CN112903671A - 一种使用循环酶法的测定试剂盒及其测定方法 - Google Patents
一种使用循环酶法的测定试剂盒及其测定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112903671A CN112903671A CN202110143682.1A CN202110143682A CN112903671A CN 112903671 A CN112903671 A CN 112903671A CN 202110143682 A CN202110143682 A CN 202110143682A CN 112903671 A CN112903671 A CN 112903671A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- reagent
- kit
- assay kit
- buffer solution
- determination
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 23
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims abstract description 13
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims abstract description 13
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 title claims abstract description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 33
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 13
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N NAD zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 239000003109 Disodium ethylene diamine tetraacetate Substances 0.000 claims abstract description 11
- 235000019301 disodium ethylene diamine tetraacetate Nutrition 0.000 claims abstract description 11
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 239000006084 composite stabilizer Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims abstract description 9
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 229940045944 sodium lauroyl glutamate Drugs 0.000 claims abstract description 8
- IWIUXJGIDSGWDN-UQKRIMTDSA-M sodium;(2s)-2-(dodecanoylamino)pentanedioate;hydron Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCC(=O)N[C@H](C([O-])=O)CCC(O)=O IWIUXJGIDSGWDN-UQKRIMTDSA-M 0.000 claims abstract description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 6
- CXONXVMMINSQBV-NNYOXOHSSA-N (2r,3r,4s,5r)-5-[[[[(2r,3s,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxymethyl]-2-(3-carbamothioylpyridin-1-ium-1-yl)-4-hydroxyoxolan-3-olate Chemical compound NC(=S)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)[O-])=C1 CXONXVMMINSQBV-NNYOXOHSSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 claims abstract description 5
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 claims abstract description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 claims description 10
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims description 7
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 7
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 6
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 6
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 6
- ZPIRTVJRHUMMOI-UHFFFAOYSA-N octoxybenzene Chemical compound CCCCCCCCOC1=CC=CC=C1 ZPIRTVJRHUMMOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 6
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims description 6
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 claims description 6
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N (2s,4r)-4-[(3r,5s,6r,7r,8s,9s,10s,13r,14s,17r)-6-ethyl-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2-methylpentanoic acid Chemical compound C([C@@]12C)C[C@@H](O)C[C@H]1[C@@H](CC)[C@@H](O)[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)C[C@H](C)C(O)=O)CC[C@H]21 HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N 0.000 description 8
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 8
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 229950006238 nadide Drugs 0.000 description 4
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- SCVJRXQHFJXZFZ-KVQBGUIXSA-N 2-amino-9-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-3h-purine-6-thione Chemical compound C1=2NC(N)=NC(=S)C=2N=CN1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SCVJRXQHFJXZFZ-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 1
- 208000022309 Alcoholic Liver disease Diseases 0.000 description 1
- 206010008635 Cholestasis Diseases 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 206010023126 Jaundice Diseases 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000007870 cholestasis Effects 0.000 description 1
- 231100000359 cholestasis Toxicity 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001351 cycling effect Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
- G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
- G01N21/78—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator producing a change of colour
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
- G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
- G01N21/31—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry
- G01N21/3103—Atomic absorption analysis
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Plasma & Fusion (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种使用循环酶法的测定试剂盒，所述测定试剂盒包括试剂Ⅰ和试剂Ⅱ；所述试剂Ⅰ包括：TRIS缓冲液40mmol/L；β‑硫烟酰胺腺苷二核苷酸氧化型(Thio‑NAD)2g/L；乙二胺四乙酸二钠0.2g/L；月桂酰谷氨酸钠0.2g/L；所述试剂Ⅱ包括：二乙醇胺缓冲液100mmol/L；β‑烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型(NADH)6g/L；α‑羟类固醇脱氢酶(3α‑HSD)6000U/L；复合稳定剂0.1wt％；叠氮钠1g/L。本发明使用循环酶法的测定试剂盒中采用TRIS缓冲液(pH值为4.6)，试剂Ⅰ中添加乙二胺四乙酸二钠和月桂酰谷氨酸钠，月桂酰谷氨酸钠的助溶作用，有利于提高本试剂盒的准确度，乙二胺四乙酸二钠作是一种良好的配合剂，有效减少金属离子的干扰作用，提高测试结果的准确性。
Description
技术领域
本发明属于测定试剂盒的技术领域，具体涉及一种使用循环酶法的测定试剂盒及其测定方法。
背景技术
公告号为CN1378077A的中国发明专利，其公开了一种总胆汁酸测定方法和测定试剂，提供了一种总胆汁酸测定的方法即酶循环法，其反应原理是利用3α-HSD和硫代氧化型辅酶(Thio-NAD)特异性氧化胆汁酸，生成3-酮类固醇和还原性硫代氧化型辅酶(Thio-NADH)；在3α-HSD存在的条件下，3-酮类固醇和还原型辅酶Ⅰ(NADH)又生成胆汁酸和氧化型辅酶(NAD)每一次循环比原来的反应提高一倍的灵敏度，如此往复循环，从而放大微量的胆汁酸，产生大量的水溶性非染料的硫代还原型辅酶Ⅰ(Thio-NADH)，最后测定生成的Thio-NADH的吸光度变化，测得胆汁酸的含量。
该发明中提供的试剂，在2-8℃开盖使用状态下，试剂稳定的时间较短；在2-8℃度密闭避光存储的过程中，试剂稳定性不理想，随着放置时间的延长，反应度会下降，试剂颜色由无色或淡黄色逐渐变成红色。
因此有必要开发一种新的具有良好稳定性和检测准确性的总胆汁酸测定试剂盒。
发明内容
本发明的目的是要解决现有产品的技术问题，提供一种使用循环酶法的测定试剂盒及其测定方法。
为了解决上述问题，本发明按以下技术方案予以实现的：
第一方面，本发明提供了一种使用循环酶法的测定试剂盒，所述测定试剂盒包括试剂Ⅰ和试剂Ⅱ；
所述试剂Ⅰ包括：
TRIS缓冲液40mmol/L；
β-硫烟酰胺腺苷二核苷酸氧化型(Thio-NAD)2g/L；
乙二胺四乙酸二钠0.2g/L；
月桂酰谷氨酸钠0.2g/L；
所述试剂Ⅱ包括：
二乙醇胺缓冲液100mmol/L；
β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型(NADH)6g/L；
α-羟类固醇脱氢酶(3α-HSD)6000U/L；
复合稳定剂0.1wt％；
叠氮钠1g/L。
优选地，所述复合稳定剂包括：
乙二胺四乙酸二钠0.2～0.3％、聚乙二醇辛基苯基醚1～2％、海藻糖2～3％、酪蛋白3～5％、甘油1～2％，聚乙烯吡咯烷酮0.1～0.2％，余量去离子水。
优选地，所述二乙醇胺缓冲液的PH值为9.2。
优选地，所述TRIS缓冲液的PH值为4.6。
第二方面，本发明还提供了一种第一方面的使用循环酶法的测定试剂盒的测定方法，所述测定方法包括以下步骤：
将5μL待测样品与200μL试剂Ⅰ进行混合，在37℃下反应5min后，加入50μL试剂Ⅱ混合，1min后记录。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
1、本发明使用循环酶法的测定试剂盒中采用TRIS缓冲液(pH值为4.6)，试剂Ⅰ中添加乙二胺四乙酸二钠和月桂酰谷氨酸钠，月桂酰谷氨酸钠的助溶作用，有利于提高本试剂盒的准确度，乙二胺四乙酸二钠作是一种良好的配合剂，有效减少金属离子的干扰作用，提高测试结果的准确性。
2、本发明试剂Ⅱ中采用了二乙醇胺缓冲液、叠氮钠以及复合物稳定剂，提高了试剂的稳定性。
具体实施方式
以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
血清总胆汁酸的测定对慢性肝病、肝硬化、酒精性肝病以及胆汁淤积的诊断、预后和疗效评估方面往往优于多项肝酶学指标，因此具有重要的临床应用价值，随着其临床检测方法从过去繁琐的高效液相色谱法逐渐发展为方便适用的酶循环法，在临床的应用越来越普及。近年国内多家试剂厂商纷纷推出酶循环法试剂盒，但在实际工作中，却发现试剂盒的质量良莠不齐，影响了检验结果的准确性，且稳定性交差。
为此，本发明提供了一种使用循环酶法的测定试剂盒，所述测定试剂盒包括试剂Ⅰ和试剂Ⅱ；
所述试剂Ⅰ包括：
TRIS缓冲液40mmol/L；
β-硫烟酰胺腺苷二核苷酸氧化型(Thio-NAD)2g/L；
乙二胺四乙酸二钠0.2g/L；
月桂酰谷氨酸钠0.2g/L；
所述试剂Ⅱ包括：
二乙醇胺缓冲液100mmol/L；
β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型(NADH)6g/L；
α-羟类固醇脱氢酶(3α-HSD)6000U/L；
复合稳定剂0.1wt％；
叠氮钠1g/L。
具体的，所述二乙醇胺缓冲液的PH值为9.2。所述TRIS缓冲液的PH值为4.6。
其中，所述复合稳定剂包括乙二胺四乙酸二钠0.2～0.3％、聚乙二醇辛基苯基醚1～2％、海藻糖2～3％、酪蛋白3～5％、甘油1～2％，聚乙烯吡咯烷酮0.1～0.2％，余量去离子水。
本发明的复合稳定剂用于测定试剂盒中，一方面，选用的材料中，如乙二胺四乙酸二钠、酪蛋白等确保了试剂盒检测结果的准确性，并且使测定试剂盒更为稳定，可有效延长试剂盒的保存时间，经试验，在2-8℃开盖使用状态下，避光保存的有效期天数大于30天，反应度下降幅度极小。此外，该稳定剂成本低廉，配制简单，值得进一步广泛推广。
实施例1
本实施例1所述复合稳定剂包括乙二胺四乙酸二钠0.2％、聚乙二醇辛基苯基醚1％、海藻糖2％、酪蛋白3％、甘油1％，聚乙烯吡咯烷酮0.1％，余量去离子水。
实施例2
本实施例2所述复合稳定剂包括乙二胺四乙酸二钠0.25％、聚乙二醇辛基苯基醚1.5％、海藻糖2.5％、酪蛋白4％、甘油1.5％，聚乙烯吡咯烷酮0.15％，余量去离子水。
实施例3
本实施例3所述复合稳定剂包括乙二胺四乙酸二钠0.3％、聚乙二醇辛基苯基醚2％、海藻糖3％、酪蛋白5％、甘油2％，聚乙烯吡咯烷酮0.2％，余量去离子水。
本发明还提供了一种基于上述使用循环酶法的测定试剂盒的测定方法，所述测定方法包括以下步骤：将5μL待测样品与200μL试剂Ⅰ进行混合，在37℃下反应5min后，加入50μL试剂Ⅱ混合，1min后记录。
线性范围测试与对比：取一无明显黄疸和溶血的高浓度新鲜血清，用去离子水稀释成不同浓度，并分别测定6次计算平均值，具体如表1所示。
表1本发明产品的线性范围
| r值 | 范围(μmol/L) |
| 0.9984 | 0.04～181.6 |
结果表明：本测试结果的相关系数r＝0.99998，满足试剂盒的线性要求，根据表中结果显示，本试剂盒的线性范围为1-180μmol/L。
测试2
相关性测试：使用贝克曼AU480生化分析仪进行测定，对本试剂盒用朗道校准品进行校准，并测定20例临床样本的TBA的含量，线性回归方程为y＝0.8803X+2.33，r＝0.9997，表明本试剂盒测试结果的相关性良好。
测试3
表2本发明回收率测定
| 测定结果(μmol/L) | 加入的标准物浓度(μmol/L) | 回收率(％) |
| 5.2 | 0.00 | - |
| 10.36 | 10.00 | 95 |
| 10.8 | 20.00 | 94 |
| 10.60 | 30.00 | 92 |
从结果可以看出，该试剂在各浓度段的回收率均>92％，非特异性结合的影响较少。
测试4
精密度测试：分别对高、低值质控血清进行测定，检查本发明的试剂在高值和低值标本时的测定精密度。另结果表明批内精密度和批间精密度均较好，结果见表3。
表3精密度测试结果
| 低值质控血清10±3μmol/L | 高值质控血清70±5μmol/L | |
| 测定均值 | 10.5μmol/L | 72.1μmol/L |
| 标准差 | 0.06 | 0.10 |
| 变异系数 | 1.74 | 0.85 |
| 测定均值 | 10.8μmol/L | 72.21μmol/L |
| 标准差 | 0.11 | 0.13 |
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，故凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何修改、等同变化与修饰,均仍属于本发明技术方案的范围内。
Claims (5)
1.一种使用循环酶法的测定试剂盒，其特征在于，所述测定试剂盒包括试剂Ⅰ和试剂Ⅱ；
所述试剂Ⅰ包括：
TRIS缓冲液40mmol/L；
β-硫烟酰胺腺苷二核苷酸氧化型(Thio-NAD)2g/L；
乙二胺四乙酸二钠0.2g/L；
月桂酰谷氨酸钠0.2g/L；
所述试剂Ⅱ包括：
二乙醇胺缓冲液100mmol/L；
β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型(NADH)6g/L；
α-羟类固醇脱氢酶(3α-HSD)6000U/L；
复合稳定剂0.1wt％；
叠氮钠1g/L。
2.根据权利要求1所述的使用循环酶法的测定试剂盒，其特征在于，所述复合稳定剂包括：
乙二胺四乙酸二钠0.2～0.3％、聚乙二醇辛基苯基醚1～2％、海藻糖2～3％、酪蛋白3～5％、甘油1～2％，聚乙烯吡咯烷酮0.1～0.2％，余量去离子水。
3.根据权利要求1所述的使用循环酶法的测定试剂盒，其特征在于：
所述二乙醇胺缓冲液的PH值为9.2。
4.根据权利要求1所述的使用循环酶法的测定试剂盒，其特征在于：
所述TRIS缓冲液的PH值为4.6。
5.一种根据权利要求1至4任意一项所述的使用循环酶法的测定试剂盒的测定方法，其特征在于，所述测定方法包括以下步骤：
将5μL待测样品与200μL试剂Ⅰ进行混合，在37℃下反应5min后，加入50μL试剂Ⅱ混合，1min后记录。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110143682.1A CN112903671A (zh) | 2021-02-02 | 2021-02-02 | 一种使用循环酶法的测定试剂盒及其测定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110143682.1A CN112903671A (zh) | 2021-02-02 | 2021-02-02 | 一种使用循环酶法的测定试剂盒及其测定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112903671A true CN112903671A (zh) | 2021-06-04 |
Family
ID=76121437
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110143682.1A Pending CN112903671A (zh) | 2021-02-02 | 2021-02-02 | 一种使用循环酶法的测定试剂盒及其测定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112903671A (zh) |
Citations (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1378077A (zh) * | 2002-05-10 | 2002-11-06 | 肖洪武 | 一种总胆汁酸的测定方法及测定试剂 |
| CN101003831A (zh) * | 2007-01-17 | 2007-07-25 | 王贤理 | 肝胆系统疾病诊断试剂盒 |
| CN102539791A (zh) * | 2012-01-09 | 2012-07-04 | 宁波天康生物科技有限公司 | 总胆汁酸的定量测定及测定试剂盒 |
| CN104198420A (zh) * | 2014-08-14 | 2014-12-10 | 上海睿康生物科技有限公司 | 一种稳定的总胆汁酸检测试剂盒 |
| CN104198422A (zh) * | 2014-08-18 | 2014-12-10 | 苏州康铭诚业医用科技有限公司 | 一种用于α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒的复合稳定剂 |
| CN105002264A (zh) * | 2015-07-28 | 2015-10-28 | 中生北控生物科技股份有限公司 | 一种总胆汁酸测定试剂盒 |
| CN107505273A (zh) * | 2017-08-10 | 2017-12-22 | 威特曼生物科技（南京）有限公司 | 血清总胆汁酸含量测定试剂盒及其使用方法 |
| CN107703288A (zh) * | 2017-06-27 | 2018-02-16 | 廊坊恒益生物技术有限公司 | 提高反应稳定性的胆汁酸检测试剂 |
| CN107991252A (zh) * | 2017-11-23 | 2018-05-04 | 中山市创艺生化工程有限公司 | 一种用于α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒的稳定剂及其制备方法 |
| CN108220387A (zh) * | 2018-03-28 | 2018-06-29 | 潍坊市康华生物技术有限公司 | 一种总胆汁酸检测试剂盒 |
| CN108872117A (zh) * | 2017-05-11 | 2018-11-23 | 广州市伊川生物科技有限公司 | 一种总胆汁酸测定试剂盒及其测定方法 |
| CN110261337A (zh) * | 2019-07-15 | 2019-09-20 | 三诺生物传感股份有限公司 | 一种总胆汁酸检测试剂 |
-
2021
- 2021-02-02 CN CN202110143682.1A patent/CN112903671A/zh active Pending
Patent Citations (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1378077A (zh) * | 2002-05-10 | 2002-11-06 | 肖洪武 | 一种总胆汁酸的测定方法及测定试剂 |
| CN101003831A (zh) * | 2007-01-17 | 2007-07-25 | 王贤理 | 肝胆系统疾病诊断试剂盒 |
| CN102539791A (zh) * | 2012-01-09 | 2012-07-04 | 宁波天康生物科技有限公司 | 总胆汁酸的定量测定及测定试剂盒 |
| CN104198420A (zh) * | 2014-08-14 | 2014-12-10 | 上海睿康生物科技有限公司 | 一种稳定的总胆汁酸检测试剂盒 |
| CN104198422A (zh) * | 2014-08-18 | 2014-12-10 | 苏州康铭诚业医用科技有限公司 | 一种用于α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒的复合稳定剂 |
| CN105002264A (zh) * | 2015-07-28 | 2015-10-28 | 中生北控生物科技股份有限公司 | 一种总胆汁酸测定试剂盒 |
| CN108872117A (zh) * | 2017-05-11 | 2018-11-23 | 广州市伊川生物科技有限公司 | 一种总胆汁酸测定试剂盒及其测定方法 |
| CN107703288A (zh) * | 2017-06-27 | 2018-02-16 | 廊坊恒益生物技术有限公司 | 提高反应稳定性的胆汁酸检测试剂 |
| CN107505273A (zh) * | 2017-08-10 | 2017-12-22 | 威特曼生物科技（南京）有限公司 | 血清总胆汁酸含量测定试剂盒及其使用方法 |
| CN107991252A (zh) * | 2017-11-23 | 2018-05-04 | 中山市创艺生化工程有限公司 | 一种用于α-羟丁酸脱氢酶测定试剂盒的稳定剂及其制备方法 |
| CN108220387A (zh) * | 2018-03-28 | 2018-06-29 | 潍坊市康华生物技术有限公司 | 一种总胆汁酸检测试剂盒 |
| CN110261337A (zh) * | 2019-07-15 | 2019-09-20 | 三诺生物传感股份有限公司 | 一种总胆汁酸检测试剂 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Megraw et al. | Manual and continuous-flow colorimetry of triacylglycerols by a fully enzymic method. | |
| CN111321198B (zh) | 一种谷胱甘肽还原酶测定试剂盒及其制备方法和应用 | |
| CN109212232B (zh) | 一种便捷稳定的同型半胱氨酸检测试剂盒及检测方法 | |
| CN109517813B (zh) | 一种肌酸激酶及其同工酶激活剂、测定试剂及试剂盒 | |
| CN111808921A (zh) | 一种基于Trinder反应的检测试剂盒及其应用 | |
| CN107505273A (zh) | 血清总胆汁酸含量测定试剂盒及其使用方法 | |
| CN110308282A (zh) | 一种稳定的同型半胱氨酸循环酶法检测试剂盒 | |
| CN101498662A (zh) | 单胺氧化酶mao单试剂测定试剂盒 | |
| CN111944872A (zh) | 测定肌酐含量的试剂组合、试剂或试剂盒 | |
| CN104596959A (zh) | 一种基于dna酶检测钾离子浓度的方法 | |
| CN112710853B (zh) | 一种抗干扰、稳定的血清直接胆红素（酶法）测定试剂盒及其制备方法和应用 | |
| CN102564979A (zh) | 循环酶法测定乙醇浓度的方法及乙醇测定试剂盒 | |
| CN107153044A (zh) | 一种改良型的同型半胱氨酸试剂盒及其检测方法 | |
| CN104673878B (zh) | 一种单体系测定糖化白蛋白与白蛋白浓度比值的试剂盒 | |
| CN104807995B (zh) | 一种灵敏度高的连续检测法gldh检测试剂 | |
| CN111662955A (zh) | 一种腺苷脱氨酶测定试剂盒 | |
| CN113984689B (zh) | 一种测定谷胱甘肽还原酶的试剂盒 | |
| CN112903671A (zh) | 一种使用循环酶法的测定试剂盒及其测定方法 | |
| CN107860729B (zh) | 一种用于测定谷草转氨酶的稳定试剂 | |
| CN107356544B (zh) | 一种脂肪酶检测试剂盒 | |
| CN111808918B (zh) | 一种测定5`-核甘酸酶的试剂盒 | |
| CN115710597A (zh) | 一种尿素检测试剂盒 | |
| CN110343740A (zh) | 一种高灵敏的乳酸测定方法及乳酸检测试剂盒 | |
| CN102495220B (zh) | 稳定的乙醇测定液体试剂盒 | |
| CN113624701B (zh) | 一种结合胆红素测定试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20210604 |