CN114200122A - 一种尿酸检测冻干试剂球、其配置方法及微流控检测芯片 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及医学免疫体外诊断领域,具体涉及一种尿酸检测冻干试剂球、其配置方法及微流控检测芯片。所述尿酸检测冻干试剂球包括试剂R1和试剂R2,其中试剂R1包括缓冲液、4‑氨基安替比林盐酸盐、非离子表面活性剂、尿酸酶、过氧化物酶、抗坏血酸酶、稳定剂和赋形剂;试剂R2包括缓冲液、3,5‑二氯‑2‑羟基苯磺酸钠、去胆红素干扰剂、非离子表面活性剂、稳定剂和赋形剂。将尿酸检测冻干试剂球置于微流控检测芯片中,使用便携式自动生化分析仪对微流控检测芯片中的样品进行检测。通过对尿酸检测冻干试剂球的组成配方的优化,增强了其抗干扰能力,提高了检测结果的稳定性,实现了尿酸的体外即时诊断。
Description
技术领域
本发明涉及医学免疫体外诊断领域,具体涉及一种尿酸检测冻干试剂球、其配置方法及微流控检测芯片。
技术背景
尿酸是一种含有碳、氮、氧、氢的杂环化合物,其分子式为C5H4N4O3,分子量为168.1103g/mol。尿酸的溶解度较小,因而在体内浓度偏高时容易析出结晶。随着医学技术的发展,尿酸被发现与痛风、心脑血管疾病、代谢综合征、输尿管结石和肾脏疾病等的发生、发展密切相关。因此,临床检测血清尿酸浓度具有非常重要的参考价值和意义。
目前测定尿酸的方法中,尿酸酶法应用最为广泛,并在此基础上发展出了异鲁米诺-尿酸酶化学发光法和尿酸酶-过氧化物酶偶联法;但这些方法依赖大型全自动生化分析仪,难以应用在病人身边即时诊断(point-of-care,POCT)。目前也有将液体尿酸检测试剂做成冻干试剂球的检测方法,但现有尿酸冻干试剂球形态较差,不易完全冻干导致准确度偏差较大,同时易受胆红素的干扰,导致检测结果不稳定。
发明内容
本发明实施例提供一种尿酸检测冻干试剂球、其配置方法及微流控检测芯片,能够解决冻干试剂球形态不佳、抗干扰能力差、检测结果不稳定、及时诊断难的技术问题。
为了解决以上技术问题,本发明实施例采用的一个技术方案是:
第一方面,本发明实施例提供一种尿酸检测冻干试剂球、其配置方法及微流控检测芯片。所述尿酸检测冻干试剂球包括试剂R1和试剂R2;
所述试剂R1包括:
所述试剂R2包括:
可选地,所述试剂R1和试剂R2中的缓冲液包括:N-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙磺酸(TAPS)缓冲液,4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸(HEPES)缓冲液,3-吗啉丙磺酸(MOPS)缓冲液和磷酸盐缓冲液中的一种或几种。
可选地,所述试剂R1和试剂R2中的非离子表面活性剂包括:吐温系列活性剂、司班系列活性剂和Triton系列活性剂中的一种或几种。由于非离子表面活性剂在溶液中不是以离子状态存在,所以它的稳定性高,不易受强电解质存在的影响,也不易受酸、碱的影响,与其他类型表面活性剂能混合使用,相容性好,在各种溶剂中均有良好的溶解性,在固体表面上不发生强烈吸附。
吐温是TWEEN的音译,化学名称:聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯,简称聚山梨酯(Polysorbate);吐温系列包括吐温20、21、40、60、61、80、81、85等。
司班,也译作司盘,是Span的音译,别名失水山梨醇脂肪酸酯。是失水山梨醇与不同高级脂肪酸所形成的酯,如司班-20(SP-20)为月桂酸酯;司班-80(SP-80)为单油酸酯。可与各类表面活性剂混用,尤其适应与吐温-60(T-60),复配使用效果更佳。司班系列包括司班20、40、60、65、80、83、85等。
Triton,中文译名为曲拉通,成分为聚氧乙烯-8-辛基苯基醚,又称为聚乙二醇对异辛基苯基醚。用途广泛的非离子表面活性剂,在温和的变性条件下用于恢复膜组分。Triton系列包括Triton X-15、Triton X-45、Triton X-100、Triton X-102、Triton X-114、Triton X-405等。
可选地,所述试剂R1和试剂R2中的稳定剂包括:蔗糖、果糖、甘油、牛血清白蛋白(BSA)和脂肪醇聚氧乙烯醚中的一种或几种。
可选地,所述试剂R1和试剂R2中的赋形剂包括:甘露醇、肌醇、PEG3350、PEG8000、葡聚糖1万、葡聚糖4万中的一种或几种。
其中,PEG3350为聚乙二醇3350,别名聚氧乙烯3350;PEG8000为聚乙二醇8000,由环氧乙烷聚合而成。
可选地,所述试剂R1和试剂R2的pH值范围为7.5-9.5。采用尿酸酶-过氧化物酶偶联法测定尿酸,缓冲液提供的pH值范围为8.5-9.5的碱性环境,加入Trinder反应关键物料后,调整PH值7.5-8.5,后加入其他组分制备成的试剂球可准确检测尿酸。另外,配置试剂时,为了避免pH影响酶活性,应先调节pH,再加入酶。
Trinder反应,又称“偶联终点比色法”,其原理为被测物质通过酶作用产生的过氧化氢(H2O2)在4-氨基安替比林盐酸盐(4-AAP)、过氧化物酶(POD)的存在下,可生成红色醌亚胺化合物。临床生化许多检测项目都应用了Trinder反应,该反应过程受到数十种药物和胆红素等物质干扰。其中影响最大的药物为抗坏血酸(维生素C),它能还原反应过程中所产生H2O2。使其生成的红色醌亚胺化合物减少,结果呈负干扰。应用抗坏血酸氧化酶使样本中的Vc干扰得以完全排除。通过去胆红素干扰剂作为氧化剂可以消除胆红素的干扰,使试剂具有更强的抗干扰能力。
可选地,所述R2中的去胆红素干扰剂包括:亚铁氰化钾、高铁氰化钾和胆红素氧化酶中的一种或几种。
可以理解的是,3,5-二氯-2-羟基苯磺酸钠,英文名Sodium3,5-dichloro-2-hydroxybenzenesulfonate,简称DHBS;可作为尿酸、胆固醇的比色测定中,过氧化氢光度测定的显色底物。其水溶性好、灵敏度高、稳定性好,可用于替代效果比较差的2,4-二氯苯酚。
第二方面,本发明实施例提供一种尿酸检测冻干试剂球的配置方法,包括包括试剂R1和试剂R2的配置,所述方法包括:
步骤一,配置试剂R1和试剂R2;
步骤二,将所述试剂R1和试剂R2通过定量控制滴珠点胶机直接滴在液氮中结成冰球;
所述步骤二具体操作为:
a.滴液定量系统开机及系统登录;
b.连接滴液定量系统的尿酸项目专用滴液管道和针头;
c.清洗尿酸项目专用滴液管道和针头;
d.清洗结束后,开启空压机,设置滴液参数,调节滴液目标重量,设置好参数后,准备滴液;
e.确认设定好参数后,启动滴液程序,先滴R1试剂,再滴R2试剂,当滴液颗数达到目标数量,停止滴液程序。
步骤三,将步骤二制成的冰球置于真空冷冻干燥机中进行冻干;
步骤四,步骤三结束后,氮气复压,将冻干试剂球收集保存在干燥的铝瓶中备用,所述冻干试剂球的体积范围为2.5-3.5ul。
其中,所述的尿酸检测冻干试剂球的配置方法中,所述试剂R1的配置方法包括:
步骤一,在烧杯中加入蒸馏水;
步骤二,称取缓冲液成分加入步骤一的烧杯中;
步骤三,步骤二结束后,调节溶液的pH值;
步骤四,调节好pH后,继续加入4-氨基安替比林盐酸盐;
步骤五,加入4-氨基安替比林盐酸盐后,继续调节溶液pH值;
步骤六,步骤五结束后,继续往烧杯中依次加入赋形剂和稳定剂;
步骤七,步骤六加入的赋形剂和稳定剂溶解完全后,再加入非离子表面活性剂;
步骤八,步骤七结束后,加入尿酸酶,过氧化物酶和抗坏血酸酶;
步骤九,通过以上步骤添加完所有试剂后,对溶液进行定容、摇匀备用。
所述试剂R2的配置方法包括:
步骤一,在烧杯中加入蒸馏水;
步骤二,称取缓冲液成分加入步骤一的烧杯中;
步骤三,步骤二结束后,调节溶液的pH值;
步骤四,调节好pH后,继续加入3,5-二氯-2-羟基苯磺酸钠和去胆红素干扰剂;
步骤五,加入3,5-二氯-2-羟基苯磺酸钠和去胆红素干扰剂,继续调节溶液pH值;
步骤六,步骤五结束后,继续往烧杯中依次加入赋形剂和稳定剂;
步骤七,步骤六加入的赋形剂和稳定剂溶解完全后,再加入非离子表面活性剂;
步骤八,通过以上步骤添加完所有试剂后,对溶液进行定容、摇匀备用。
第三方面,本发明实施例提供一种微流控检测芯片,所述微流控检测芯片内装有如上所述的尿酸检测冻干试剂球。
可以理解的是,所述微流控检测芯片需要配合便携式自动生化分析仪进行检测,具体检测步骤如下:
步骤一,在8%空气湿度环境中,将所述冻干试剂球装入微流控检测芯片内;
步骤二,将上述微流控检测芯片装入便携式自动生化分析仪;
步骤三,装好微流控检测芯片后,用便携式自动生化分析仪检测37℃下546nm波长的吸光值;
步骤四,利用定标曲线计算得出样本中的尿酸含量。
与现有技术相比,本发明实施例的有益效果为:通过缓冲液、非离子表面活性剂、有效的赋形剂和稳定剂成分保证了试剂球的外形及复融溶解性,很好的保护了反应物的活性,提高了尿酸冻干试剂球的稳定性;通过去胆红素干扰剂作为氧化剂消除胆红素的干扰,具有较强的抗干扰能力,检测结果精度更高;同时,本发明实施例的尿酸冻干试剂球采用尿酸酶-过氧化物酶偶联法,通过微流控检测芯片利用便携式自动生化分析仪,实现了尿酸的体外即时诊断,且操作更加简便、结果更加准确。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1是本发明实施例提供的一种尿酸检测冻干试剂球和美国Abaxis公司提供的试剂盘对尿酸检测结果的的临床相关性分析图。
图2是本发明实施例提供的一种尿酸检测冻干试剂球的线性范围图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。
本发明实施例提供一种尿酸检测冻干试剂球、其配置方法及微流控检测芯片。所述尿酸检测冻干试剂球包括试剂R1和试剂R2;
所述试剂R1包括:
所述试剂R2包括:
具体地,本发明实施例还提供一种尿酸检测冻干试剂球的配置方法,包括试剂R1和试剂R2的配置,其特征在于,所述方法包括:
步骤一,配置试剂R1和试剂R2;
步骤二,将所述试剂R1和试剂R2通过定量控制滴珠点胶机直接滴在液氮中结成冰球;
所述步骤二具体操作为:
a.滴液定量系统开机及系统登录;
b.连接滴液定量系统的尿酸项目专用滴液管道和针头;
c.清洗尿酸项目专用滴液管道和针头;
d.清洗结束后,开启空压机,设置滴液参数,调节滴液目标重量,设置好参数后,准备滴液;
e.确认设定好参数后,启动滴液程序,先滴R1试剂,再滴R2试剂,当滴液颗数达到目标数量,停止滴液程序。
步骤三,将步骤二制成的冰球置于真空冷冻干燥机中进行冻干;
步骤四,步骤三结束后,氮气复压,将冻干试剂球收集保存在干燥的铝瓶中备用,所述冻干试剂球的体积范围为2.5-3.5ul。
具体地,本发明实施例提供一种微流控检测芯片,所述微流控检测芯片内装有如上所述的尿酸检测冻干试剂球。
具体地,所述微流控检测芯片需要配合便携式自动生化分析仪进行检测,具体检测步骤如下:
步骤一,在8%空气湿度环境中,将所述冻干试剂球装入微流控检测芯片内;
步骤二,将上述微流控检测芯片装入便携式自动生化分析仪;
步骤三,装好微流控检测芯片后,用便携式自动生化分析仪检测37℃下546nm波长的吸光值;
步骤四,利用定标曲线计算得出样本中的尿酸含量。
本发明实施例的检验原理为:尿酸酶催化尿酸完全氧化生成尿囊素和过氧化氢(H2O2),随后,H2O2、4-氨基安替比林(4-AAP)和3,5-二氯-2-羟基苯磺酸钠(DHBS)经过氧化物酶(POD)的作用(Trinder反应)生成红色的醌亚胺化合物,使用深圳市锦瑞生物科技股份有限公司的便携式自动生化分析仪vp10,对生成的红色醌亚胺化合物进行检测,检测37℃下546nm波长的吸光值,吸光值与样本中尿酸浓度成正比。
以下提供多个实施例以详细说明本发明实施例提供的一种尿酸检测冻干试剂球、其配置方法及微流控检测芯片的突出效果。
实施例1:一种尿酸检测冻干试剂球1
本发明实施例提供一种尿酸检测冻干试剂球;所述尿酸检测冻干试剂球包括试剂R1和试剂R2;
所述试剂R1包括:
25℃条件下,试剂R1的pH值范围为:7.5-9.5。
所述试剂R2包括:
25℃条件下,试剂R2的pH值范围为:7.5-9.5。
实施例2:一种尿酸检测冻干试剂球2
本发明实施例提供一种尿酸检测冻干试剂球;所述尿酸检测冻干试剂球包括试剂R1和试剂R2;
所述试剂R1包括:
25℃条件下,试剂R1的pH值范围为:7.5-9.5。
所述试剂R2包括:
25℃条件下,试剂R2的pH值范围为:7.5-9.5。
实施例3:一种尿酸检测冻干试剂球3
本发明实施例提供一种尿酸检测冻干试剂球;所述尿酸检测冻干试剂球包括试剂R1和试剂R2;
所述试剂R1包括:
25℃条件下,试剂R1的pH值范围为:7.5-9.5。
所述试剂R2包括:
25℃条件下,试剂R2的pH值范围为:7.5-9.5。
实施例4:精密度
表1精密度评估计算结果
测试次数 | 测试结果(μmol/L) |
1 | 338.60 |
2 | 351.10 |
3 | 341.80 |
4 | 344.00 |
5 | 345.10 |
6 | 338.30 |
7 | 330.70 |
8 | 352.80 |
9 | 343.20 |
10 | 336.60 |
11 | 321.80 |
12 | 346.60 |
13 | 342.40 |
14 | 347.30 |
15 | 355.40 |
16 | 331.70 |
17 | 330.30 |
18 | 349.40 |
19 | 344.60 |
20 | 330.60 |
均值 | 341.12 |
SD | 8.74 |
CV | 2.56% |
使用本发明实施例1-3提供的一种尿酸检测冻干试剂球,在深圳市锦瑞生物科技股份有限公司的便携式自动生化分析仪vp10上,测试尿酸浓度为340μmol/L的血清样本20次,计算SD、均值、CV。结果如上表1所示:SD=8.74,均值=341.12μmol/L,CV=2.56%。如以上表1的精密度评估计算结果所示,本申请实施例提供的尿素冻干试剂球具有CV≤3%的精密度。
实施例5:准确度
表2准确度测试结果
测试次数 | 测试结果(μmol/L) |
1 | 354.30 |
2 | 351.10 |
3 | 359.30 |
平均值 | 354.90 |
靶值 | 350.00 |
相对偏差 | 1.40% |
如表2所示,使用本发明实施例1-3提供的一种尿酸检测冻干试剂球,在深圳市锦瑞生物科技股份有限公司的便携式自动生化分析仪vp10上,测试尿酸浓度为350μmol/L的定值血清三次,取平均值,计算相对偏差,结果如下:均值=354.9μmol/L,相对偏差=1.40%。
根据上表检测结果可知,采用本发明实施例提供的一种尿酸检测冻干试剂球对血清中尿酸含量的检测结果没有显著的差异;因此,本发明实施例提供的一种尿酸检测冻干试剂球对尿酸含量的检测结果具有较高的准确性。
实施例6:一种尿酸检测冻干试剂球与Abaxis公司试剂盘对尿酸检测结果的相关性分析
美国Abaxis公司为冻干型便携式全自动生化分析仪的标杆企业,其人用的Piccolo和兽用的VetScan在很多地方已经成为便携式全自动生化分析仪的代称。Abaxis有16种试剂盘组合,覆盖基本临床生化所需测试。
使用本发明实施例1-3提供的一种尿酸检测冻干试剂球,在深圳市锦瑞生物科技股份有限公司的便携式自动生化分析仪vp10上,对50例血清样本中的尿酸含量进行检测;与此同时,采用美国Abaxis公司提供的尿酸检测试剂盘,在其便携式全自动生化分析仪Piccolo上对相同的50例血清样本中的尿酸含量进行检测,检测结果见表3,其相关性分析结果见图1。
表3相关性分析结果
Abaxis试剂盘(μmol/L) | 本法(μmol/L) | |
1 | 314.08 | 329.29 |
2 | 374.98 | 412.12 |
3 | 220.91 | 254.55 |
4 | 409.08 | 434.34 |
5 | 421.34 | 435.35 |
6 | 336.38 | 346.46 |
7 | 548.53 | 581.82 |
8 | 244.95 | 221.21 |
9 | 398.88 | 425.25 |
10 | 687.97 | 725.25 |
11 | 202.44 | 217.17 |
12 | 309.69 | 338.38 |
13 | 231.50 | 236.36 |
14 | 44.00 | 32.32 |
15 | 175.00 | 198.99 |
16 | 173.97 | 180.81 |
17 | 901.13 | 904.04 |
18 | 167.47 | 202.02 |
19 | 185.93 | 180.81 |
20 | 1104.63 | 1136.36 |
21 | 275.44 | 273.74 |
22 | 227.10 | 205.05 |
23 | 422.22 | 434.34 |
24 | 289.11 | 291.92 |
25 | 405.97 | 385.86 |
26 | 168.73 | 140.40 |
27 | 323.20 | 307.07 |
28 | 1006.02 | 1018.18 |
29 | 364.34 | 360.61 |
30 | 791.26 | 802.02 |
31 | 329.51 | 317.17 |
32 | 264.42 | 268.69 |
33 | 375.62 | 368.69 |
34 | 347.53 | 324.24 |
35 | 496.58 | 476.77 |
36 | 391.16 | 377.78 |
37 | 280.91 | 305.05 |
38 | 368.49 | 386.87 |
39 | 180.25 | 200.00 |
40 | 240.11 | 247.47 |
41 | 87.52 | 85.86 |
42 | 180.06 | 176.77 |
43 | 337.36 | 317.17 |
44 | 391.64 | 362.63 |
45 | 209.11 | 239.39 |
46 | 361.57 | 371.72 |
47 | 574.40 | 609.09 |
48 | 274.42 | 251.52 |
49 | 422.42 | 442.42 |
50 | 194.92 | 178.79 |
图1所示的散点图,以便携式自动生化分析仪vp10上的测定值为自变量(X),以Abaxis公司便携式全自动生化分析仪Piccolo上的测定值为因变量(Y),散点图见图1。相关方程:Y=1.0234x-2.7139相关系数:R=0.9962
实施例7:一种尿酸检测冻干试剂球测定尿酸样本的线性范围
线性范围指符合正比关系的这一段溶液的浓度范围,一般应由实验确定。所谓线性范围是指利用一种方法取得精密度、准确度均符合要求的试验结果,而且成线性的供试物浓度的变化范围,其最大量与最小量之间的间隔,可用mg/L~mg/L、ug/ml~ug/ml等表示。
线性与范围的确定可用作图法(响应值Y/浓度X)或计算回归方程(Y=a+bX)来研究建立。标准曲线应覆盖样品可能的浓度范围,对于含量测定要求一般浓度上限为样品最高浓度的120%,下限为样品最低浓度的80%;目前仍广泛采用相关系数(r)表示标准曲线的线性度、并控制r≥0.9900。
本发明实施例提供的一种尿酸检测冻干试剂球,经实验确定,在[5,1190]μmol/L区间内,其线性相关系数为r≥0.990。
根据试剂的最大上限浓度,收集浓度大于待检试剂线性范围上限浓度的新鲜血清或与新鲜血清具有相同的基体状态的样本(或血清中加入待测物质纯品)作为高值样本,浓度极低或无该分析物的样本作为低限样本,但因低限样本难以收集,一般以生理盐水代替。将高低浓度标准血清样品以不同比例混合进行检测,结果如图2所示,线性范围的横坐标为样本浓度,纵坐标为对应的测定值,相关方程为:Y=1.0002x+0.3861相关系数为:R=0.9996。
如图2所示,血清样本浓度的区间为[5,1190]μmol/L时,利用本发明实施例提供的一种尿酸检测冻干试剂球,在深圳市锦瑞生物科技股份有限公司的便携式自动生化分析仪vp10上得检测结果的精密度和准确度均符合要求。
实施例8:一种尿酸检测冻干试剂球的热稳定性
在8%空气湿度环境中,将本发明实施例提供的一种尿酸检测冻干试剂球装入微流控检测芯片内封袋,在37℃避光环境中贮存0、2、3、4、6、8天后。将其取出,在深圳市锦瑞生物科技股份有限公司的便携式自动生化分析仪vp10上,分别对两个不同浓度的定值血清样本进行测试,每个样本重复测试三次。检测与分析结果见表4。
表4一种尿酸检测冻干试剂球的热稳定性分析
如表4所示,在37℃避光环境中贮存0、2、3、4、6、8天后,本发明实施例提供的一种尿酸检测冻干试剂球对尿酸含量检测结果的准确度,相对偏差在±10.0%以内。
实施例9:一种尿酸检测冻干试剂球的长期稳定性
在8%空气湿度环境中,将本发明实施例提供的一种尿酸检测冻干试剂球装入微流控检测芯片内封袋,在2-8℃避光环境中贮存0、3、6、9、12、15个月后。将其取出,在深圳市锦瑞生物科技股份有限公司的便携式自动生化分析仪vp10上,分别对两个不同浓度的定值血清样本进行测试,每个样本重复测试三次。检测与分析结果见表5。
表5一种尿酸检测冻干试剂球的长期稳定性分析
如表5所示,在2-8℃避光环境中贮存0、3、6、9、12、15个月后,本发明实施例提供的一种尿酸检测冻干试剂球对尿酸含量检测结果的准确度,相对偏差在±10.0%以内。
实施例10:一种尿酸检测冻干试剂球的抗干扰能力
本发明实施例提供的一种尿酸检测冻干试剂球的检验原理为Trinder反应,又称“偶联终点比色法”,临床生化许多检测项目都应用了Trinder反应,然而该反应过程受到数十种药物和胆红素等物质干扰。本实施例分别在检测样本中加入抗坏血酸、胆红素、血红蛋白和甘油三酯等干扰物质,对本发明实施例提供的一种尿酸检测冻干试剂球的抗干扰能力进行检验。具体结果见表6。
表6一种尿酸检测冻干试剂球的抗干扰能力分析
如表6所示,本实施例分别在检测样本中加入一定量的抗坏血酸、胆红素、血红蛋白和甘油三酯等干扰物质后,利用本发明实施例提供的一种尿酸检测冻干试剂球,在深圳市锦瑞生物科技股份有限公司的便携式自动生化分析仪vp10上对尿酸含量进行检测,检测结果准确度相对偏差在±10.0%以内。
综上所述,与现有技术相比,通过缓冲液、非离子表面活性剂、有效的赋形剂和稳定剂成分显著提高了所述尿酸冻干试剂球的各种性能;保证了试剂球的外形及复融溶解性,很好的保护了反应物的活性,实施例8和实施例9的实验结果证明了尿酸冻干试剂球的稳定性;实施例10的结果显示通过去胆红素干扰剂作为氧化剂消除胆红素的干扰,具有较强的抗干扰能力,检测结果精度更高;另外,实施例4-6的精确度结果显示本申请实施例提供的尿酸冻干试剂球,可以通过微流控检测芯片利用便携式自动生化分析仪,实现了尿酸的体外即时诊断,且操作更加简便、结果更加准确。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
2.如权利要求1所述的尿酸检测冻干试剂球,其特征在于,所述试剂R1和试剂R2中的缓冲液包括:
N-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙磺酸(TAPS)缓冲液,4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸(HEPES)缓冲液,3-吗啉丙磺酸(MOPS)缓冲液和磷酸盐缓冲液中的一种或几种。
3.如权利要求1所述的尿酸检测冻干试剂球,其特征在于,所述试剂R1和试剂R2中的非离子表面活性剂包括:
吐温系列活性剂、司班系列活性剂和Triton系列活性剂中的一种或几种。
4.如权利要求1所述的尿酸检测冻干试剂球,其特征在于,所述试剂R1和试剂R2中的稳定剂包括:
蔗糖、果糖、甘油、牛血清白蛋白和脂肪醇聚氧乙烯醚中的一种或几种;
所述试剂R1和试剂R2中的赋形剂包括:
甘露醇、肌醇、PEG3350、PEG8000、葡聚糖1万、葡聚糖4万中的一种或几种。
5.如权利要求1所述的尿酸检测冻干试剂球,其特征在于,所述试剂R1和试剂R2的pH值范围为7.5-9.5。
6.如权利要求1所述的尿酸检测冻干试剂球,其特征在于,所述R2中的去胆红素干扰剂包括:亚铁氰化钾、高铁氰化钾和胆红素氧化酶中的一种或几种。
7.一种如权利要求1-6任一项所述的尿酸检测冻干试剂球的配置方法其特征在于,所述方法包括:
步骤一,配置试剂R1和试剂R2;
步骤二,将所述试剂R1和试剂R2通过定量控制滴珠点胶机滴在液氮中结成冰球;
步骤三,将步骤二制成的冰球置于真空冷冻干燥机中进行冻干;
步骤四,步骤三结束后,氮气复压,将冻干试剂球收集保存在干燥的铝瓶中备用,所述冻干试剂球的体积范围为2.5-3.5ul。
8.如权利要求7所述的尿酸检测冻干试剂球的配置方法,其特征在于,所述试剂R1的配置方法包括:
步骤一,在烧杯中加入蒸馏水;
步骤二,称取缓冲液成分加入步骤一的烧杯中;
步骤三,步骤二结束后,调节溶液的pH值;
步骤四,调节好pH后,继续加入4-氨基安替比林盐酸盐;
步骤五,加入4-氨基安替比林盐酸盐后,继续调节溶液pH值;
步骤六,步骤五结束后,继续往烧杯中依次加入赋形剂和稳定剂;
步骤七,赋形剂和稳定剂溶解完全后,再加入非离子表面活性剂;
步骤八,步骤七结束后,加入尿酸酶,过氧化物酶和抗坏血酸酶;
步骤九,通过以上步骤添加完所有试剂后,对溶液进行定容、摇匀备用。
9.如权利要求7所述的尿酸检测冻干试剂球的配置方法,其特征在于,所述试剂R2的配置方法包括:
步骤一,在烧杯中加入蒸馏水;
步骤二,称取缓冲液成分加入步骤一的烧杯中;
步骤三,步骤二结束后,调节溶液的pH值;
步骤四,调节好pH后,继续加入3,5-二氯-2-羟基苯磺酸钠和去胆红素干扰剂;
步骤五,加入3,5-二氯-2-羟基苯磺酸钠和去胆红素干扰剂后,继续调节溶液pH值;
步骤六,步骤五结束后,继续往烧杯中依次加入赋形剂和稳定剂;
步骤七,步骤六加入的赋形剂和稳定剂溶解完全后,再加入非离子表面活性剂;
步骤八,通过以上步骤添加完所有试剂后,对溶液进行定容、摇匀备用。
10.一种微流控检测芯片,其特征在于,所述微流控检测芯片内装有如权利要求1-9任一项所述的尿酸检测冻干试剂球。
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