JP2796462B2 - エタノール分析用組成物 - Google Patents
エタノール分析用組成物Info
- Publication number
- JP2796462B2 JP2796462B2 JP3330492A JP33049291A JP2796462B2 JP 2796462 B2 JP2796462 B2 JP 2796462B2 JP 3330492 A JP3330492 A JP 3330492A JP 33049291 A JP33049291 A JP 33049291A JP 2796462 B2 JP2796462 B2 JP 2796462B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- composition
- compound
- ethanol
- enzyme
- reagent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/32—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving dehydrogenase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/96—Stabilising an enzyme by forming an adduct or a composition; Forming enzyme conjugates
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、エタノール分析用の組
成物に関するものである。本発明の組成物は、酵素アル
コール デヒドロゲナーゼ、補酵素ニコチンアミド ア
デニン ジヌクレオチドおよび式 Ｈ2 Ｎ−（ＣＨ2 ）n −ＣＨＲ−ＣＨ2 −ＮＨ2 Ｉ （式中、Ｒは、Ｈ、ＣＨ3 またはＯＨであり、そしてｎ
は、０、１、２、３または４である、ただしＲがＯＨで
ある場合には、ｎは０であることはできない。）で示さ
れる化合物を含有する。式Ｉで示される適当な化合物
は、１，２−ジアミノエタン（Ｒ＝Ｈ、ｎ＝０）、１，
２−ジアミノプロパン（Ｒ＝ＣＨ3 、ｎ＝０）、１，３
−ジアミノプロパン（Ｒ＝Ｈ、ｎ＝１）、および１，３
−ジアミノ−２−ヒドロキシプロパン（Ｒ＝ＯＨ、ｎ＝
１）を包含する。
成物に関するものである。本発明の組成物は、酵素アル
コール デヒドロゲナーゼ、補酵素ニコチンアミド ア
デニン ジヌクレオチドおよび式 Ｈ2 Ｎ−（ＣＨ2 ）n −ＣＨＲ−ＣＨ2 −ＮＨ2 Ｉ （式中、Ｒは、Ｈ、ＣＨ3 またはＯＨであり、そしてｎ
は、０、１、２、３または４である、ただしＲがＯＨで
ある場合には、ｎは０であることはできない。）で示さ
れる化合物を含有する。式Ｉで示される適当な化合物
は、１，２−ジアミノエタン（Ｒ＝Ｈ、ｎ＝０）、１，
２−ジアミノプロパン（Ｒ＝ＣＨ3 、ｎ＝０）、１，３
−ジアミノプロパン（Ｒ＝Ｈ、ｎ＝１）、および１，３
−ジアミノ−２−ヒドロキシプロパン（Ｒ＝ＯＨ、ｎ＝
１）を包含する。
【０００２】
【従来の技術】体液、たとえば唾液、血液および尿中の
エタノールの量を測定するための体液試験は、中でも、
安全および健康上の理由で重要である。酔いながら運転
している疑いがある場合の血中アルコール含有量の検出
とともに、アルコールの濫用およびその検出は、迅速で
かつまた信頼できるエタノール測定が重要である多くの
重要な分野のうちの二つである。
エタノールの量を測定するための体液試験は、中でも、
安全および健康上の理由で重要である。酔いながら運転
している疑いがある場合の血中アルコール含有量の検出
とともに、アルコールの濫用およびその検出は、迅速で
かつまた信頼できるエタノール測定が重要である多くの
重要な分野のうちの二つである。
【０００３】体液のエタノール含有量の測定に有用な方
法では、酵素反応を使用する。この方法では、アルコー
ル デヒドロゲナーゼの作用によって、エタノールがア
セトアルデヒドに変換され、ここで補酵素として作用す
るニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）が
その還元形態（ＮＡＤＨ）に変換される。この反応経路
は下記の式で示される：
法では、酵素反応を使用する。この方法では、アルコー
ル デヒドロゲナーゼの作用によって、エタノールがア
セトアルデヒドに変換され、ここで補酵素として作用す
るニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）が
その還元形態（ＮＡＤＨ）に変換される。この反応経路
は下記の式で示される：
【化３】 ＡＤＨはアルコール デヒドロゲナーゼを表わす。
【０００４】この反応の平衡はアルコールとＮＡＤの側
にある。しかしながら、この平衡は、反応がアルカリ性
条件の下に生起し、生成されたアセトアルデヒドが捕獲
された時には、右方向に移動する。この反応の過程およ
び程度は、３４０ナノメーターにおける分光光度分析に
よって測定することができる。この波長においては、Ｎ
ＡＤは紫外線を吸収しないが、ＮＡＤＨは紫外線を吸収
する。上記反応で生成されるＮＡＤＨの量は、存在する
エタノールの量に相当する。
にある。しかしながら、この平衡は、反応がアルカリ性
条件の下に生起し、生成されたアセトアルデヒドが捕獲
された時には、右方向に移動する。この反応の過程およ
び程度は、３４０ナノメーターにおける分光光度分析に
よって測定することができる。この波長においては、Ｎ
ＡＤは紫外線を吸収しないが、ＮＡＤＨは紫外線を吸収
する。上記反応で生成されるＮＡＤＨの量は、存在する
エタノールの量に相当する。
【０００５】分析法として使用する場合には、この反応
は完了させなければならない。しかしながら、エタノー
ルがＮＡＤによってアセトアルデヒドに酸化された場合
には、この反応の平衡は好ましくないものとなるため
に、ＮＡＤＨがエタノールに対して定量的に生成される
ように、アセトアルデヒドをこの系から分離しなければ
ならない。アセトアルデヒドを分離もしくは捕獲するた
めの方法の一つでは、捕獲剤を使用する。さらにまた、
大部分の酵素反応の場合と同様に、分析系のpHを、特定
の酵素反応に最適の範囲内に維持するための緩衝剤が必
要である。
は完了させなければならない。しかしながら、エタノー
ルがＮＡＤによってアセトアルデヒドに酸化された場合
には、この反応の平衡は好ましくないものとなるため
に、ＮＡＤＨがエタノールに対して定量的に生成される
ように、アセトアルデヒドをこの系から分離しなければ
ならない。アセトアルデヒドを分離もしくは捕獲するた
めの方法の一つでは、捕獲剤を使用する。さらにまた、
大部分の酵素反応の場合と同様に、分析系のpHを、特定
の酵素反応に最適の範囲内に維持するための緩衝剤が必
要である。
【０００６】現在使用されている捕獲剤がＡＤＨを不活
性化できることも知られている。現在の分析系は安定性
が低く、その安定性は一度混合されると室温（約２０
℃）で一日以下であり、冷蔵しても約３日である。新鮮
な分析試薬をしばしば調製しなくてはならない。低い安
定性はまた、精度を確保するために、既知のエタノール
試料を操作する必要性をさらに度々、導くことがある。
性化できることも知られている。現在の分析系は安定性
が低く、その安定性は一度混合されると室温（約２０
℃）で一日以下であり、冷蔵しても約３日である。新鮮
な分析試薬をしばしば調製しなくてはならない。低い安
定性はまた、精度を確保するために、既知のエタノール
試料を操作する必要性をさらに度々、導くことがある。
【０００７】エタノールの分析および試薬に現在使用さ
れている多くの捕獲剤、たとえばヒドラジンは、ＡＤＨ
を不活性にすることができ、この分析および試薬の貯蔵
安定性を制限している。
れている多くの捕獲剤、たとえばヒドラジンは、ＡＤＨ
を不活性にすることができ、この分析および試薬の貯蔵
安定性を制限している。
【０００８】従って、ＡＤＨを不活性化しない捕獲剤に
対する要求が存在している。ＡＤＨに対する酵素安定組
成物に関する要求もまた存在している。長期間安定性を
有する分析系に対する要求もまた、存在している。
対する要求が存在している。ＡＤＨに対する酵素安定組
成物に関する要求もまた存在している。長期間安定性を
有する分析系に対する要求もまた、存在している。
【０００９】
【発明の開示】従って、本発明の目的は、エタノールを
分析するための、このような組成物を提供することにあ
る。本発明の組成物は、酵素アルコール デヒドロゲナ
ーゼ、補酵素ニコチンアミド アデニン ジヌクレオチ
ドおよび下記の式Ｉで示される化合物を含有する： Ｈ2 Ｎ−（ＣＨ2 ）n −ＣＨＲ−ＣＨ2 −ＮＨ2 Ｉ 式中、Ｒは、Ｈ、ＣＨ3 またはＯＨであり、そしてｎ
は、０、１、２、３または４である。ただしＲがＯＨで
ある場合には、ｎは０であることはできない。
分析するための、このような組成物を提供することにあ
る。本発明の組成物は、酵素アルコール デヒドロゲナ
ーゼ、補酵素ニコチンアミド アデニン ジヌクレオチ
ドおよび下記の式Ｉで示される化合物を含有する： Ｈ2 Ｎ−（ＣＨ2 ）n −ＣＨＲ−ＣＨ2 −ＮＨ2 Ｉ 式中、Ｒは、Ｈ、ＣＨ3 またはＯＨであり、そしてｎ
は、０、１、２、３または４である。ただしＲがＯＨで
ある場合には、ｎは０であることはできない。
【００１０】式Ｉで示される適当な化合物は、１，２−
ジアミノエタン（Ｒ＝Ｈ、ｎ＝０）、１，２−ジアミノ
プロパン（Ｒ＝ＣＨ3 、ｎ＝０）、１，３−ジアミノプ
ロパン（Ｒ＝ＣＨ3 、ｎ＝１）、および１，３−ジアミ
ノ−２−ヒドロキシプロパン（Ｒ＝ＯＨ、ｎ＝１）を包
含する。これらの化合物は公知であり、Ａｌｄｒｉｃｈ
（Ｓｔｅｉｎｈｅｉｍ／Ｇｅｒｍａｎｙ）および（また
は）Ｓｉｇｍａ（Ｂｕｃｈｓ／Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎ
ｄ）などの化学品供給先から得ることができる。好まし
くは、本発明の組成物はＡＤＨに対する酵素安定組成物
をさらに含有する。
ジアミノエタン（Ｒ＝Ｈ、ｎ＝０）、１，２−ジアミノ
プロパン（Ｒ＝ＣＨ3 、ｎ＝０）、１，３−ジアミノプ
ロパン（Ｒ＝ＣＨ3 、ｎ＝１）、および１，３−ジアミ
ノ−２−ヒドロキシプロパン（Ｒ＝ＯＨ、ｎ＝１）を包
含する。これらの化合物は公知であり、Ａｌｄｒｉｃｈ
（Ｓｔｅｉｎｈｅｉｍ／Ｇｅｒｍａｎｙ）および（また
は）Ｓｉｇｍａ（Ｂｕｃｈｓ／Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎ
ｄ）などの化学品供給先から得ることができる。好まし
くは、本発明の組成物はＡＤＨに対する酵素安定組成物
をさらに含有する。
【００１１】式Ｉで示される化合物は、水性溶液中で、
約９のpHにおいて効果的な緩衝剤である。このpHにおい
て、式Ｉで示される化合物は、良好な緩衝能力を示すと
同時に、前記した反応過程において生成されるアセトア
ルデヒドを捕獲するための良好な捕獲効果を示す。１，
３−ジアミノ−２−ヒドロキシプロパンはＡＤＨを安定
化する助けとなることが見い出された。
約９のpHにおいて効果的な緩衝剤である。このpHにおい
て、式Ｉで示される化合物は、良好な緩衝能力を示すと
同時に、前記した反応過程において生成されるアセトア
ルデヒドを捕獲するための良好な捕獲効果を示す。１，
３−ジアミノ−２−ヒドロキシプロパンはＡＤＨを安定
化する助けとなることが見い出された。
【００１２】本発明のもう一つの態様は、この組成物の
安定性を増大することにある。本発明が安定性の増大を
もたらすことが見いだされた。全く予想外に、本発明に
よって、４℃で少なくとも約６０日間の安定性を有す
る、すなわちＡＤＨを不活性にしない、安定な組成物が
生成されることが見い出された。
安定性を増大することにある。本発明が安定性の増大を
もたらすことが見いだされた。全く予想外に、本発明に
よって、４℃で少なくとも約６０日間の安定性を有す
る、すなわちＡＤＨを不活性にしない、安定な組成物が
生成されることが見い出された。
【００１３】本発明はまた、試料中のエタノールを検出
するための診断的分析方法に関するものであり、この分
析方法は、試料を、 （１）（イ）酵素アルコール デヒドロゲナーゼ、 （ロ）補酵素ニコチンアミド アデニン ジヌクレオチ
ド、および （ハ） 式 Ｈ2 Ｎ−（ＣＨ2 ）n −ＣＨＲ−ＣＨ2 −ＮＨ2 Ｉ （式中、Ｒは、Ｈ、ＣＨ3 またはＯＨであり、そしてｎ
は、０、１、２、３または４である。ただしＲがＯＨで
ある場合には、ｎは０であることはできない。）で示さ
れる化合物、からなる組成物を混合し、次いで （２） 生成されるＮＡＤＨの量を測定する、 ことからなる。
するための診断的分析方法に関するものであり、この分
析方法は、試料を、 （１）（イ）酵素アルコール デヒドロゲナーゼ、 （ロ）補酵素ニコチンアミド アデニン ジヌクレオチ
ド、および （ハ） 式 Ｈ2 Ｎ−（ＣＨ2 ）n −ＣＨＲ−ＣＨ2 −ＮＨ2 Ｉ （式中、Ｒは、Ｈ、ＣＨ3 またはＯＨであり、そしてｎ
は、０、１、２、３または４である。ただしＲがＯＨで
ある場合には、ｎは０であることはできない。）で示さ
れる化合物、からなる組成物を混合し、次いで （２） 生成されるＮＡＤＨの量を測定する、 ことからなる。
【００１４】さらにまた、本発明は、下記の特徴を有す
る診断キットに関するものである：この分析もしくは診
断キットを構成する各成分は当技術で周知の慣用の方法
によって、一緒に合せることができる。たとえば、諸成
分を慣用の技術によって密に混合し、水溶液を形成する
ことができる。好適態様においては、２つの分離した試
薬、すなわち第一試薬と開始試薬とを先ず形成すること
によって、組成物の安定性を得ることができ、これらの
試薬は使用前に後で慣用の技術によって一緒に混合し、
分析用組成物を形成することができる。好ましくは、こ
の第一試薬は式Ｉで示される化合物も含有しており、そ
してこの開始試薬はＮＡＤ、ＡＤＨおよびＡＤＨに対す
る酵素安定剤組成物を含有する。第一試薬のpHは好まし
くは、約８．５〜約９．５の範囲である。開始試薬のpH
は好ましくは、約６．５〜約７．０の範囲である。
る診断キットに関するものである：この分析もしくは診
断キットを構成する各成分は当技術で周知の慣用の方法
によって、一緒に合せることができる。たとえば、諸成
分を慣用の技術によって密に混合し、水溶液を形成する
ことができる。好適態様においては、２つの分離した試
薬、すなわち第一試薬と開始試薬とを先ず形成すること
によって、組成物の安定性を得ることができ、これらの
試薬は使用前に後で慣用の技術によって一緒に混合し、
分析用組成物を形成することができる。好ましくは、こ
の第一試薬は式Ｉで示される化合物も含有しており、そ
してこの開始試薬はＮＡＤ、ＡＤＨおよびＡＤＨに対す
る酵素安定剤組成物を含有する。第一試薬のpHは好まし
くは、約８．５〜約９．５の範囲である。開始試薬のpH
は好ましくは、約６．５〜約７．０の範囲である。
【００１５】本発明は下記のとおりに行なうことができ
る：予め選ばれた量の第一試薬を３つの分離した反応キ
ュベット中に入れる。一定量の試料を次いで、各キュベ
ットに入れる。第一のキュベットには水を加え、以下で
説明するように、後で開始試薬を添加し、この反応は試
薬ブランクとして用いる。第二のキュベットには、同一
量の既知エタノール標準溶液を加える。さらに、最後の
キュベットには、同一量のエタノール含有量が不明の試
料を加える。次いで、３４０ｎｍにおける吸収値を３つ
のキュベットのそれぞれについて測定し、試料ブランク
値を得る。
る：予め選ばれた量の第一試薬を３つの分離した反応キ
ュベット中に入れる。一定量の試料を次いで、各キュベ
ットに入れる。第一のキュベットには水を加え、以下で
説明するように、後で開始試薬を添加し、この反応は試
薬ブランクとして用いる。第二のキュベットには、同一
量の既知エタノール標準溶液を加える。さらに、最後の
キュベットには、同一量のエタノール含有量が不明の試
料を加える。次いで、３４０ｎｍにおける吸収値を３つ
のキュベットのそれぞれについて測定し、試料ブランク
値を得る。
【００１６】この第一、第二および第三のキュベットの
それぞれに、予め選ばれた量の開始試薬を加える。好ま
しくは、第一試薬の量と開始試薬の量との割合は、約
３：１である。これらのキュベットを次いで、約２５℃
〜約４０℃の温度でインキュベートする。
それぞれに、予め選ばれた量の開始試薬を加える。好ま
しくは、第一試薬の量と開始試薬の量との割合は、約
３：１である。これらのキュベットを次いで、約２５℃
〜約４０℃の温度でインキュベートする。
【００１７】このインキュベーション中に、反応の終末
点が測定されるまで、分光光度測定を行なう。この反応
の終末点は全てのエタノールがアセトアルデヒドに酸化
される時点である。得られるデータを分析し、エタノー
ルを含有する試料液体中のエタノールの量を決定する。
本発明の分析用組成物は自動式試験装置に好適である
が、約３２０ｎｍ〜約３８０ｎｍの範囲の紫外部吸収を
測定することができる分光光度計のいづれをも使用する
ことができる。
点が測定されるまで、分光光度測定を行なう。この反応
の終末点は全てのエタノールがアセトアルデヒドに酸化
される時点である。得られるデータを分析し、エタノー
ルを含有する試料液体中のエタノールの量を決定する。
本発明の分析用組成物は自動式試験装置に好適である
が、約３２０ｎｍ〜約３８０ｎｍの範囲の紫外部吸収を
測定することができる分光光度計のいづれをも使用する
ことができる。
【００１８】予め選ばれた量の第一試薬と開始試薬とを
手で予備混合することもでき、次いで自動式臨床用分析
機により、キュベット中にピペット添加する。使用する
第一試薬の量対開始試薬の量の割合は同一である。
手で予備混合することもでき、次いで自動式臨床用分析
機により、キュベット中にピペット添加する。使用する
第一試薬の量対開始試薬の量の割合は同一である。
【００１９】第一試薬および開始試薬は両方ともに、保
存剤を含有することができる。有用な保存剤は、６より
大きいかまたは６に等しいpH環境内で微生物の増殖を防
止するのに有効なものであることは当業者にとって明ら
かなことである。好適な保存剤はナトリウムアジドであ
る。
存剤を含有することができる。有用な保存剤は、６より
大きいかまたは６に等しいpH環境内で微生物の増殖を防
止するのに有効なものであることは当業者にとって明ら
かなことである。好適な保存剤はナトリウムアジドであ
る。
【００２０】第一試薬はまた、当該第一試薬の未調製pH
を約８．５〜約９．５の範囲のpHに減少させる酸を含有
することができる。このpH範囲において、式Ｉで示され
る化合物は、捕獲剤として働き、かつまた第一試薬のた
めの緩衝剤として働く。
を約８．５〜約９．５の範囲のpHに減少させる酸を含有
することができる。このpH範囲において、式Ｉで示され
る化合物は、捕獲剤として働き、かつまた第一試薬のた
めの緩衝剤として働く。
【００２１】開始試薬はまた、前記した酵素安定組成物
（ＥＳＣ）を含有することができる。ＥＳＣは、ＡＤＨ
が変性しないように、ＡＤＨの活性形態の維持に有用で
ある。ＥＳＣは好ましくは、１種または２種以上の化合
物を含有する。ＡＤＨが亜鉛およびスルフヒドリル（す
なわち、チオールもしくは−ＳＨ）部分を含有すること
は周知であり、従って亜鉛および（または）スルフヒド
リル部分を含有する化合物は好適な候補化合物である。
好適には、亜鉛化合物、たとえば、亜鉛塩化化合物は、
イオン化して遊離の亜鉛イオンを生成することができ
る。このような化合物の一例に、硫酸亜鉛がある。好ま
しくは、スルフヒドリル含有化合物は有機基に結合して
いる、少なくとも１個のスルフヒドリル基を含有してお
り、その種類および構造は当業者に充分に知られてい
る。このような化合物の一例には、１−チオグリセロー
ルがある。
（ＥＳＣ）を含有することができる。ＥＳＣは、ＡＤＨ
が変性しないように、ＡＤＨの活性形態の維持に有用で
ある。ＥＳＣは好ましくは、１種または２種以上の化合
物を含有する。ＡＤＨが亜鉛およびスルフヒドリル（す
なわち、チオールもしくは−ＳＨ）部分を含有すること
は周知であり、従って亜鉛および（または）スルフヒド
リル部分を含有する化合物は好適な候補化合物である。
好適には、亜鉛化合物、たとえば、亜鉛塩化化合物は、
イオン化して遊離の亜鉛イオンを生成することができ
る。このような化合物の一例に、硫酸亜鉛がある。好ま
しくは、スルフヒドリル含有化合物は有機基に結合して
いる、少なくとも１個のスルフヒドリル基を含有してお
り、その種類および構造は当業者に充分に知られてい
る。このような化合物の一例には、１−チオグリセロー
ルがある。
【００２２】さらにまた、ＥＳＣはアルカリ金属、たと
えばナトリウムまたはカリウム、あるいはアルカリ土類
金属、たとえばマグネシウムから誘導されるメタンスル
ホン酸の塩を含有することができる。ＥＳＣはまた、Ｄ
−マンニトールを含有することができる。
えばナトリウムまたはカリウム、あるいはアルカリ土類
金属、たとえばマグネシウムから誘導されるメタンスル
ホン酸の塩を含有することができる。ＥＳＣはまた、Ｄ
−マンニトールを含有することができる。
【００２３】ＥＳＣは場合により、ＡＤＨの安定化を助
ける、他の化合物を含有することもできる。この化合物
はまた、開始試薬の緩衝剤としても作用することができ
る。開始試薬は、ＡＤＨおよびＮＡＤの安定性が確実に
維持されるために、緩衝しなければならない。ＡＤＨが
約６．５〜約８．５のpH範囲で酵素活性を保有すること
は公知である。ＮＡＤが酸性環境におけるよりも、アル
カリ性環境において、迅速に加水分解することも知られ
ている。従って、開始試薬のpHを約６．５〜約７．０
に、好ましくは約６．８のpHに維持することができる緩
衝剤が好ましい。好ましくは、酸および塩基、あるいは
酸の塩を使用することができる。このような酸塩の例に
は、クエン酸ナトリウムがある。
ける、他の化合物を含有することもできる。この化合物
はまた、開始試薬の緩衝剤としても作用することができ
る。開始試薬は、ＡＤＨおよびＮＡＤの安定性が確実に
維持されるために、緩衝しなければならない。ＡＤＨが
約６．５〜約８．５のpH範囲で酵素活性を保有すること
は公知である。ＮＡＤが酸性環境におけるよりも、アル
カリ性環境において、迅速に加水分解することも知られ
ている。従って、開始試薬のpHを約６．５〜約７．０
に、好ましくは約６．８のpHに維持することができる緩
衝剤が好ましい。好ましくは、酸および塩基、あるいは
酸の塩を使用することができる。このような酸塩の例に
は、クエン酸ナトリウムがある。
【００２４】第一試薬および開始試薬を構成する、好適
化合物および濃度範囲を以下に示す： 第一試薬 範 囲 式Ｉで示される化合物 ０．１〜１．０モル／リットル ナトリウムアジド ０．０１〜１％ 開始試薬 クエン酸ナトリウム １．０〜１００．０ミリモル／リットル ナトリウムアジド ０．０１〜１％ 硫酸亜鉛 ０〜１０．０ミリモル／リットル １−チオグリセロール ０〜１．０モル／リットル メタンスルホン酸ナトリウム塩 ０〜５．０モル／リットル Ｄ−マンニトール ０〜１５．０％ ＮＡＤ ４．０ミリモル／リットルより大 ＡＤＨ １０．０ＫＵ1 ／リットルより大 1ＫＵ＝１０００単位
化合物および濃度範囲を以下に示す： 第一試薬 範 囲 式Ｉで示される化合物 ０．１〜１．０モル／リットル ナトリウムアジド ０．０１〜１％ 開始試薬 クエン酸ナトリウム １．０〜１００．０ミリモル／リットル ナトリウムアジド ０．０１〜１％ 硫酸亜鉛 ０〜１０．０ミリモル／リットル １−チオグリセロール ０〜１．０モル／リットル メタンスルホン酸ナトリウム塩 ０〜５．０モル／リットル Ｄ−マンニトール ０〜１５．０％ ＮＡＤ ４．０ミリモル／リットルより大 ＡＤＨ １０．０ＫＵ1 ／リットルより大 1ＫＵ＝１０００単位
【００２５】
【実施例】本発明を下記の例でさらに充分に説明する。
この例は本発明の範囲を制限する意味を有するものでは
ない。別段の記載がないかぎり、パーセンテージはいづ
れも、重量／容量である。温度はいづれも、摂氏度であ
る。
この例は本発明の範囲を制限する意味を有するものでは
ない。別段の記載がないかぎり、パーセンテージはいづ
れも、重量／容量である。温度はいづれも、摂氏度であ
る。
【００２６】例１ この実験の目的は、試料液体中のエタノールの濃度を本
発明の組成物を使用して測定することにある。０．３モ
ル／リットルの濃度の１，３−ジアミノ−２−ヒドロキ
シプロパンおよび総溶液の０．１％の濃度のナトリウム
アジドを一緒に密に混合し、約９の調製pHを有する第一
試薬を形成する。下記の化合物を一緒に混合し、開始試
薬を形成する： （ａ）クエン酸ナトリウム ５０ミリモル／リットル （ｂ）ナトリウムアジド ０．１％ （ｃ）硫酸亜鉛 １．０ミリモル／リットル （ｄ）１−チオグリセロール ０．２５モル／リットル （ｅ）メタンスルホン酸ナトリウム塩 ２．５モル／リットル （ｆ）Ｄ−マンニトール １０．０％ （ｇ）ＮＡＤ ３６．０ミリモル／リットル （ｈ）ＡＤＨ ３６０ＫＵ／リットル エタノール含有試料液体（「試料液体」）の分析は、Ｃ
ＯＢＡＳ ＭＩＲＡ（登録名）臨床化学分析機（これは
Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｉｎｃ．から入
手できる）において、標準操作方法にしたがい、行なっ
た。
発明の組成物を使用して測定することにある。０．３モ
ル／リットルの濃度の１，３−ジアミノ−２−ヒドロキ
シプロパンおよび総溶液の０．１％の濃度のナトリウム
アジドを一緒に密に混合し、約９の調製pHを有する第一
試薬を形成する。下記の化合物を一緒に混合し、開始試
薬を形成する： （ａ）クエン酸ナトリウム ５０ミリモル／リットル （ｂ）ナトリウムアジド ０．１％ （ｃ）硫酸亜鉛 １．０ミリモル／リットル （ｄ）１−チオグリセロール ０．２５モル／リットル （ｅ）メタンスルホン酸ナトリウム塩 ２．５モル／リットル （ｆ）Ｄ−マンニトール １０．０％ （ｇ）ＮＡＤ ３６．０ミリモル／リットル （ｈ）ＡＤＨ ３６０ＫＵ／リットル エタノール含有試料液体（「試料液体」）の分析は、Ｃ
ＯＢＡＳ ＭＩＲＡ（登録名）臨床化学分析機（これは
Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｉｎｃ．から入
手できる）において、標準操作方法にしたがい、行なっ
た。
【００２７】この例では、第一試薬１２０マイクロリッ
トル、試料液体２マイクロリットルおよび試料プローベ
を浄化するための水９０マイクロリットルを反応キュベ
ット［ＣＯＢＡＳ ＭＩＲＡ（登録名）のＣｙｃｌ
１］中に、ピペットで加える。３４０ｎｍで吸収値を読
み取り、このデータは試料液体ブランク値とする。さら
に、既知濃度のエタノールを含有するエタノール標準液
を、同一量の第一試薬とともにキュベット中にピペット
で加える。３４０ｎｍで吸収値を読み取り、このデータ
はエタノール標準のブランク値とする。次いで、各反応
キュベットに、開始試薬４０マイクロリットルおよび水
５５マイクロリットルを加える［ＣＯＢＡＳ ＭＩＲＡ
（登録名）のＣｙｃｌｅ ２］。第一試薬１２０マイク
ロリットル、水１４７マイクロリットルおよび開始試薬
４０マイクロリットルを含有する試薬ブランクをまた、
キュベット中に形成する。これらのキュベットを、３４
０ｎｍにおける吸収が終末点に達するまで、すなわちエ
タノールのアセトアルデヒドへの酸化が完了するまで、
さらに数サイクルの間、３７℃でインキュベートする。
エタノール含有試料液体中のエタノールの計算は、Ｃｙ
ｃｌｅ １の終了点に読み取った吸収量とＣｙｃｌｅ
６の終了点に読み取った吸収値との間の差にもとづいて
いる。１サイクルは２５秒に等しい。この吸収読み取り
値の差はエタノール含有試料液体中のエタノール濃度に
比例する。
トル、試料液体２マイクロリットルおよび試料プローベ
を浄化するための水９０マイクロリットルを反応キュベ
ット［ＣＯＢＡＳ ＭＩＲＡ（登録名）のＣｙｃｌ
１］中に、ピペットで加える。３４０ｎｍで吸収値を読
み取り、このデータは試料液体ブランク値とする。さら
に、既知濃度のエタノールを含有するエタノール標準液
を、同一量の第一試薬とともにキュベット中にピペット
で加える。３４０ｎｍで吸収値を読み取り、このデータ
はエタノール標準のブランク値とする。次いで、各反応
キュベットに、開始試薬４０マイクロリットルおよび水
５５マイクロリットルを加える［ＣＯＢＡＳ ＭＩＲＡ
（登録名）のＣｙｃｌｅ ２］。第一試薬１２０マイク
ロリットル、水１４７マイクロリットルおよび開始試薬
４０マイクロリットルを含有する試薬ブランクをまた、
キュベット中に形成する。これらのキュベットを、３４
０ｎｍにおける吸収が終末点に達するまで、すなわちエ
タノールのアセトアルデヒドへの酸化が完了するまで、
さらに数サイクルの間、３７℃でインキュベートする。
エタノール含有試料液体中のエタノールの計算は、Ｃｙ
ｃｌｅ １の終了点に読み取った吸収量とＣｙｃｌｅ
６の終了点に読み取った吸収値との間の差にもとづいて
いる。１サイクルは２５秒に等しい。この吸収読み取り
値の差はエタノール含有試料液体中のエタノール濃度に
比例する。
【００２８】試薬ブランクは、０．４１の３４０ｎｍに
おける吸収（Ａ340 ）を有し、そしてエタノール溶液標
準（３００mg／デシリットル）は１．９８のＡ340 を有
した。試料液体ブランクは０．００のＡ340 を有した。
試料液体は０．８４のＡ340 を有していた。この試料液
体中のエタノール濃度は、ＣＯＢＡＳ ＭＩＲＡ（登録
名）により、８３mg／デシリットルであることが計算さ
れた。ＣＯＢＡＳ ＭＩＲＡ（登録名）は、エタノール
標準の補正吸収値に対する被験試料液体の補正吸収値の
比を取り、得られた倍数をエタノール標準の濃度と掛け
算し、試料液体のエタノール濃度を得ることによりエタ
ノール濃度を計算する。この補正吸収値は、試薬ブラン
クの吸収値および試料液体ブランクの吸収値に関して補
正されている絶対吸収値である。
おける吸収（Ａ340 ）を有し、そしてエタノール溶液標
準（３００mg／デシリットル）は１．９８のＡ340 を有
した。試料液体ブランクは０．００のＡ340 を有した。
試料液体は０．８４のＡ340 を有していた。この試料液
体中のエタノール濃度は、ＣＯＢＡＳ ＭＩＲＡ（登録
名）により、８３mg／デシリットルであることが計算さ
れた。ＣＯＢＡＳ ＭＩＲＡ（登録名）は、エタノール
標準の補正吸収値に対する被験試料液体の補正吸収値の
比を取り、得られた倍数をエタノール標準の濃度と掛け
算し、試料液体のエタノール濃度を得ることによりエタ
ノール濃度を計算する。この補正吸収値は、試薬ブラン
クの吸収値および試料液体ブランクの吸収値に関して補
正されている絶対吸収値である。
【００２９】前記で説明したように、組成物の安定性の
増大が見い出された。組成物の安定性の増大はＣＯＢＡ
Ｓ ＭＩＲＡ（登録名）を用いて、下記のとおりにして
測定した：第一試薬対開始試薬の３：１の割合の溶液を
調製し、単次操作試薬を形成する。この単次操作試薬２
００マイクロリットル、エタノール含有試料２マイクロ
リットルおよび稀釈剤（水）５０マイクロリットルを反
応キュベット中にピペットで入れる。Ａ340 を直ちに読
み取る（混合後の４．５秒の時点）。この読み取り値は
上記例における試料ブランクの読み取り値に等しい。反
応キュベットを、終末点に達するまで（約６分、または
１５サイクル）、３７℃でインキュベートする。上記例
の場合と同様に、試薬ブランクおよびエタノール標準に
ついて行なう。
増大が見い出された。組成物の安定性の増大はＣＯＢＡ
Ｓ ＭＩＲＡ（登録名）を用いて、下記のとおりにして
測定した：第一試薬対開始試薬の３：１の割合の溶液を
調製し、単次操作試薬を形成する。この単次操作試薬２
００マイクロリットル、エタノール含有試料２マイクロ
リットルおよび稀釈剤（水）５０マイクロリットルを反
応キュベット中にピペットで入れる。Ａ340 を直ちに読
み取る（混合後の４．５秒の時点）。この読み取り値は
上記例における試料ブランクの読み取り値に等しい。反
応キュベットを、終末点に達するまで（約６分、または
１５サイクル）、３７℃でインキュベートする。上記例
の場合と同様に、試薬ブランクおよびエタノール標準に
ついて行なう。
【００３０】３８０mg／デシリットルの濃度を有する既
知のエタノール含有試料を、単次操作試薬の試験の度毎
に、評価する。これらの試験の間で、この単次操作試薬
は冷蔵庫内で４℃に維持する。既知のエタノール含有試
料は、１７日目、３０日目、６０日目および９０日目に
評価する。試料が約３８０mg／デシリットルのエタノー
ル濃度を有するものと評価された（もしくはこの濃度が
採取された）場合には、この単次操作試薬の安定性は保
持されているものとする。
知のエタノール含有試料を、単次操作試薬の試験の度毎
に、評価する。これらの試験の間で、この単次操作試薬
は冷蔵庫内で４℃に維持する。既知のエタノール含有試
料は、１７日目、３０日目、６０日目および９０日目に
評価する。試料が約３８０mg／デシリットルのエタノー
ル濃度を有するものと評価された（もしくはこの濃度が
採取された）場合には、この単次操作試薬の安定性は保
持されているものとする。
【００３１】この計算は、上記例で説明した方法と同一
の方法により、ＣＯＢＡＳ ＭＩＲＡ（登録名）で行な
った。この安定性の試験結果を以下に示す：４℃におけ
る一回操作試薬の安定性約３８０mg／デシリットルの濃
度の、エタノール含有試料を回収。
の方法により、ＣＯＢＡＳ ＭＩＲＡ（登録名）で行な
った。この安定性の試験結果を以下に示す：４℃におけ
る一回操作試薬の安定性約３８０mg／デシリットルの濃
度の、エタノール含有試料を回収。
【表１】 ４℃における日数 17 30 60 90 （一回操作試薬） 分析値 ３８１ ３８７ ３８３ ３７１ （mg／デシリットル）
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C12Q 1/32
Claims (17)
- 【請求項１】 下記の成分からなる組成物： （イ） 酵素アルコール デヒドロゲナーゼ、 （ロ） 補酵素ニコチンアミド アデニン ジヌクレオ
チド、および （ハ） 式 Ｈ2 Ｎ−（ＣＨ2 ）n −ＣＨＲ−ＣＨ2 −ＮＨ2 Ｉ （式中、ＲはＨ、ＣＨ3 またはＯＨであり、そしてｎは
０、１、２、３または４である、ただしＲがＯＨである
場合には、ｎは０であることはできない。）で示される
化合物。 - 【請求項２】 化合物が 【化１】 からなる群から選ばれる、請求項１に記載の組成物。
- 【請求項３】 化合物がＨ2 Ｎ−ＣＨ2 −ＣＨ（ＯＨ）
−ＣＨ2 −ＮＨ2 である、請求項２に記載の組成物。 - 【請求項４】 酵素アルコール デヒドロゲナーゼに対
する酵素安定組成物をさらに含有する、請求項１に記載
の組成物。 - 【請求項５】 組成物のpHが約８．５〜約９．５の範囲
内である、請求項４に記載の組成物。 - 【請求項６】 酵素安定組成物が亜鉛化合物、スルフヒ
ドリル含有化合物、メタンスルホン酸の塩、Ｄ−マンニ
トールおよびクエン酸の塩からなる、請求項５に記載の
組成物。 - 【請求項７】 酵素安定組成物が硫酸亜鉛、１−チオグ
リセロール、メタンスルホン酸ナトリウム塩、Ｄ−マン
ニトールおよびクエン酸ナトリウムからなる、請求項６
に記載の組成物。 - 【請求項８】 体液中のエタノール含有量を測定するた
めの分析溶液であって、請求項１〜７のいづれか一項に
記載の組成物からなる分析溶液。 - 【請求項９】 試料中のエタノールを検出するための診
断的分析方法であって、試料を、 （イ）酵素アルコール デヒドロゲナーゼ、 （ロ）補酵素ニコチンアミド アデニン ジヌクレオチ
ド、および （ハ） 式 Ｈ2 Ｎ−（ＣＨ2 ）n −ＣＨＲ−ＣＨ2 −ＮＨ2 Ｉ （式中、Ｒは、Ｈ、ＣＨ3 またはＯＨであり、そしてｎ
は、０、１、２、３または４である、ただしＲがＯＨで
ある場合には、ｎは０であることはできない。）で示さ
れる化合物、と反応させ、次いで生成されるＮＡＤＨの
量を測定することからなる分析方法。 - 【請求項１０】 上記成分の（イ）、（ロ）および
（ハ）をそれぞれ別々に、または予め混合した溶液とし
て、添加する、請求項９に記載の診断的分析方法。 - 【請求項１１】 上記成分の（イ）および（ロ）を予め
混合した溶液として添加する、請求項９または１０に記
載の診断的分析方法。 - 【請求項１２】 エタノール検定用診断キットであっ
て、 （イ）（ｉ）式 Ｈ2 Ｎ−（ＣＨ2 ）n −ＣＨＲ−ＣＨ2 −ＮＨ2 Ｉ （式中、Ｒは、Ｈ、ＣＨ3 またはＯＨであり、そしてｎ
は、０、１、２、３または４である、ただしＲがＯＨで
ある場合には、ｎは０であることはできない。）で示さ
れる化合物を含有する第一試薬、および （ロ）(i) 酵素アルコール デヒドロゲナーゼおよび (ii)補酵素ニコチンアミド アデニン ジヌクレオチド
を含有する開始試薬、 からなる診断キット。 - 【請求項１３】 式Ｉで示される化合物が、 【化２】 からなる群から選ばれる、請求項１２に記載の診断キッ
ト。 - 【請求項１４】 式Ｉで示される化合物が、 Ｈ2 Ｎ−ＣＨ2 −ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ2 −ＮＨ2 であ
る、請求項１３に記載の診断キット。 - 【請求項１５】 開始試薬が酵素アルコール デヒドロ
ゲナーゼに対する酵素安定組成物をさらに含有してお
り、この酵素安定組成物は、開始試薬のpHを約６．５〜
約７．０の範囲に維持するのに充分な量で存在してい
る、請求項１２に記載の診断キット。 - 【請求項１６】 酵素安定組成物が亜鉛化合物、スルフ
ヒドリル含有化合物、メタンスルホン酸の塩、Ｄ−マン
ニトールおよびクエン酸の塩からなる、請求項１５に記
載の診断キット。 - 【請求項１７】 上記酵素安定組成物が硫酸亜鉛、１−
チオグリセロール、メタンスルホン酸ナトリウム塩、Ｄ
−マンニトールおよびクエン酸ナトリウムからなる、請
求項１６に記載の診断キット。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US628080 | 1990-12-13 | ||
| US07/628,080 US5141854A (en) | 1990-12-13 | 1990-12-13 | Enzymatic composition for ethanol assay |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04287695A JPH04287695A (ja) | 1992-10-13 |
| JP2796462B2 true JP2796462B2 (ja) | 1998-09-10 |
Family
ID=24517374
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3330492A Expired - Lifetime JP2796462B2 (ja) | 1990-12-13 | 1991-12-13 | エタノール分析用組成物 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5141854A (ja) |
| EP (1) | EP0490286B1 (ja) |
| JP (1) | JP2796462B2 (ja) |
| CA (1) | CA2057395A1 (ja) |
| DE (1) | DE69111768T2 (ja) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5290683A (en) * | 1992-11-19 | 1994-03-01 | Yedy Israel | Rapid analysis of ethanol in body fluids |
| US5416004A (en) * | 1993-01-19 | 1995-05-16 | Detwiler; Richard L. | Multilayer analytical element containing primary amine buffer and method for the determination of ethanol |
| US5429932A (en) * | 1993-05-24 | 1995-07-04 | Eastman Kodak Company | Multilayer analytical element containing niacinamide and method for the determination of ethanol |
| US5429931A (en) * | 1993-05-24 | 1995-07-04 | Eastman Kodak Company | Multilayer analytical element containing crosslinked binder and method for the determination of ethanol |
| US5861269A (en) * | 1996-11-01 | 1999-01-19 | Dade Behring Marburg Gmbh | Methods for removing interferences due to endogenous dehydrogenases in enzyme assays |
| US5968746A (en) * | 1997-11-26 | 1999-10-19 | Schneider; David R. | Method and apparatus for preserving human saliva for testing |
| WO2000017636A1 (en) * | 1998-09-18 | 2000-03-30 | Guardian Angel, Llc | Alcohol concentration test system |
| US7700305B2 (en) | 1999-09-17 | 2010-04-20 | N2Itive1 Innovations | Analyte detection |
| US6380380B1 (en) * | 1999-01-04 | 2002-04-30 | Specialty Assays, Inc. | Use of nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) and nicotinamide adenine dinucliotide phosphate (NADP) analogs to measure enzyme activities metabolites and substrates |
| US6127140A (en) * | 1999-06-18 | 2000-10-03 | Abbott Laboratories | Assay for quantitative measurement of analytes in biological samples |
| WO2001058928A1 (en) | 2000-02-08 | 2001-08-16 | Nagasawa Herbert T | N-terminal d(-)-penicillamine peptides as aldehyde sequestration agents |
| KR100986733B1 (ko) * | 2008-08-08 | 2010-10-08 | 한국화학연구원 | 증진된 부탄올 내성 및 부탄올 고생산 균주의 제조방법 |
| US20210087603A1 (en) * | 2019-09-20 | 2021-03-25 | Charite - Universitaetsmedizin Berlin | Methods, kits and devices for measuring extracellular pyridine nucleotide |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3539450A (en) * | 1966-06-30 | 1970-11-10 | Calbiochem | Stabilization of enzymes |
| US3493467A (en) * | 1967-07-26 | 1970-02-03 | Smithkline Corp | Reversible biochemical reaction employing a trapping agent |
| US3941659A (en) * | 1974-07-11 | 1976-03-02 | Honeywell Inc. | Blood alcohol analyzer |
| US3926736A (en) * | 1974-08-30 | 1975-12-16 | Calbiochem | Enzymatic ethanol assay |
| DE2545977A1 (de) * | 1975-10-14 | 1977-05-05 | Calbiochem | Laboratoriumsreagenz zur bestimmung von aethanol in fluessigkeiten |
| DE2629808C2 (de) * | 1976-07-02 | 1984-01-19 | Institut Fresenius Chemische und Biologische Laboratorien GmbH, 6204 Taunusstein | Verfahren zur Stabilitätsverbesserung von Dehydrogenasen |
| US4141772A (en) * | 1977-06-27 | 1979-02-27 | The Procter & Gamble Company | Method and apparatus for forming a continuous reinforced fibrous web |
| US4481292A (en) * | 1980-07-01 | 1984-11-06 | The Coca-Cola Company | Process for the generation of acetaldehyde from ethanol |
| US4810633A (en) * | 1984-06-04 | 1989-03-07 | Miles Inc. | Enzymatic ethanol test |
| US5112741A (en) * | 1988-07-07 | 1992-05-12 | Enzymatics, Inc. | Acetaldehyde trapping system |
-
1990
- 1990-12-13 US US07/628,080 patent/US5141854A/en not_active Expired - Lifetime
-
1991
- 1991-12-06 DE DE69111768T patent/DE69111768T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1991-12-06 EP EP91120950A patent/EP0490286B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-12-11 CA CA002057395A patent/CA2057395A1/en not_active Abandoned
- 1991-12-13 JP JP3330492A patent/JP2796462B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1992
- 1992-05-29 US US07/890,902 patent/US5525481A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0490286A1 (en) | 1992-06-17 |
| JPH04287695A (ja) | 1992-10-13 |
| DE69111768D1 (de) | 1995-09-07 |
| US5525481A (en) | 1996-06-11 |
| CA2057395A1 (en) | 1992-06-14 |
| EP0490286B1 (en) | 1995-08-02 |
| DE69111768T2 (de) | 1995-12-21 |
| US5141854A (en) | 1992-08-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2796462B2 (ja) | エタノール分析用組成物 | |
| EP1242440B1 (en) | Use of nicotinamide adenine dinucleotide (nad) analogs to measure ethanol | |
| JP2539225B2 (ja) | グルコ−ス定量用安定化液体酵素組成物、それを用いる試薬キット及び定量方法 | |
| EP0570588B1 (en) | Method and reagent for determination of serum iron or unsaturated iron binding capacity using aconitase | |
| JPH0670798A (ja) | 尿酸測定用試薬組成物 | |
| EP0463755A1 (en) | Stable aqueous NADH reagent and kit | |
| EP0415188B1 (en) | Enzymatic method for determining analyte concentrations | |
| JP2619222B2 (ja) | 血液試料または血液由来の試料中のフルクトサミン含量を測定するための試薬と方法 | |
| JPH10513063A (ja) | 安定化された補酵素溶液、並びにアルカリ性環境下でのデヒドロゲナーゼ及び基質の測定のためのその使用 | |
| EP0603831A1 (en) | Stable single liquid reagent for the determination of carbon dioxide in serum | |
| JPH0155880B2 (ja) | ||
| JPH1172497A (ja) | 直接型ビリルビンの測定方法および測定用試薬 | |
| EP0607064B1 (en) | Assay method and reagent for magnesium in human body fluids | |
| EP0811692A1 (en) | Method of determining bile acid conjugated with sulfuric acid and kit therefor | |
| EP0371600A1 (en) | Method of assaying magnesium | |
| JPH0142679B2 (ja) | ||
| JP2880210B2 (ja) | 酵素法による抱合型ビリルビン比色定量法及び試薬 | |
| US4207203A (en) | Uric acid standard solutions | |
| US20010044128A1 (en) | Stabilized coenzyme solutions and their use for determining dehydrogenases or substrates thereof | |
| JPH02255098A (ja) | グアニジノ酢酸の定量法 | |
| JPH1146794A (ja) | 直接型ビリルビンの測定方法及び測定用キット | |
| JP3614962B2 (ja) | アンモニウムイオンを消去する方法及び試料中の特定成分を測定する方法 | |
| US5304469A (en) | Propylene glycol as an activator for phosphoenolpyruvate carboxylase | |
| JPH0743387B2 (ja) | 直接ビリルビンの定量法 | |
| JPH08242893A (ja) | クレアチンキナーゼ活性測定用液状試薬 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |