CN105385751B - 一种准确度高、抗干扰能力强的总胆固醇检测试剂 - Google Patents

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Abstract

本发明一种准确度高、抗干扰能力强的总胆固醇检测试剂，涉及总胆固醇检测技术领域，本发明在试剂R使用了生物缓冲液CAPS(3－（环己氨基）－1－丙磺酸)缓冲液，保证缓冲能力；在试剂的R中加入十八烷基三甲基溴化铵和EMULGEN‑707两种表面活性剂，较好的提高试剂的乳化作用，提高试剂的准确度和特异性；在试剂R中加入了海藻糖、甘露醇等稳定剂，能够有效地改善试剂的稳定性；在试剂R中加入了羟基乙叉二膦酸，能够有效的螯合重金属离子，提高试剂的准确性；本发明还在试剂中加入了抗化学酸氧化酶和胆红素氧化酶，能够有效的去除抗坏血酸和胆红素的干扰，产品配置简单，价格低廉，非常适合大面积的临床推广。

Description

一种准确度高、抗干扰能力强的总胆固醇检测试剂
技术领域
本发明涉及总胆固醇检测技术领域，特别涉及一种准确度高、抗干扰能力强的总胆固醇检测试剂。
背景技术
总胆固醇是指血液中所有脂蛋白所含胆固醇之总和。人群总胆固醇水平主要取决于遗传因素和生活方式。总胆固醇包括游离胆固醇和胆固醇酯，肝脏是合成和贮存的主要器官。胆固醇是合成肾上腺皮质激素、性激素、胆汁酸及维生素D等生理活性物质的重要原料，也是构成细胞膜的主要成分，胆固醇（CHO）和胆固醇酯（ChE）为类脂质，是脂肪在血液中存在的一种形式。胆固醇在体内有许多重要功能，其主要功能有：胆固醇是所有细胞膜和亚细胞器膜上的重要组成成分；是胆汁酸的唯一前体；是所有类固醇激素，包括性腺和肾上腺激素的前体等。人体血清胆固醇增多常见于高脂血症、动脉粥样硬化、糖尿病、肾病综合征、甲状腺功能减退、胆总管阻塞、高血压（部分）等疾病。胆固醇含量减少常见于低脂蛋白血症、贫血、败血症、甲状腺功能亢进、肝病、严重感染、营养不良、肺结核和晚期癌症等疾病。胆固醇作为血脂类常规检查项目，在临床中有着很重要的应用。因此，研发一种准确度高、抗干扰能力强的总胆固醇检测试剂是很有必要的。
测定总胆固醇的方法有多种，常规方法包括化学法和酶法。化学法需要有机溶剂提取胆固醇，涉及强酸反应，特异性差，干扰因素多，准确度差，操作步骤复杂，不适用于临床操作。因此，临床一般采用酶法。酶法的原理是血清中的胆固醇被胆固醇脂水解酶（CHE）水解为游离胆固醇，后者被胆固醇氧化酶（CHO）氧化成胆甾烯酮和过氧化氢，再经过过氧化物酶（POD）催化4-氨基安替比林与酚生成红色醌亚胺色素，它的颜色深浅与胆固醇的浓度成正比。该方法具有较好的精度和准确性，灵敏度高，但是易受多种干扰因素的干扰，例如血清中的物质如血红蛋白，胆红素，抗坏血酸等也会干扰测定结果，因此，在酶法的基础上发明了一种准确度好，抗干扰能力更强的总胆固醇检测试剂。
发明内容
本发明的目的是提供一种一种准确度高、抗干扰能力强的总胆固醇检测试剂。
本发明基本原理：
血清中的胆固醇被胆固醇脂水解酶（CHE）水解为游离胆固醇，后者被胆固醇氧化酶（CHO）氧化成胆甾烯酮和过氧化氢，再经过过氧化物酶（POD）催化4-氨基安替比林与酚生成红色醌亚胺色素，醌亚胺的最大吸收峰在505nm附近，吸光度与样本中的总胆固醇含量成正比。
Figure DEST_PATH_IMAGE001
本发明是通过以下步骤得到的：
一种准确度高、抗干扰能力强的总胆固醇检测试剂，包括试剂R，所述试剂R的组成如下：
试剂R中含有：
CAPS缓冲液（pH7.0） 50mmol/L
4-氨基安替比林 1.0mmo1/L
胆固醇酯酶(CHE) 2000U/L
胆固醇氧化酶(CHO) 2000U/L
过氧化物酶(POD) 2500U/L
3,5-二氯-2-羟基苯磺酸钠（DHBS） 3.5mmol/L
氯化镁 2.5mmol/L
海藻糖 20g/L
甘露醇 20g/L
羟基乙叉二膦酸 2ml/L
十八烷基三甲基溴化铵· 0.3g/L
EMULGEN-707 0.35ml/L
抗坏血酸氧化酶 2.5KU/L，
胆红素氧化酶· 2KU/L
防腐剂· 0.5ml/L 。
所述的总胆固醇检测试剂，试剂R中缓冲液为25℃，pH为7的CAPS(3－（环己氨基）－1－丙磺酸)缓冲液缓冲液。
所述的总胆固醇检测试剂，所述防腐剂为PC-300。
所述的总胆固醇检测试剂来检测总胆固醇的检测方法，使用全自动生化分析仪利用终点法进行测定，检测主波长为505nm。
所述的一种准确度高、抗干扰能力强的总胆固醇检测试剂，其特征在于所述抗干扰剂为抗坏血酸氧化酶和胆红素氧化酶。
所述的一种准确度高、抗干扰能力强的总胆固醇检测试剂，其特征在于所述金属离子螯合剂为羟基乙叉二膦酸。
本发明的创新处：
1）在试剂R中使用了CAPS(3－（环己氨基）－1－丙磺酸)缓冲液，在试剂中使用的CAPS(3－（环己氨基）－1－丙磺酸)缓冲液是生物缓冲液，对在保证缓冲能力的同时，不会对反应体系产生负面影响；
2）在试剂的R中加入了十八烷基三甲基溴化铵和EMULGEN-707两种表面活性剂，这两种表面活性剂能有较好的提高试剂的乳化作用，从而提高试剂的准确度和特异性；
3）在试剂R中加入了羟基乙叉二膦酸，能够有效的螯合重金属离子，并且能够较好的提高试剂的准确性；
4）在试剂中加入海藻糖、甘露醇作为稳定剂，能有效的改善试剂的稳定性，且不影响试剂的准确度；
5）本发明还在试剂中加入了抗坏血酸氧化酶和胆红素氧化酶，能够有效的去除抗坏血酸和胆红素的干扰。
附图说明
图1为两种试剂的相关性曲线图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明：
实施例1
1）一种准确度高、抗干扰能力强的总胆固醇检测试剂，所述试剂R的组成如下：
试剂R中含有：
CAPS缓冲液（pH7.0） 50mmol/L
4-氨基安替比林 1.0mmo1/L
胆固醇酯酶(CHE) 2000U/L
胆固醇氧化酶(CHO) 2000U/L
过氧化物酶(POD) 2500U/L
3,5-二氯-2-羟基苯磺酸钠（DHBS） 3.5mmol/L
氯化镁 2.5mmol/L
海藻糖 20g/L
甘露醇 20g/L
羟基乙叉二膦酸 2ml/L
十八烷基三甲基溴化铵· 0.3g/L
EMULGEN-707 0.35ml/L
抗坏血酸氧化酶 2.5KU/L，
胆红素氧化酶 2KU/L
防腐剂 0.5ml/L
2）检测使用方法：
本实施例描述的总胆固醇检测试剂，在使用时采用全自动生化分析仪，如日立7180全自动分析仪等，利用终点法进行测定。将实施例1的试剂放置到对应的试剂位上，在样品盘的对应位置放置好蒸馏水、标准品和样本，操作如表1：
表1实施例1试剂检测方法
Figure DEST_PATH_IMAGE002
计算：样本CHO浓度= 样本ΔA/标准ΔA×标准浓度。
实施例2
相关性实验：利用实施例1配方配制试剂，与市场常见的国家食品药品监督管理局认可的某公司的总胆固醇试剂盒进行对照检测，同时检测了20个临床血清样本，检测结果如表2所示。并获得了两种试剂的相关性曲线（如图1所示）。
表2实施例1试剂与市场常见并得到认可的总胆固醇测定试剂盒对比检测结果
Figure DEST_PATH_IMAGE003
通过检测结果显示，两个试剂盒的相关系数为0.9997，说明了两者有极大的相关性，实施例1的试剂中添加的稳定剂和抗干扰剂没有影响试剂的准确度。表明实施例1的试剂具有良好的准确度。
实施例3
干扰性试验：取新鲜混合血清，分成2等份，然后将每等份再分成5等份，加入不同的干扰物质，使其在血清中的浓度达到表3的要求。然后分别用实施例1和对照试剂（同实施例2），同时对比测定血清中总胆固醇的含量,加入不同干扰物质后各组的测定结果见表3。相对偏差(%)=(干扰样本的测定均值－无干扰物质的样本的测定均值)/无干扰物质的测定均值×100%。
表3实施例试剂抗干扰性能比较
由表3可以看出，实施例1试剂在抗坏血酸≤2000μmol/L、胆红素≤986μmol/L、血红蛋白≤10.5 g/L对测试结果没有明显干扰。并且相较于对照试剂，实施例1试剂具有更好的抗干扰能力。

Claims (3)

1.一种准确度高、抗干扰能力强的总胆固醇检测试剂，其特征在于包括试剂R，所述试剂R的组成如下：
Figure FDA0001760019180000011
2.根据权利要求1所述的一种准确度高、抗干扰能力强的总胆固醇检测试剂，其特征在于试剂R中缓冲液为25℃，pH为7的CAPS缓冲液。
3.根据权利要求1或2所述的一种准确度高、抗干扰能力强的总胆固醇检测试剂，其特征在于所述防腐剂为PC-300。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106367471B (zh) * 2016-09-29 2021-12-03 中国医学科学院北京协和医院 用于测定总胆固醇的试剂盒和方法
CN106645763B (zh) * 2017-01-03 2019-03-22 长沙中生众捷生物技术有限公司 总胆固醇的检测试纸
CN108690869A (zh) * 2017-04-05 2018-10-23 广州市伊川生物科技有限公司 一种高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒及其检测方法
CN111206071A (zh) * 2020-01-17 2020-05-29 上海高踪医疗器械科技有限公司 一种总胆固醇检测试剂盒及其生产工艺

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104931448A (zh) * 2015-06-17 2015-09-23 陈锡良 一种乳酸脱氢酶同工酶1的检测试剂及其检测方法
CN104977418A (zh) * 2015-04-10 2015-10-14 山东博科生物产业有限公司 一种准确稳定的总胆固醇检测试剂

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5111389B2 (ja) * 2006-10-18 2013-01-09 協和メデックス株式会社 小粒子低密度リポ蛋白中のコレステロールの定量方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104977418A (zh) * 2015-04-10 2015-10-14 山东博科生物产业有限公司 一种准确稳定的总胆固醇检测试剂
CN104931448A (zh) * 2015-06-17 2015-09-23 陈锡良 一种乳酸脱氢酶同工酶1的检测试剂及其检测方法

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