CN115201186A - 一种检测唾液尿酸的检测试纸条及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种检测唾液尿酸的检测试纸条及制备方法，检测试纸条包括基板、滤纸以及多孔聚合物薄膜。滤纸与基板粘合，多孔聚合物薄膜覆盖在滤纸上。滤纸上载有缓冲盐、尿酸酶、辣根过氧化物酶、4‑氨基安替比林、显色剂、抗干扰剂、反应促进剂以及表面活性剂，显色剂为N‑乙基‑N‑(2‑羟基‑3‑磺丙基)‑3‑甲基苯胺钠盐或者3,5二氯‑2‑羟苯磺酸。上述检测试纸条的检测结果准确性高、重复性好、线性范围宽、灵敏度以及精密度高，特异性强，稳定性好，能够长时间保存，方便在专用的全自动分析仪上检测，实现唾液尿酸的定量检测。除唾液尿酸外，本发明的检测试纸条也可以应用于其他尿酸样本的检测，适用范围广，能够应用于各级医院、卫生预防部门和医学生物科研单位。

Description

一种检测唾液尿酸的检测试纸条及制备方法

技术领域

本发明涉及尿酸检测技术领域，具体涉及一种检测唾液尿酸的检测试纸条及制备方法。

背景技术

尿酸是嘌呤代谢的终末产物，是血液中重要的抗氧化剂。血清尿酸监测在痛风和高尿酸血症人群的达标治疗中的应用价值极高，极大地提高了患者最终的尿酸达标率及治疗效果。然而，在对高尿酸血症患者进行尿酸监测的过程中，频繁采血会给部分患者造成很大的负担，同时静脉采血或者反复针刺也会增加感染风险。

唾液是由唾液腺分泌的混合液，与其他体液如血液尿液等样品一样，内含物极为丰富，与血液中的相应成分关系密切。研究发现，唾液尿酸和血清尿酸有很好的相关性，因此测定唾液中的尿酸能够反映出血中尿酸的浓度。近年来，越来越多的研究发现，唾液尿酸对青少年高血压、青少年肥胖、子痫前期等疾病额发病有很好的预测价值。

目前，临床上检测尿酸的方法是基于分光光度法、荧光分析法、气相色谱法和高效液相色谱法。上述临床常用的如分光光度法等，这些技术大多复杂、耗时，并且需要昂贵的设备，因此不适合便捷快速出具结果。近年来，国内外学者发明了几种可快速检测出唾液尿酸的新的电化学方法。

电化学方法具有检测时间短、成本低、所需样品少等优点，是生理分析中快速定量的有效方法。Huang等开发的纸基分析装置及Shi等制备的一次性使用的尿酸生物传感器，均可用于直接检测人唾液中的尿酸，具有灵敏度高、线性范围宽的优点。Kim等发明的护齿器则可实时、连续监测唾液尿酸水平，并将信息传回。然而，这些设备虽然使得唾液尿酸的测定越来越快速、准确，但是还不够简便、经济。

公开号为CN 108593633 A的发明申请提供了一种检测试纸，其优点是简便、经济，但是只能出具半定量检测结果，无法和自动分析仪器等进行共同检测以获得精确的检测数据。

因此，需要提供一种既简便经济，能够快速准确地检测唾液尿酸含量，又能够与自动分析仪器共同使用，快速出具较为准确的定量检测结果的唾液尿酸检测试纸条。

发明内容

(一)要解决的技术问题

为了解决现有技术中存在的唾液尿酸检测复杂、耗时、不够经济简便、只能获得半定量的检测结果的问题，本发明提供一种检测唾液尿酸的检测试纸条及制备方法。

(二)技术方案

为了达到上述目的，本发明采用的主要技术方案包括：

一种检测唾液尿酸的检测试纸条，包括基板、滤纸以及多孔聚合物薄膜；

所述滤纸与所述基板粘合，所述多孔聚合物薄膜覆盖在所述滤纸表面；

所述滤纸上载有缓冲盐、尿酸酶、辣根过氧化物酶、4-氨基安替比林、显色剂、抗干扰剂、反应促进剂以及表面活性剂；

所述显色剂为N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐或者3,5二氯-2-羟苯磺酸。

如上所述的检测试纸条，优选地，所述抗干扰剂包括金属离子络合剂、抗坏血酸氧化酶以及胆红素氧化酶；

所述金属离子络合剂包括乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸钠、乙二胺四乙酸钾中的一种或几种。

如上所述的检测试纸条，优选地，所述反应促进剂为亚铁氰化钾、亚铁氰化钠中的一种或两种。

如上所述的检测试纸条，优选地，所述表面活性剂为TritonX-100、Tween20、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或几种。

如上所述的检测试纸条，优选地，所述多孔聚合物薄膜的孔径密度为100-300目；

所述多孔聚合物薄膜为多孔聚合物薄膜或者醋酸纤维素薄膜。

本发明还提供一种上述检测试纸条的制备方法，包括如下步骤：

S1：将磷酸盐缓冲液、4-氨基安替比林以及显色剂配制成pH为7-8的A溶液；所述显色剂为N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐或者3,5二氯-2-羟苯磺酸；

S2、将磷酸盐缓冲液、金属离子络合剂、反应促进剂、辣根过氧化物酶、尿酸酶、抗坏血酸氧化酶、胆红素氧化酶以及表面活性剂配制成pH为7-8的B溶液；

S3：将滤纸浸入A溶液中，待滤纸均匀浸润后取出烘干，然后将其浸入B溶液中，待滤纸均匀浸润后取出烘干；

S4：对多孔聚合物薄膜进行预处理；

S5：将步骤S3得到的分别浸润过A溶液以及B溶液的干燥滤纸粘贴在基板上，然后将经过预处理的多孔聚合物薄膜覆盖在滤纸上。

如上所述的检测试纸条的制备方法，优选地，步骤S1中，A溶液中，磷酸盐缓冲液的浓度为0.05M-0.2M，4-氨基安替比林的质量分数为0.05％-0.2％，显色剂的质量分数为0.1％-0.5％。

如上所述的检测试纸条的制备方法，优选地，步骤S2中，B溶液中，磷酸盐缓冲液的浓度为0.05M-0.2M，金属离子络合剂的质量分数为0.05％-0.8％，反应促进剂的质量分数为0.01％-0.05％，辣根过氧化物酶的浓度为50KU/L-100KU/L，尿酸酶的浓度为3KU/L-10KU/L，抗坏血酸氧化酶的浓度为2KU/L-5KU/L，胆红素氧化酶的浓度为0.2KU/L-1KU/L，表面活性剂的质量分数为0.1％-0.5％。

如上所述的检测试纸条的制备方法，优选地，步骤S3中，滤纸从A溶液中取出后，置于40-60℃的电热鼓风干燥箱中干燥处理50-70min；滤纸从B溶液中取出后，置于40-60℃的电热鼓风干燥箱中干燥处理50-70min。

如上所述的检测试纸条的制备方法，优选地，步骤S4中，将多孔聚合物薄膜浸入C溶液中，待多孔聚合物薄膜均匀浸润后取出，置于40-60℃的电热鼓风干燥箱中干燥50-70min；所述多孔聚合物薄膜的孔径密度为100-300目；

所述C溶液中，聚乙烯醇的质量分数为0.01％-0.1％，聚乙烯吡咯烷酮的质量分数为0.05％-0.2％。

(三)有益效果

本发明的检测试纸条，通过对显色剂进行改进，使得唾液中的尿酸能够和试纸条快速反应，提高了检测速度。

本发明将多孔聚合物薄膜覆盖在滤纸的表面，使滤纸与尿酸反应后得到的颜色能够均匀融合在多孔聚合物薄膜上，由于多孔聚合物薄膜的表面平整度和均匀性远好于表面凸凹不平的滤纸，因此本发明的检测试纸条能够与自动分析仪器结合使用，多孔聚合物薄膜融合的颜色很容易被自动分析仪捕捉，并且得到的检测结果较为准确，具有较高的灵敏度，能够快速出具较为准确的定量分析结果。

另外，本发明还通过金属离子络合剂避免金属离子对试纸条的测试准确程度造成影响，通过胆红素氧化酶减少胆红素对测试结果的干扰，通过抗坏血酸氧化酶降低维生素C的干扰。

实验表明，本发明的检测试纸条的检测结果准确性高、重复性好、线性范围宽、灵敏度以及精密度高，特异性强，稳定性好，能够长时间保存，方便在专用的全自动分析仪上检测，实现唾液尿酸的定量检测。除唾液尿酸外，本发明的检测试纸条也可以应用于其他尿酸样本的检测，适用范围广，便于推广使用，能够做到人机分离，提高工作效率，可广泛应用于各级医院、卫生预防部门和医学生物科研单位。

具体实施方式

为了更好的解释本发明，以便于理解，下面结合具体实施方式，对本发明作详细描述。

现有技术中，检测试纸只能和标准比色卡进行对比，根据试纸条的颜色深浅程度判断尿酸的大致浓度范围，出具半定量检测结果。试纸条为滤纸材质，滤纸的制备工艺决定了滤纸表面凸凹不平，而全自动分析仪器通过颜色分辨进行浓度分析，表面不平整的试纸条的反射光或者灰度不均匀，会影响全自动分析仪器的判断结果，导致检测数值与实际值存在较大偏差，因此现有技术中的试纸条很难和全自动分析仪器联合使用以获取尿酸的定量检测结果。

本发明提供一种检测唾液尿酸的检测试纸条，包括基板、滤纸以及多孔聚合物薄膜。滤纸与基板粘合，多孔聚合物薄膜覆盖在滤纸表面。

滤纸上载有缓冲盐、尿酸酶、辣根过氧化物酶、4-氨基安替比林、显色剂、抗干扰剂、反应促进剂以及表面活性剂。

上述显色剂为N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐或者3,5二氯-2-羟苯磺酸。本发明通过对显色剂进行改进，使得唾液中的尿酸能够和试纸条快速反应，提高了检测速度。

本发明中的显色原理为偶联显色反应，具体为：尿酸和氧气以及水在尿酸酶的作用下生成过氧化氢，过氧化氢在辣根过氧化物酶的作用下使得4-氨基安替比林与显色剂缩合，生成红色醌类化合物作为色源。

本发明将多孔聚合物薄膜覆盖在滤纸的表面，使滤纸与尿酸反应后得到的色源能够均匀融合在多孔聚合物薄膜上，由于多孔聚合物薄膜的表面平整度和均匀性较好，因此本发明的检测试纸条能够与自动分析仪器结合使用，多孔聚合物薄膜融合的颜色很容易被自动分析仪捕捉，并且得到的检测结果较为准确，具有较高的灵敏度，能够快速出具较为准确的定量分析结果。

上述抗干扰剂包括金属离子络合剂、抗坏血酸氧化酶以及胆红素氧化酶。其中金属离子络合剂包括乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸钠、乙二胺四乙酸钾中的一种或几种，用于和检测样本中存在的金属离子进行络合反应，避免金属离子抑制滤纸上的酶的活性。偶联显色过程中发生的是氧化反应，维生素C作为还原剂，检测样本中维生素C含量过多可能会将产生的氧化物进行还原，导致不显色，影响尿酸检测结果的判断。为此，本发明通过抗坏血酸氧化酶消耗检测样本中可能存在的维生素C，保证检测结果具有较高的准确性。胆红素本身有颜色，会与产生的色源叠加在一起影响检测结果，因此，本发明通过胆红素氧化酶消除样本中可能存在的胆红素，以保证检测结果的准确性。

上述反应促进剂为亚铁氰化钾、亚铁氰化钠中的一种或两种。人体体液中的尿酸含量往往较低，本发明中，反应促进剂的作用包括：首先加快显色反应的速度，增强显色效果，其次使得色源的颜色进一步加深，提高检测的灵敏度。

上述表面活性剂为TritonX-100、Tween20、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或几种。本发明中，表面活性剂用于增加显色反应的均匀度，以及显色的亮度，达到增色效果。

优选地，本发明中所使用的多孔聚合物薄膜的孔径密度为100-300目，多孔聚合物薄膜为多孔聚合物薄膜或者醋酸纤维素薄膜。

另一方面，本发明还提供上述检测试纸条的制备方法，包括如下步骤：

S1：将磷酸盐缓冲液、4-氨基安替比林以及显色剂配制成pH为7-8的A溶液，其中显色剂为N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐或者3,5二氯-2-羟苯磺酸。

S2、将磷酸盐缓冲液、金属离子络合剂、反应促进剂、辣根过氧化物酶、尿酸酶、抗坏血酸氧化酶、胆红素氧化酶以及表面活性剂配制成pH为7-8的B溶液。

S3：将滤纸浸入A溶液中，待滤纸均匀浸润后取出烘干，然后将其浸入B溶液中，待滤纸均匀浸润后取出烘干。

S4：对多孔聚合物薄膜进行预处理，以增加多孔聚合物薄膜和滤纸的粘合力。

S5：将步骤S3得到的分别浸润过A溶液以及B溶液的干燥滤纸粘贴在基板上，然后将经过预处理的多孔聚合物薄膜覆盖在滤纸上。

步骤S1以及步骤S2中，A溶液和B溶液分别配制并分别保存的原因在于：A溶液和B溶液混合后，在阳光照射等条件下，可能会自我偶联，造成自显色，影响试纸条的检测准确性以及有效期限。因此需要分别制备A溶液和B溶液组分，并分别将滤纸浸入A溶液以及B溶液中，然后分别烘干，以保证滤纸上的各种试剂成分在干燥状态下不发生自我偶联反应，能够维持较长的保存期限。

酶促反应需要在固定的pH值范围内进行以保证稳定性，另外，人的体液的酸碱度也存在一定程度的差别，因此检测过程中不同的样本也有可能导致反应速度有所差别。因此，上述步骤S1以及步骤S2中，均使用磷酸盐缓冲液将整个反应体系的pH维持在7-8，保证试纸条在偶联显色过程中具有均匀的反应速度，具有较好的稳定性。

优选地，A溶液中，磷酸盐缓冲液的浓度为0.05M-0.2M，4-氨基安替比林的质量分数为0.05％-0.2％，显色剂的质量分数为0.1％-0.5％。B溶液中，磷酸盐缓冲液的浓度为0.05M-0.2M，金属离子络合剂的质量分数为0.05％-0.8％，反应促进剂的质量分数为0.01％-0.05％，辣根过氧化物酶的浓度为50KU/L-100KU/L，尿酸酶的浓度为3KU/L-10KU/L，抗坏血酸氧化酶的浓度为2KU/L-5KU/L，胆红素氧化酶的浓度为0.2KU/L-1KU/L，表面活性剂的质量分数为0.1％-0.5％。

优选地，步骤S3中，滤纸从A溶液中取出后，置于40-60℃的电热鼓风干燥箱中干燥处理50-70min；滤纸从B溶液中取出后，置于40-60℃的电热鼓风干燥箱中干燥处理50-70min。

步骤S4中，将多孔聚合物薄膜浸入C溶液中，待多孔聚合物薄膜均匀浸润后取出，置于40-60℃的电热鼓风干燥箱中干燥50-70min。多孔聚合物薄膜的孔径密度优选为100-300目。C溶液中，聚乙烯醇的质量分数为0.01％-0.1％，聚乙烯吡咯烷酮的质量分数为0.05％-0.2％。本发明中，尼龙预处理的目的是使多孔聚合物薄膜和滤纸之间的粘合力更好，并且使多孔聚合物薄膜的表面更加平整。

为了进一步明确本发明方案及其技术进步性，以下结合具体实施例和技术效果进行说明。

实施例1

本实施例提供一种检测唾液尿酸的检测试纸条的制备方法，包括如下步骤：

S1：配制磷酸盐缓冲液的浓度为0.15M、4-氨基安替比林的质量分数为0.1％、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐的质量分数为0.2％、pH值为7.5的A溶液，备用。

S2：配制磷酸盐缓冲液的浓度为0.15M、乙二胺四乙酸二钠的质量分数为0.4％、亚铁氰化钾的质量分数为0.02％、辣根过氧化物酶的浓度为50KU/L、尿酸酶浓度为5KU/L、抗坏血酸氧化酶浓度为2KU/L、胆红素氧化酶浓度为0.2KU/L、TritonX-100的浓度为0.1％、pH值为7.5的B溶液，备用。

S3：将滤纸浸入A溶液中，待A溶液浸染均匀后取出滤纸，并将其置于50℃电热鼓风干燥箱中干燥60分钟。然后将烘干的滤纸浸入B溶液中，待B溶液浸染均匀后取出，置于50℃电热鼓风干燥箱中干燥60分钟。

S4、尼龙膜的预处理：配制聚乙烯醇质量分数为0.04％、聚乙烯吡咯烷酮的质量分数为0.05％的C溶液。将尼龙膜浸入C溶液中，待C溶液浸染均匀后取出，置于50℃电热鼓风干燥箱中干燥60分钟。

S5、组装：把干燥的滤纸裁切为合适大小，粘贴于基板上，然后将经过预处理的尼龙膜裁切成合适的大小，覆于上述滤纸上。

实施例2

本实施例提供一种检测唾液尿酸的检测试纸条的制备方法，与实施例1的区别在于，A溶液以及B溶液中，磷酸盐缓冲液的浓度为0.2M，显色剂为3,5二氯-2-羟苯磺酸，其质量分数为0.3％，乙二胺四乙酸钠的质量分数为0.2％，B溶液中，表面活性剂为Tween20，其质量分数为0.15％。

实施例3

本实施例提供一种检测唾液尿酸的检测试纸条的制备方法，与实施例1的区别在于，A溶液以及B溶液中，磷酸盐缓冲液的浓度为0.2M，4-氨基安替比林的质量分数为0.2％，N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐的质量分数为0.4％，乙二胺四乙酸钠的质量分数为0.8％，亚铁氰化钾的质量分数为0.04％，辣根过氧化物酶的浓度为100KU/L、尿酸酶浓度为10KU/L、抗坏血酸氧化酶浓度为4KU/L、胆红素氧化酶浓度为0.4KU/L、TritonX-100的质量分数为0.2％。

实施例4-5

实施例4-5是在实施例1的基础上，将A溶液以及B溶液中磷酸盐缓冲液的浓度分别设置为0.05M以及0.2M。

实施例6-7

实施例6-7是在实施例1的基础上，将N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐的质量分数分别设置为0.1％以及0.5％。

实施例8-9

实施例8-9是在实施例1的基础上，将胆红素氧化酶的浓度分别设置为0.5KU/L以及1.0KU/L。

实施例10-11

实施例10-11是在实施例1的基础上，将亚铁氰化钾的质量分数分别设置为0.01％以及0.05％。

实施例12-14

实施例12-14是在实施例1的基础上，以3,5二氯-2-羟苯磺酸为显色剂，其质量分数分别设置为0.1％、0.2％以及0.5％。

对比例1-2

对比例1-2是在实施例1的基础上，将A溶液以及B溶液中磷酸盐缓冲液的浓度分别设置为0.02M以及0.25M。

对比例3-4

对比例3-4是在实施例1的基础上，将N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐的质量分数分别设置为0.05％以及0.8％。

对比例5

对比例5是在实施例1的基础上，将胆红素氧化酶的浓度设置为0.1KU/L。

对比例6-7

对比例6-7是在实施例1的基础上，将亚铁氰化钾的质量分数分别设置为0.005％以及0.1％。

对比例8-9

对比例8-9是在实施例1的基础上，将3,5二氯-2-羟苯磺酸的质量分数分别为0.05％以及0.8％。

评价测试：

①：采用实施例1得到的检测试纸条进行尿酸的半定量检测，具体地，配制浓度为800μmol/L的尿酸标准溶液，并梯度稀释成0μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L以及800μmol/L共7个浓度。

取上述各个浓度的标准尿酸溶液30μL，分别滴加到实施例1-14所得的检测试纸条上，反应90秒后进行观察，能够肉眼观察到上述实施例制备得到的试纸条都按照标准尿酸溶液由低到高的浓度呈现出由无色到紫红色的明显色阶。因此，本发明的检测试纸条能够较好地用于尿酸的半定量检测。

②：将实施例1制备得到的唾液尿酸检测试纸条与专用全自动分析仪联合使用。具体地，将实施例1的试纸条装入专用卡壳和卡盒中，置于专用全自动分析仪的试剂卡仓中，然后以评价测试①中浓度分别为0μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L以及800μmol/L的标准尿酸溶液作为样本，样本量为30μl，滴加至试纸条上，反应90秒。

将上述滴加标准液的试纸条样本分别置于全自动分析仪的样本盘中，通过全自动分析仪逐一检测色度，绘制定标曲线。

得到定标曲线后，在具体测试某唾液样本时，将样本置于全自动分析仪的样本盘中，样本与试纸条接触进行检测，待检测结束后，仪器根据定标曲线自动计算出所测样本中尿酸的浓度。

为了验证试纸条与全自动分析仪联合使用时所出具的定量分析结果的准确度，本实施例还自制浓度分别为25μmol/L、100μmol/L、400μmol/L的标准尿酸溶液，并将其作为样本，采用上述试纸条与全自动分析仪结合的方法3次重复测定每种样本的尿酸浓度，并计算检测值与理论值的相对偏差，具体结果参见表1。

表1试纸条与全自动分析仪联合使用时的测试值与理论值对比

通过表1可知，经过多次测定，得到的相对偏差均小于标准要求的10％，因此本发明的试纸条能够和全自动分析仪结合使用，且具有高准确度。

③：对评价测试②中唾液尿酸检测试纸条与专用全自动分析仪共同使用检测尿酸浓度的方法的精密度进行分析。

具体地，以评价测试②中的标定曲线为校准曲线，以任意的唾液样品作为待测样品，对同一待测样品重复检测10次，检测结果如表2所示。

表2检测样品中的尿酸浓度及标准差率

通过表2可知，重复检测10次中，标准差率为3.21％，小于标准要求的10％，因此本发明的试纸条和全自动分析仪结合使用时具有高精密度。

④：对评价测试②中的唾液尿酸检测试纸条与专用全自动分析仪共同使用检测尿酸浓度的方法进行线性分析：

具体地，将浓度为800μmol/L的高尿酸样品分别稀释为7个不同的浓度，依次为0μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L以及800μmol/L。

采用评价测试②中的唾液尿酸检测试纸条与专用全自动分析仪共同使用检测尿酸浓度的方法对上述每种浓度的样品进行2次检测，并计算相关系数R值，具体结果见表3。

表3不同浓度标准尿酸溶液的检测值、平均值及R值

通过表3可知，根据尿酸溶液的检测值、理论值以及平均值计算得到的R值为0.999，大于0.995，接近于1，表明上述试纸条与专用全自动分析仪共同使用以定量检测尿酸浓度的检测方法在0μmol/L-800μmol/L的范围内具有良好的线性度。

⑤：对评价测试②中的唾液尿酸检测试纸条与专用全自动分析仪共同使用检测尿酸浓度的方法的抗干扰能力(特异性)进行测试，具体包括对胆红素的抗干扰能力测试以及对维生素C的抗干扰能力测试。

(1)抗胆红素干扰测试：

采用评价测试②中的唾液尿酸检测试纸条与专用全自动分析仪共同使用检测尿酸浓度的方法，对胆红素浓度分别为0μmol/L、128.25μmol/L、256.5μmol/L、513μmol/L以及1026μmol/L的尿酸溶液分别进行3次尿酸浓度的定量检测，记录每次检测得到的结果，计算尿酸检测的平均值以及样本标准差S，然后计算d_obs以及d_c。其中，当d_obs小于或等于d_c时，不拒绝无效假设，即认为胆红素不是干扰物质，对应浓度的胆红素在检测过程中不影响试纸条对尿酸浓度的检测；当d_obs大于d_c时，拒绝无效假设，接受备择假设，即认为检测物质是干扰物质，对应浓度的胆红素在检测过程中会影响试纸条对尿酸浓度的检测。

表4胆红素存在时的尿酸检测结果

(2)抗维生素C干扰测试：

采用评价测试②中的唾液尿酸检测试纸条与专用全自动分析仪共同使用检测尿酸浓度的方法，对维生素C浓度分别为0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、150μmol/L以及200μmol/L的尿酸溶液分别进行3次尿酸浓度的定量检测，记录每次检测得到的结果，计算尿酸检测的平均值以及样本标准差S，然后计算d_obs以及d_c。其中，当d_obs小于或等于d_c时，不拒绝无效假设，即认为维生素C不是干扰物质，对应浓度的维生素C在检测过程中不影响试纸条对尿酸浓度的检测；当d_obs大于d_c时，拒绝无效假设，接受备择假设，即认为检测物质是干扰物质，对应浓度的维生素C在检测过程中会影响试纸条对尿酸浓度的检测。

表5维生素C存在时的尿酸检测结果

通过表4以及表5可知，当胆红素浓度达到1026μmol/L时，会对尿酸测定结果产生影响，当维生素C浓度达到200μmol/L时，会对尿酸测定结果产生影响。因此，实际应用过程中，本发明的检测试纸条所检测的样本中的胆红素浓度需要保持在1026μmol/L以下，维生素C的浓度应该保持在200μmol/L以下。

⑥：分别配制浓度为0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L以及800μmol/L的尿酸标准溶液作为线性样本，将上述各个线性样本分别滴加在实施例1、实施例4、实施例5、对比例1以及对比例2制备得到的具有不同浓度磷酸盐缓冲液的试纸条上，然后将试纸条放置在专用自动分析仪中，检测其反射率，自动分析仪将反射率以电压信号的形式输出，记录每张试纸条对应的电压数值(单位为V)，具体参见表6以及表7。

表6实施例1、4、5中不同磷酸盐浓度试纸条对应的电压值

表7对比例1、2中不同磷酸盐浓度试纸条对应的电压值

需要说明的是，自动分析仪中读取的电压值是由反射率转化而来，当试纸条的颜色越深，反射率就越高，对应得到的电压越低，即电压值与反射率成反比，也就是与试纸条的颜色深浅程度成反比。在同一批线性样本中，所得的电压值的范围(最高电压值和最低电压值的差值)越宽，代表试纸条的显色深浅程度差别越大，线性度越宽，越容易被自动分析仪识别分辨出来，检测效果越好。

因此，通过表6可知，采用0.15M磷酸盐缓冲液制备的试纸测试条的线性样本的线性范围最宽，采用0.05M和0.2M的磷酸盐缓冲液制备的试纸条的线性范围较宽，能够得到较好的检测结果。

通过表7可知，磷酸盐缓冲液浓度为0.02M时，含量过低，可能不足以维持反应体系的pH值的稳定性，而磷酸盐缓冲液浓度为0.25M时，含量过高，过多的磷酸盐可能影响了部分酶的活性，影响分辨效果和检测效果。

⑦：分别配制浓度为0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L以及800μmol/L的尿酸溶液作为线性样本，将上述各个线性样本分别滴加在实施例1、实施例6、实施例7、对比例3以及对比例4制备得到的具有不同浓度显色剂的试纸条上，然后将试纸条放置在专用自动分析仪中，检测其反射率，自动分析仪将反射率以电压信号的形式输出，记录每张试纸条对应的电压数值(单位为V)，具体参见表8以及表9。

表8实施例1、6、7中不同显色剂浓度试纸条对应的电压值

表9对比例3、4中不同显色剂浓度试纸条对应的电压值

通过表8以及表9的检测结果可知，采用质量分数为0.2％N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐制备的试纸测试条的线性范围最宽，采用质量分数为0.1％以及0.5％的N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐制备的试纸条的线性范围较宽，能够得到较好的检测结果。超出该范围后，例如质量分数分别为0.05％以及0.8％时，显色剂添加量过少或者过多，整体颜色范围较窄，分辨率不高。

⑧：配制尿酸浓度为200μmol/L、胆红素浓度为300μmol/L的尿酸溶液作为样本，将上述样本分别滴加在实施例1、实施例8、实施例9以及对比例5制备得到的具有不同浓度胆红素氧化酶的试纸条上，然后将试纸条放置在专用自动分析仪中，检测尿酸含量并进行记录，具体参见表10。

表10实施例及对比例中不同浓度的胆红素氧化酶的试纸条的尿酸检测结果

通过表10可知，胆红素氧化酶浓度在0.2-1.0KU/L时，所得的试纸条对胆红素的抗干扰效果较好，并且随着胆红素氧化酶浓度的增加，抗干扰结果达到平衡。而当胆红素氧化酶浓度低于0.2KU/L，例如0.1KU/L时，胆红素的干扰明显，检测结果与实际值偏差较大。

⑨：分别配制浓度为0μmol/L、100μmol/L、300μmol/L、以及500μmol/L的尿酸溶液作为线性样本，将上述各个线性样本分别滴加在实施例1、实施例10、实施例11、对比例6以及对比例7制备得到的具有不同浓度反应促进剂的试纸条上，然后将试纸条放置在专用自动分析仪中，检测其在不同时间点时的反射率，自动分析仪将反射率以电压信号的形式输出，记录每张试纸条对应的电压数值(单位为V)，具体参见表11以及表12。

表11实施例1、10、11中不同反应促进剂浓度试纸条在不同时间点的电压值

表12对比例6、7中不同反应促进剂浓度试纸条在不同时间点的电压值

通过表11以及表12可知，反应促进剂对试纸条的反应时间有影响，在3min的反应时间下，反应促进剂为0.01％-0.05％时，试纸条的线性范围较宽，能够得到较好的检测结果。超出该范围后，反应促进剂的含量过高或者过低，导致试纸条的颜色过浅或者过深，整体颜色范围较窄，线性相关性不好，分辨率不高。

⑩：分别配制浓度为0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L以及800μmol/L的尿酸溶液作为线性样本，将上述各个线性样本分别滴加在实施例12、实施例13、实施例14、对比例8以及对比例9制备得到的具有不同浓度显色剂(3,5二氯-2-羟苯磺酸，简称DHBS)的试纸条上，然后将试纸条放置在专用自动分析仪中，检测其反射率，自动分析仪将反射率以电压信号的形式输出，记录每张试纸条对应的电压数值(单位为V)，具体参见表13以及表14。

表13实施例12、13、14中不同显色剂浓度试纸条对应的电压值

表14对比例8、9中不同显色剂浓度试纸条对应的电压值

通过表13以及表14的检测结果可知，采用质量分数为0.2％的3,5二氯-2-羟苯磺酸制备的试纸测试条的线性范围最宽，采用质量分数为0.1％以及0.5％的3,5二氯-2-羟苯磺酸制备的试纸条的线性范围较宽，能够得到较好的检测结果。超出该范围后，例如质量分数分别为0.05％时，显色剂添加量过少，整体颜色范围较窄，分辨率不高；而质量分数为0.8％时，结果与含量为0.5％的结果差异不明显，基于成本考虑，DHBS用量上限优选0.5％。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (10)

1.一种检测唾液尿酸的检测试纸条，其特征在于，包括基板、滤纸以及多孔聚合物薄膜；

所述滤纸与所述基板粘合，所述多孔聚合物薄膜覆盖在所述滤纸表面；

所述滤纸上载有缓冲盐、尿酸酶、辣根过氧化物酶、4-氨基安替比林、显色剂、抗干扰剂、反应促进剂以及表面活性剂；

所述显色剂为N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐或者3,5二氯-2-羟苯磺酸。

2.根据权利要求1所述的检测试纸条，其特征在于，所述抗干扰剂包括金属离子络合剂、抗坏血酸氧化酶以及胆红素氧化酶；

所述金属离子络合剂包括乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸钠、乙二胺四乙酸钾中的一种或几种。

3.根据权利要求1所述的检测试纸条，其特征在于，所述反应促进剂为亚铁氰化钾、亚铁氰化钠中的一种或两种。

4.根据权利要求1所述的检测试纸条，其特征在于，所述表面活性剂为TritonX-100、Tween20、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮中的一种或几种。

5.根据权利要求1所述的检测试纸条，其特征在于，所述多孔聚合物薄膜的孔径密度为100-300目；

所述多孔聚合物薄膜为尼龙膜或者醋酸纤维素薄膜。

6.一种权利要求1-5任一项所述的检测试纸条的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1：将磷酸盐缓冲液、4-氨基安替比林以及显色剂配制成pH为7-8的A溶液；所述显色剂为N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐或者3,5二氯-2-羟苯磺酸；

S2、将磷酸盐缓冲液、金属离子络合剂、反应促进剂、辣根过氧化物酶、尿酸酶、抗坏血酸氧化酶、胆红素氧化酶以及表面活性剂配制成pH为7-8的B溶液；

S3：将滤纸浸入A溶液中，待滤纸均匀浸润后取出烘干，然后将其浸入B溶液中，待滤纸均匀浸润后取出烘干；

S4：对多孔聚合物薄膜进行预处理；

S5：将步骤S3得到的分别浸润过A溶液以及B溶液的干燥滤纸粘贴在基板上，然后将经过预处理的多孔聚合物薄膜覆盖在滤纸上。

7.根据权利要求6所述的检测试纸条的制备方法，其特征在于，步骤S1中，A溶液中，磷酸盐缓冲液的浓度为0.05M-0.2M，4-氨基安替比林的质量分数为0.05％-0.2％，显色剂的质量分数为0.1％-0.5％。

8.根据权利要求6所述的检测试纸条的制备方法，其特征在于，步骤S2中，B溶液中，磷酸盐缓冲液的浓度为0.05M-0.2M，金属离子络合剂的质量分数为0.05％-0.8％，反应促进剂的质量分数为0.01％-0.05％，辣根过氧化物酶的浓度为50KU/L-100KU/L，尿酸酶的浓度为3KU/L-10KU/L，抗坏血酸氧化酶的浓度为2KU/L-5KU/L，胆红素氧化酶的浓度为0.2KU/L-1KU/L，表面活性剂的质量分数为0.1％-0.5％。

9.根据权利要求6所述的检测试纸条的制备方法，其特征在于，步骤S3中，滤纸从A溶液中取出后，置于40-60℃的电热鼓风干燥箱中干燥处理50-70min；滤纸从B溶液中取出后，置于40-60℃的电热鼓风干燥箱中干燥处理50-70min。

10.根据权利要求6所述的检测试纸条的制备方法，其特征在于，步骤S4中，将多孔聚合物薄膜浸入C溶液中，待多孔聚合物薄膜均匀浸润后取出，置于40-60℃的电热鼓风干燥箱中干燥50-70min；所述多孔聚合物薄膜的孔径密度为100-300目；

所述C溶液中，聚乙烯醇的质量分数为0.01％-0.1％，聚乙烯吡咯烷酮的质量分数为0.05％-0.2％。