CN102507915A - 稳定的乳酸测定液体试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种稳定的乳酸测定液体试剂盒，其特征在于：该试剂盒为由试剂1和试剂2组成的液体型双试剂，其中试剂1各组分及浓度为：缓冲液(pH5.5-6.5)0.05~0.5M，α/β-萘酚 20~200mg/L，辅酶 20~200mg/L，防腐剂 0.1~10g/L；试剂2各组分及浓度为：缓冲液(pH8.5-9.5) 0.05~0.5M，乳酸脱氢酶20~200KU/L，稳定剂0.1~100g/L，防腐剂0.1~10g/L。本发明具有准确度、精密度均较好，开瓶稳定性好，2～8℃开瓶保存至少可稳定15天，能满足临床检验要求的优点。

Description

稳定的乳酸测定液体试剂盒

技术领域

本发明属于医学检验测定技术领域，具体涉及一种稳定的乳酸测定液体试剂盒。

背景技术

乳酸是糖代谢的中间产物，主要来源于骨骼肌、脑、皮肤、肾髓质和红细胞等，血液中乳酸浓度与这些组织产生乳酸的速率以及肝脏对乳酸的代谢速度有关，约65％的乳酸由肝脏利用，而肝外乳酸通过骨骼肌和肾皮质的氧化作用清除。一般认为乳酸浓度超过5 mmol/L以及pH值小于7.25时提示有明显的乳酸中毒。乳酸中毒在下列两类临床情况下发生：A型(缺氧型)：常见，与组织氧合作用降低有关，如休克、低血容量和左心室衰竭；B型：与某些疾病(如糖尿病、肿瘤、肝病)、药物或毒物如乙醇、甲醇、水杨酸或先天代谢紊乱(如甲基丙二酸血症，丙酮酸血症和脂肪酸氧化缺陷)有关。乳酸中毒比较常见，住院患者发生率约1％。其所致死亡率超过60％，如同时存在低血压，则死亡率接近100％。

现在普遍使用的测定血液中乳酸的方法为比色法，该法是利用乳酸脱氢酶催化L-乳酸和辅酶生成丙酮酸和还原型辅酶，并加入硫酸肼捕获丙酮酸使反应完成，生成的还原型辅酶与乳酸等摩尔，通过测定还原型辅酶来计算乳酸含量。由于肼易与空气中的二氧化碳发生反应生成肼基甲酸，因而此法试剂开瓶稳定性较差，试剂开瓶后由于吸收空气中的二氧化碳很快就会导致试剂pH值下降，影响测定的准确度及试剂的稳定性。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种准确度、精密度均较好，开瓶稳定性好，2～8℃开瓶保存至少可稳定 15天，能满足临床检验要求的开瓶稳定的乳酸测定液体试剂盒。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案为：一种稳定的乳酸测定液体试剂盒，该试剂盒为由试剂1和试剂2组成的液体型双试剂，其中

试剂1各组分及浓度为：

缓冲液(pH 5.5-6.5)                0.05~0.5 M （mol/L）

α/β-萘酚（α-萘酚或β-萘酚）     20~200 mg/L

辅酶                            20~200 mg/L

防腐剂                           0.1~10 g/L；

试剂2各组分及浓度为：

缓冲液(pH 8.5-9.5)                0.05~0.5 M

乳酸脱氢酶                       20~200 KU/L

稳定剂                           0.1~100 g/L

防腐剂                           0.1~10 g/L。

本发明上述试剂1中的缓冲液为柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液、咪唑缓冲液、醋酸-醋酸钠缓冲液等中的一种，优选柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液。

本发明上述试剂1中的辅酶为NAD（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸），NADP（烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸，又称辅酶II），thio-NAD（硫代氧化型辅酶I）等中的一种。

本发明上述试剂2中的缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、3-三羟甲基甲胺-2-羟基丙磺酸缓冲液、哌嗪-1,4-二乙磺酸缓冲液等中的一种，优选三羟甲基氨基甲烷缓冲液。

本发明上述试剂2中的稳定剂为乙二醇、丙三醇、牛血清白蛋白、海藻糖等中的一种。

本发明的防腐剂为叠氮钠或proclin系列防腐剂（如Proclin300）等。

本发明试剂1和试剂2的配制方法为常规方法，即按照上述配方比例，分别将试剂1和试剂2所述的各组分分别加入蒸馏水后各自混合搅匀即可。

本发明试剂测定样本中乳酸的测试条件如下：温度：30-37 ℃；比色杯光径为1.0 cm。检测主波长340 nm，副波长405 nm。

应用本发明乳酸测定试剂测定样本中乳酸的方法如下：样品（校准管以校准品做样品）加试剂1混匀，30-37℃孵育3-5 min后读取吸光度A0，立即加入试剂2混匀，30-37℃反应5 min后，读取吸光度A1，ΔA＝A1-A0。其中样本用量3 μl，试剂1用量200 μl，试剂2 用量50 μl。     

本发明试剂盒测定样本中LAC含量按以下公式进行计算：   

本发明的优点和有益效果：

本发明通过加入α/β-萘酚替代硫酸肼与丙酮酸反应，促进反应进行，同时发挥其他组分之间的协同作用，从而避免了“由于肼易与空气中的二氧化碳发生反应生成肼基甲酸造成的试剂开瓶稳定性较差、试剂开瓶后由于吸收空气中的二氧化碳很快就会导致试剂pH值下降，影响测定的准确度及试剂的稳定性”的缺陷。

具体实施方式

以下是本发明的具体实施例，对本发明的技术方案作进一步描述，但本发明并不限于这些实施例。

实施例1

试剂1各组分及浓度为：

咪唑缓冲液(pH 5.5)    0.3 M 

α-萘酚     20 mg/L

NAD    20 mg/L

叠氮钠   0.2 g/L

试剂2各组分及浓度为：

哌嗪-1,4-二乙磺酸缓冲液(pH 8.5)     0.1M

乳酸脱氢酶    50 KU/L

乙二醇        10 g/L

Proclin300    0.5 g/L。

试剂1和试剂2的配制方法为常规方法，即试剂1和试剂2所述组分分别加入蒸馏水后各自混合搅匀即可。

实施例2

试剂1各组分及浓度为：

柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液(pH 6.0)    0.1 M 

β-萘酚     20 mg/L

thio-NAD    50 mg/L

Proclin300   0.1 g/L

试剂2各组分及浓度为：

三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH 9.0)    0.2 M

乳酸脱氢酶    80 KU/L

牛血清白蛋白   0.1 g/L

Proclin300   1 g/L

实施例2试剂盒的制备方法同实施例1。

对照例1 

试剂1各组分及浓度为：

醋酸-醋酸钠缓冲液(pH 5.5)    0.05 M 

硫酸肼     50 mg/L

thio-NAD     50 mg/L

Proclin300   2 g/L；

试剂2各组分及浓度为：

3-三羟甲基甲胺-2-羟基丙磺酸缓冲液(pH 9.5)    0.1 M

乳酸脱氢酶    80 KU/L

丙三醇   20 g/L

叠氮钠   0.3 g/L。

实施例3   试剂盒的制备方法同实施例1。

本发明试剂盒测定样本中的乳酸的测试条件如下：温度：30-37 ℃；比色杯光径为1.0 cm。检测主波长340 nm，副波长405nm。

应用本发明乳酸测定试剂盒测定样本中乳酸的方法如下：样品（校准管以校准品做样品）加R1混匀，30-37℃孵育3-5 min后读取吸光度A0，立即加入R2混匀，30-37℃反应5 min后，读取吸光度A1，ΔA＝A1-A0。其中样本用量3 μl，试剂1用量200 μl，试剂2 用量50 μl。     

本发明试剂盒测定样本中LAC含量按以下公式进行计算：   

下面结合表格对本发明实施例所得试剂盒的性能进行说明。

将实施例1-3配制的试剂2-8℃开瓶15 d，对高低值样本进行检测，结果如表1所示：

表1

以上结果表明实施例1和2开瓶稳定性较对比对照例1好。

Claims (9)

1.一种稳定的乳酸测定液体试剂盒，其特征在于：该试剂盒为由试剂1和试剂2组成的液体型双试剂，其中

试剂1各组分及浓度为：

缓冲液(pH 5.5-6.5)                 0.05~0.5 M

α/β-萘酚                         20~200 mg/L

辅酶                             20~200 mg/L

防腐剂                           0.1~10 g/L；

试剂2各组分及浓度为：

缓冲液(pH 8.5-9.5)                 0.05~0.5 M

乳酸脱氢酶                       20~200 KU/L

稳定剂                           0.1~100 g/L

防腐剂                           0.1~10 g/L。

2.根据权利要求1所述的稳定的乳酸测定液体试剂盒，其特征在于：所述试剂1中的缓冲液为柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液、咪唑缓冲液、醋酸-醋酸钠缓冲液中的一种。

3.根据权利要求2所述的稳定的乳酸测定液体试剂盒，其特征在于：所述试剂1中的缓冲液为柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液。

4.根据权利要求1所述的稳定的乳酸测定液体试剂盒，其特征在于：所述试剂1中的辅酶为NAD、NADP、thio-NAD中的一种。

5.根据权利要求1所述的稳定的乳酸测定液体试剂盒，其特征在于：所述试剂2中的缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、3-三羟甲基甲胺-2-羟基丙磺酸缓冲液、哌嗪-1,4-二乙磺酸缓冲液中的一种。

6.根据权利要求5所述的稳定的乳酸测定液体试剂盒，其特征在于：所述试剂2中的缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液。

7.根据权利要求1所述的稳定的乳酸测定液体试剂盒，其特征在于：所述试剂2中的稳定剂为乙二醇、丙三醇、牛血清白蛋白、海藻糖中的一种。

8.根据权利要求1所述的稳定的乳酸测定液体试剂盒，其特征在于：所述的防腐剂为叠氮钠或proclin系列防腐剂。

9.根据权利要求9所述的稳定的乳酸测定液体试剂盒，其特征在于：所述的proclin系列防腐剂为Proclin300。