　　　　　　　　　　　　Ｉ（式
   中、ＲはＨ、ＣＨ３　またはＯＨであり、そしてｎは０
   、１、２、３または４である、ただしＲがＯＨである場
   合には、ｎは０であることはできない。）で示される化
   合物。
2. 【請求項２】　　化合物が 【化１】 からなる群から選ばれる、請求項１に記載の組成物。
3. 【請求項３】　　化合物がＨ２　Ｎ−ＣＨ２　−ＣＨ（
   ＯＨ）−ＣＨ２　−ＮＨ２　である、請求項２に記載の
   組成物。
4. 【請求項４】　　酵素アルコール　　デヒドロゲナーゼ
   に対する酵素安定組成物をさらに含有する、請求項１に
   記載の組成物。
5. 【請求項５】　　組成物のｐＨが約８．５〜約９．５の
   範囲内である、請求項４に記載の組成物。
6. 【請求項６】　　酵素安定組成物が亜鉛化合物、スルフ
   ヒドリル含有化合物、メタンスルホン酸の塩、Ｄ−マン
   ニトールおよびクエン酸の塩からなる、請求項５に記載
   の組成物。
7. 【請求項７】　　酵素安定組成物が硫酸亜鉛、１−チオ
   グリセロール、メタンスルホン酸ナトリウム塩、Ｄ−マ
   ンニトールおよびクエン酸ナトリウムからなる、請求項
   ６に記載の組成物。
8. 【請求項８】　　体液中のエタノール含有量を測定する
   ための分析溶液であって、請求項１〜７のいづれか一項
   に記載の組成物からなる分析溶液。
9. 【請求項９】　　試料中のエタノールを検出するための
   診断的分析方法であって、試料を、 （イ）酵素アルコール　　デヒドロゲナーゼ、（ロ）補
   酵素ニコチンアミド　　アデニン　　ジヌクレオチド、
   および （ハ）　　式 　　　　　　Ｈ２　Ｎ−（ＣＨ２　）ｎ　−ＣＨＲ−Ｃ
   Ｈ２　−ＮＨ２　　　　　　　　　　　　　　　Ｉ（式
   中、Ｒは、Ｈ、ＣＨ３　またはＯＨであり、そしてｎは
   、０、１、２、３または４である、ただしＲがＯＨであ
   る場合には、ｎは０であることはできない。）で示され
   る化合物、と反応させ、次いで生成されるＮＡＤＨの量
   を測定することからなる分析方法。
10. 【請求項１０】　　上記成分の（イ）、（ロ）および（
    ハ）をそれぞれ別々に、または予め混合した溶液として
    、添加する、請求項９に記載の診断的分析方法。
11. 【請求項１１】　　上記成分の（イ）および（ロ）を予
    め混合した溶液として添加する、請求項９または１０に
    記載の診断的分析方法。
12. 【請求項１２】　　エタノール検定用診断キットであっ
    て、 （イ）（ｉ）式 　　　　　　Ｈ２　Ｎ−（ＣＨ２　）ｎ　−ＣＨＲ−Ｃ
    Ｈ２　−ＮＨ２　　　　　　　　　　　　　　　Ｉ（式
    中、Ｒは、Ｈ、ＣＨ３　またはＯＨであり、そしてｎは
    、０、１、２、３または４である、ただしＲがＯＨであ
    る場合には、ｎは０であることはできない。）で示され
    る化合物を含有する第一試薬、および（ロ）（ｉ）　酵
    素アルコール　　デヒドロゲナーゼおよび（ｉｉ）補酵
    素ニコチンアミド　　アデニン　　ジヌクレオチドを含
    有する開始試薬、 からなる診断キット。
13. 【請求項１３】　　式Ｉで示される化合物が、【化２】 からなる群から選ばれる、請求項１２に記載の診断キッ
    ト。
14. 【請求項１４】　　式Ｉで示される化合物が、Ｈ２　Ｎ
    −ＣＨ２　−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２　−ＮＨ２　である
    、請求項１３に記載の診断キット。
15. 【請求項１５】　　開始試薬が酵素アルコール　　デヒ
    ドロゲナーゼに対する酵素安定組成物をさらに含有して
    おり、この酵素安定組成物は、開始試薬のｐＨを約６．
    ５〜約７．０の範囲に維持するのに充分な量で存在して
    いる、請求項１２に記載の診断キット。
16. 【請求項１６】　　酵素安定組成物が亜鉛化合物、スル
    フヒドリル含有化合物、メタンスルホン酸の塩、Ｄ−マ
    ンニトールおよびクエン酸の塩からなる、請求項１５に
    記載の診断キット。
17. 【請求項１７】　　上記酵素安定組成物が硫酸亜鉛、１
    −チオグリセロール、メタンスルホン酸ナトリウム塩、
    Ｄ−マンニトールおよびクエン酸ナトリウムからなる、
    請求項１６に記載の診断キット。