CN104195220B - 一种用于人血清丙氨酸氨基转移酶测定的试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于人血清丙氨酸氨基转移酶测定的缓冲液,所述缓冲液是以Tris‑柠檬酸作为缓冲体系用于试剂盒中的,试剂盒包括第一试剂和第二试剂,第一试剂的成分组成为Tris、丙氨酸、NADH、乳酸脱氢酶、叠氮钠、柠檬酸,第二试剂的成分组成为Tris、α‑酮戊二酸、叠氮钠、柠檬酸。通过上述方式,本发明的用于人血清丙氨酸氨基转移酶测定的缓冲液采用Tris‑柠檬酸作为缓冲体系,该缓冲液可提供人血清中丙氨酸氨基转移酶发生酶促反应的良性条件,与之配伍的试剂盒在测定数据的准确度和稳定性方面均优于现有报道的缓冲液,值得推广使用。
Description
技术领域
本发明涉及体外诊断领域,特别是涉及一种用于人血清丙氨酸氨基转移酶测定的试剂盒。
背景技术
丙氨酸氨基转移酶(ALT)通常称为谷丙转氨酶,是一种参与人体蛋白质新陈代谢的酶(相当于工业生产中的催化剂),在生物体内起加快蛋白质氨基酸转化的作用,它在肝脏细胞的细胞浆中浓度最高,而在肾、心、骨骼肌等组织器官中含量较少。人体内谷丙转氨酶升高通常是由某些与肝脏相关的疾病如肝硬化、肝癌、病毒性肝炎等引起的,也常见于广泛损伤的肌肉疾病或伴有休克的循环衰竭、缺氧、心肌梗塞和溶血性疾病。故在临床医学上,丙氨酸氨基转移酶是最重要的肝功能指标之一,对其测定的稳定性和准确性也就尤为重要。
目前在体外测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)主要采用连续监测法,该方法是国际临床化学和实验室医学联盟(IFCC)推荐方法。具体测定过程如下 :
。
上述反应造成 NADH 减少,引起吸光度在波长 340nm 处下降,下降速率与丙氨酸氨 基转移酶(ALT)活力成正比。然而要保证上述反应的正常进行,必须有一个稳定的缓冲溶液 环境,缓冲液是决定丙氨酸氨基转移酶发生酶促反应的制约因素,是该酶测定试剂盒的重 要组成部分。国外专利EP20030708559 用来检测血清丙氨酸氨基转移酶涉及的缓冲液为三 羟甲基氨基甲烷 -盐酸(Tris-HCl);专利 US4241179、US7192727 中测定丙氨酸氨基转移酶 采用磷酸盐(钠盐或铵盐)缓冲液、GOOD’S 缓冲液、Tris-HCl 缓冲液,使用浓度为 20 mM-100 mM 不等 ;国内专利 CN98101247 中亦提到丙氨酸氨基转移酶测定的缓冲液为磷酸二氢钠和 磷酸氢二钠缓冲液 ;专利 CN200610167703.9 对丙氨酸氨基转移酶测定提及 pH 为 5.0~8.0的系列缓冲液,包含磷酸盐缓冲液、硼酸 - 硼砂缓冲液、Tris-HCl缓冲液等。
发明内容
本发明主要解决的技术问题是提供一种用于人血清丙氨酸氨基转移酶测定的试剂盒,在测定数据的准确度和稳定性方面均优于现有报道的试剂盒。
为解决上述技术问题,本发明采用的一个技术方案是 :提供一种用于人血清丙氨酸氨基转移酶测定的试剂盒,所述试剂盒包括第一试剂和第二试剂,所述第一试剂的成分组 成为 :Tris 5~15 g/L、丙氨酸 44 g/L、烟酰胺嘌呤二核苷酸(NADH)0.25 g/L、乳酸脱氢酶 4000 U/L、叠氮钠 0.5 g/L、柠檬酸 2~5 g/L,所述第二试剂的成分组成为 :Tris5~15 g/L、3α- 酮戊二酸 2.2g/L、叠氮钠 0.5g/L、柠檬酸 2~5 g/L。
在本发明一个较佳实施例中,所述第一试剂的 pH 值为 7.5,所述第二试剂的pH 值为 7.5。
在本发明一个较佳实施例中,所述第一试剂的成分组成为 :Tris 9.6912 g/L、丙 氨酸 44 g/L、烟酰胺嘌呤二核苷酸(NADH)0.25 g/L、乳酸脱氢酶 4000 U/L、叠氮钠0.5 g/L、柠檬酸 3.99 g/L。
在本发明一个较佳实施例中,所述第二试剂的成分组成为 :Tris 12.11g/L、α-酮戊二酸 2.2g/L、叠氮钠 0.5g/L、柠檬酸 2 g/L。
本发明的有益效果是 :本发明的用于人血清丙氨酸氨基转移酶测定的试剂盒是以 Tris- 柠檬酸作为缓冲体系的,与现有报道的缓冲液相比,对维持与之配伍的酶类稳定性具 有更优的效果,与之配伍的试剂盒在测定数据的准确度和稳定性方面表现更优,值得推广使用。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施 例仅是本发明的一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通 技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例,都属于本发明保护的范围。
以下实施例中采用的仪器 :UV Blue Star 紫外分光光度计 1 台(北京莱伯泰科仪器有限公司,亦或者其它品牌);恒温数显水浴锅 1 台(上海梅香仪器有限公司,亦或者其它品牌)。
实施例 1 :
提供一种用于人血清丙氨酸氨基转移酶测定的试剂盒,由第一试剂和第二试剂组成, 以 Tris- 柠檬酸作为缓冲体系 :
所述第一试剂的主要成分为 :
所述第二试剂的主要成分为 :
实施例 2 :
提供一种用于人血清丙氨酸氨基转移酶测定的试剂盒,由第一试剂和第二试剂组成, 以 Tris-HCl 作为缓冲体系 :
所述第一试剂的主要成分为 :
所述第二试剂的主要成分为 :
实施例 3 :
提供一种用于人血清丙氨酸氨基转移酶测定的试剂盒,由第一试剂和第二试剂组成, 以 HEPES- 氢氧化钠作为缓冲体系 :
所述第一试剂的主要成分为 :
所述第二试剂的主要成分为 :
实施例 4 :
提供一种用于人血清丙氨酸氨基转移酶测定的试剂盒,由第一试剂和第二试剂组成, 以硼酸 - 硼砂作为缓冲体系 :
所述第一试剂的主要成分为 :
所述第二试剂的主要成分为 :
实施例 5 :
提供一种用于人血清丙氨酸氨基转移酶测定的试剂盒,由第一试剂和第二试剂组成, 以磷酸盐作为缓冲体系 :
所述第一试剂的主要成分为 :
所述第二试剂的主要成分为 :
将以上实施例 1~5 配制试剂作为供试试剂盒,以英国朗道实验室有限公司生产的 质控血清 2(质控 2)、质控血清 3(质控 3)作为待测样本,采用紫外可见分光光度计进行检 测。设一个空白测试、两个样本测试,其中空白测试以蒸馏水代替样本,详细测定过程如下 表所示。样本、第一试剂、第二试剂的比例为 60μL : 1000μL : 500μL,设定的主波长为 340nm、副波长为 405nm,样品与试剂混匀后延迟 1min 读数,读数时间为 1.5min,得出△ A/ min(每分钟吸光度变化),根据公式 ALT(U/L)= △ A/min × F 计算出样本中丙氨酸氨基 转移酶(ALT)含量,计算因子 F=4180。质控血清 2 ALT 的靶值为 20U/L,质控血清3 ALT 的靶值为 84U/L,允许偏差范围 ±10%。
根据以上测定方法,每 5 天测试一次,每次做 3 个平行并取其平均值,连续监测一个月,共测试 6 次,得到每个实施例及空白测试数据,详见下面两个表。计算得到 6 次测定 结果的平均值、相对偏差、标准偏差(SD)。相对偏差这项可反映测定结果的准确性,标准偏 差这项可反映测定结果的稳定性。
Claims (3)
1.一种用于人血清丙氨酸氨基转移酶测定的试剂盒, 其特征在于: 所述试剂盒包括第一试剂和第二试剂, 所述第一试剂的成分组成为: Tris 5~15 g/L、 丙氨酸44 g/L、 烟酰胺嘌呤二核苷酸 (NADH) 0.25 g/L、 乳酸脱氢酶 4000 U/L、 叠氮钠 0.5 g/L、 柠檬酸2~5 g/L, 所述第二试剂的成分组成为: Tris 5~15 g/L、α- 酮戊二酸 2.2g/L、 叠氮钠0.5g/L、 柠檬酸 2~5 g/L;所述第一试剂的 pH 值为 7.5, 所述第二试剂的 pH 值为7.5。
2.根据权利要求 1 所述的一种用于人血清丙氨酸氨基转移酶测定的试剂盒, 其特征在于: 所述第一试剂的成分组成为 : Tris 9.6912 g/L、 丙氨酸 44 g/L、 烟酰胺嘌呤二核苷酸(NADH) 0.25 g/L、 乳酸脱氢酶 4000 U/L、 叠氮钠 0.5 g/L、 柠檬酸 3.99 g/L。
3.根据权利要求 1 所述的一种用于人血清丙氨酸氨基转移酶测定的试剂盒, 其特征在于:所述第二试剂的成分组成为: Tris 12.11g/L、α- 酮戊二酸 2.2g/L、 叠氮钠 0.5g/L、 柠檬酸 2 g/L。
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