CN109957603A - 一种乳酸检测试剂盒 - Google Patents

一种乳酸检测试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN109957603A
CN109957603A CN201711437404.7A CN201711437404A CN109957603A CN 109957603 A CN109957603 A CN 109957603A CN 201711437404 A CN201711437404 A CN 201711437404A CN 109957603 A CN109957603 A CN 109957603A
Authority
CN
China
Prior art keywords
reagent
kit
acid
lactate
detection kit
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201711437404.7A
Other languages
English (en)
Inventor
董雯
罗维晓
黄海金
李贵雨
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ji'nan Qian Si Biotechnology Co Ltd
Original Assignee
Ji'nan Qian Si Biotechnology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ji'nan Qian Si Biotechnology Co Ltd filed Critical Ji'nan Qian Si Biotechnology Co Ltd
Priority to CN201711437404.7A priority Critical patent/CN109957603A/zh
Publication of CN109957603A publication Critical patent/CN109957603A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
    • C12Q1/28—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
    • C12Q1/32—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving dehydrogenase

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种乳酸检测试剂盒，属于临床体外检测试剂技术领域。本发明试剂盒包括试剂R1、试剂R2、校准品。通过在试剂R2中加入由4‑FPBA、葡甘露聚糖、NaCl、丙二醇、曲拉通100、BSA组成的复合稳定剂，有效的提高了试剂盒的稳定性，其线性范围也较好，试剂的准确度高，有利于在市场中进一步的推广使用。

Description

一种乳酸检测试剂盒
技术领域
本发明涉及临床体外检测试剂技术领域，特别涉及一种乳酸检测试剂盒。
背景技术
乳酸(IUPAC学名：2-羟基丙酸)是一种化合物，它在多种生物化学过程中起作用。它是一种羧酸，分子式是C3H6O3。它是一个含有羟基的羧酸，因此是一个α-羟酸(AHA)。在水溶液中它的羧基释放出一个质子，而产生乳酸根离子CH3CHOHCOO-。在发酵过程中乳酸脱氢酶将丙酮酸转换为左旋乳酸。在一般的新陈代谢和运动中乳酸不断被产生，但是其浓度一般不会上升。
在发酵过程中乳酸脱氢酶将丙酮酸转换为左旋乳酸。在一般的新陈代谢和运动中乳酸不断被产生，但是其浓度一般不会上升。只有在乳酸产生过程加快，乳酸无法被及时运走时其浓度才会提高。乳酸运输速度由一系列因素影响，其中包括单羧基转运体、乳酸脱氢酶的浓度和异构体形式、组织的氧化能力。一般来说血液中的乳酸浓度在不运动时为1-2mmol/L，在强烈运动时可以上升到20mmol/L。
一般来说当组织的能量无法通过有氧呼吸得以满足，组织无法获得足够的氧或者无法足够快地处理氧的情况下乳酸的浓度会上升。在这种情况下丙酮酸脱氢酶无法及时将丙酮酸转换为乙酰辅酶A，丙酮酸开始堆积。在这种情况下假如乳酸脱氢酶不将丙酮酸还原为乳酸的话糖酵解过程和三磷酸腺苷的合成会受到抑制。产生乳酸的过程为：丙酮酸+NADH+H+→乳酸+NAD++2H
这个过程的意义在于重建糖酵解所需要的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)来保持三磷酸腺苷的合成。在氧气充足的肌肉细胞中乳酸可以被氧化为丙酮酸，然后直接用来作为三羧酸循环的燃料。它也可以在肝脏内糖异生的过程中通过科里布斯循环转化为葡萄糖。乳杆菌属的细菌也可以进行乳酸发酵。这些细菌可以生活在口内，它们产生的乳酸是导致龋齿的原因。在医学里乳酸常被用在乳酸林格氏液中。这是一种与人的血液等张的氯化钠、氯化钾和乳酸在蒸馏水中的溶液。在损伤、手术或烧伤失血后常使用乳酸林格氏液来补充失血。
人血清中乳酸参考范围为12-16mg/dL。在肌肉细胞中，乳酸浓度升高表明代谢性酸中毒可能是乳酸中毒。与剧烈活动有关的组织缺氧会提高血清乳酸浓度。由呼吸衰竭或低灌注状态引起的组织缺氧，则可见到危及生命的乳酸中毒。严重的脱水也会导致肌肉细胞氧传送的减少。乳酸中毒可能经常伴随糖尿病酮中毒。组织氧耗量的加大，如在败血症中所见，也会导致乳酸中毒。乳酸血症的严重程度可以帮助揭示潜在疾病的严重性。
乳酸氧化酶氧化乳酸生成丙酮酸和过氧化氢，过氧化氢与4-氨基安替比林、对氯苯酚反应生成红色醌式染料，此染料在546nm有最大吸收峰，吸收强度与标本中乳酸含量成正比。该方法是一种无需预处理样本，技术和设备要求不高，而精密度和特异性更高的分析方法。由于该方法不需要昂贵的设备，可以实现自动化，且可测定大量标本，因此受到临床广泛推广。但是普通的乳酸检测试剂中由于存在酶，会使该试剂的稳定性受到影响，不利于试剂的长期保存，从而造成准确度差及浪费的不良后果。
发明内容
针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种乳酸检测试剂盒。该试剂盒与常规的试剂盒相比，稳定性好，准确度高，线性范围好，分析灵敏度高，有利于试剂在临床上的推广应用。
本发明是通过以下措施实现的：
一种乳酸检测试剂盒，其特征在于，它包含试剂R1、试剂R2 和校准品，其中试剂R1组成为：
试剂R2组成为：
所述试剂R1和试剂R2在使用时的体积比为R1：R2＝3：1。
本发明的试剂盒在具有双试剂功能的自动生化分析仪上进行，其具体使用方法如图6：
本发明所使用的校准品为英国朗道公司生产的复合校准品。
加入生理盐水、样本或校准品3μl，之后再加入R1试剂210μl 预孵育5min后读取吸光度A1，之后再加入70μl的试剂R2反应5min 后，读取吸光度A2，并计算ΔA。
本发明的有益效果：
本发明提供的乳酸检测试剂盒，通过在试剂R2中加入了由4-甲酰苯基硼酸(4-FPBA)、葡甘露聚糖、NaCl、丙二醇、曲拉通100、 BSA组成的复合稳定剂，各组分协同作用使试剂稳定性能优异，解决了酶长期保存不稳定这一难题，在试验中它能增加酶的稳定时间，而不会影响酶的活性，从而有效地增强了试剂盒的稳定性，却不会对试剂的准确度和分析灵敏度产生影响，有利于该试剂在市场中进一步的推广。
附图说明
图1实施例2准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性；
图2实施例3准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性；
图3实施例4准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性；
图4实施例1-4线性相关验证实验检测结果；
图5稳定性验证实验检测结果；
图6本试剂盒在具有双试剂功能的自动生化分析仪上的具体使用方法。
具体实施方式
为了更好的理解本发明，下面结合具体实施例来进一步详细说明。
实施例1
市场上获得认可的一种准确度优异的乳酸试剂盒，它包括试剂 R1、试剂R2、校准品。
其中试剂R1组成为：
试剂R2组成为：
本实施例描述的试剂盒，在使用时，其测定方法是采用具有双试剂功能的东芝120自动分析仪，操作如下：
加入生理盐水、样本或校准品3μl，之后再加入R1试剂210μl 预孵育5min后读取吸光度A1，之后再加入70μl的试剂R2反应5min 后，读取吸光度A2，并计算ΔA。
本实施例所使用的校准品为英国朗道公司生产的复合校准品。
实施例2
一种乳酸检测试剂盒，它包括试剂R1、试剂R2、校准品。
其中试剂R1组成为：
试剂R2组成为：
具体测定方法同实施例1。
实施例3
一种乳酸检测试剂盒，它包括试剂R1、试剂R2、校准品。
其中试剂R1组成为：
试剂R2组成为：
具体测定方法同实施例1。
实施例4
一种乳酸检测试剂盒，它包括试剂R1、试剂R2、校准品。
其中试剂R1组成为：
试剂R2组成为：
具体测定方法同实施例1。
对上述实施例1-4中制得的试剂盒分析性能进行实验验证。
准确度验证实验：
将实施例2、3、4的试剂盒作为实验组，实施例1中市场上获得认可的准确度优异的乳酸试剂盒作为对照组进行对比实验，对40个样本进行检测，检测的结果如图1-图3。
通过图1-图3的检测数据可知，实施例2、3、4检测试剂盒与对照检测试剂盒的检测结果线性相关系数r分别为0.9993、0.9984、0.9986，相关性比较好，表明本发明的试剂盒与市场上获得认可的具有优异准确度的乳酸检测试剂盒有高度一致性，证明本发明试剂盒添加的其他各种成分对其准确性不会造成影响，试剂盒依然保持较好的准确度。
线性相关性验证实验：
找到乳酸高值样本为150mg/dl，用生理盐水进行系列稀释，配制 6个不同浓度的样本，依次为150mg/dl、120mg/dl、90mg/dl、60mg/dl、 30mg/dl、0mg/dl浓度的样本，每个浓度水平各样本分别测定三次，分别取其平均值。分别利用实施例1、2、3、4的试剂进行检测。检测结果如图4所示。
上述检测结果显示，实施例1-4检测结果相关性均大于0.990，但实施例2、3、4的检测结果大于0.999，与实施例1相比具有更好的线性相关性，这说明本发明试剂具有更好的线性相关性。
稳定性验证实验：
在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存试剂，检测四种实施例试剂的稳定性。四种试剂每月选取同一样本测定其吸光度三次，取平均值，与新鲜的实施例1试剂检测结果进行对比，从而确定试剂的稳定时间。检测数据如图5。
实验结果显示，实施例1试剂在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存15个月稳定，而实施例2、3、4试剂在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存24个月稳定，说明在试剂中通过加入复合稳定剂能够有效的提高乳酸检测试剂盒的稳定性。
综合以上分析，本发明提供的乳酸检测试剂盒，在试剂R2中通过加入复合稳定剂能够有效的提高试剂盒的稳定性，线性范围较好，试剂的准确度也较好。因此，本发明提供的乳酸检测试剂盒有利于在市场中进一步的推广使用。

Claims (2)

1.一种乳酸检测试剂盒，其特征在于，它包含试剂R1、R2和校准品，其中试剂R1组成为：
Tris缓冲液(pH=9.3) 50 mmol/L
乳酸酶D 0.45U/mL
抗坏血酸酶 0.6U/mL
DAOS 1mmol/L
试剂R2组成为：
Tris缓冲液(pH=9.3) 50 mmol/L
4-氨基安替比林 0.75mmol/L
过氧化物酶 16U/mL
胆碱氧化酶 7.0U/mL
4-甲酰苯基硼酸 0.01%（W/V）
葡甘露聚糖 0.5-1 mg/mL
NaCl 5mmol/L
丙二醇 20mg/mL
曲拉通100 1%（V/V）
BSA 0.1-1g/L。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述组分2中加入了由4-FPBA、葡甘露聚糖、NaCl、丙二醇、曲拉通100、BSA六种成分组成的复合稳定剂，解决了酶长期保存不稳定这一难题。
CN201711437404.7A 2017-12-26 2017-12-26 一种乳酸检测试剂盒 Pending CN109957603A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711437404.7A CN109957603A (zh) 2017-12-26 2017-12-26 一种乳酸检测试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711437404.7A CN109957603A (zh) 2017-12-26 2017-12-26 一种乳酸检测试剂盒

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN109957603A true CN109957603A (zh) 2019-07-02

Family

ID=67022589

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201711437404.7A Pending CN109957603A (zh) 2017-12-26 2017-12-26 一种乳酸检测试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109957603A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110734953A (zh) * 2019-09-20 2020-01-31 北京九强生物技术股份有限公司 一种l-乳酸盐检测试剂盒

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0100217A2 (en) * 1982-07-23 1984-02-08 Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Process for quantitative determination of substrate treated with oxidase
CN101825625A (zh) * 2009-03-06 2010-09-08 北京中生金域诊断技术有限公司 同时检测人体尿液中尿乳酸、肌酸和β-羟丁酸的试剂盒
CN102507915A (zh) * 2011-11-07 2012-06-20 宁波美康生物科技股份有限公司 稳定的乳酸测定液体试剂盒
CN102766677A (zh) * 2012-07-31 2012-11-07 武汉生之源生物科技有限公司 乳酸脱氢酶检测试剂盒及其制备方法
CN104388530A (zh) * 2014-11-28 2015-03-04 山东博科生物产业有限公司 一种稳定性强的乳酸检测试剂
WO2015131231A1 (en) * 2014-03-03 2015-09-11 Adelaide Research & Innovation Pty Ltd Methods for using (-)-perhexiline
CN105400862A (zh) * 2015-12-24 2016-03-16 山东博科生物产业有限公司 一种葡萄糖检测试剂盒

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0100217A2 (en) * 1982-07-23 1984-02-08 Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Process for quantitative determination of substrate treated with oxidase
CN101825625A (zh) * 2009-03-06 2010-09-08 北京中生金域诊断技术有限公司 同时检测人体尿液中尿乳酸、肌酸和β-羟丁酸的试剂盒
CN102507915A (zh) * 2011-11-07 2012-06-20 宁波美康生物科技股份有限公司 稳定的乳酸测定液体试剂盒
CN102766677A (zh) * 2012-07-31 2012-11-07 武汉生之源生物科技有限公司 乳酸脱氢酶检测试剂盒及其制备方法
WO2015131231A1 (en) * 2014-03-03 2015-09-11 Adelaide Research & Innovation Pty Ltd Methods for using (-)-perhexiline
CN104388530A (zh) * 2014-11-28 2015-03-04 山东博科生物产业有限公司 一种稳定性强的乳酸检测试剂
CN105400862A (zh) * 2015-12-24 2016-03-16 山东博科生物产业有限公司 一种葡萄糖检测试剂盒

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
吕邦泰: "乳酸氧化酶法血浆中乳酸", 《临床检验杂志》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110734953A (zh) * 2019-09-20 2020-01-31 北京九强生物技术股份有限公司 一种l-乳酸盐检测试剂盒
CN110734953B (zh) * 2019-09-20 2022-07-05 北京九强生物技术股份有限公司 一种l-乳酸盐检测试剂盒

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Allred et al. Determination of coenzyme A and acetyl CoA in tissue extracts
Laker et al. Spectrophotometric determination of urinary oxalate with oxalate oxidase prepared from moss.
JP5129572B2 (ja) 生体試料中の２項目の測定対象物の同時分別定量方法
CN111321198B (zh) 一种谷胱甘肽还原酶测定试剂盒及其制备方法和应用
JP5906604B2 (ja) 全血検体の成分測定方法
CN101003831A (zh) 肝胆系统疾病诊断试剂盒
WO2019120086A1 (zh) 一种1,5-脱水-d-山梨醇的检测试剂盒及其检测方法
CN105203472A (zh) 一种稳定的游离脂肪酸测定试剂盒
JP6913956B2 (ja) Ｌ−キヌレニンの測定方法及び測定キット
CN111024965B (zh) 甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒
CN106191211B (zh) 一种用于高密度脂蛋白胆固醇检测试剂的稳定剂
CN105385751B (zh) 一种准确度高、抗干扰能力强的总胆固醇检测试剂
CN109957603A (zh) 一种乳酸检测试剂盒
CN101006185A (zh) 通过酶直接介导测定样品中分析物浓度的方法
CN102564979A (zh) 循环酶法测定乙醇浓度的方法及乙醇测定试剂盒
CN104807995B (zh) 一种灵敏度高的连续检测法gldh检测试剂
CN107703288A (zh) 提高反应稳定性的胆汁酸检测试剂
JPH06253895A (ja) 総ケトン体の測定方法および測定試薬
Kiuchi et al. A case of β-carotenemia misdiagnosed as jaundice by the bilirubin oxidase method
CN115267229A (zh) 试剂盒及其制备方法
CN110343740A (zh) 一种高灵敏的乳酸测定方法及乳酸检测试剂盒
CN105510255A (zh) 一种β-羟丁酸的测定方法及其测定试剂盒
CN109298190A (zh) 一种高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒
CN114966025A (zh) 谷胱甘肽还原酶测定试剂盒及其制备方法与应用
Naazeri et al. Fluorimetry as a simple and sensitive method for determination of catalase activity

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20190702