CN104198473A

CN104198473A - 一种稳定的尿酸检测试剂盒

Info

Publication number: CN104198473A
Application number: CN201410401474.7A
Authority: CN
Inventors: 李伟奇; 李�杰; 房君江; 张秀文; 林清玉
Original assignee: SHANGHAI REIGNCOM BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: SHANGHAI REIGNCOM BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2014-08-14
Filing date: 2014-08-14
Publication date: 2014-12-10
Anticipated expiration: 2034-08-14
Also published as: CN104198473B

Abstract

本发明提供了一种稳定的尿酸检测试剂盒；由试剂R1及试剂R2组成，所述试剂R1的各组分为：缓冲液，乙二胺四乙酸二钠，乙酸镁四水，蔗糖，除干扰剂，色原，稳定剂，防腐剂，所述试剂R2的各组分为：缓冲液，乙二胺四乙酸二钠，4-氨基安替比林，过氧化物酶，尿酸酶，稳定剂，防腐剂。本发明利用尿酸酶还原尿酸的比色法来测定血尿酸含量，此法特异性强，灵敏度明显高于化学法，可以用于全自动生化仪，更适合临床使用。本发明在试剂中加入了除干扰剂，有效的去除了血清中抗坏血酸的干扰，使得结果更为准确。

Description

一种稳定的尿酸检测试剂盒

技术领域

本发明涉及医学免疫体外诊断领域，具体地，涉及一种稳定的尿酸检测试剂盒。

背景技术

生物细胞核中的遗传物质DNA(脱氧核糖核酸)和细胞质中RNA(核糖核酸)由几十万、几百万甚至几千万个核苷酸组成。反过来当核酸氧化分解后的产物之一就是嘌呤，所以说嘌呤是细胞的组成成分。体内的老旧细胞，还有食物，尤其是富含嘌呤的食物(如动物内脏、海鲜等)在体内新陈代谢过程中，其核酸氧化分解产物就有嘌呤(这种内源性的嘌呤占总嘌呤的80％)。体内产生嘌呤后，会在肝脏中再次氧化为(2，6，8--三氧嘌呤)又称为尿酸。2/3尿酸经肾脏随尿液排出体外，1/3通过粪便和汗液排出。可见，嘌呤是核酸的氧化分解的代谢产物，而尿酸是嘌呤的代谢最终产物，其中的嘌呤环没有解开。

正常情况下，体内的尿酸大约有1200毫克，每天新生成约600毫克，同时排泄掉600毫克，处于平衡的状态。但如果体内产生过多来不及排泄或者尿酸排泄机制退化，则体内尿酸滞留过多，当血液尿酸浓度大于7毫克/分升，导致人体体液变酸，影响人体细胞的正常功能，长期置之不理将会引发痛风。另外过于疲劳或是休息不足亦可导致代谢相对迟缓导致痛风发病。

血中尿酸全部从肾小球滤过，其中98％在近曲小管中段又被分泌到肾小球腔内，然后50％重吸收的尿酸在近曲小管中段又被分泌到肾小管腔内,在近曲小管直段又有40％～44％被重吸收，只有6％～10％尿酸排出。正常人体内尿酸的生成与排泄速度较恒定。体液中尿酸含量变化，可以充分反映出人体内代谢、免疫等机能的状况。

诊断方法：经典的血尿酸测定方法是化学法，即利用磷钨酸能被尿酸盐还原为蓝色的磷钨酸复合物这一原理，通过光电比色结果，来判断血尿酸含量。此法沿用已久，但特异性差，灵敏度欠佳。目前较为先进的血尿酸测定法是高压液相层析(HPL.C)和质谱法，此法灵敏度最高，特异性强，所得数值精确，但此法需要使用独立的仪器，操作较为繁琐。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明的目的是提供一种稳定的尿酸检测试剂盒。本发明利用尿酸酶还原尿酸的比色法来测定血尿酸含量，此法特异性强，灵敏度明显高于化学法，可以用于全自动生化仪，更适合临床使用。本发明在试剂中加入了除干扰剂，有效的去除了血清中抗坏血酸的干扰，使得结果更为准确。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明涉及一种稳定的尿酸检测试剂盒，由试剂R1及试剂R2组成，所述试剂R1的各组分及浓度为：

所述试剂R2的各组分及浓度为：

优选地，所述R1试剂的pH为6.0-8.0。

优选地，所述试剂R1中的缓冲液为甘氨酸缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸-NaOH缓冲液、HEPES缓冲液、Good’s缓冲液中的一种或几种。

优选地，所述试剂R1中的除干扰剂为抗坏血酸钠氧化酶、亚铁氰化钾、磷钼酸铵或乙二胺中的一种或几种。

优选地，所述试剂R1中的色原为TOOS、MEHA、TBHB中的一种或几种。

优选地，所述试剂R1中的稳定剂为牛血清白蛋白、海藻糖、蔗糖或螯合剂中的一种。

优选地，所述试剂R1中的防腐剂为叠氮钠或proclin 300。

优选地，所述试剂R2中的缓冲液PH为6.0-8.0，所述试剂R2中的缓冲液为甘氨酸缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸-NaOH缓冲液、HEPES缓冲液或Good’s缓冲液中的一种或几种，

优选地，所述试剂R2中的稳定剂为牛血清白蛋白、海藻糖、蔗糖或螯合剂中的一种。

优选地，所述试剂R2中的防腐剂为叠氮钠或proclin 300。

本发明试剂盒检测尿酸的反应原理为：第一反应：首先在除干扰剂的作用下，除去样本中的抗坏血酸；第二反应：然后尿酸在尿酸酶的作用下，生成过氧化氢；同时过氧化氢、4-氨基安替比林和色原在过氧化物酶的作用下，生成醌系有色素，最后通过比色测定尿酸的含量。

[第一反应]

[第二反应]

与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：

1、本发明不需要复杂的预处理及特殊仪器，试剂具有足够的稳定性及易于操作等优点；

2、本发明使用方便快捷，长期稳定，结果准确，成本低廉的尿酸检测试剂盒。

3、本发明在试剂中加入了除干扰剂，有效的去除了血清中抗坏血酸的干扰，使得结果更为准确，更能符合临床检验的要求。

附图说明

通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、目的和优点将会变得更明显：

图1为根据朗道标准品，定标UA试剂的定标曲线图，其中X轴表示UA的含量，Y轴表示吸光度。

图2为采用本发明试剂和贝克曼公司的UA试剂的相关性的对比图；其中X轴表示的是本发明试剂测定的病人血清结果，Y轴表示的是贝克曼公司试剂测定的病人血清结果，相关系数R²＝0.9986，回归方程为y＝1.051x-0.1919。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。

实施例1～3

本实施例1～3涉及一种稳定的尿酸检测试剂盒，由试剂R1及试剂R2组成，所述试剂R1、R2的各组分及浓度见表1所示：

表1

本发明实施例1-3描述的UA检测试剂盒，适用于各种类型的全自动生化仪，以日立7170全自动生化仪为例，其操作如表2。分析方法：两点终点法，即试剂R1、R2的用量分别为240ul和80ul，样本量5ul；240ul试剂R1加入5ul样本于37℃孵育5min后读取吸光度A1，加入80ulR2，反应5分钟后，读取吸光度A2；检测波长分别为主波长600nm、副波长800nm。

采用本试剂及上述测定方法，采用日立7170生化分析仪测得的UA标准品(自朗道)的曲线(如图1所示)，其中X轴表示UA含量(μ mol/L)；Y轴表示吸光度。

表2

相关性试验

使用本法发明试剂(具体配方同实施例1)和贝克曼公司的UA试剂，采用自动7170全自动生化分析仪对50份人血清(包括正常和异常标本)按各自参数同时进行测定，对测定值进行相关性分析。按照与上述“UA测定方法”中的参数进行测定。测定结果见图2，X，Y轴均为测定值(UA的含量μ mol/L)，

由图2的结果看出，两种试剂的相关系为R²＝0.9986，回归方程为y＝1.051x-0.1919。结果表明本试剂与进口试剂测定病人血清相关性良好，具有很好的特异性和准确性。

此外，以上实验是采用日立公司制造的7170全自动生化仪进行的，但本发明的试剂不限于上述仪器，还适用于其他全自动或半自动生化分析仪。

准确度和精密度试验

本实验目的是检测试剂的稳定性。

采用实验例1试剂、对照试剂、标准品、质控品。

机器：日立7170自动生化分析仪。

操作步骤：使用标准品定标，测定各质控10次。

结果解析：根据检测数据，计算测试均值、SD、CV和相对偏差。

表3结果显示，本发明试剂与各质控偏差均小于2％，准确度非常好。测定10次同个样本的CV值均小于1％，表明试剂精密度良好。

表3

	低值质控	中值质控
			1	332.02	558.62
2	333.05	557.54
			3	332.41	558.16
4	334.11	557.55
			5	332.68	556.37
6	333.17	555.44
			7	332.68	556.36
8	334.03	556.18
			9	333.75	557.36
10	333.63	558.43
			平均值	333.15	557.20
SD	0.71	1.07
			CV	0.21％	0.19％
靶值	330.00	550.00
			相对偏差	0.96％	1.31％

线性实验

本实验目的是检测试剂线性范围。

采用实验例1试剂、对照试剂、标准品、空白溶液、高浓度尿酸样品。

机器：日立7170自动生化分析仪。

操作步骤：以空白溶液作为稀释液，按1/5、2/5、3/5、4/5、5/5(原倍)稀释，测定各样本3次。测定空白溶液20次。

结果解析：计算测定20次空白溶液结果的均值与标准差SD。以空白均值加两倍标准差作为最低检测限结果(X+2SD)。计算各稀释样本测定结果均值，作图得线性方程，r值及各浓度偏差。

表4、5结果表示，本发明试剂最低检测线可达到2μ mol/L以下，高值浓度在2000以上时，检测结果仍能保持准确。结合2个表中的结果，本发明试剂线性范围可达到2-2000μ mol/L，线性范围很宽。

表4

次数	浓度	次数	浓度	次数	浓度
						1	0.82	8	0.51	15	0.82
2	0.82	9	0.55	16	1.11
						3	0.82	10	0.82	17	0.82
4	0.82	11	0.82	18	0.82
						5	1.65	12	1.65	19	1.65
6	0.82	13	1.65	20	0.82
						7	0.82	14	0.82
均值	0.97	SD	0.37	X+2SD	1.70

表5

以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改，这并不影响本发明的实质内容。

Claims

1.一种稳定的尿酸检测试剂盒，其特征在于，由试剂R1及试剂R2组成，所述试剂R1的各组分及浓度为：

所述试剂R2的各组分及浓度为：

2.如权利要求1所述的稳定的尿酸检测试剂盒，其特征在于，所述R1试剂的pH为6.0-8.0。

3.如权利要求1所述的稳定的尿酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的缓冲液为甘氨酸缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸-NaOH缓冲液、HEPES缓冲液、Good’s缓冲液中的一种或几种。

4.如权利要求1所述的稳定的尿酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的除干扰剂为抗坏血酸钠氧化酶、亚铁氰化钾、磷钼酸铵或乙二胺中的一种或几种。

5.如权利要求1所述的稳定的尿酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的色原为TOOS、MEHA、TBHB中的一种或几种。

6.如权利要求1所述的稳定的尿酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的稳定剂为牛血清白蛋白、海藻糖、蔗糖或螯合剂中的一种。

7.如权利要求1所述的稳定的尿酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的防腐剂为叠氮钠或proclin 300。

8.如权利要求1所述的稳定的尿酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中的缓冲液pH为6.0-8.0，所述试剂R2中的缓冲液为甘氨酸缓冲液、Tris缓冲液、甘氨酸-NaOH缓冲液、HEPES缓冲液或Good’s缓冲液中的一种或几种。

9.如权利要求1所述的稳定的尿酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中的稳定剂为牛血清白蛋白、海藻糖、蔗糖或螯合剂中的一种。

10.如权利要求1所述的稳定的尿酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中的防腐剂为叠氮钠或proclin 300。