CN104198422B

CN104198422B - 一种用于α‑羟丁酸脱氢酶测定试剂盒的复合稳定剂

Info

Publication number: CN104198422B
Application number: CN201410404609.5A
Authority: CN
Inventors: 杨灵勇; 周丽霞
Original assignee: Medical Science And Technology Ltd Of Sincere Industry Of Suzhou Kang Ming
Current assignee: Medical Science And Technology Ltd Of Sincere Industry Of Suzhou Kang Ming
Priority date: 2014-08-18
Filing date: 2014-08-18
Publication date: 2017-04-19
Anticipated expiration: 2034-08-18
Also published as: CN104198422A

Abstract

本发明公开了一种用于α‑羟丁酸脱氢酶测定试剂盒的复合稳定剂，该复合稳定剂包含缓冲液、蛋白、螯合剂、多元醇、防腐剂等多种成分，各成分的含量为：三羟甲基氨基甲烷 3~9 g/L、乙二胺四乙酸二钠 40~60 g/L、海藻糖 20~30 g/L、牛血清白蛋白 10~30 g/L、甘油 10~20 g/L、聚乙烯吡咯烷酮 15~25 g/L、Proclin 300 1~10 g/L。通过上述方式，本发明的复合稳定剂用于α‑羟丁酸脱氢酶测定试剂盒中，测定结果不仅准确度高、稳定性好，而且延长了开瓶效期。另外，该复合稳定剂成本低廉，配制简单，因此值得进一步推广使用。

Description

一种用于α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒的复合稳定剂

技术领域

本发明涉及体外诊断领域，特别是涉及一种用于α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒的复合稳定剂。

背景技术

α-羟丁酸脱氢酶（HBDH）不是一个独立的特异酶，而是含有H亚基的乳酸脱氢酶同工酶LDH1和LDH2的总称。测定α-羟丁酸脱氢酶，其实际反映的是乳酸脱氢酶同工酶LDH1和LDH2的活性，对诊断心肌疾病和肝病有重要意义。目前，国内很多医疗机构所使用的α-羟丁酸脱氢酶试剂盒多采用速率法测定。该测试原理如下：

。

α-羟丁酸脱氢酶催化α-酮丁酸转化成α-羟基丁酸，同时使烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）氧化成NAD⁺，在340 nm处NADH吸光度的下降速率与HBDH活性成正比。以此方法为原理的α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒一般用于半自动、全自动生化分析仪，测定快速、准确，但是由于试剂盒中包含的NADH本身性质不稳定，极易被氧化不利于保存，导致α-羟丁酸脱氢酶试剂盒缺乏稳定性，保存时间短，直接影响到临床使用。

目前关于α-羟丁酸脱氢酶测定试剂稳定性的报道非常有限。专利CN02139298提到了加入氧化型烟酰胺辅酶（NAD⁺或NADP⁺），利用酶-底物-NAD⁺或酶-底物-NADP⁺系统循环将氧化型辅酶转化成还原性辅酶，当还原型辅酶积累到一定浓度时即可进行测定，但是该方法较为复杂，成本昂贵，而且不能保证在系统循环中NADH的产生速率和总量能满足试剂盒的要求；专利CN200610030784.8提供了一种NADH的复合稳定剂，它对单独的NADH具有一定的稳定作用，但并未提及加入到成分较为复杂的试剂盒中也可起到类似的稳定作用。因此研究一种配制简单、成本低廉、对α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒有良好稳定效果的复合稳定剂，是非常必要的。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种用于α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒的复合稳定剂，该复合稳定剂要配制简单、成本低廉且对α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒有良好的稳定效果。

为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种用于α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒的复合稳定剂，所述复合稳定剂包括三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸二钠、海藻糖、牛血清白蛋白、甘油、聚乙烯吡咯烷酮和液体生物防腐剂Proclin 300，各组分的含量为：三羟甲基氨基甲烷 3~9 g/L、乙二胺四乙酸二钠 40~60 g/L、海藻糖 20~30 g/L、牛血清白蛋白 10~30 g/L、甘油 10~20 g/L、聚乙烯吡咯烷酮 15~25 g/L、Proclin 3001~10 g/L。

在本发明一个较佳实施例中，所述复合稳定剂组分的含量为：三羟甲基氨基甲烷6 g/L、乙二胺四乙酸二钠 50 g/L、海藻糖 25 g/L、牛血清白蛋白 20 g/L、甘油 15 g/L、聚乙烯吡咯烷酮 20 g/L、Proclin 300 5 g/L。

在本发明一个较佳实施例中，所述复合稳定剂应用于α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒中，所述α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂的组分为：磷酸氢二钠25.069 g/L、磷酸二氢钾2.435 g/L、α-酮丁酸钠盐0.496 g/L，所述第二试剂的组分为：三羟甲基氨基甲烷8.479 g/L、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NADH 0.0851 g/L、盐酸5.6mL/L。

在本发明一个较佳实施例中，所述复合稳定剂的使用量在α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒中的体积分数为5%。

本发明的有益效果是：本发明的复合稳定剂用于α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒中，测定结果不仅准确度高、稳定性好，而且延长了开瓶效期。另外，该复合稳定剂成本低廉，配制简单，因此值得进一步推广使用。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图，其中：

图1是本发明质控血清2的稳定性试验结果；

图2是本发明质控血清3的稳定性试验结果。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明以下实施例中涉及的仪器有：UV Blue Star紫外分光光度计1台（北京莱伯泰科仪器有限公司，亦或者其它品牌）；恒温数显水浴锅1台（上海梅香仪器有限公司，亦或者其它品牌）。

实施例1：

提供一种用于α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒的复合稳定剂，所述复合稳定剂组分的含量为：三羟甲基氨基甲烷 6 g/L、乙二胺四乙酸二钠 50 g/L、海藻糖 25 g/L、牛血清白蛋白 20 g/L、甘油 15 g/L、聚乙烯吡咯烷酮 20 g/L、Proclin 300 5 g/L，将上述各组分充分溶解、混合后，即可制得一种液体复合稳定剂成品。

将实施例1应用于α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒，并从准确度、稳定性及使用量三方面进行评价。

（一）准确度试验

1、供试稳定剂：采用实施例1所述复合稳定剂。

2、供试试剂盒为α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒，由试剂1和试剂2组成，组分如下：

试剂1：磷酸氢二钠25.069 g/L、磷酸二氢钾2.435 g/L、α-酮丁酸钠盐0.496 g/L；

试剂2：三羟甲基氨基甲烷8.479 g/L、NADH 0.0851 g/L、盐酸5.6 mL/L。

3、试验方法及结果：

按实施例1配制复合稳定剂，按3%（v/v）的量加入α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒中（试剂1和试剂2均按此量添加），与不添加复合稳定剂的α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒分别测定样本中α-羟丁酸脱氢酶活性。本试验以英国朗道质控血清水平2（质控2）和质控血清水平3（质控3）为样本，采用紫外可见分光光度计进行检测，设一个空白测试、两个样本测试（空白测试以蒸馏水代替样本）。样本与试剂1和试剂2 的比例为：50μL︰1200μL︰300μL，设定的主波长为340nm、副波长为405nm，样本与试剂混匀后延迟1min读数，读数时间为1.5min，得出△A/min（每分钟吸光度变化），根据公式α-羟丁酸脱氢酶（U/L）=△A/min × F计算出样本中α-羟丁酸脱氢酶含量（计算因子F=5140）。质控血清2中α-羟丁酸脱氢酶的靶值为224U/L，质控血清3中α-羟丁酸脱氢酶的靶值为408 U/L，允许偏差范围±10%。

根据以上测定方法，以同批次同瓶装的质控血清2、质控血清3作为检测样本，分别用添加3%（v/v）复合稳定剂的α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒和不添加复合稳定剂的α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒进行检测，连续检测8次，计算得到测定结果的平均值、相对偏差。准确度试验结果见下表。

由上表数据可知，无论是否加入稳定剂，相对偏差都在允许范围内，说明3%复合稳定剂的加入并没有影响试剂盒测量的准确度，甚至加入3%稳定剂后试剂盒测定数据的准确度还有所提升，使其测定值更接近靶值。

（二）稳定性试验

1、供试稳定剂：实施例1所述复合稳定剂。

2、供试试剂为α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒，组分参照准确度试验。

3、试验方法及结果：

按实施例1配制复合稳定剂，按3%（v/v）的量加入α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒中（试剂1和试剂2均按此量添加），与不添加复合稳定剂的α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒分别测定样本中α-羟丁酸脱氢酶含量。本试验以英国朗道质控血清水平2（质控2）和质控血清水平3（质控3）为样本，按试验（一）的测定方法，每5天测试一次，每次做三个平行并取其平均值，检测周期40天，共测试8次，得到针对质控血清2、质控血清3的测试结果。以测试天数作为横坐标，以测定平均值作为纵坐标作图，试验结果见图1和图2。

由图1和图2可以观察到，加入复合稳定剂的α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒，每次的测定值均在其靶值线附近上下浮动，相对地，未加入稳定剂的α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒在整个测试周期内偏离靶值线幅度较大，甚至超出了准确度偏差允许范围。由此可见，添加了3%复合稳定剂的试剂盒在测试稳定性方面表现更为优异，复合稳定剂对α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒有明显的稳定效果，可有效延长α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒的保存期限。

（三）使用量对比试验

1、供试稳定剂：采用实施例1所述复合稳定剂。

3、试验方法及结果：

将复合稳定剂按照5%（v/v）、10%（v/v）的比例分别加入α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒中（试剂1和试剂2均按同样量添加），进行样本中α-羟丁酸脱氢酶含量的测定。按本发明稳定性试验的测定方法测定，连续检测8次，计算得到测定结果的平均值、相对偏差、标准偏差。相对偏差这项可反映测定结果的准确性，标准偏差这项可反映测定结果的稳定性。下表为复合稳定剂的加入量比对结果。

由上表数据可知，复合稳定剂的三种不同加入量对α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒的准确度均没有影响，测量值均在靶值允许偏差范围内，其中5%添加量的试剂盒相对偏差最小，分别为0.39%和0.03%，表明添加5%复合稳定剂的α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒准确度优于其它两种添加量。此外，从标准偏差数据来看，5%添加量的试剂盒的数值最小，仅为6和8，说明加入5%复合稳定剂的α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒重复性最佳，该试剂盒更为稳定，在试剂盒开瓶后40天左右还能保持良好的测试性能。从准确度和稳定性角度来看，5%可定为复合稳定剂在α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒中的最佳加入量。

从以上数据和分析结果可以得到，α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒加入本发明所述复合稳定剂后，测定结果准确度高，稳定性好，延长了开瓶效期，且最适加入体积比大约为5%。此外，该复合稳定剂成本低廉，配制简单，具有进一步推广价值。

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其它相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims

1.一种用于α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒的复合稳定剂，其特征在于，所述复合稳定剂包括三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸二钠、海藻糖、牛血清白蛋白、甘油、聚乙烯吡咯烷酮和液体生物防腐剂Proclin 300，各组分的含量为：三羟甲基氨基甲烷 3~9 g/L、乙二胺四乙酸二钠 40~60 g/L、海藻糖 20~30 g/L、牛血清白蛋白 10~30 g/L、甘油 10~20 g/L、聚乙烯吡咯烷酮 15~25 g/L、Proclin 300 1~10 g/L；

所述复合稳定剂应用于α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒中，所述α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂的组分为：磷酸氢二钠25.069 g/L、磷酸二氢钾2.435 g/L、α-酮丁酸钠盐0.496 g/L，所述第二试剂的组分为：三羟甲基氨基甲烷8.479 g/L、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH） 0.0851 g/L、盐酸5.6 mL/L。

2.根据权利要求1所述的复合稳定剂，其特征在于，所述复合稳定剂组分的含量为：三羟甲基氨基甲烷 6 g/L、乙二胺四乙酸二钠 50 g/L、海藻糖 25 g/L、牛血清白蛋白 20 g/L、甘油 15 g/L、聚乙烯吡咯烷酮 20 g/L、Proclin 300 5 g/L。

3.根据权利要求1所述的复合稳定剂，其特征在于，所述复合稳定剂的使用量在α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒中的体积分数为5%。