CN102788797A - 显示及采集肛提肌内运动终板分布图像的方法 - Google Patents
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Abstract
显示及采集肛提肌内运动终板分布图像的方法，包括以下步骤：采用胆碱酯酶整体染色方法对肛提肌标本内运动终板进行染色；制作空心的透光硅胶模型，在硅胶模型内部放置背景光源；将完成运动终板染色的肛提肌标本放在硅胶模型外表面，在背景光源照射下用照相机采集肛提肌内运动终板分布的立体形态影像；将标本放在解剖显微镜下进行显微解剖并采集图像。本发明提供的显示及采集肛提肌内运动终板分布图像的方法可以使肛提肌内运动终板着色，进而在背景光源的映射下，达到完整显示肛提肌内运动终板分布状态的目的，为明确肛提肌内运动终板的走行分布规律提供有效的研究图像。
Description
技术领域
本发明涉及的是运动终板染色技术，具体地说是一种显示及采集肛提肌内运动终板分布图像的方法。
背景技术
流行病学研究发现15%的成年人存在慢性盆腔疼痛,其中80%的慢性盆腔疼痛患者的疼痛症状由肛提肌痉挛引起。在动物实验和临床研究中均发现：将肉毒杆菌毒素注射于肌肉内运动终板所在区域，可提高由运动神经元功能异常引起的肌肉痉挛和肌张力失常的治疗效果。因此，明确肛提肌内运动终板的分布方式有助于指导临床运用肉毒杆菌毒素直接注射于肛提肌内运动终板分布区，达到松弛肌肉痉挛、有效治疗慢性盆腔疼痛、减少副反应的目的。
目前，文献中尚无针对肛提肌内运动终板分布研究的报道。 原因包括： 1.肛提肌的组成复杂；2.肛提肌的位置特殊；3. 肛提肌与尿道、阴道、直肠和肛管等内脏器官关系密切，多数妇产科、泌尿外科和肛肠外科的临床学者误把肛提肌当做内脏肌肉，而不是全是骨骼肌组成的一部分；4. 相关专业的临床学者欠缺解剖学和组织病理学关于运动终板染色方法方面的专业知识，而经典基础解剖学研究中针对肛提肌及运动终板的研究较少。
虽然胆碱酯酶染色方法是一种比较经典的研究骨骼肌内部运动终板分布的方法，但至今未有采用胆碱酯酶染色方法针对肛提肌内运动终板分布研究的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种显示及采集肛提肌内运动终板分布图像的方法，该方法能在不破坏标本完整性的情况下，准确地获得肛提肌内运动终板分布图像。
为实现上述目的，本发明提供的显示及采集肛提肌内运动终板分布图像的方法是：采用胆碱酯酶整体染色方法对肛提肌标本内运动终板进行染色；制作空心的透光硅胶模型，在硅胶模型内部放置背景光源；将完成运动终板染色的肛提肌标本放在硅胶模型外表面，在背景光源照射下用照相机采集肛提肌内运动终板分布的立体形态影像；将标本放在解剖显微镜下进行显微解剖并采集图像。
本发明提供的显示及采集肛提肌内运动终板分布图像的方法可以使肛提肌内运动终板着色，进而在背景光源的映射下，达到完整显示肛提肌内运动终板分布状态的目的，为明确肛提肌内运动终板的走行分布规律提供有效的研究图像。
本发明提供的显示及采集肛提肌内运动终板分布图像的方法具有以下积极效果：
1、为解剖、生理和临床医学等相关研究准确描述肛提肌内运动终板分布规律提供了理论依据。
2、明确肛提肌内的运动终板分布规律，对于提高肉毒杆菌毒素局部注射治疗由于肛提肌痉挛引起的慢性盆腔疼痛疾病的临床治疗效果，提供了重要的指导；对缓解由于肛提肌痉挛引起的慢性盆腔疼痛、提高患者生活质量具有重要的意义。
具体实施方式
以下通过一具体实施例进一步说明本发明。
本发明提供的显示及采集肛提肌内运动终板分布图像的方法一实施例如下：
1、收集死亡24小时内的尸体，完整解剖出肛提肌标本。
2、将标本固定在含有磷酸氢二钠及磷酸二氢钠的中性甲醛溶液中2小时，中性甲醛溶液为甲醛溶液中加入磷酸氢二钠及磷酸二氢钠将其PH值调整为7的溶液。
3、将固定后的标本依次放入pH值分别为7.4和6.0的以磷酸氢二钠及酸二氢钠为溶质的缓冲液中冲洗，所采用的缓冲液的浓度均为0.1mol/l，冲洗的时间均为15min。
4、将标本放入37℃、 pH值为6.0的stock溶液中孵育2小时，每100mlstock溶液由硫酸铜150mg、氨基乙酸190mg、氯化镁500mg、顺丁烯二酸900mg、4%氢氧化钠15ml、40%无水硫酸钠85ml及碘化乙酰硫代胆碱100mg混合组成。
5、将孵育后的标本依次放入浓度为40%的无水硫酸钠溶液和蒸馏水中冲洗；标本在无水硫酸钠溶液和蒸馏水中冲洗的时间均为15min。
6、将标本置于浓度为20%的铁氰化钾溶液中浸泡染色，标本在铁氰化钾溶液中浸泡染色的时间为15min。
7、将标本在蒸馏水中冲洗1小时后，用浓度为50%的甘油保存。
完成上述步骤后，即可进行以下标本的影像采集工作：
1、制作空心透光硅胶模型，模型的外表面为曲面，如球面或抛物面，模型为半球形或近似于半球形，在硅胶模型内部放置背景光源，背景光源采用白炽灯，将完成运动终板染色的肛提肌标本贴放在硅胶模型外表面，在背景光源照射下用照相机采集肛提肌内运动终板分布的立体形态影像，照相机采用单反数码照相机；
2、将标本放在解剖显微镜下进行显微解剖并采集图像。
完成以上工作后，即可了解肛提肌内运动终板的分布和走行的整体特点，绘制出肛提肌内的运动终板分布图，并应用于临床以及解剖和生理等基础研究中。
Claims (7)
1.显示及采集肛提肌内运动终板分布图像的方法，其特征在于包括以下步骤：采用胆碱酯酶整体染色方法对肛提肌标本内运动终板进行染色；制作空心的透光硅胶模型，在硅胶模型内部放置背景光源；将完成运动终板染色的肛提肌标本放在硅胶模型外表面，在背景光源照射下用照相机采集肛提肌内运动终板分布的立体形态影像；将标本放在解剖显微镜下进行显微解剖并采集图像。
2.根据权利要求1所述的显示及采集肛提肌内运动终板分布图像的方法，其特征在于对肛提肌标本内运动终板进行染色包括以下步骤：
（1）、完整解剖出肛提肌标本，将标本放置在含有磷酸氢二钠及磷酸二氢钠的中性甲醛溶液中固定2小时；
（2）、将固定后的标本依次放入pH值分别为7.4和6.0的以磷酸氢二钠及磷酸二氢钠为溶质的缓冲液中冲洗；
（3）、将冲洗后的标本放入37℃ 、pH值为6.0的stock溶液中孵育2小时；
（4）、将孵育后的标本依次放入浓度为40%的无水硫酸钠溶液和蒸馏水中冲洗；
（5）、将标本置于浓度为20%的铁氰化钾溶液中浸泡染色；
（6）、将染色后的标本放置于浓度为50%的甘油中保存。
3.根据权利要求2所述的显示及采集肛提肌内运动终板分布图像的方法，其特征在于：在所述步骤（1）中，中性甲醛溶液为甲醛溶液中加入磷酸氢二钠及磷酸二氢钠将其PH值调整为7的溶液。
4.根据权利要求2所述的显示肛提肌内运动终板分布的方法，其特征在于：在所述步骤（2）中，所采用的缓冲液的浓度均为0.1mol/l，冲洗的时间均为15min。
5.根据权利要求2所述的显示及采集肛提肌内运动终板分布图像的方法，其特征在于：在所述步骤（3）中，每100mlstock溶液由硫酸铜150mg、氨基乙酸190mg、氯化镁500mg、顺丁烯二酸900mg、4%氢氧化钠15ml、40%无水硫酸钠85ml及碘化乙酰硫代胆碱100mg混合组成。
6.根据权利要求2所述的显示及采集肛提肌内运动终板分布图像的方法，其特征在于：在所述步骤（4）中，标本在无水硫酸钠溶液和蒸馏水中冲洗的时间均为15min。
7.根据权利要求2所述的显示及采集肛提肌内运动终板分布图像的方法，其特征在于：在所述步骤（5）中，标本在铁氰化钾溶液中浸泡染色的时间为15min。
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