JPS62175196A - ヘモグロビンのペルオキシダ−ゼ様活性測定のための組成物および方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔発明の背景〕 本発明はペルオキシダーゼ活性検出のための試薬組成物
および方法に関する。本発明は特に、糞便またはその他
の生物学的検体中に存在する潜血中のヘモグロビンのプ
ソイド−ペルオキシダーゼ活性検出に関する。

アメリカ合衆国では毎年１００，０００Å以上が結腸癌
および直ｍ癌に罹患している。これらの癌もその他の消
化器系臓器の癌と同様に早期に診断および治療をすれば
罹患した人々の８０〜９０％の治癒率を達成しうる。し
かしながら診断および治療がＨれると治癒率は２５％以
下に減少する。従って消化管におけるこの疾病を早期発
見することが治療の成否の鍵となる。

消化管の癌のほとんどは、初期の段階においてさえもあ
る程度出血し、糞便中に潜血すなわち潜伏面を生じる。

血中ヘモグロビンのペルオキシダーゼ様活性を検出する
ことによるとの潜血の有無の測定方法および試験法を開
発することが多くの研究者の目標となっている。

最も汎用されている潜血診断用指示薬の一つは、アメリ
カ熱帯地域を原産地とするグアヤクム（Ｇｕａｉａｃｕ
ｍ　）　　属のある種の木の材木からの抽出物からでき
たものである。グアヤク（ｇｕａｉａｃ　）と称するこ
の抽出物はヘモグロビンと酸化剤例えば過酸化水素の共
存下に本質的に無色から青色に変化する。

今日最も汎用されている試験法は二つの基本的カテゴリ
ーに分けることができる。すなわち、「直接接触」型と
「便器（ｂｏｗｌ）内」　型である。

「直接接触」型では糞便の少量サンプルを何がしかの形
の担体上に沈着させた発色試薬と接触させて試薬に色の
変化が生じるかどうかを観察する。「便器内Ｊ型では、
支持体または担体上の試薬（一種または複数種）を試験
すべき糞便含有トイレット水に入れそして色の変化を観
察する。最初の「直接接触」型の一例は、米国特許第５
，９３６．００６号明細書に開示されそしてＳｍ１ｔｈ
Ｋｌｉｎｅ　Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ社によシ販売され
ている「Ｈｅｍｏｃｃｕｌｔ　Ｊテストである。簡単に
いうと、このテストは、テストスライドの両側に開放自
在フラップを有する特殊テストスライドに収納されたグ
アヤク試薬含浸吸着性白紙を用いる。

上記テストスライドを使用するには、糞便サンプルを採
取し、テストスライドの片側のパネルを開き次いでその
パネルｋ　ＨＵしることによシサンプルをグアヤク含浸
紙に塗布しなけれはならない。次にテストスライドの反
対側のパネルを−〇　− 開き、そして現像剤（こ２ｔは過酸化水素と変性アルコ
ールの安定化溶液である）をグアヤク含浸紙に塗布する
。グアヤク含浸紙の反対側に塗布された糞便中に潜血が
存在している場合には、グアヤク反応生成物が白色紙の
地色に青色物質として現われ、糞便中に血液が存在する
ことを示す。

このテストは医師が診療室で用いた夛、診断検査所が用
いたシするのには向いているが、糞便を取扱うととに対
する嫌気と結果を判断する上での熟練の欠如から一般人
による使用には容易に適合化しうるタイプのテストでは
ない。前述したように、このテストは、糞便標本の採取
を必要とする。通常、標本はへらまたは木製舌圧子の端
部にサンプルを採取することによシ得られ、次いでそれ
を用いてテストスライド中の紙の上に標本を塗布する。

サンプルが得られチー１〇− スト手順が完了したら、テストスライドとへらまたは圧
子はいずれも処分しなければならない。

使用済みの材料の処分は一般人にとって仮に心理的な嫌
気反応はないとしても物理的問題を呈すことがあシ、事
実呈ｉ〜ている。かくて、不潔であることや使用済みの
テストスライドおよびへらまだは圧子に付髄する処分上
の問題があるために一般人はとのテスＭｒ用いそうにな
い。その上、−殺人は、テスト結果を分析し、そこから
正確な結論を出すのに必要な技ｆＡｋ必ずしも持ち合わ
せていない。

別法として、−殺人が自宅でテストヲ開始し、次に現像
剤の添加およびテストの分析のために医師または検査所
にテストスライドに送付することもできる。しかしこの
手順をとる場合、テスト完了までの時間経過が著しいと
き（ｊ１テストスライドおよび標本を冷蔵する必要があ
る。

標本を医師または適宜の検査所に提出できるようになる
まで、通常は利用可能な唯一の冷蔵手段である家庭の冷
蔵庫に糞標本を貯蔵することを一般人が望まないことは
確かである。従って、一般公衆がこの方法に従ったり応
じたシすることはあシそうにない。

米国特許第４，４７３，０７９号明細書には、支持体に
より担持されたグアヤクゴムまたはベンジジンなどの酸
化還元指示薬、延展性（ｓｐｒｅａｃｉａｂｌｅ）媒質
上の固形状酸素放出性化合物例えば過ポウ酸す）　ＩＪ
ウム、および試験すべき生物学的物質をサンプリングす
るためのアプリケータを含む、糞便中の潜血用直接接触
テストが記載されている。

「便器内」潜血テストは、米国特許第２β３８，５７７
号明細書に開示されている。ここで採用した基本的テス
ト試薬は０−）ルイジンとベンジジンである。これらの
試薬は、血液および他の反応体が存在する“と、肉視で
きる色素を生成する。

このテストは、−見、実行可能な家庭での潜血テストヲ
見出すという問題を解決したかのようであるが、二つの
理由から成功していない。第一に、前掲の試薬自体が発
癌性のあることが知られておシ従って一般公衆用に配布
するのは不適当である。更に重要なことには、該試薬は
金属のような水道水中の不純物のために潜血の存在を間
違って示す割合が比較的高い。

米国特許第４，３８５，１１４号明細書には、サンプル
ｆ３，５′，５，５’−テトラアルキルベンジジンと過
酸化水素、または過酸化水素と反応する物質と接触させ
、そしてその反応による発色を評価することによる過酸
化活性物質の検出および測定方法が記載されている。こ
の方法は、特に、尿中の血液およびグルコースの検出、
および血清中のコレステロールおよびコレステロールエ
ステルの検出について適用される。詳細には、この方法
は、ｐ紙をペルオキシド成分含有溶液およびベンジジン
化合物含有溶液で順次含浸することによシ適用される。

乾燥後、テスト紙を尿試料に浸し、そして色の変化、例
えば青緑色を観察する。

米国特許第４，１７５，９２３号明細書にはボウル内潜
血テストが記載されておシ、この場合グアヤクゴム含浸
の紙シートにユーザーが過酸化水素溶液を塗布しなけれ
ばならない。次にそのシートラトイレットの便器に入れ
色の変化を観察する。米国特許第４，５４１，９８７号
明細書では、グアヤコールスルホン酸およびモノペルサ
ルフェートの顆粒状化学組成物がポケット状で吸着紙と
非吸着紙の間に挾持されている。この製品の使用にあた
っては、そのアセンブリをトイレット＝１４− ボウル水の表面に吸着紙を下向きにして置き、そして生
じる色の変化を観察する。

一方、本発明の提供する水性媒質中、すなわち「便器内
」の糞便中の潜血を検出するための乾燥顆粒状の安定な
試薬の場合には、すべての反応成分が混合されておシ、
そしてその試薬が水で儒れるまでは反応は全く起こらな
い。家庭への供給水にみられる重金属に対する封鎖剤を
包含してもよい。

〔発明の概要〕

簡単に言えば、本発明は、３．３Ｓ　５．　ｓ’−テト
ラメチルベンジジンと、水と接触するとペルオキシドを
放出するアルカリ金橋過ホウ酸塩（例えば過ホウ酸ナト
リウム）を包含する、水性媒質中の翼便またはその他の
生物学的基質中の潜血を検出するための乾燥顆粒状で安
定性の高い試薬よりなる。強有機カルボン酸、および重
金属封鎖剤を包含してもよい。テトラメチルベンジジン
の二硫酸塩型は遊離アミンよりも安定性が高いのでこれ
を用いるのが好ましい。

本発明は、従来技術と同様に、ヘモグロビンおよび生物
学的流体中に存在するプソイド−ペルオキシダーゼ活性
の検出に基づいて着想したものである。このペルオキシ
ダーゼ様活性（触媒活性物質としても言及される）は、
血液の場合、ヘモグロビンに確認されている。これらの
物質は、すべてが同じ補欠分子族、鉄プロトポルフィリ
ンまたはヘムを有する複合タンパク質、ヘムタンパク質
に一般的に分類される。この補欠分子族は、酸素源から
受容体への酸素移動（該受容体はそれによって酸化状態
となる）を触媒する能力を有する。前記受容体は酸化状
態となるまでは無色の前駆体であシ、酸化型は発色によ
ジペルオキシダーゼ活性の存在を示す。

試薬組成物の長期安定性を確保するために３．３′，５
，５’−テトラメチルベンジジンを、組成物の他の成分
と混合する前に、水溶性顆粒物質例えばスクロースまた
は硫酸ナトリウムに酸化防止剤の存在下にポリビニール
ピロリドンなどの水溶性ポリマー材料でＭ覆するのが好
ましい。

これによシ、血液含有検体と接触しないうちに３．３′
，５，５’−テトラメチルベンジジンが過ホウ酸塩と反
応してしまうことが防止される。組成物の安定性は、少
くとも部分的に水溶性であるポリマー・コーティングで
過ホウ酸塩をフィルム被憶することによって更に高める
ことができる。

エチルセルロースとヒドロキシプロピルメチルセルロー
スの混合物が優れたコーティングとなることを見出した
。水溶性でｇ＆湿性の充填剤例、ｔＪＪマンニトール、
ソルビトールおよび硫酸ナトリウムなどを前記組成物と
混合使用してもよい。

本組成物は顆粒状に製造され、そして生物分解性があシ
浮くことのできるマトリックス例えばティシュ−・ペー
パーの袋内、有孔ゼラチンカプセル内、または紙で裏打
ちされている透明で成形された（ｃａｓｔ）　　生物分
解性材料例えばプルランの空所内に包装することができ
る。プルランはＨａｙａｓｈｉ　ｂａｒ　ａ　Ｂｉ　Ｏ
Ｃｈｅｍｌｃ　ａ　ｌ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　５
Ｉｎｃ、社から入手できる市販のトリグルコポリサッカ
ライドである。便器内へ脱糞後、包装された試薬組成物
を中に入れ便器内水面に浮かせる。

便器内水中に少しでも血液が存在すれば試薬組成物が青
色を呈することによって検出される。

〔好ましい態様の詳細な説明〕

本発明においては、潜血テス）ｋ行うのに必要なすべて
の成分が乾燥混合物として試薬組成物に含まれているた
め、従来技術のようにテスト実施前に試薬を添加したシ
混合したシする必要がない。試薬が便器水に儒れるまで
反応は全く起らない。後述するような試薬含有マトリッ
クスは、はんの少量の水がテストの実行に必要な時間内
、すなわち数秒〜２分間内に試薬に浸入し、それによっ
て高濃度の試薬、従って高感度潜血テストが得られるよ
うに設計される。

本発明のテスト試薬の色素原は、血液のある種の成分、
特にヘモグロビンのベルオギシダーゼ活性の存在下に過
酸化水素によシ酸化されて青色色素になシうる非発癌性
無色色素である３、３′，５，５’−テトラメチルベン
ジジンである。アルカリ金属過ホウ酸塩は、水に添加さ
れると過酸化水素を放出する熱安定性化合物である過ホ
ウ酵ナトリウム一水和物であるのが好ましい。

すなわち、３　、３′，　５　、５’−テトラメチルベ
ンジジンと過ホウ酸ナトリウム一水和物を水および血中
の過酸化活性ヘモグロビンの存在下に組み合わせた場合
、そのテトラメチルベンジジンは酸化されてベンジジン
の青色テトラメチル誘導体となる。安定な、乾燥した水
溶性強酸を試薬組成物に添加して湿潤した場合の試薬の
田が所望の範囲、すなわち約ｐＨ５〜約ｐＨ７となるよ
うに調整する。かかる市としては、無水クエン酸が好ま
しい。偽陽性反応を与える可能性のある家庭給水中に存
在する微量金属による金属触媒作用を抑えるために、封
鎖剤例えばエチレンジアミン四酢酔またはそのす）　Ｉ
Ｊウム塩が試薬に添加される。

遊離アミンとしての３．３′，５．５’−テトラメチル
ベンジジンを本発明に用いてもよいが、よシ安定な誘導
体は３．３′，　５．５’−テトラメチルベンジジン二
硫酸塩である。テトラメチルベンジジンの二塩酸塩は、
ペルオキシドの存在下に該塩酸塩が次亜塩素酸塩に変わ
ってしまいそれが血液が存在しなくてもテトラメチルベ
ンジジンを青色色素に酸化してしまうので使用できない
。例えば水分の存在下におけるテトラメチルベンジジン
と過ホウ酸塩との反応を防止するために、本発明の試薬
を使用時まで乾燥状態に製造し維持する。しかしながら
、テトラメチルベンジジンまたはペルオキシド源まだは
両者を処理してそれらをテストに用いるまで実質的に相
互に非反応性とすることによって試薬の安定性は更に高
められる。テトラメチルベンジジンの更なる処理として
、テトラメチルベンジジンと酸化防止剤を含有する組成
物を不活性な水溶性顆粒状物質例えばシュークロース上
で水溶性ポリマーを用いて被覆する。かかる組成物は、
酸化防止剤（例えばブチル化ヒドロキシトルエン（’Ｂ
ＨＴ）など）、テトラメチルベンジジンおよびボリビ２
　ｌ− ニールピロリドンをクロロホルムに溶解することによシ
調製される。この溶液を顆粒化したシュークロースに添
加しそして常時攪拌しながら加熱することによジクロロ
ホルムを除去する。

過ホウ酸塩の更なる処理として、それを、他の成分に添
加する前に、エチルセルロースとヒドロキシプロピルメ
チルセルロースの混合物を用いて流動床でフィルムコー
ティングしてもよい（大体、コーティング１０％に対し
過ホウ酸ナトリウム一水和物９０％の割合）。そのコー
ティングは水溶性であシ、潜血試験のために過ホウ酸塩
が水と反応することを可能にする。

水分の迅速な吸収を助け、またそれによって迅速なテス
ト反応を促進するだめに、水溶性で好ましくは吸湿性充
填剤例えばマンニトール、ソルビトール、硫酸ナトリウ
ムなどを組成物に添加してもよい。

試薬は、そのすべての成分を、例えばブレンド装置で混
合することにより調製される。しかしながら、好ましく
は、テトラメチルベンジジン、酸、封鎖剤および充填剤
（存在する場合）をまず混合しそこに過ホウ酸塩を添加
する。

一般に、３．３′，　５．５’−テトラメチルベンジジ
ンまたはその二硫酸塩の量は、組成物の約０．５〜５％
であるのがよい。過ホウ酸ナトリウム一水和物は全試薬
の約５％〜６０％であるのがよい。

酸濃度は、全試薬の１〜５重債％の範囲で変化可能であ
シ、またＭ鎮剤は５〜６０重量％の範囲で変化可能であ
る。残りの部分は試薬の安定性を高めるのに用いられる
充填剤およびその他の材料で占める。

前述の試薬は糞便中の潜血の匝器内測定に特に有用では
あるが、また水性媒質中のいかなる生物学的標本の過酸
化活性の測定にも用いることができる。

陽性および陰性コントロールを含めることもできる。陽
性コントロールは基本的成分と乾燥全面、ヘモグロビン
またはヘマチンを含有し、ユーザーにその試薬の化学的
性質が作用していること全確信させる。陰性コントロー
ルは前記ペルオキシド源を除いたもので、試薬に陽性テ
ストヲ生起させる化学物質が便器水中に存在しないこと
を保証する。

顆粒状試薬を容れるマ）　ＩＪラックス、三つの基本的
形ｄ　（ｃｏｎｆｉ、ｇｕ、ｒａｔｉｏｎ）のいずれで
あってもよい。顆粒状試薬は、積層された生物分解性物
質例えば紙のポケット内にか、水の流入全可能にするた
めの孔部を有する透明な生物分解性ゼラチンカプセル内
にか、または吸着紙で裏打ちされた生物分解性ポリマー
例えばプルランなどのポリサッカライドから成形した透
明ウェル内に収納できる。試薬含有マトリックスの大き
さは、経済性および便器内水面にみあった任意の大きさ
であってよい。前記の紙および透明な成形ポリサッカ２
イドマトリツクスは共にテスト用およびコントロール用
試薬顆粒全容れる多数のセクションを有してもよい。あ
るいはまたコントロール試薬は紙およびポリサッカライ
ドマ）　ＩＪソックス別個に調製してもよい。

試薬含有マ）　ＩＪソックス潜血含有の疑いのある糞便
を容れた便器内に置かれる。試薬ヵＳ背色に変化すると
共に陽性コントロールが同じ色変化を呈し、陰性コント
ロールは色の変化がないとき、血液の存在が示される。

この色変化には通常はんの数分間を要するだけである。

本発明をよシ十分説明するために以下実施例を挙げる。

すべての百分率は特に断わらなければ全Ｍ量を基準とし
ている。

２５一 実施例　１ この実施例では、以下の成分を用いて試薬組成物を調製
した。

マンニトール（米国局方）　　　　　　　６９％無水ク
エン酸　　　　　　　　　１４％ＥＤＴＡ四ナトリウム
塩・２Ｈ２０２％テトラメチルベンジジン　　　　　　
　　　１％過ホウ酸ナトリウム一水和物　　　　　　　
１４％マンニトール、クエン酸、ＥＤＴＡおよびテトラ
メチルベンジジンｆ　Ｈｏｂａｒｔ　Ｍｉｘｅｒ中１０
分間速度１でブレンドし、次いで過ホウ酸ナトリウムを
添加し、そして更に２分間ブレンドすることによシ組代
物ｆｒ、調製した。

実施例　２ この実施例は、遊離アミンに代えてテトラメチルベンジ
ジン二硫酸塩を用いたよシ安定な試薬組成物の調製全例
示するものである。この実施例では、過ホウ酸ナトリウ
ム一水和物を他の成分に添加する前に流動床でエチルセ
ルロース（４０ｆｆｉｆｆｉ％）トヒドロキシプロピル
メチルセルロース（６Ｏｆｆｉ　量％）の混合物でフィ
ルムコーティングする（大体、コーティング１０％に対
し過ホウ酸ナトリウム一水和物９０％の割合）ことによ
シ試薬の安定性は更に尚められた。その組成を以下に記
載する。

マンニトール（米国局方）　　　　　　　６７％無水ク
エン酸　　　　　　　　　１４％ＥＤＴＡ四ナトリウム
塩・２Ｈ２０２％テトラメチルベンジジン・２Ｈ２Ｓ○
４　　　１％フィルムコーティングされた過ホウ　　　
　１６％酸ナトリウム一水和物 実施例　に の実施例では、テトラメチルペンジジン二硫酸塩と酸化
防止剤とを不活性水溶性物質としてのスクロースに水溶
性ポリマーで被覆することによシ、よ多安定にした。か
かる組成物（スクロース−テトラメチルベンジジン顆粒
）は、１ｇのブチル化ヒドロキシトルエン、１ｇのテト
ラメチルベンジジンおよび４ｇのポリビニールピロリド
ンを４０−のクロロホルムに溶解することによシ調製し
た。その溶液を９４Ｆの顆粒状スクロースに添加し、そ
して常時攪拌しながら加熱してクロロホルムを除去した
。得られた顆粒は自由流動性で１％テトラメチルベンジ
ジンを含有した。この顆粒を用いて下記のテスト組成物
を調製した。この組成物にはマンニトールを用いなかっ
た。

成　　　分　　　　　　　　　　　　重量％ジン果ｎ粒 無水クエン酸　　　　　　　　　２１％フィルムコーテ
ィングされた過ホ　　　　２６％つ酔ナトリウム一水和
物 ＥＤＴＡ四ナトリウム堰・２Ｈ２０ｉ％実施例　４ この実施例では、陽性コントロール組成物を以下に示さ
れるようなテスト組成物にヘモグロビンを添加すること
によシ調製した。

マンニトール（米国局方）　　　　　　　６７％無水ク
エン酸　　　　　　　　　１３９８％ＥＤＴＡ四ナトリ
ウム塩・２Ｈ２０２％テトラメチルベンジジン・２Ｈ２
ＳＯ４１％フィルムコーティングされた過ホウ酸　　１
６％ナトリウム−水和物 ヘモグロビン　　　　　　　　　　　　　　　０．０２
％２９一 実施例　５ この実施例では、下記に示されるような充填剤、ＥＤＴ
Ａ四ナトサナトリウム塩ン酸ナトリウムおよびテトラメ
チルベンジジン二硫酸塩をブレンドすることによシ陰性
コントロール組成物を調製した。

マンニトール（米国局方）　　　　　　　６１％無水ク
エン酸　　　　　　　　１１％ クエン酸ナトリウム（米国局方）　　　　２５％ＥＤＴ
Ａ四ナトリウム塩・２Ｈ２０２％テトラメチルベンジジ
ン・２Ｈ２ＳＯ４１％実施例　６ 実施例１〜５に記載の乾燥顆粒状組成物の各々を次のテ
ストマトリクスに取シ込んだ。すなわち、Ａ：紙マトリ
クス、Ｂ：ゼラチンカプセル、そしてＣ：透明成形ポリ
サツカライドフイルム（マトリクス１個あたＢａ、’＋
ｇ〜［：１．５！９）。

Ａ１紙マトリクス： 各デバイスを作るために、２枚の吸慴紙を寸法にあわせ
て切断した。１枚に、顆粒状組成物を配置すべき区域を
マスクして、感圧噴霧接着剤を噴霧した。マスクを除去
し、そして０．１．９〜０．５Ｉの化学組成物を沈着さ
せた。次に２枚目の紙を接触接着剤を含む１枚目の上に
上層しそして適所に圧着した。このようにして各組成物
を、紙片間の固設され十分規定された区域に積層した。

同様に、陽性および陰性コントロールを含む紙を調製し
た。コントロールを含む得られたデバイスを糞便を含む
便器水面に置き、そして潜血の存在による色の変化ヲ１
慢性および陰性コントロールを注視しながら観察しだ。

Ｂ、ゼラチンカプセル； 庸　０．００、または０００の透明硬質ゼラチン製２ピ
ース式カプセルを用いる。火炎中で加熱した應２７皮下
注射針を用いて穿刺することによシ各カプセルにいくつ
かの小穴をランダムに設ける。それらカプセルを組成物
の漏えいを防止するだめにポリソルベートの薄膜で被覆
した。

カプセルを開き、各組成物でほぼ半分充填しそして閉じ
る。同様にして陽性および陰性コントロールをカプセル
内に取シ込んだ。それらカプセルを用いて糞便含有便器
水に入れそして生じる色の変化を観察すると共に陽性お
よび陰性コントロールを観察する。カプセルが透明なた
め、いかなる色の変化もユーザーは明瞭に見分けること
ができる。

Ｃ１透明成形ポリサッカライドフィルム：ポリサッカラ
イド（プルラン）の水性溶液を適当な型に注ぎそして４
０℃のオーブン内に入れる。得られる透明な成形トレイ
を型から取シ出し、そして０．１Ｆ〜０．５ｇの各組成
物をウェルに入れる。１枚の吸着紙片に接触接着剤を噴
霧しそしてトレイの上にしつかシと圧着する。

同様にして陽性および陰性コントロールをウェルに取シ
込む。このようにして組成物をウェル内に隔離収納し、
そして紙価を下にしてそのアセンブリを便器水内に入れ
ることによシその水の中の潜血の検出に用いることがで
きる。ポリサッカライドフィルムが透明なためにユーザ
ーは生じる色の変化を識別する能力が増す。

以上本発明を説明したが、本発明に多様な変形を加えて
もよいことはもちろんである。このような変形は、本発
明の精神および範囲から逸脱したものではなく、すべて
特許請求の範囲内に含まれるものである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）（ａ）３，３′，５，５′−テトラメチルベンジジ
   ンと（ｂ）アルカリ金属過ホウ酸塩 との実質的に乾燥した混合物よりなる水性媒質中のペル
   オキシダーゼ様活性の測定試薬。 ２）アルカリ金属過ホウ酸塩が過ホウ酸ナトリウム一水
   和物である特許請求の範囲第１項記載の試薬。 ３）３，３′，５，５′−テトラメチルベンジジンが３
   ，３′，５，５′−テトラメチルベンジジン二硫酸塩で
   ある特許請求の範囲第１項記載の試薬。 ４）更に水溶性強有機カルボン酸を包含する特許請求の
   範囲第１項記載の試薬。 ５）更に重金属封鎖剤を包含する特許請求の範囲第１項
   記載の試薬。 ６）更に水溶性充填剤を包含する特許請求の範囲第１項
   記載の試薬。 ７）（ａ）不活性水溶性物質に水溶性ポリマーで被覆さ
   れた３，３′，５，５′−テトラメチルベンジジンと （ｂ）アルカリ金属過ホウ酸塩 よりなる水性媒質中のペルオキシダーゼ様活性の測定試
   薬。 ８）酸化防止剤ブチル化ヒドロキシトルエンが配合され
   ている特許請求の範囲第７項記載の試薬。 ９）水溶性ポリマーがポリビニールピロリドンである特
   許請求の範囲第７項記載の試薬。 １０）水溶性ポリマーがスクロースである特許請求の範
   囲第７項記載の試薬。 １１）更にクエン酸を包含する特許請求の範囲第７項記
   載の試薬。 １２）更にエチレンジアミン四酢酸またはその塩を包含
   する特許請求の範囲第７項記載の試薬。 １３）更に水溶性充填剤を包含する特許請求の範囲第７
   項記載の試薬。 １４）水溶性充填剤がマンニトールである特許請求の範
   囲第１３項記載の試薬。 １５）（ａ）３，３′，５，５′−テトラメチルベンジ
   ジンと（ｂ）水溶性ポリマー物質でフィルムコーティン
   グされた過ホウ酸ナトリウム よりなる水性媒質中のペルオキシダーゼ様活性の測定試
   薬。 １６）ポリマー材料がエチルセルロースとヒドロキシプ
   ロピルメチルセルロースの混合物である特許請求の範囲
   第１５項記載の試薬。 １７）更にクエン酸を包含する特許請求の範囲第１５項
   記載の試薬。 １８）更にエチレンジアミン四酢酸またはその塩を包含
   する特許請求の範囲第１５項記載の試薬。 １９）更に水溶性充填剤を包含する特許請求の範囲第１
   ５項記載の試薬。 ２０）充填剤がマンニトールである特許請求の範囲第１
   ９項記載の試薬。 ２１）シート間に特許請求の範囲第１項記載の試薬を含
   有する吸着紙シート積層体。 ２２）シート間に特許請求の範囲第７項記載の試薬を含
   有する吸着紙シート積層体。 ２３）シート間に特許請求の範囲第１５項記載の試薬を
   含有する吸着紙シート積層体。 ２４）特許請求の範囲第１項記載の試薬を含有する穴を
   有するゼラチンカプセル。 ２５）特許請求の範囲第７項記載の試薬を含有する穴を
   有するゼラチンカプセル。 ２６）特許請求の範囲第１５項記載の試薬を含有する穴
   を有するゼラチンカプセル。 ２７）特許請求の範囲第１項記載の試薬を含有する複数
   のウェルを有する成形されたポリサッカライドフィルム
   。 ２８）特許請求の範囲第７項記載の試薬を含有する複数
   のウェルを有する成形されたポリサッカライドフィルム
   。 ２９）特許請求の範囲第１５項記載の試薬を含有する複
   数のウェルを有する成形されたポリサッカライドフィル
   ム。 ３０）（ａ）水性媒質中のペルオキシダーゼ活性の有無
   を分析すべき検体を採集し、 （ｂ）その水性媒質を （ｉ）３，３′，５，５′−テトラメチルベンジジンと
   （ｉｉ）アルカリ金属過ホウ酸塩 よりなる試薬と接触させ、そして （ｃ）前記試薬の色の変化の有無を観察することよりな
   る水性媒質中のペルオキシダーゼ様活性の検出方法。 ３１）検出すべきペルオキシダーゼ活性が検体中のヘモ
   グロビンの存在を意味する特許請求の範囲第３０項記載
   の方法。 ３２）アルカリ金属過ホウ酸塩が過ホウ酸ナトリウム一
   水和物である特許請求の範囲第３０項記載の方法。 ３３）３，３′，５，５′−テトラメチルベンジジンが
   ３，３′，５，５′−テトラメチルベンジジン二硫酸塩
   である特許請求の範囲第３０項記載の方法。 ３４）試薬が更に水溶性強有機カルボン酸を包含する特
   許請求の範囲第３０項記載の方法。 ３５）試薬が更に重金属封鎖剤を包含する特許請求の範
   囲第３０項記載の方法。 ３６）試薬が更に水溶性充填剤を包含する特許請求の範
   囲第３０項記載の方法。