CN101503732B - 一种葡萄糖氧化酶单一液体测定试剂 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种葡萄糖氧化酶单一液体测定试剂，其为单一液体形式，且其组分配比为：葡萄糖氧化酶1-50KU/L；过氧化物酶0.5-50KU/L；4-氨基安替比林0.1-20mmol/L；硫酸钠1-200g/L；3-吗啉丙磺酸5-500mmol/L；高敏复合色原0.05-10g/L；防腐剂0.05-20g/L；缓冲液pH5.0-8.0。本发明具有能以单一液体状态存在并具有优良的稳定性和灵敏度、并具有检测波长范围广等优点。
Description
技术领域
本发明涉及医学检验领域中的一种分析试剂，具体涉及一种用于测定葡萄糖含量的葡萄糖氧化酶单一液体测定试剂。
背景技术
在众多的研究结果表明，全球糖尿病发病率增长迅速，糖尿病已经成为继肿瘤、心血管病变之后第三大严重威胁人类健康的慢性疾病。目前全球糖尿病患者已超过1.2亿人，我国患者人群居世界第二。由于糖尿病是终身性疾病，对于已确诊糖尿病的患者，为控制和延缓病情的发展、减少并发症的发生，必须定期、不定期测量血糖，作为医院血常规项目之一，如何快速、准确检测血液中葡萄糖含量有着积极意义。
血液中葡萄糖含量酶法测定方法主要有：己糖激酶法、葡萄糖脱氢酶法、氧化酶法、酶电极、血糖仪等。其中，己糖激酶法、葡萄糖脱氢酶法试剂存在价格昂贵(氧化酶法的2-3倍)，不能在可见光范围检测；而酶电极法不普及，无法在临床生化分析仪上组合检测；而血糖仪虽然微量方便，但只能作定性检测；葡萄糖氧化酶法经济、准确，是目前应用最广泛的测定血糖的方法，但常见的以苯酚为色原的葡萄糖氧化酶法混合试剂很不稳定，酶酚混合试剂在冰箱只能存放1个月(参考《全国临床检验操作规程(第3版)》，P360-361卫生部医政司编制，东南大学出版社2006年11出版)，且适用波长范围窄，因此，目前市面上实际应用的葡萄糖氧化酶法试剂常以冻干试剂或者液体双试剂方式来延长保存期，但是，由于血糖为常规项目试剂用量大，更换频率高，双试剂占用仪器的试剂舱位多、容易错位、另外仪器损耗引起双试剂配比不平衡而造成试剂浪费较大，而冻干试剂复溶对医院用户带来额外的工作量、复溶更容易二次污染等影响检验质量、效率，此外市面上含有苯酚的葡萄糖氧化酶法试剂对操作人员、设备、环境都会有较大的危害和污染。
发明内容
本发明的目的是为了解决上述技术的不足之处，提供一种能以单一液体状态存在并具有优良的稳定性和灵敏度、并具有检测波长范围广的葡萄糖氧化酶单一液体测定试剂。
为实现上述目的，本发明的技术方案是在本发明所采取的技术方案：其为单一液体形式，且其组分与配比为：
葡萄糖氧化酶1-50KU/L；
过氧化物酶0.5-50KU/L；
4-氨基安替比林0.1-20mmol/L；
硫酸钠1-200g/L；
3-吗啉丙磺酸5-500mmol/L；
高敏复合色原0.05-10g/L；
防腐剂0.05-20g/L；
缓冲液pH 5.0-8.0。
作为对上述方案的进一步补充，所述的高敏复合色原指在500-600nm的毫摩尔消光系数都能大于13升·毫摩尔-1·厘米-1，本发明可以是3，5-二氯-2-羟基苯磺酸钠(DBHS)和N-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠(TOPS)、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐(TOOS)、N，N-二(4-磺丁基)-3-甲基苯胺二钠盐(TODB)等水溶性显色剂的中的两种或两种以上组合。
本发明采用高敏复合色原替代传统的葡萄糖氧化酶法试剂的苯酚，不仅避免了苯酚对操作人员、设备、环境都会有较大的危害和污染，而且还采用多种色原复合使得本发明的试剂检测波长范围相比于传统的苯酚类的葡萄糖氧化酶法试剂更广，提高了灵敏度和适应性，此外本发明结合高敏复合色原和硫酸钠与3-吗啉丙磺酸，可以使本发明的试剂以稳定地单试剂形式存在至少一年时间，克服传统的葡萄糖氧化酶法试剂的稳定性不佳以及因双试剂形式而存在的复配以及操作不便和易引起操作污染的缺陷。
进一步设置是所述的缓冲液可以为但不限于磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、Good’S生物缓冲液，其pH为5.0-8.0。本发明优选采用磷酸盐缓冲液作为缓冲液。
进一步设置是所述的防腐剂可以是PROCLIN系列防腐剂、叠氮钠、庆大霉素、氯霉素、对羟基苯甲酸甲酯、脱氧乙酸及其盐、阳离子表面活性剂等，用量为0.05～20g/L，在保质期内抑制微生物的生长，防止试剂失效。
进一步设置是还可以含有蛋白稳定剂、多元醇、氨基酸、螯合剂、二价金属离子、非离子表面活性剂。
所述的多元醇、蛋白类稳定剂、氨基酸、螯合剂、二价金属离子，可以是单独使用，也可以是组合使用。其中多元醇可以是甘油、乙二醇、丙二醇、二甘醇等，用量为1～500g/L，多元醇可以和水相互间形成坚强的氢键，降低水分子的活力，保持酶活性的三维结构。蛋白类稳定剂可以是牛血清白蛋白、人血清白蛋白、卵清蛋白等，用量为1～100g/L，蛋白类稳定剂可以和试剂中酶分子作用，减少离解为亚基或变性失活。氨基酸可以是赖氨酸、天门冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、蛋氨酸、精氨酸、缬氨酸、亮氨酸、甘氨酸、苏氨酸、酪氨酸、组氨酸等及其盐，用量为0.1～500g/L，氨基酸可以协助保护酶蛋白质氨基酸核心序列的构想完整性，提高稳定性。螯合剂有乙二胺四乙酸(EDTA)、亚氨基二乙酸、氮三乙酸和二乙基三胺五乙酸、2-环己二胺四乙酸、乙二醇双(α-氨基乙酸)醚四乙酸、乙基乙二胺三乙酸等及其盐类，用量为0.05～100g/L，络合试剂中微量重金属，防止抑制酶活性。
其中二价金属离子可以是镁、钙、锰、钠、铵、钾、铜离子等，用量为0.01～100g/L，作为酶的辅助因子，维持酶的构象。非离子表面活性剂可以是：吐温系列、TritonX系列等非离子表面活性剂，用量可以是0.01-10％，起到主要增溶、澄清、防止水溶液游离氧等作用。
本发明的基础葡萄糖氧化酶测定试剂的基本原理
将最终反应物置生化分析仪下检测波长500-600nm处的吸光度变化，即可测算出葡萄糖含量。
本发明的优点在于：
1、可以以稳定的单一试剂形式存在至少稳定一年，而且操作简单不用复配，手工上机都能方便适用，降低试剂浪费和环境污染，避免了传统的双试剂占用仪器的试剂舱位多、容易错位、另外仪器损耗引起双试剂配比不平衡而造成试剂浪费较大等缺点。
2、灵敏度好，且检测波长范围广(500-600nm)，可适用于各种生化检测仪器，提高仪器利用率。
说明书附图
图1本发明具体实施例1与对照例数据分析图。
具体实施方式
下面结合说明书附图和具体实施方式对本发明做进一步描述。只用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限定，该领域的技术工程师可根据上述发明的内容对本发明作出一些非本质的改进和调整。
实施例1
主要成分浓度
磷酸盐缓冲液(pH 7.0)100mmol/L
葡萄糖氧化酶12KU/L
过氧化物酶5KU/L
4-氨基安替比林0.5mmol/L
叠氮钠1.5g/L
氯化镁2g/L
硫酸钠5g/L
3-吗啉丙磺酸20mmol/L
DHBS 0.265g/L
TOPS 0.05
对照例
主要成分浓度
磷酸盐缓冲液(pH 7.0)50mmol/L
葡萄糖氧化酶12KU/L
过氧化物酶5KU/L
4-氨基安替比林0.5mmol/L
苯酚11mmol/L
测试条件
| 波长 | 500nm | 测定方法 | 终点法 |
| 反应温度 | 37℃ | 标本/试剂 | 1∶150 |
| 反应时间 | 10分钟 |
表一、临床标本
从表一和说明书附图1的结果，可以看出，本发明实施例的稳定组合和高敏复合显色剂对测定结果没有影响，与对照例(含苯酚试剂)有良好的相关性。
表二、质控及稳定性
表二结果：本发明实施例有很好的稳定性(稳定12个月)可以满足商业化需求，而对照例3个月测定结果已经明显下降，结果超出质控靶值范围。
表三、吸光度范围及灵敏度(100mg/dL葡萄糖标准品)
| 500nm | 520nm | 546nm | 600nm | |
| 实施例1 | 0.194 | 0.276 | 0.329 | 0.161 |
| 对照例 | 0.141 | 0.135 | 0.104 | 0.029 |
表三结果表明，本发明的复合色原在500-600nm处比对照例有更好的灵敏度，确保读数的可靠性、适用光谱范围宽，满足不同生化分析仪及用户程序设定要求，如可以选择600nm波长避开样品中胆红素、血红蛋白的吸收峰降低干扰。
实施例2
主要成分浓度
磷酸盐缓冲液(pH 6.8)50mmol/L
葡萄糖氧化酶12KU/L
过氧化物酶5KU/L
4-氨基安替比林0.5mmol/L
PROCLIN 300 0.5g/L
硫酸镁1g/L
硫酸钠20g/L
3-吗啉丙磺酸200mmol/L
DHBS 0.5g/L
TODB 0.1g/L
调pH 6.8
实施例3
主要成分浓度
磷酸盐缓冲液(pH 6.8)50mmol/L
葡萄糖氧化酶12KU/L
过氧化物酶5KU/L
4-氨基安替比林0.5mmol/L
PROCLIN300 0.5g/L
硫酸镁1g/L
硫酸钠1g/L
3-吗啉丙磺酸5mmol/L
DHBS 0.5g/L
TODB 0.1g/L
调pH 6.8
表四、质控及稳定性
表四的结果，本发明的稳定方法比对照例稳定性得到了不同程度提高。
从上述的结果可以表明：本发明的试剂与对照例有良好的相关性和准确度；保存时间长，比对照例有更好的稳定性和灵敏度，满足临床诊断要求，适用于临床葡萄糖含量检测。
Claims (2)
1.一种葡萄糖氧化酶单一液体测定试剂，其特征在于其为单一液体形式，且其组分包括有：
磷酸盐缓冲液(pH 7.0)100mmol/L；
葡萄糖氧化酶12KU/L；
过氧化物酶5KU/L；
4-氨基安替比林0.5mmol/L；
叠氮钠1.5g/L；
氯化镁2g/L；
硫酸钠5g/L；
3-吗啉丙磺酸20mmol/L；
DHBS 0.265g/L；
TOPS 0.05g/L。
2.根据权利要求1所述的葡萄糖氧化酶单一液体测定试剂，其特征在于：还含有蛋白稳定剂、多元醇、氨基酸、螯合剂、二价金属离子、非离子表面活性剂。
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