CN104195222B

CN104195222B - 一种用于总胆固醇测定试剂盒的复合稳定剂

Info

Publication number: CN104195222B
Application number: CN201410404608.0A
Authority: CN
Inventors: 杨灵勇; 周丽霞
Original assignee: Medical Science And Technology Ltd Of Sincere Industry Of Suzhou Kang Ming
Current assignee: Medical Science And Technology Ltd Of Sincere Industry Of Suzhou Kang Ming
Priority date: 2014-08-18
Filing date: 2014-08-18
Publication date: 2018-09-07
Anticipated expiration: 2034-08-18
Also published as: CN104195222A

Abstract

本发明公开了一种用于总胆固醇测定试剂盒的复合稳定剂，所述复合稳定剂包括牛血清白蛋白、β‑环糊精、甘油、表面活性剂和防腐剂，各组分的含量为：牛血清白蛋白5~15 g/L、β‑环糊精8~12 g/L、甘油10~20 g/L、表面活性剂0.1~1 g/L、防腐剂0.1~1 g/L。通过上述方式，本发明的复合稳定剂能够有效用于总胆固醇测定试剂盒中，能有效延长试剂盒的保存时间，且测定结果稳定性更好，该复合稳定剂成本低廉，配制简单，因此值得进一步推广使用。

Description

一种用于总胆固醇测定试剂盒的复合稳定剂

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种用于总胆固醇测定试剂盒的复合稳定剂。

背景技术

血清总胆固醇（total cholesterol，TC）是血液中所有脂蛋白所含胆固醇的总和，其测定可作为肝脏功能，肠吸收功能，胆汁功能，冠状动脉疾病，甲状腺功能和肾上腺疾病的诊断指标。目前测定总胆固醇的方法主要采用总胆固醇酶法（COD-PAP法）。具体测定原理如下：

。

此法利用氧化酶反应产生过氧化氢，经过氧化物酶（POD）催化，使4-氨基安替比林与酚反应，生成红色醌亚胺色素，醌亚胺的吸光度与样本中总胆固醇含量成正比。总胆固醇试剂盒成分比较复杂，含有多种酶，其试剂盒稳定性直接与酶活性相关，而酶的活性易受各种因素的干扰，比如pH、温度、紫外线、重金属盐、抑制剂、激活剂等，因此总胆固醇测定试剂盒缺乏稳定性，保存时间短，致使直接临床使用受到限制。

目前，延长试剂盒稳定性和有效期的方法基本都是通过添加稳定剂和改变贮存条件来实现的，但是单一的稳定剂已经越来越不能满足对试剂盒稳定性的要求，越来越多的稳定剂以复合组合物的形式出现。专利CN 101864402 A中提到了一种可以稳定过氧化物酶的组合物，但总胆固醇试剂盒中酶的种类比较多，并不能说明该组合物在总胆固醇测定试剂盒中可以起到类似的稳定作用；专利CN 1986785 A提供了一种复合稳定剂，该稳定剂对单独的乳酸脱氢酶，肌氨酸氧化酶，脲酶，肌酐酶，肌酐水解酶，过氧化氢酶，胆固醇氧化酶，胆固醇酯酶，过氧化物酶的溶液都具有稳定效果，但并未提及对于成分更加复杂、酶种类较多的试剂盒也有良好的稳定作用。因此，研究一种配制简单、成本低廉、对总胆固醇测定试剂盒有良好稳定效果的复合稳定剂，是非常必要的。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种用于总胆固醇测定试剂盒的复合稳定剂，所述复合稳定剂要配制简单、成本低廉且对总胆固醇测定试剂盒稳定效果好。

为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种用于总胆固醇测定试剂盒的复合稳定剂，所述复合稳定剂包括牛血清白蛋白、β-环糊精、甘油、表面活性剂和防腐剂，各组分的含量为：牛血清白蛋白 5~15 g/L、β-环糊精 8~12 g/L、甘油 10~20 g/L、表面活性剂 0.1~1.0 g/L、防腐剂 0.1~1.0 g/L。

在本发明一个较佳实施例中，所述表面活性剂为吐温-20，所述防腐剂为液体生物防腐剂Proclin300、NaN₃或庆大霉素。

在本发明一个较佳实施例中，所述复合稳定剂组分的含量为：牛血清白蛋白 5~15g/L、β-环糊精 8~12 g/L、甘油 10~20 g/L、吐温-20 0.1~1 g/L、Proclin300 0.1~1 g/L。

在本发明一个较佳实施例中，所述复合稳定剂组分的含量为：牛血清白蛋白 10g/L、β-环糊精 5 g/L、甘油 7.5 g/L、吐温-20 0.5 g/L、Proclin300 0.5 g/L。

在本发明一个较佳实施例中，所述复合稳定剂应用于总胆固醇测定试剂盒中，所述总胆固醇测定试剂盒包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂的组分为50 mM Hepes缓冲液、氯化镁2.03 g/L、4-氨基安替比林0.508 g/L、胆固醇脂酶1500 U/L、胆固醇氧化酶2000 U/L、叠氮钠1 g/L，所述第二试剂的组分为50 mM Hepes缓冲液、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲氧基苯胺钠盐1.47 g/L、过氧化物酶3000 U/L、叠氮钠1 g/L。

在本发明一个较佳实施例中，所述复合稳定剂的使用量在总胆固醇测定试剂盒中的体积分数为0.8%。

本发明的有益效果是：本发明的复合稳定剂用于总胆固醇测定试剂盒中，能有效延长试剂盒的保存时间，且测定结果稳定性更好，该复合稳定剂成本低廉，配制简单，因此值得进一步推广使用。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明以下实施例使用到的仪器有：UV Blue Star紫外分光光度计1台（北京莱伯泰科仪器有限公司，亦或者其它品牌）；恒温数显水浴锅1台（上海梅香仪器有限公司，亦或者其它品牌）。

实施例1：

提供一种用于总胆固醇测定试剂盒的复合稳定剂，所述复合稳定剂组分的含量为：牛血清白蛋白 10 g/L、β-环糊精 5 g/L、甘油 7.5 g/L、吐温-20 0.5 g/L、Proclin3000.5 g/L，将上述各组分充分溶解、混合后，即可制得一种液体复合稳定剂成品。

将实施例1应用于总胆固醇测定试剂盒中，并从稳定性、使用量两方面进行评价。

（一）稳定性试验

1、供试稳定剂：实施例1中所述复合稳定剂。

2、供试试剂为总胆固醇测定试剂盒，由试剂1和试剂2组成。组分如下：

试剂1：Hepes缓冲液（50 mM）、氯化镁2.03 g/L、4-氨基安替比林0.508 g/L、胆固醇脂酶1500 U/L、胆固醇氧化酶2000 U/L、叠氮钠1 g/L；

试剂2：Hepes缓冲液（50 mM）、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲氧基苯胺钠盐1.47 g/L、过氧化物酶3000 U/L、叠氮钠1 g/L。

3、试验方法及结果

将实施例1配制的复合稳定剂按1%（v/v）的量加入总胆固醇测定试剂盒中（试剂1和试剂2均按此量添加），与不添加复合稳定剂的总胆固醇测定试剂盒分别测定样本中总胆固醇含量。本试验以英国朗道质控血清水平2（质控2）和质控血清水平3（质控3）为样本，标准品另购，采用紫外可见分光光度计进行检测，设一个空白测试、一个标准测试、两个样本测试，其中空白测试以蒸馏水代替样本。样本与试剂1和试剂2 的比例为：16μL︰1000μL︰500μL，设定的主波长为505nm、副波长为660nm，样本与试剂1混匀后，37℃孵育3.5min，读取各管吸光度A1，加入试剂2混匀后反应5min，读取吸光度A2，每管的吸光度变化△A=A2-A1，扣除试剂空白后计算出样本、标准品的吸光度变化值△A_样本、△A_标准，然后根据公式总胆固醇（mg/dL）=△A_样本/△A_标准× C_标准计算出样本中总胆固醇含量（C_标准为标准品浓度）。质控血清2总胆固醇的靶值为160mg/dL，质控血清3总胆固醇的靶值为288mg/dL，允许偏差范围在±10%。

根据以上测定方法，以同批次同瓶装的质控血清2、质控血清3作为检测样本，分别用添加1%（v/v）复合稳定剂的总胆固醇测定试剂盒和不添加复合稳定剂的总胆固醇测定试剂盒进行检测，每10天测试一次，每次做三个平行并取其平均值，检测周期70天，得到针对质控血清2、质控血清3的测试结果，计算得到测定结果的标准偏差（SD）和有效期天数，标准偏差这项可反映测定结果的稳定性。稳定性试验结果见下表。

由上表数据可知，未加入复合稳定剂的总胆固醇测定试剂盒，其检测结果标准偏差明显较大，约为加入1%复合稳定剂的试剂盒检测结果标准偏差的10倍，说明没有加入复合稳定剂的总胆固醇测定试剂盒很不稳定，有效期天数只能维持20天左右，相对地，加入1%复合稳定剂的总胆固醇测定试剂盒在整个测试周期中，准确度均在允许偏差范围内，说明在70天左右该测定试剂盒仍能保持优良的测试性能。由此可见，添加了1%复合稳定剂的总胆固醇测定试剂盒在测试稳定性方面表现更为优异，复合稳定剂对其有明显的稳定效果，可有效延长总胆固醇测定试剂盒的保存期限。

（二）使用量对比试验

1、供试稳定剂：实施例1所述复合稳定剂。

2、供试试剂为总胆固醇测定试剂盒，组分参照稳定性试验。

3、试验方法及结果

将复合稳定剂按照0.5%（v/v）、0.8%（v/v）的比例分别加入总胆固醇测定试剂盒中（试剂1和试剂2均按同样量添加），进行样本中总胆固醇含量的测定。按本发明稳定性试验的测定方法测定，计算得到测定结果的标准偏差和有效期天数，使用量试验结果见下表。标准偏差这项可反映测定结果的稳定性。

由上表数据可知，复合稳定剂的三种不同加入量对总胆固醇测定试剂盒的稳定作用均有所增强，从不同程度上延长了试剂盒的保存期限，其中加入0.5%复合稳定剂的试剂盒稳定性稍弱，0.8%添加量的试剂盒标准偏差最小，分别为4和7，保存期限也达到了1%添加量试剂盒的检测效果，说明加入0.8%复合稳定剂的总胆固醇测定试剂盒重复性最佳，该试剂盒更为稳定，在试剂盒开瓶后70天左右还能保持良好的测试性能。因此，0.8%可定为复合稳定剂在总胆固醇测定试剂盒中的最佳使用量。

从以上数据和分析结果可以得到，总胆固醇测定试剂盒加入本发明所述复合稳定剂后，能延长试剂盒的保存时间，测定结果稳定性更好，且最适加入体积比大约为0.8%。另外，该复合稳定剂成本低廉，配制简单，因此值得进一步推广使用。

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其它相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims

1.一种用于总胆固醇测定试剂盒的复合稳定剂，其特征在于，所述复合稳定剂由牛血清白蛋白、 β-环糊精、甘油、吐温-20和液体生物防腐剂 Proclin300组成，各组分的含量为：牛血清白蛋白 10 g/L、 β-环糊精 5 g/L、甘油 7.5 g/L、吐温-20 0.5 g/L、Proclin300 0.5 g/L；

所述复合稳定剂应用于总胆固醇测定试剂盒中，所述总胆固醇测定试剂盒包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂的组分为 50 mM Hepes 缓冲液、氯化镁 2.03 g/L、 4-氨基安替比林 0.508 g/L、胆固醇脂酶 1500 U/L、胆固醇氧化酶 2000 U/L、叠氮钠1g/L，所述第二试剂的组分为 50 mM Hepes缓冲液、N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲氧基苯胺钠盐1.47 g/L、过氧化物酶3000 U/L、叠氮钠1 g/L，所述复合稳定剂的使用量在总胆固醇测定试剂盒中的体积分数为 0.8%。