CN115267229A - 试剂盒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生化检测领域，特别涉及试剂盒及其制备方法。本发明提供了乳酸脱氢酶法测定丙酮酸检测试剂盒。该试剂盒包括试剂R1和试剂R2；试剂R1由缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、防腐剂、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)组成；试剂R2由缓冲剂、防腐剂、乳酸脱氢酶(LDH)组成；试验表明本发明所述试剂盒检测结果准确性高、抗干扰能力强、线性检测范围宽、稳定性好、保存期长，易于在临床进行推广。
Description
技术领域
本发明涉及生化检测领域，特别涉及试剂盒及其制备方法。
背景技术
丙酮酸是体内糖分解代谢与合成代谢的重要中间产物，丙酮酸是糖酵解途径产物，通过三羧酸循环氧化成CO2和H2O，使血中的乳酸/丙酮酸比值维持在9左右。当机体处于缺氧代谢情况下，丙酮酸被还原为乳酸，乳酸/丙酮酸比值升高。缺氧越严重，比值升高越明显。根据比值可推测循环衰竭的严重程度，严重时可导致乳酸性中毒。轻微的活动会引起乳酸和丙酮酸同时升高，但比值不变。血液丙酮酸的测定主要用于维生素B1缺乏症的诊断。维生素B1的焦磷酸酯是丙酮酸在细胞内进一步氧化分解为乙酰辅酶A时的脱羧辅酶。维生素B1缺乏时，体内丙酮酸的氧化发生障碍，使丙酮酸的含量增加；血中丙酮酸增高还见于糖尿病、心力衰竭、腹泻、严重肝损伤、急性感染、慢性酒精中毒、慢性肺心病及酮症酸中毒等，因此测定丙酮酸含量具有非常重要的临床意义。
目前，丙酮酸检测的主要方法有：有二硝基苯腙法、酶联免疫法、液相分析法、化学发光法、乳酸脱氢酶法。二硝基苯肼比色法，是根据丙酮酸与2，4-二硝基苯肼反应，生成有色的苯腙，但该法受到其它α-酮酸的干扰，特异性差，操作繁琐。酶联免疫法灵敏度高，特异性强，但干扰因素多，重复性不好。而液相和化学发光有较好的准确性和灵敏度，但是成本较高，且液相分析法需要样本前处理，操作耗时较长。
乳酸脱氢酶法具有操作简单、快捷、灵敏，可采用自动生化分析仪快速高通量测定，且成本较低的优点。因此开发出适合大中小医院以及基层单位临床应用的丙酮酸检测试剂，将有助于疾病诊断、治疗和预后。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了试剂盒及其制备方法，该试剂盒与常规的试剂盒相比，抗干扰和线性范围比常规的检测试剂盒要好，稳定性及精密度水平高，有利于试剂在临床上的推广应用。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了以下任一项在提高丙酮酸检测试剂和/或试剂盒的抗干扰能力和/或准确性中的应用：
(I)、pH值的提高；或
(II)、稳定剂以及表面活性剂浓度的改变；
所述抗干扰能力包括抗血红蛋白干扰能力和/或抗脂肪乳干扰能力；
所述pH值为所述丙酮酸检测试剂和/或试剂盒中，含所述稳定剂的试剂中的pH值；和/或
所述稳定剂的改变后浓度为20～40g/L；和/或
所述表面活性剂的改变后浓度为20～40g/L；和/或
所述稳定剂包括NaCl；和/或
所述表面活性剂包括烷氧基聚乙烯氢氧基乙醇、聚二甲基硅氧烷或脂肪醇乙氧基化物中的一种或两者以上的组合；和/或
所述烷氧基聚乙烯氢氧基乙醇包括15-S-9和/或15-S-30；和/或
所述聚二甲基硅氧烷包括甲基乙基氧化SILWETL7600；和/或
所述脂肪醇乙氧基化物包括
X-080。
本发明还提供了试剂组合，包括试剂1和试剂2；
以浓度计，所述试剂1包括：
以浓度计，所述试剂2包括：
所述缓冲液2 50～100mM；
所述防腐剂2 0.5～1.0g/L；
所述乳酸脱氢酶 250～400kU/L；
所述试剂1的pH值为9.0～10.0；
所述试剂2的pH值为7.0～8.0；
所述缓冲液1与缓冲液2可以相同也可以不相同；
所述防腐剂1和所述防腐剂2可以相同也可以不相同。
在本发明的一些具体实施方案中，上述试剂组合中所述缓冲液1或所述缓冲液2独立选自CAPSO缓冲液、AMP缓冲液、CHES缓冲液、三乙醇胺缓冲液、MOPS缓冲液、HEPES缓冲液、TAPSO缓冲液、MOBS缓冲液或TES缓冲液中的一种或两者以上的组合；和/或
所述缓冲液1的pH值为9.0～10.0；和/或
所述缓冲液2的pH值为7.0～8.0；和/或
所述稳定剂包括NaCl；和/或
所述表面活性剂包括烷氧基聚乙烯氢氧基乙醇、聚二甲基硅氧烷或脂肪醇乙氧基化物中的一种或两者以上的组合；和/或
所述防腐剂1或所述防腐剂2独立选自PC300和/或NaN3；和/或
所述烷氧基聚乙烯氢氧基乙醇包括15-S-9和/或15-S-30；和/或
所述聚二甲基硅氧烷包括甲基乙基氧化SILWETL7600；和/或
所述脂肪醇乙氧基化物包括
X-080。
在本发明的一些具体实施方案中，上述试剂组合中所述缓冲液1为CAPSO缓冲液；和/或
所述缓冲液2为三乙醇胺；和/或
所述稳定剂为NaCl；和/或
所述表面活性剂为
X-080；和/或
所述防腐剂1为PC300；和/或
所述防腐剂2为NaN3。
在本发明的一些具体实施方案中，上述试剂组合中还包括校准品；
所述校准品由丙酮酸钠纯品与缓冲液混合获得；
所述校准品的浓度包括200μmol/L。
本发明还提供了上述试剂组合在制备丙酮酸检测试剂盒中的应用。
本发明还提供了试剂盒，包括上述试剂组合，以及可接受的辅料或助剂。
在本发明的一些具体实施方案中，上述试剂盒中包括试剂1和试剂2；
以浓度计，所述试剂1包括：
以浓度计，所述试剂2包括：
所述试剂1的pH值为9.0～10.0；
所述试剂2的pH值为7.0～8.0。
在本发明的一些具体实施方案中，上述试剂盒中所述CAPSO的pH值包括9.5；和/或
所述三乙醇胺的pH值包括7.5。
在本发明的一些具体实施方案中，上述试剂盒中还包括校准品；
所述校准品由丙酮酸钠纯品与缓冲液混合获得；
所述校准品的浓度包括200μmol/L。
本发明的试剂盒有如下效果：
本发明采用乳酸脱氢酶法，通过优化反应体系，提升试剂测值准确性、稳定性，并扩大了线性检测范围。
相关性实验结果表明，优化NaCl及表面活性剂
X-080含量，两者复配可以提升试剂测值准确性。
精密度检测结果显示本发明试剂盒精密度良好。
抗干扰检测结果显示，优选的稳定剂NaCl及表面活性剂的含量，显著提升试剂的抗脂肪乳能力；NaCl能提升试剂抗血红蛋白能力，pH升高抗血红蛋白能力增强；且NaCl与pH协调作用，明显提升试剂抗血红蛋白能力。
稳定性检测结果显示本发明2～8℃贮存18个月前后检测相对偏差较小。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1示本发明检测试剂盒与对照试剂盒检测结果的相关性关系图；
图2示本发明检测试剂盒丙酮酸浓度检测值与理论值的线性关系图。
具体实施方式
本发明公开了试剂盒及其制备方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明提供的乳酸脱氢酶法测定丙酮酸的检测试剂盒包括：
1)校准品：将丙酮酸钠纯品添加到缓冲液中配制而成，单点校准品浓度为200μmol/L；
2)R1试剂组分包括：缓冲液A 50～100mM；稳定剂20～40g/L；表面活性剂20～40g/L；防腐剂0.1～0.2g/L；NADH 0.3～0.5mmol/L；
3)R2试剂组分包括：缓冲液B 50～100mM；防腐剂0.5～1.0g/L；LDH250～400kU/L；
所述缓冲液A为CAPSO缓冲液、AMP缓冲液、CHES缓冲液、三乙醇胺缓冲液中的任一种，缓冲液B为三乙醇胺、MOPS、HEPES、TAPSO、MOBS或TES缓冲液中的任一种；
所述缓冲液A的pH为9.0～10.0，所述缓冲液B的pH为7.0～8.0；
所述稳定剂为NaCl；
所述表面活性剂为烷氧基聚乙烯氢氧基乙醇15-S-9、烷氧基聚乙烯氢氧基乙醇15-S-30、聚二甲基硅氧烷甲基乙基氧化SILWETL7600或脂肪醇乙氧基化物
X-080中的一种或多种。
本发明采用创新之处如下：
优选的NaCl及表面活性剂含量，特别的NaCl与表面活性剂的协同作用，提升试剂测值准确性。
优选的NaCl及表面活性剂含量，特别是NaCl与表面活性剂的复配，显著提升试剂的抗脂肪乳能力。
优选的R1试剂pH、NaCl协同作用，显著改善试剂的抗血红蛋白能力。
如无特殊说明，本发明所用原料、试剂、耗材以及采用的仪器皆为普通市售品，均可由市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1
1)试剂R1的组分含量：
2)试剂R2的组分含量：
该试剂R1、试剂R2的配制如下：
试剂R1配制：
按配方称取23.73g的CAPSO、30g的NaCl、30g的
X-080、0.1g的PC300于洁净容器中，加去离子水搅拌30min，使其充分溶解，调节pH至9.5；加入0.199g的NADH，充分搅拌至均匀；加入去离子水定容至1L，过滤得R1。
试剂R2配制：
按配方称取14.92g三乙醇胺、0.5g的NaN3于洁净容器中，加去离子水搅拌30min，使其充分溶解，调节pH至7.0；加入0.848g的LDH，充分搅拌至均匀；加入去离子水定容至1L，过滤得R2。
本实施例描述的丙酮酸检测试剂盒，测定方法是采用东芝120自动分析仪，操作如下：加入去离子水、样本或校准品16μL，之后再加入R1试剂160μL混匀，37℃恒温5min后相对于空白读取吸光度A1，再加入40μL的试剂R2混匀，37℃恒温5min后，读取吸光度A2，并计算ΔA＝A2-A1。
实施例2
1)试剂R1的组分含量：
2)试剂R2的组分含量：
试剂R1配制：
按配方称取23.73g的CAPSO、30g的NaCl、30g的
X-080、0.2g的PC300于洁净容器中，加去离子水搅拌30min，使其充分溶解，调节pH至9.5；加入0.265g的NADH，充分搅拌至均匀；加入去离子水定容至1L，过滤得R1。
试剂R2配制：
按配方称取14.92g三乙醇胺、1.0g的NaN3于洁净容器中，加去离子水搅拌30min，使其充分溶解，调节pH至7.5；加入0.989g的LDH，充分搅拌至均匀；加入去离子水定容至1L，过滤得R2。
实施例3
1)试剂R1的组分含量：
2)试剂R2的组分含量：
试剂R1配制：
按配方称取11.865g的CAPSO、20g的NaCl、40g的
X-080、0.1g的PC300于洁净容器中，加去离子水搅拌30min，使其充分溶解，调节pH至9.0；加入0.331g的NADH，充分搅拌至均匀；加入去离子水定容至1L，过滤得R1。
试剂R2配制：
按配方称取7.46g三乙醇胺、0.5g的NaN3于洁净容器中，加去离子水搅拌30min，使其充分溶解，调节pH至8.0；加入1.131g的LDH，充分搅拌至均匀；加入去离子水定容至1L，过滤得R2。
实施例4
1)试剂R1的组分含量：
2)试剂R2的组分含量：
试剂R1配制：
按配方称取23.73g的CAPSO、40g的NaCl、20g的
X-080、0.1g的PC300于洁净容器中，加去离子水搅拌30min，使其充分溶解，调节pH至10.0；加入0.232g的NADH，充分搅拌至均匀；加入去离子水定容至1L，过滤得R1。
试剂R2配制：
按配方称取14.92g三乙醇胺、0.5g的NaN3于洁净容器中，加去离子水搅拌30min，使其充分溶解，调节pH至7.0；加入0.848g的LDH，充分搅拌至均匀；加入去离子水定容至1L，过滤得R2。
实施例5
1)试剂R1的组分含量：
2)试剂R2的组分含量：
该试剂R1、试剂R2的配制如下：
试剂R1配制：
按配方称取17.798g的CAPSO、30g的NaCl、30g的
X-080、0.1g的PC300于洁净容器中，加去离子水搅拌30min，使其充分溶解，调节pH至9.5；加入0.199g的NADH，充分搅拌至均匀；加入去离子水定容至1L，过滤得R1。
试剂R2配制：
按配方称取11.19g三乙醇胺、1.0g的NaN3于洁净容器中，加去离子水搅拌30min，使其充分溶解，调节pH至7.5；加入0.848g的LDH，充分搅拌至均匀；加入去离子水定容至1L，过滤得R2。
对比例1
一种乳酸脱氢酶法测定丙酮酸的检测试剂盒，包括R1试剂和R2试剂，与实施例1一致，区别在于：所述R1试剂包括以下组分：pH 9.5的缓冲液100mM；稳定剂NaCl 30g/L；防腐剂0.1g/L；NADH 0.3mmol/L。
所述R1试剂的制备方法包括：
按配方称取23.73g的CAPSO、30g的NaCl、0.1g的PC300于洁净容器中，加去离子水搅拌30min，使其充分溶解，调节pH至9.5；加入0.199g的NADH，充分搅拌至均匀；加入去离子水定容至1L，过滤得R1。
对比例2
一种乳酸脱氢酶法测定丙酮酸的检测试剂盒，包括R1试剂和R2试剂，与实施例1一致，区别在于：所述R1试剂包括以下组分：pH 9.5的缓冲液100mM；表面活性剂30g/L；防腐剂0.1g/L；NADH 0.3mmol/L；
所述R1试剂的制备方法包括：
按配方称取23.73g的CAPSO、30g的
X-080、0.1g的PC300于洁净容器中，加去离子水搅拌30min，使其充分溶解，调节pH至9.5；加入0.199g的NADH，充分搅拌至均匀；加入去离子水定容至1L，过滤得R1。
对比例3
一种乳酸脱氢酶法测定丙酮酸的检测试剂盒，包括R1试剂和R2试剂，与实施例1一致，区别在于：所述R1试剂包括以下组分：pH 9.5的缓冲液100mM；稳定剂NaCl 30g/L；表面活性剂10g/L；防腐剂0.1g/L；NADH 0.3mmol/L；
所述R1试剂的制备方法包括：
按配方称取23.73g的CAPSO、30g的NaCl、10g的
X-080、0.1g的PC300于洁净容器中，加去离子水搅拌30min，使其充分溶解，调节pH至9.5；加入0.199g的NADH，充分搅拌至均匀；加入去离子水定容至1L，过滤得R1。
对比例4
一种乳酸脱氢酶法测定丙酮酸的检测试剂盒，包括R1试剂和R2试剂，与实施例1一致，区别在于：所述R1试剂包括以下组分：pH 9.5的缓冲液100mM；稳定剂NaCl 10g/L；表面活性剂30g/L；防腐剂0.1g/L；NADH 0.3mmol/L；
所述R1试剂的制备方法包括：
按配方称取23.73g的CAPSO、10g的NaCl、30g的
X-080、0.1g的PC300于洁净容器中，加去离子水搅拌30min，使其充分溶解，调节pH至9.5；加入0.199g的NADH，充分搅拌至均匀；加入去离子水定容至1L，过滤得R1。
对比例5
一种乳酸脱氢酶法测定丙酮酸的检测试剂盒，包括R1试剂和R2试剂，与实施例1一致，区别在于：所述R1试剂包括以下组分：pH 8.5的缓冲液100mM；稳定剂NaCl 30g/L；防腐剂0.1g/L；NADH 0.3mmol/L；
所述R1试剂的制备方法包括：
按配方称取23.73g的CAPSO、30g的NaCl、0.1g的PC300于洁净容器中，加去离子水搅拌30min，使其充分溶解，调节pH至8.5；加入0.199g的NADH，充分搅拌至均匀；加入去离子水定容至1L，过滤得R1。
对比例6
一种乳酸脱氢酶法测定丙酮酸的检测试剂盒，包括R1试剂和R2试剂，与实施例1一致，区别在于：所述R1试剂包括以下组分：pH 8.5的缓冲液100mM；稳定剂NaCl 30g/L；表面活性剂30g/L；防腐剂0.1g/L；NADH 0.3mmol/L；
所述R1试剂的制备方法包括：
按配方称取23.73g的CAPSO、30g的NaCl、30g的
X-080、0.1g的PC300于洁净容器中，加去离子水搅拌30min，使其充分溶解，调节pH至8.5；加入0.199g的NADH，充分搅拌至均匀；加入去离子水定容至1L，过滤得R1。
对比例7
一种乳酸脱氢酶法测定丙酮酸的检测试剂盒，包括R1试剂和R2试剂，与实施例1一致，区别在于：所述R1试剂包括以下组分：pH 7.5的缓冲液100mM；稳定剂NaCl 30g/L；表面活性剂30g/L；防腐剂0.1g/L；NADH 0.3mmol/L；
所述R1试剂的制备方法包括：
按配方称取23.73g的CAPSO、30g的NaCl、30g的
X-080、0.1g的PC300于洁净容器中，加去离子水搅拌30min，使其充分溶解，调节pH至7.5；加入0.199g的NADH，充分搅拌至均匀；加入去离子水定容至1L，过滤得R1。
对比例8
专利CN106290212A一种灵敏度高的丙酮酸检测试剂。
所述试剂R1包括的成分及相应含量为：Tris 10mmol/L，NADPH 2mmol/L，壳聚糖1g/L，Surfynol485 2mL/L，Zonyl FSN100 0.5mL/L，氯化锂0.1g/L，二羟乙基甘氨酸(DEG)1mol/L，叠氮钠0.1g/L，pH 9.5。
所述试剂R2包括的成分及相应含量为：磷酸盐缓冲液100mmol/L，海藻糖5g/L，乳酸脱氢酶2kU/L，叠氮钠0.1g/L，pH 6.5。
对比例9
专利CN109212176A一种丙酮酸测定试剂盒及其制备方法和应用。
所述试剂R1包括的成分及相应含量为：三羟甲基氨基甲烷(Tris)80mmol/L，还原型辅酶Ⅰ(NADH)0.35mmol/L，EDTA-Na2 10mmol/L，曲拉通-100 1g/L，NaN3 1g/L，pH 8.0。
所述试剂R2包括的成分及相应含量为：三羟甲基氨基甲烷(Tris)80mmol/L，乳酸脱氢酶(LDH)300U/L，聚乙二醇6000 5g/L，BSA 5g/L，葡甘露聚糖10g/L，曲拉通-100 1g/L，NaN3 1g/L，pH 6.0。
对比例10
专利CN109212176A一种丙酮酸测定试剂盒及其制备方法和应用。
所述试剂R1包括的成分及相应含量为：三羟甲基氨基甲烷(Tris)80mmol/L，还原型辅酶Ⅰ(NADH)0.35mmol/L，EDTA-Na2 10mmol/L，吐温201g/L，NaN3 1g/L，pH 8.0。
所述试剂R2包括的成分及相应含量为：三羟甲基氨基甲烷(Tris)80mmol/L，乳酸脱氢酶(LDH)300U/L，聚乙二醇6000 5g/L，BSA 5g/L，葡甘露聚糖10g/L，吐温20 1g/L，硫酸庆大霉素1g/L，pH 6.0。
对比例11
专利CN109212176A一种丙酮酸测定试剂盒及其制备方法和应用。
所述试剂R1包括的成分及相应含量为：三羟甲基氨基甲烷(Tris)80mmol/L，还原型辅酶Ⅰ(NADH)0.35mmol/L，EDTA-Na2 10mmol/L，Brij35 1g/L，NaN3 1g/L，pH 8.0。
所述试剂R2包括的成分及相应含量为：三羟甲基氨基甲烷(Tris)80mmol/L，乳酸脱氢酶(LDH)300U/L，聚乙二醇6000 5g/L，BSA 5g/L，葡甘露聚糖10g/L，吐温20 1g/L，NaN31g/L，pH 6.0。
效果例
本发明实施例1～5所述试剂盒性能评定结果水平基本一致，以实施例1～5制备的试剂盒为例对相关性、线性范围、精密度、抗干扰性、稳定性等相关性能进行验证。
(1)标准曲线制定
以上实施办法的试剂用东芝Toshiba 120FR全自动生化仪进行测试，测试波长为340nm/404nm，取样本或校准品16μL，再加入160μL的试剂R1，37℃恒温5min，相对于空白读取吸光度A1；然后加入40μL试剂R2，37℃孵育5min后读取吸光度A2，则反应吸光度ΔA＝A2-A1；使用标准品进行多点定标，并用样条函数进行计算得到定标曲线，从工作曲线中可查找到样本中丙酮酸浓度值。
(2)相关性实验
以市场上获得认可的一种准确度优异的丙酮酸试剂盒(北京九强生物技术股份有限公司)作为对照组，实施例的试剂盒作为实验组进行对比实验，对40个样本进行检测，检测的结果如表1。以市面上对照试剂盒测试结果为横坐标自变量(对照组)，以本发明试剂盒测试结果为纵坐标应变量，做线性回归曲线，得实施例1回归方程为Y＝0.9943X+0.3725，线性相关系数R＝0.9977；实施例2回归方程Y＝1.0079X-1.037，线性相关系数R＝0.9958；实施例3回归方程Y＝0.998X-0.2216，线性相关系数R＝0.9957；实施例4回归方程Y＝0.9957X-0.5524，线性相关系数R＝0.996；实施例5回归方程Y＝1.0001X-1.2058，线性相关系数R＝0.9952；线性关系良好，测试结果可以有效作为临床检验。实施例1相关性曲线见图1。对比例1～4实验结果见表2；对比例1回归方程为Y＝0.9385X-11.617，线性相关系数R＝0.978；对比例2回归方程为Y＝0.9719X-6.7645，线性相关系数R＝0.9765；对比例3回归方程为Y＝0.9446X-4.5534，线性相关系数R＝0.9761；对比例4回归方程为Y＝0.9789X-2.2322，线性相关系数R＝0.9755；表1～2的结果表明：优化NaCl及表面活性剂
X-080含量，两者复配可以提升试剂测值准确性。
表1实施例1～5相关性实验检测结果(单位：μmol/L)
表2对比例1～4相关性实验检测结果(单位：μmol/L)
(3)线性实验
用丙酮酸钠高值样本2160μmol/L进行稀释，配制成6个不同梯度浓度样本，依次为2160μmol/L、1620μmol/L、1080μmol/L、540μmol/L、270μmol/L、135μmol/L、0μmol/L浓度样本，每个样本测2次取均值。线性测定结果见表3。以理论浓度作为横坐标自变量X，以实际测试值作为纵坐标应变量Y求出线性回归方程，计算线性回归相关系数r，结果显示实施例1线性回归方程为Y＝1.0152X-2.3516，其相关系数r＝0.9999；实施例2线性回归方程为Y＝0.996X+5.0023，其相关系数r＝0.9998；实施例3线性回归方程为Y＝1.0022X-0.1294，其相关系数r＝0.9997；实施例4线性回归方程为Y＝1.0062X-1.705，其相关系数r＝0.9998；实施例5线性回归方程为Y＝1.0061X-0.5938，其相关系数r＝0.9998；表明本发明在线性范围0～2160μmol/L内相关性较好。实施例1线性范围曲线如图2。
表3实施例1～5线性范围分析结果
(4)精密度检测
分别取丙酮酸(PYR)浓度高低两支血清样本，各连续测试20次，计算其变异系数，实施例精密度结果见表4。试剂盒精密度良好。
表4实施例1～5精密度检测结果
(5)抗干扰检测
将临床正常病人血清分成两份，一份添加最高浓度的干扰物质，另一份添加等量的溶剂，将添加和不添加干扰物的样本做3个梯度的等差稀释，每个样本检测三次，颠倒检测顺序，计算测值的偏差。评价实施例抗脂肪乳干扰能力，结果如表5；对比例1～4抗脂肪乳干扰能力，对比例8～11抗脂肪乳干扰能力，结果如表6、表7。实施例1、对比例1～2、5～7抗血红蛋白干扰能力，结果如表8。表5～6结果表明：NaCl及表面活性剂
X-080的复配使用，显著提升试剂的抗脂肪乳能力；单独使用NaCl或
X-080，抗干扰能力均较差；且含量不足时，抗干扰能力也会变差。表7结果表明：对比例8～11试剂盒的抗干扰能力均较差，本试剂盒抗脂肪乳干扰能力明显优于对比例8～11。表8结果表明：NaCl能提升试剂抗血红蛋白能力，pH升高抗血红蛋白能力增强；且NaCl与pH协调作用，明显提升试剂抗血红蛋白能力。
表5实施例1～5抗脂肪乳干扰检测结果
表6对比例1～4抗脂肪乳干扰检测结果
表7对比例8～11抗脂肪乳干扰检测结果
表8实施例1、对比例1～2、5～7抗血红蛋白干扰检测结果
(6)稳定性检测
对本发明试剂盒进行长期稳定性测试。取本发明试剂盒于测试仪器上定标，在2～8℃环境下密封贮存18个月，分3月、6月、9月、12月、18月对浓度分别为150μmol/L和300μmol/L的血清样本进行长期稳定测试，计算开瓶18月后测试结果偏差值，结果见表9。
表9实施例1～5稳定性检测结果
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.以下任一项在提高丙酮酸检测试剂和/或试剂盒的抗干扰能力和/或准确性中的应用：
(I)、pH值的提高；或
(II)、稳定剂以及表面活性剂浓度的改变；
所述抗干扰能力包括抗血红蛋白干扰能力和/或抗脂肪乳干扰能力；
所述pH值为所述丙酮酸检测试剂和/或试剂盒中，含所述稳定剂的试剂中的pH值；和/或
所述稳定剂的改变后浓度为20～40g/L；和/或
所述表面活性剂的改变后浓度为20～40g/L；和/或
所述稳定剂包括NaCl；和/或
所述表面活性剂包括烷氧基聚乙烯氢氧基乙醇、聚二甲基硅氧烷或脂肪醇乙氧基化物中的一种或两者以上的组合；和/或
所述烷氧基聚乙烯氢氧基乙醇包括15-S-9和/或15-S-30；和/或
所述聚二甲基硅氧烷包括甲基乙基氧化SILWETL7600；和/或
所述脂肪醇乙氧基化物包括
X-080。
2.试剂组合，其特征在于，包括试剂1和试剂2；
以浓度计，所述试剂1包括：
以浓度计，所述试剂2包括：
所述缓冲液2 50～100mM；
所述防腐剂2 0.5～1.0g/L；
所述乳酸脱氢酶 250～400kU/L；
所述试剂1的pH值为9.0～10.0；
所述试剂2的pH值为7.0～8.0；
所述缓冲液1与缓冲液2可以相同也可以不相同；
所述防腐剂1和所述防腐剂2可以相同也可以不相同。
3.如权利要求2所述的试剂组合，其特征在于，所述缓冲液1或所述缓冲液2独立选自CAPSO缓冲液、AMP缓冲液、CHES缓冲液、三乙醇胺缓冲液、MOPS缓冲液、HEPES缓冲液、TAPSO缓冲液、MOBS缓冲液或TES缓冲液中的一种或两者以上的组合；和/或
所述缓冲液1的pH值为9.0～10.0；和/或
所述缓冲液2的pH值为7.0～8.0；和/或
所述稳定剂包括NaCl；和/或
所述表面活性剂包括烷氧基聚乙烯氢氧基乙醇、聚二甲基硅氧烷或脂肪醇乙氧基化物中的一种或两者以上的组合；和/或
所述防腐剂1或所述防腐剂2独立选自PC300和/或NaN3；和/或
所述烷氧基聚乙烯氢氧基乙醇包括15-S-9和/或15-S-30；和/或
所述聚二甲基硅氧烷包括甲基乙基氧化SILWETL7600；和/或
所述脂肪醇乙氧基化物包括
X-080。
4.如权利要求2或3所述的试剂组合，其特征在于，所述缓冲液1为CAPSO缓冲液；和/或
所述缓冲液2为三乙醇胺；和/或
所述稳定剂为NaCl；和/或
所述表面活性剂为
X-080；和/或
所述防腐剂1为PC300；和/或
所述防腐剂2为NaN3。
5.如权利要求2至4任一项所述的试剂组合，其特征在于，还包括校准品；
所述校准品由丙酮酸钠纯品与缓冲液混合获得；
所述校准品的浓度包括200μmol/L。
6.如权利要求2至5任一项所述的试剂组合在制备丙酮酸检测试剂盒中的应用。
7.试剂盒，其特征在于，包括如权利要求3至6所述的试剂组合，以及可接受的辅料或助剂。
8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，包括试剂1和试剂2；
以浓度计，所述试剂1包括：
以浓度计，所述试剂2包括：
缓冲液 三乙醇胺 50～100mM；
防腐剂 NaN3 0.5～1.0g/L；
LDH 250～400kU/L；
所述试剂1的pH值为9.0～10.0；
所述试剂2的pH值为7.0～8.0。
9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述CAPSO的pH值包括9.5；和/或
所述三乙醇胺的pH值包括7.5。
10.如权利要求8或9所述的试剂盒，其特征在于，还包括校准品；
所述校准品由丙酮酸钠纯品与缓冲液混合获得；
所述校准品的浓度包括200μmol/L。
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