KR102080670B1 - 글루코오스 옥시다아제를 함유하는 당뇨 진단용 조성물 - Google Patents

글루코오스 옥시다아제를 함유하는 당뇨 진단용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 글루코오스 옥시다아제를 함유하는 당뇨 진단용 조성물에 관한 것으로서, 글루코오스 옥시다아제(glucose oxidase)가 글루코오스와 반응할 경우 그 부산물로 과산화수소가 발생하는 원리를 적용한 조성물이다. 본 발명을 통해 혈액을 채취하여 혈당을 측정하는 과정을 수행하지 않아도, 본 발명의 조성물을 수세식 양변기 또는 소변기의 물탱크에 투여함으로써 당뇨 증상이 있는 사람이 화장실을 이용하는 것만으로도 체내에 포함된 당의 정량적 측정을 용이하게 할 수 있다.

Description

글루코오스 옥시다아제를 함유하는 당뇨 진단용 조성물 {Composition comprising glucose oxidase for diagnosing diabetes mellitus}
본 발명은 글루코오스 옥시다아제를 함유하는 당뇨 진단용 조성물에 관한 것이다. 또한 본 발명은 상기 당뇨 진단용 조성물을 수세식 양변기의 물탱크에 투입하여 상기 조성물이 용해된 수세식 양변기 급수탱크 물이 양변기 내에 담기고, 양변기에 소변이 담길 때의 색상 변화를 통해 소변 내의 글루코스 함량을 측정하는 방법에 관한 것이다.
혈당의 수치는 일상생활에서 많이 변하지만 그 최고값과 최저값에 대한 수치는 상당한 의학적인 정보를 담고 있다. 가장 잘 알려진 바로 당뇨병(Diabetes) 진단에 소변의 당 수치(Glucose Level)는 진단에 주요한 검사결과로 널리 알려져 있다. 인구의 노령화가 빠르게 지속되고 있으며 건강수명 확장을 위한 요구가 증가함에 따라 당뇨병을 일상에서 확인하고자 하는 요구도 급속히 증가하고 있다.
혈당의 수치를 측정하는 가장 일반적인 방법은 손가락에 일회용의 바늘로 혈액을 채취하여 휴대용 혈당측정기를 이용하여 당 수치를 확인하는 방법이다. 정확하게 값을 확인할 수 있으며 정량화가 가능하기 때문에 당뇨 진단에 가장 많이 쓰이고 현재 만성 당뇨질환자의 경우 대부분 휴대하고 있을 정도로 대중화 되어 있다. 하지만 이 방식의 경우 손가락을 바늘로 찔러야 하는 고통과 상대적으로 고가의 소모품을 구입/휴대 하여야 하는 단점이 있다.
하기 화학 반응에서 설명하는 바와 같이 우리가 섭취한 탄수화물은 분해가 되어 글루코오스(glucose)로 분해되고 산화를 촉진시키는 효소인 글루코오스 옥시다아제(glucose oxidase)와 반응하여 글로코락틴으로 변형되며 그 부산물로 과산화수소(Peroxide, H2O2)를 발생하게 된다.
Figure 112019094018770-pat00001
혈액 검사 이전에 이러한 글루코오스 옥시다아제를 이용한 소변 스틱 검사의 방법으로 당뇨를 확인 하는 방법이 1차적인 당뇨의 판정에 많이 사용되고 있었다. 그러나 이러한 스틱 검사지를 활용할 경우, 소변의 당 수치의 경우 혈당이 상당히 높을 경우에만 관찰이 가능하기 때문에 초기 당뇨 스크린용으로 많이 사용되었고, 이러한 방식의 경우 스틱 검사기를 매번 휴대해야 하는 번거로움이 있다.
이에 본 발명자들은 수세식 양변기 또는 소변기의 물탱크 투입이 가능한 글루코오스 옥시다아제를 함유하는 당뇨 진단용 조성물을 제조하여 기존보다 용이하게 당뇨 진단이 가능함을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
대한민국 등록특허 제10-1031687호 (발명의 명칭 : 당뇨측정수단이 구비되는 소변기와 당뇨측정방법, 출원인 : 이상덕, 등록일 : 2011년04월20일) 대한민국 공개특허 제10-1993-0000950호 (발명의 명칭 : 당뇨병 진단을 겸한 변기 세정제 조성물, 출원인 : 주식회사 엘지, 공개일 : 1993년01월16일) 대한민국 공개특허 제10-2017-0030018호 (발명의 명칭 : 적양배추 시약을 이용한 건강진단장치 및 방법, 출원인 : 이정현, 공개일 : 2017년03월16일) 대한민국 공개특허 제10-2015-0101466호 (발명의 명칭 : 아스페르길루스 니게르로부터 유도된 신규한 글루코오스 옥시다아제, 출원인 : 에프. 호프만-라 로슈 아게, 공개일 : 2015년09월03일)
본 발명의 목적은 글루코오스 옥시다아제를 함유하는 당뇨 진단용 조성물을 제공하는 데에 있다. 또한 본 발명의 목적은 글루코오스 옥시다아제를 함유하는 당뇨 진단용 조성물에 관한 것이다. 또한 본 발명의 목적은 상기 당뇨 진단용 조성물을 수세식 양변기의 물탱크에 투입하여 상기 조성물이 용해된 수세식 양변기 급수탱크 물이 양변기 내에 담기고, 양변기에 소변이 담길 때의 색상 변화를 통해 소변 내의 글루코스 함량을 측정하는 방법을 제공하는 데에 관한 것이다.
본 발명은 글루코오스 옥시다아제, 페록시다아제, 석고, 지방산모노에탄올아미드, 친수성 폴리머, 가교제 및 방부제를 함유하는 당뇨 진단용 조성물에 관한 것이다. 상기 당뇨 진단용 조성물에는 물이 더 포함될 수 있다.
상기 조성물은 글루코오스 옥시다아제 0.1~0.5 중량%, 페록시다아제 0.1~0.5 중량%, 석고 5~10 중량%, 지방산모노에탄올아미드 2~5 중량%, 친수성 폴리머 20~40 중량%, 가교제 2~5 중량% 및 방부제 0.1~1 중량%가 포함된 것일 수 있다. 물이 포함될 경우 50 내지 70 중량%가 포함되는 것이 좋다.
본 발명에서 글루코오스 옥시다아제가 상기 조성물에 0.1 중량% 미만으로 첨가되면 글루코오스의 존재 유무 측정이 어려우며, 0.5 중량%를 초과할 경우에는 반응이 일어날 수 있으나 필요 이상으로 과량 첨가되어 비용면에서 적합하지 않다.
상기 페록시다아제는 글루코오스 옥시다아제가 글루코오스와 반응하여 H2O2가 발생할 때 발색현상을 일으키며 글루코오스의 함량이 높을수록 진한 갈색을 띄는 현상이 나타난다. 그러나 페록시다아제가 0.1 중량% 미만으로 첨가되면 글루코오스의 존재 유무 측정이 어려우며, 0.5 중량%를 초과할 경우에는 글루코오스의 농도가 낮아도 진한 갈색이 반응이 일어날 수 있어 바람직하지 않다.
상기 석고는 무수 석고나 수화물 상태의 석고가 모두 사용될 수 있으며, 수화물 상태의 석고는 H2O가 7 이내로 치환된 것이 좋다. 석고는 조성물이 균일하게 용해될 수 있는 역할을 한다.
석고와 함께 지방산모노에탄올아미드가 용해성을 균일하게 하기 위해 사용될 수 있다.
석고와 지방산모노에탄올아미드의 조성물 내 함량은 각각 5~10 중량%와 2~5 중량%인 것이 적절하며, 이 범위를 벗어나게 되면 목표 용해 기간인 40~45일 정도까지 조성물이 유지되지 못할 수 있다.
상기 친수성 폴리머는 히아루론산(hyaluronic acid), 알긴산(alginic acid), 펙틴(pectin), 카라기난(carrageenan), 콘드로이친 설페이트(chindroitin sulfate), 덱스트란 설페이트(dextran sulfate), 키토산(chitosan), 폴리라이신(polylysine), 콜라겐(collagen), 젤라틴(gelatin), 카르복시메틸키틴(carbixymethyl chitin), 피브린(fibrin), 덱스트란(dextran), 아가로즈(agarose), 및 풀루란(pullaran)로 이루어진 군에서 1 종 이상 선택되는 천연 폴리머일 수 있다. 친수성 폴리머가 조성물 내에 20 중량% 미만이면 글루코오스 옥시다아제와 페록시다아제의 방출이 너무 빨리 되어 조성물이 양변기 내의 물탱크 내에서 너무 빠른 기간 내에 용해될 수 있고, 40 중량%를 초과하면 글루코오스 옥시다아제와 페록시다아제의 방출이 적절하게 되지 않아 당뇨 측정이 어려울 수 있다.
상기 가교제는 알루미늄클로라이드(aluminium chloride), 알루미늄글리시네이트(aluminium glycinate), 알루미늄설페이트(aluminium sulphate), 알루미늄칼륨설포네이트(aluminium potassium sulfonate), 칼슘클로라이드(calcium chloride) 및 마그네슘클로라이드(magnesium chloride)로 이루어진 군에서 1종 이상 선택되는 것일 수 있다. 상기 가교제가 조성물 내에 2 중량% 미만이면 글루코오스 옥시다아제와 페록시다아제의 방출이 너무 빨리 되어 조성물이 양변기 내의 물탱크 내에서 너무 빠른 기간 내에 용해될 수 있다. 가교제가 5 중량%를 초과하면 글루코오스 옥시다아제와 페록시다아제의 방출이 적절하게 되지 않아 당뇨 측정이 어려울 수 있다.
또한, 상기 조성물에는 방부제가 포함될 수 있는데, 파라벤계 방부제, 알코올계 방부제, 이소졸리논계 방부제, 및 포르말린계 방부제로 이루어진 군에서 1종 이상 선택되는 것을 사용할 수 있다. 이 때, 방부제는 0.1~1 중량% 이내로 포함되기만 한다면 장기보관이 가능하고, 물탱크 내에서 조성물의 희석으로 인해 물때가 끼거나 물탱크 내의 수질오염이 되는 것을 방지할 수 있다.
상기 조성물은 수세식 양변기의 물탱크 투입용 제제로 제조될 수 있다.
또한, 본 발명의 조성물에는 수세식 양변기내의 물탱크에 적용될 수 있는 각종 부형제들이 첨가될 수 있다. 상기 부형제는 서방형 방출제일 수 있는데, 부형제의 첨가를 통해 본 발명의 조성물이 수세식 양변기의 물탱크 내에서 1~2개월 이내에 서방형으로 방출될 수 있다. 또한 상기 부형제로서 수세식 양변기의 물탱크 자재의 부식을 억제할 수 있는 것이 부식방지제가 첨가될 수 있으며, 이 외 상기 물탱크 내에 채워지는 물의 부패를 방지할 수 있는 각종 항균제가 첨가될 수도 있다. 상기 서방형 방출제, 부식방지제 또는 항균제 등의 부형제는 글루코오스 옥시다아제와 글루코오스의 반응을 통한 과산화수소 발생, 상기 과산화수소와 지시약과의 발색반응 등을 제한하지 않는 것을 사용하는 것이 바람직하다. 이들 각종 부형제로서 기존에 화장실용 세정제에 사용되는 계면활성제 등이 사용될 수 있고, 알코올 페놀계, 지방 알코올글루코스중합체, 솔비탄 지방산 유도체 등이 사용가능하다.
상기 물은 정제수를 사용하는 것이 바람직하며, 이에 특별히 한정되지는 않는다. 또한 본 발명의 조성물은 화장실 내의 소취효과 및 방향효과를 부여하기 위한 향료 등의 첨가제를 더욱 포함할 수 있다.
본 발명은 글루코오스 옥시다아제를 함유하는 당뇨 진단용 조성물에 관한 것으로서, 글루코오스 옥시다아제(glucose oxidase)가 글루코오스와 반응할 경우 그 부산물로 과산화수소가 발생하는 원리를 적용한 조성물이다. 본 발명을 통해 혈액을 채취하여 혈당을 측정하는 과정을 수행하지 않아도, 본 발명의 조성물을 수세식 양변기의 물탱크에 투여함으로써 당뇨 증상이 있는 사람이 화장실을 이용하는 것만으로도 체내에 포함된 당의 정량적 측정을 용이하게 할 수 있다. 대한민국 공개특허 제10-1993-0000950호, 대한민국 등록특허 제10-1031687호, 대한민국 공개특허 제10-2017-0030018호 등에도 지시약 또는 당뇨 측정이 가능한 장치나 조성물을 통해 소변 내 당 함량의 측정을 확인하려는 시도는 있었으나 본 발명에서와 같은 조성물을 통해 당뇨 진단을 하는 기술은 현재까지 확인된 바 없다.
도 1은 본 발명의 실험예 1에서 제조한 글루코오스 옥시다아제가 포함된 비누의 사진이다.
도 2의 첫번째 사진은 스틱검사지로 확인할 수 있는 과산화수소의 함량을 나타내는 지시색을 나타내며, 두번째부터 다섯번째의 사진은 글루코오스 옥시다아제가 포함된 비누와 각 농도별 포도당 용액을 반응시킨 후 발생되는 과산화수소와 반응된 스틱검사지의 상태를 나타낸다.
이하 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명은 여기서 설명되는 실시예에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 오히려, 여기서 소개되는 내용이 철저하고 완전해지도록, 당업자에게 본 발명의 사상을 충분히 전달하기 위해 제공하는 것이다.
<실험예 1. 글루코오스 옥시다아제의 당뇨 진단 가능성 확인>
글루코오스 옥시다아제 효소가 글루코오스와 반응할 경우 그 부산물로 과산화수소가 발생한다. 따라서 글루코오스가 존재하는 곳에 글루코오스 옥시다아제를 투입하여 반응 부산물인 H2O2의 농도를 측정함으로 당의 농도를 확인하는 방식에 기반하고 있다. 이에 소변으로 방출된 글루코오스의 농도 측정이 항상 가능한 글루코오스 옥시다아제 잔류 조건을 구비하는 데에 본 발명의 기술적 특징을 두었다.
한편, 글루코오스 옥시다아제의 효소반응이 잘 일어나기 위해서는 고체 또는 액체 상태에서 상기 효소를 고정 또는 방출시켜주는 물질이 효소의 활성을 저해하지 않는 조건으로 잘 배합이 되어야 한다. 따라서 이를 확인하기 위해 효소와 고정물질 간의 다양한 배합비 실험이 필요하며, 상기 고정물질을 특정화 하는 조건이 필요하다. 이에 다음과 같은 실험을 수행하였다.
- 시료 : 글루코오스 옥시다아제 (Sigma-Aldrich), 비누 베이스 및 글리세린(글루코오스 옥시다아제 고정용 물질로 사용)
이 실험에서는 글루코오스 옥시다아제가 액체상태로 방출되기 용이한 고체 조성물 상태를 구비하기 위해, 먼저 비누 형태의 조성물을 제조하기로 하였다. 글리세린과 글루코오스 옥시다아제 파우더를 혼합하여 비누를 제조할 경우 비누의 화학적인 매트릭스 구조에 글루코오스 옥시다아제가 안정적으로 위치하게 할 수 있게 된다. 이에 글리세린과 비누베이스에 열을 가하여 용액 상태가 되게 하고, 글루코오스 옥시다아제를 상기 용액에 바로 혼합하고 굳혀 글루코오스 옥시다아제가 포함된 비누를 제조하였다(도 1 참조).
도 1은 글루코오스 옥시다아제가 포함된 비누의 사진이며, 이는 10㎎의 글루코오스 옥시다아제가 총 5g의 비누에 포함된 것이다.
이렇게 제조된 비누에 각각 2~20%(w/v)의 글루코오스 용액을 1분 동안 반응시켜 과산화수소 발생여부를 스틱검사지로 확인하였다(과산화수소 검사용 스틱검사지 사용). 이에 대한 결과는 도 2에 나타내었는데, 도 2의 첫번째 사진은 스틱검사지로 확인할 수 있는 과산화수소의 함량을 나타내는 지시색을 나타내며, 두번째부터 다섯번째의 사진은 글루코오스 옥시다아제가 포함된 비누와 각 농도별 포도당 용액을 반응시킨 후 발생되는 과산화수소와 반응된 스틱검사지의 상태를 나타낸다.
따라서 이렇게 비누 형태로 제조된 글루코오스 옥시다아제가 포함된 제품이 양변기의 물탱크에 투여될 경우, 일정한 용해도가 유지된다면 글루코오스 옥시다아제가 존재하는 용액이 당뇨 증상이 있는 사람의 소변과 반응할 수 있는 환경이 조성될 수 있음을 확인하였다.
다만, 이와 같은 비누 베이스의 경우, 물탱크에 투여될 경우, 2~3일 이후에 물탱크 내에서 완전히 풀어져 1~2개월 동안 천천히 동량으로 방출되는 효과를 구현할 수 없다. 또한, 매번 스틱검사지를 이용하여 측정하기 보다는 직접 발생제를 조성물 내에 포함시켜야만 소변이 배출된 상태에서 직접 육안으로 이를 확인하는 것이 필요하기에 따라서, 다음으로는 양변기의 물탱크 내에서 글루코오스 옥시다아제가 같은 농도를 유지할 수 있도록 또한, 서방형으로 방출될 수 있는 상태이면서, 같은 농도의 글루코오스 농도에서는 같은 발색을 하는 특징이 있는 본 발명의 조성물을 제조하는 조건에 대한 실험을 수행하였다.
<제조예 1. 당뇨 측정용 조성물의 제조>
글루코오스 옥시다아제, 페록시다아제, 석고 분말(CaSO4·2H2O), 지방산모노에탄올아미드, 친수성 폴리머로서 카라기난, 가교제로서 알루미늄클로라이드, 방부제로서 메틸파라벤 및 물을 준비하여 60℃에서 4시간 동안 비이커 내에서 마그네틱 바를 이용하여 교반을 통해 용해시킨 후 지름 6cm, 높이 3cm의 비누제조용 몰드에 붓고 1일 동안 25℃에서 굳혀 당뇨 측정용 조성물을 제조하였다.
제조군 글루
코오스 옥시
다아제
(g)
페록시
다아제
(g)
석고
(g)
지방산
모노
에탄올
아미드
(g)
카라
기난
(g)
알루
미늄
클로
라이드
(g)
메틸
파라벤
(g)

(g)
총합
(g)
제조예 1-1 0.3 0.2 7 3 26 3 0.5 60 100
제조예 1-2 0.2 0.3 5 5 25 5 0.5 59 100
제조예 1-3 0.3 0.2 10 2 35 2 0.5 50 100
                   
제조예 1-4 0.1 0.8 10 2 35 2 0.1 50 100
제조예 1-5 0.05 0.45 2 7 50 0 0.5 40 100
제조예 1-6 0.2 0.3 15 0 10 2 0.5 72 100
제조예 1-7 0.3 0.2 0 0 50 5 1 43.5 100
<실험예 2. 용해안정성 확인>
제조예 1에서 제조된 당뇨 측정용 조성물을 각 7개 그룹당 각 3대씩의 양변기 물탱크에 넣어 최종 용해되는 기간을 확인하였다.
그 결과 제조예 1-1 내지 1-3은 약 45일간의 용해기간을 유지하는 것으로 파악되었고, 페록시다아제만 과량 들어갔을 뿐, 다른 성분은 본 발명의 당뇨 측정용 조성물 제조 조건에 포함되는 제조예 1-4까지는 이 30일간의 용해기간이 유지되었다.
그러나, 각 성분 중의 일부가 빠지거나 과량/소량 첨가된 제조예 1-5 내지 1-7의 경우 용해기간이 15일 이하인 것으로 확인되어 소모시간이 너무 짧은 것으로 확인된다.
실험군 용해기간
제조예 1-1 45일
제조예 1-2 49일
제조예 1-3 44일
 
제조예 1-4 43일
제조예 1-5 15일
제조예 1-6 10일
제조예 1-7 9일
또한, 글루코오스 농도를 실험예 1에서처럼 2~20%(w/v)로 조절하여 이 농도별로 갈색(페록시다아제 반응색)이 나타나는지를 기간을 정해두고 확인하였다.
그 결과 하기 표 3과 같이 제조예 1-1 내지 1-3에서만 40일까지도 글루코오스의 농도에 따른 발색 비교가 가능하였다. 표 3에서 발색 정도가 확인이 안 된 실험군은 그 이후 추가 실험을 하지 않아 '-'로 표기하였다. 한편, 제조예 1-4의 경우 페록시다아제 함량이 높아 오히려 농도별 반응이 확인되지 않는 경우인 것으로 파악되었다.
실험군 농도별 글루코오스 반응 구분 가능 유무
실험 3일째 실험 시작 7일째 실험 시작 40일째
제조예 1-1
제조예 1-2
제조예 1-3
 
제조예 1-4 × - -
제조예 1-5 ×
제조예 1-6 ×
제조예 1-7 × -
<실험예 3. 당뇨 환자의 사용 확인>
글루코오스 표준 시약보다 소변이 단백질이나 노폐물 등이 많아 직접적으로는 반응이 일어나지 않을 수 있기 때문에 일회용의 바늘로 혈액을 채취하여 휴대용 혈당측정기를 이용하여 당 수치를 확인하는 당뇨병 환자 2명씩을 한그룹으로 하여 각 그룹들의 양변기에 각 제조예 조성물을 사용해보도록 하였고, 반응 결과를 휴대용 혈당측정기와 유사한 결과를 갖는지를 나타내게 하였다.
실험군 소변 내 당뇨 측정 가능 여부
7일째 40일째
제조예 1-1
제조예 1-2
제조예 1-3
 
제조예 1-5 ×
제조예 1-6 ×
제조예 1-7 × ×
그 결과, 글루코오스 표준 시약을 통해 실험하였던 것을 통해 예상한 결과가 유사하게 나와 제조예 1-1 내지 제조예 1-3 조성물의 우수성이 입증되었다.
이상과 같이 본 발명의 조건으로 제조된 당뇨 측정용 조성물은 혈액의 채취 없이 당 수치를 육안으로 확인할 수 있다는 장점이 있으면서도 사용이 편리하기에, 기존의 혈당 측정장치 또는 조성물에 비해 본 발명의 조성물을 당뇨 측정에 유용하게 사용할 수 있다.
또한 본 발명을 통해 상기 당뇨 진단용 조성물을 수세식 양변기의 물탱크에 투입하여 상기 조성물이 용해된 수세식 양변기 급수탱크 물이 양변기 내에 담기고, 양변기에 소변이 담길 때의 색상 변화를 통해 미리 확인된 글루코오스 농도별 지시색 변화표를 통해 소변 내의 글루코스 함량을 측정하는 방법을 제공할 수 있다.

Claims (6)

  1. 글루코오스 옥시다아제 0.1~0.5 중량%, 페록시다아제 0.1~0.5 중량%, 석고로서 CaSO4·2H2O 5~10 중량%, 지방산모노에탄올아미드 2~5 중량%, 친수성 폴리머로서 카라기난 20~40 중량%, 가교제로서 알루미늄클로라이드 2~5 중량% 및 방부제로서 메틸파라벤 0.1~1 중량%를 함유하는 것을 특징으로 하는 당뇨 진단용 조성물.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. 제1항의 당뇨 진단용 조성물을 수세식 양변기 또는 소변기의 물탱크에 투입하여 상기 조성물이 용해된 수세식 양변기 급수탱크 물이 양변기 내에 담기고, 양변기에 소변이 담길 때의 색상 변화를 통해 소변 내의 글루코스 함량을 측정하는 방법.
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