CN106680222B - 胆碱酯酶测定试剂及试剂盒 - Google Patents

胆碱酯酶测定试剂及试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种胆碱酯酶测定试剂，包括pH值为7.5～8.0的试剂R1和pH值为3.5～4.5的试剂R2，且所述试剂R1和所述试剂R2的体积比为5:1；1L所述试剂R1主要由以下组分组成：1～3 g的磷酸二氢钠，20～50 g的磷酸氢二钠，1.2～2.4 g的三羟甲基氨基甲烷和0.6～1.2 g的铁氰化钾；1L所述试剂R2主要由以下组分组成：3～9 g的2‑（N吗啉基）乙磺酸，1～6 g的氯化钠，0.2～1.0 g/乙二胺四乙酸二钠，1～5 g的氯化镁，0.2～1 g的ProClin300和10～20 g的碘化丁酰硫代胆碱。另外，本发明还提供上述胆碱酯酶测定试剂及试剂盒，该胆碱酯酶测定试剂及试剂盒的线性范围广，精确度高，具有广阔的应用前景。

Description

胆碱酯酶测定试剂及试剂盒
技术领域
本发明涉及体外检测试剂领域，具体地，涉及一种胆碱酯酶测定试剂及试剂盒。
背景技术
胆碱酯酶（cholinesterase，CHE）是一种催化酰基胆碱或胆碱酯水解反应的酶，主要由真性胆碱酯酶和假性胆碱酯酶组成。真性胆碱酯酶也称乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase），主要存在于胆碱能神经末梢突触间隙，特别是运动神经终板突触后膜的皱摺中聚集较多，也存在于胆碱能神经元内和红细胞中；假性胆碱酯酶（PCHE）存在于血清或血浆中，除可作用于乙酰胆碱外，还可作用于其他胆碱类化合物。
在临床中，通常是以测定假性胆碱酯酶活性作为协助诊断有机磷中毒和评估肝实质细胞损害的重要手段。现有技术，主要是通过胆碱酯酶对丁酰硫代胆碱起催化作用，使之水解生成丁酸和硫代胆碱，而硫代胆碱和指示剂5，5～二硫代双（2～硝基苯甲酸）反应生成显色物质，而显色物质在指定波长下测试吸光度以得到水解产物硫代胆碱的浓度，进而得到假性胆碱酯酶的活性。但是实际应用中，5，5～二硫代双（2～硝基苯甲酸）反应灵敏度太高，导致其检测的线性范围较窄，其使用受到限制。
发明内容
有鉴于此，本发明提供一种胆碱酯酶测定试剂及试剂盒，以解决上述问题。
具体地，本发明采取如下技术方案：
一种胆碱酯酶测定试剂，包括pH值为7.5～8.0的试剂R1和pH值为3.5～4.5的试剂R2，且所述试剂R1和所述试剂R2的体积比为5:1；所
1L所述试剂R1主要由以下组分组成：1～3 g的磷酸二氢钠，20～50 g的磷酸氢二钠，1.2～2.4 g的三羟甲基氨基甲烷和0.6～1.2 g的铁氰化钾；
1L所述试剂R2主要由以下组分组成：3～9 g 的2-（N吗啉基）乙磺酸，1～6 g的氯化钠，0.2～1.0 g/乙二胺四乙酸二钠，1～5 g的氯化镁， 0.2～1 g的ProClin300和10～20g的碘化丁酰硫代胆碱。
基于上述，1L所述试剂R1主要由以下组分组成：1.5～2.0 g的磷酸二氢钠，30～35g的磷酸氢二钠，1.2～1.5 g的三羟甲基氨基甲烷，0.8～1.0 g的铁氰化钾；1L所述试剂R2主要由以下组分组成：5～7 g 的2-（N吗啉基）乙磺酸，1～3 g的氯化钠，0.3～0.8 g的乙二胺四乙酸二钠， 2～3 g的氯化镁， 0.5～1 g/L的ProClin300， 15～20 g的碘化丁酰硫代胆碱。
基于上述，所述试剂R1主要由以下组分组成：1.6 g的磷酸二氢钠，32 g的磷酸氢二钠，1.2 g的三羟甲基氨基甲烷，0.9 g铁氰化钾；所述试剂R2主要由以下组分组成：5.78g 的2-（N吗啉基）乙磺酸，2.1 g的氯化钠，0.5 g的乙二胺四乙酸二钠，2.5 g的氯化镁，1 g的ProClin300，17.6 g的碘化丁酰硫代胆碱。
一种胆碱酯酶测定试剂及试剂盒，包括上述的胆碱酯酶测定试剂和盛放所述胆碱酯酶测定试剂的试剂盒。
本发明提供的胆碱酯酶测定试剂及试剂盒在具有双试剂功能的迪瑞CS-400B自动生化分析仪上使用，具体使用步骤如下：先加入样本5 μl，然后加入所述试剂R1试剂250 μl预孵育5 min，再加入50 μl的所述试剂R2反应1.5 min，读取吸光度A1，继续反应1.5 min后，读取吸光度A2，并计算ΔA/min。
与现有技术相比，本发明提供的胆碱酯酶测定试剂，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1中的铁氰化钾作为指示剂，磷酸二氢钠和磷酸氢二钠作为酸碱缓冲剂，三羟甲基氨基甲烷作为抑制剂，主要对胆碱的水解反应起抑制作用，指示剂、酸碱缓冲剂和抑制剂相互配合，协同试剂R2克服指示剂过于灵敏的缺点，有利于扩大所述胆碱酯酶测定试剂的线性范围；在所述试剂R2中加入氯化镁作为催化剂，加快反应速度，提高测试的精确性；本发明提供的胆碱酯酶测定试剂在不影响测试精确性的前提下，有效提高了测定的线性范围，更加有利于临床使用。另外，本发明还提供了上述胆碱酯酶测定试剂及试剂盒，其结构简单，使用方便，更适于临床应用。
附图说明
图1 是实施例1准确度验证实验检测结果与对照组1检测结果相关性；
图2 是实施例2准确度验证实验检测结果与对照组1检测结果相关性；
图3 是实施例3准确度验证实验检测结果与对照组1检测结果相关性；
图4 是实施例4准确度验证实验检测结果与对照组1检测结果相关性。
具体实施方式
下面通过具体实施方式，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。
实施例1
本实施例提供一种胆碱酯酶测定试剂，包括pH值为7.7的试剂R1和pH值为4.0的试剂R2；所述试剂R1和所述试剂R2的体积比为5:1；
1 L所述试剂R1主要由以下组分组成：1.6 g的磷酸二氢钠，32 g的磷酸氢二钠，1.2 g的三羟甲基氨基甲烷，0.6 g的铁氰化钾；
1 L所述试剂R2主要由以下组分组成：5.78 g 的2-（N吗啉基）乙磺酸，2.12 g的氯化钠，0.5 g的乙二胺四乙酸二钠，2.5 g的氯化镁，1 g的ProClin300，17.6 g的碘化丁酰硫代胆碱。
本实施例还提供一种胆碱酯酶测定试剂及试剂盒，包括所述胆碱酯酶测定试剂和盛放所述胆碱酯酶测定试剂的容器。
本实施例提供的胆碱酯酶测定试剂及试剂盒在具有双试剂功能的迪瑞CS-400B自动生化分析仪上使用，具体使用步骤如下：先加入样本5 μl，然后加入所述试剂R1试剂250μl预孵育5 min，再加入50 μl的所述试剂R2反应1.5 min，读取吸光度A1，继续反应1.5 min后，读取吸光度A2，并计算ΔA/min。
实施例2
本实施例提供一种胆碱酯酶测定试剂及试剂盒，本实施例与实施例1的不同之处在于：
所述胆碱酯酶测定试剂包括pH值为8.0的试剂R1和pH值为3.5的试剂R2；
1 L所述试剂R1主要由以下组分组成：1.0 g的磷酸二氢钠，20 g的磷酸氢二钠，1.2 g的三羟甲基氨基甲烷，0.9 g的铁氰化钾；
1 L所述试剂R2主要由以下组分组成：3.0 g 的2-（N吗啉基）乙磺酸，1.0 g的氯化钠，1.0 g的乙二胺四乙酸二钠，5 g的氯化镁，0.2 g的ProClin300，10 g的碘化丁酰硫代胆碱。
实施例3
本实施例提供一种胆碱酯酶测定试剂及试剂盒，本实施例与实施例1的不同之处在于：
所述胆碱酯酶测定试剂包括pH值为7.5的试剂R1和pH值为4.5的试剂R2；
1 L所述试剂R1主要由以下组分组成：3.0 g的磷酸二氢钠，40 g的磷酸氢二钠，1.2 g的三羟甲基氨基甲烷，1.2 g的铁氰化钾；
1 L所述试剂R2主要由以下组分组成：6.0 g 的2-（N吗啉基）乙磺酸，6.0 g的氯化钠，0.2 g的乙二胺四乙酸二钠，1 g的氯化镁，0.5 g的ProClin300，20 g的碘化丁酰硫代胆碱。
实施例4
本实施例提供一种胆碱酯酶测定试剂及试剂盒，本实施例与实施例1的不同之处在于：
所述胆碱酯酶测定试剂包括pH值为7.8的试剂R1和pH值为4.3的试剂R2；
1 L所述试剂R1主要由以下组分组成：2.0 g的磷酸二氢钠，50 g的磷酸氢二钠，2.4 g的三羟甲基氨基甲烷，0.9 g的铁氰化钾；
1 L所述试剂R2主要由以下组分组成：9.0 g 的2-（N吗啉基）乙磺酸，3.0 g的氯化钠，0.5 g的乙二胺四乙酸二钠，3 g的氯化镁，0.7 g的ProClin300，12 g的碘化丁酰硫代胆碱。
验证实验
实验组：实施例1～4提供的胆碱酯酶测定试剂及试剂盒。
对照组1：市售胆碱酯酶试剂盒。
对照组2：提供一种胆碱酯酶试剂盒，其包括pH值为7.7的试剂R1和pH值为4.0的试剂R2；1 L所述试剂R1主要由以下组分组成：1.6 g的磷酸二氢钠，32 g的磷酸氢二钠，0.9 g的铁氰化钾；1 L所述试剂R2主要由以下组分组成：5.78 g 的2-（N吗啉基）乙磺酸，2.12 g的氯化钠，0.5 g的乙二胺四乙酸二钠，2.5 g的氯化镁，1 g的ProClin300，17.6 g的碘化丁酰硫代胆碱。
准确度验证实验：取40个样品，分别使用实验组和对照组1对其进行测试，测试结果如图1～4所示。
由图可知，实施例1～4提供的胆碱酯酶测定试剂及试剂盒与对照组1的检测结果相关性为0.9925、0.9971、0.9965、0.9926，相关性比较好，说明本发明提供的胆碱酯酶测定试剂及试剂盒的准确度较高。
线性范围验证实验：取胆碱酯酶高值样本25000U/L和低值样本1500U/L，用低值样本对高值样本进行稀释，配制6个不同浓度的样本，依次为1500U/L、3000U/L、6000U/L、13000U/L、19000U/L、25000U/L浓度的样本，分别用实验组和对照组2对其进行测试，每个浓度水平的样本分别测3次，分别取其平均值，检测结果如表1所示。
表1 胆碱酯酶测定试剂及试剂盒的线性范围验证实验结果
结果表明，实验组检测结果线性相关系数均大于0.99，各浓度的线性偏差均≤5%，说明本发明的试剂盒的线性范围可达到1500U/L~25000U/L，具有更宽的线性范围；而对照组2中未加入三羟甲基氨基甲烷，用其检测较低浓度时，测量结果较为准确，测量胆碱酯酶高值样本偏差迅速增大，测量样本的理论浓度为25000 U/L时的线性偏差高达27.9%，线性相关系数小于0.98，其线性范围小于实验组。综上所述，本发明提供的胆碱酯酶测定试剂及试剂盒的准确度高、线性范围广，更加有利于临床使用。
最后应当说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其限制；尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细的说明，所属领域的普通技术人员应当理解：依然可以对本发明的具体实施方式进行修改或者对部分技术特征进行等同替换；而不脱离本发明技术方案的精神，其均应涵盖在本发明请求保护的技术方案范围当中。

Claims (4)

1.一种胆碱酯酶测定试剂，其特征在于，它包括pH值为7.5～8.0的试剂R1和pH值为3.5～4.5的试剂R2，且所述试剂R1和所述试剂R2的体积比为5:1；
1L所述试剂R1主要由以下组分组成：1～3 g的磷酸二氢钠，20～50 g的磷酸氢二钠，1.2～2.4 g的三羟甲基氨基甲烷和0.6～1.2 g的铁氰化钾；
1L所述试剂R2主要由以下组分组成：3～9 g 的2-（N吗啉基）乙磺酸，1～6 g的氯化钠，0.2～1.0 g乙二胺四乙酸二钠，1～5 g的氯化镁， 0.2～1 g的ProClin300和10～20 g的碘化丁酰硫代胆碱。
2.根据权利要求1所述的胆碱酯酶测定试剂，其特征在于，1L所述试剂R1主要由以下组分组成：1.5～2.0 g的磷酸二氢钠，30～35 g的磷酸氢二钠，1.2～1.5 g的三羟甲基氨基甲烷，0.8～1.0 g的铁氰化钾；1L所述试剂R2主要由以下组分组成：5～7 g 的2-（N吗啉基）乙磺酸，1～3 g的氯化钠，0.3～0.8 g的乙二胺四乙酸二钠， 2～3 g的氯化镁， 0.5～1 g的ProClin300，15～20 g的碘化丁酰硫代胆碱。
3.根据权利要求1或2所述的胆碱酯酶测定试剂，其特征在于，1L所述试剂R1主要由以下组分组成：1.6 g的磷酸二氢钠，32 g的磷酸氢二钠，1.2 g的三羟甲基氨基甲烷，0.9 g铁氰化钾；1L所述试剂R2主要由以下组分组成：5.78 g 的2-（N吗啉基）乙磺酸，2.1 g的氯化钠，0.5 g的乙二胺四乙酸二钠，2.5 g的氯化镁，1 g的ProClin300，17.6 g的碘化丁酰硫代胆碱。
4.一种胆碱酯酶测定试剂盒，其特征在于，它包括权利要求1～3任一项所述的胆碱酯酶测定试剂和盛放所述胆碱酯酶测定试剂的试剂盒。
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