CN102323399A

CN102323399A - 用于检测丙氨酸氨基转移酶的多层膜干化学试剂片

Info

Publication number: CN102323399A
Application number: CN201110273872A
Authority: CN
Inventors: 白鹏利; 唐玉国; 程文播; 孙海旋; 王心醉; 王弼陡
Original assignee: Suzhou Institute of Biomedical Engineering and Technology of CAS
Current assignee: Suzhou Institute of Biomedical Engineering and Technology of CAS
Priority date: 2011-09-16
Filing date: 2011-09-16
Publication date: 2012-01-18

Abstract

本发明公开了一种用于测定丙氨酸氨基转移酶的多层膜干化学试剂片，包括一下支撑层，所述下支撑层的一端开设有测试孔，其还包一多层膜，所述多层膜包括依次由下往上迭合的透光层、试剂层、辅助层和扩散层，所述多层膜的透光层的一面粘合固定于所述下支撑层的测试孔处。本发明的用于检查丙氨酸氨基转移酶的多层膜干片能够快速准确的检测血清、血浆中的丙氨酸氨基转移酶，同时还能提高干片的保存时间。

Description

用于检测丙氨酸氨基转移酶的多层膜干化学试剂片

技术领域

本发明属于体外临床诊断试剂技术领域，具体的涉及一种用于检测丙氨酸氨基转移酶的多层膜干化学试剂片，可用于检测血浆、血清中的转氨酶。

背景技术

丙氨酸氨基转移酶（Alanine aminotransferase, ALT）又称为谷丙转氨酶，主要存在于肝细胞血浆内，细胞内浓度高于血清浓度1000-3000倍，只要有1%肝组织发生破坏，就可以使血清中浓度升高一倍，被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。检测血液中的丙氨酸氨基转氨酶对急性乙型肝炎、慢性肝炎、HBV携带者、重型肝炎以及肝硬化、肝癌等一系列病毒性肝炎的诊断和分析有重要意义。

目前丙氨酸氨基转移酶普遍采用各种生化分析仪器检测，这些仪器都需要使用各种液体试剂，这对某些使用场合带来不便。一是液体试剂保持时间不能过长已经大量试剂可能造成浪费；二是液体试剂不便于运输。

临床急诊生化指标所使用的干化学产品基本上是国外公司的产品，大概有三种类型的产品。第一类是以强生公司为代表的多层膜干片的干化学技术，利用感光胶片的涂层技术将扩散层、反射层、试剂层等试剂涂在透明支撑层上，从支撑层的反面测定光密度的变化。第二类是日本京都公司的干化学技术，其组成为一塑料支撑层，一端为反应区包括样品层和试剂层，试剂层为某种织物作为试剂载体。加样和测试同时在上部进行。第三类为罗氏公司的干化学产品，将试剂层涂在多丝的纤维或者织物上，全血通过玻璃纤维横向过滤后与上试剂层接触反应，通过上部覆盖一透明的支撑层上涂有试剂层和反射层，最上部覆盖一层合成纤维网布作为加样层。以强生公司为代表的多层膜干片生产工艺复杂，对材料设备要求高；以日本京都公司为代表的干片有某些缺陷，如在加样端容易产生一定的气泡、过量液体等，加样和测定在同一测样品可能造成干扰。

国内有公司申请了干化学专利，上海科华生物工程公司申请的专利200720072185.2和200710044719.5，无锡申瑞生物制品有限公司的专利200610161430.7，其中描述了丙氨酸氨基转移酶的测定的干化学试纸条，在这些专利中应用的方法是将配好的检测液直接浸泡在滤纸或者纤维膜上，然后粘合在塑料基材上进行测试，这种方法是将滤纸或者纤维素膜在检测试剂中浸泡，吸附于滤纸或者纤维素膜中的试剂的量无法确定，重复性不能充分保证，缺乏准确性和精密性；此外，该法采用色原显色在610nm-650nm检测，而检测丙氨酸氨基转移酶的国际标准采用速率法，在340nm处监测NADH的氧化速率，反应原理如下所示。

采用干化学试剂片法丙氨酸氨基转移酶的快速检测对疾病的筛查具有重要意义。

发明内容

为克服现有技术中的不足，本发明的目的在于提供一种能够提高检测的准确性和精密度，同时还能提高干片的保存时间的用于检测丙氨酸氨基转移酶的多层膜干化学试剂片。

为了解决上述技术问题，实现上述目的，本发明通过如下技术方案实现：

用于测定丙氨酸氨基转移酶的多层膜干化学试剂片，包括一下支撑层，所述下支撑层的一端开设有测试孔，其还包一多层膜，所述多层膜包括依次由下往上迭合的透光层、试剂层、辅助层和扩散层，所述多层膜的透光层的一面粘合固定于所述下支撑层的测试孔处。

进一步的，所述扩散层之上设置一上支撑层，所述上支撑层上开设有一加样孔，所述加样孔位于所述上支撑层与所述扩散层结合的位置。

进一步的，所述上支撑层与所述下支撑层之间的孔隙处设置有一中间支撑层。

进一步的，所述透光层为在330nm-380nm透光率在80%以上的透明塑料，厚度为20-300μm。所述透光层可以由各种透明塑料（如聚乙烯ＰＥ、聚丙烯ＰＰ、聚对苯二甲酸乙二醇酯ＰＥＴ、聚碳酸酯PC等）、玻璃等制备而成，尤其以PET为最佳。透光层的厚度以100-200μm为最佳。在340nm-365nm范围透光率80%以上，95%以上为最佳。光源从测试孔入射，并透过透光层，优选的，采用340nm检测，要求所选透光层对340nm波长的光透过率达80%以上。

进一步的，所述试剂层内包含水溶性高分子材料及缓冲液、乳酸脱氢酶和NADH。丙氨酸氨基转移酶分子量较大，不容易透过扩散层进入试剂层，因此，将丙氨酸氨基转移酶的底物置于扩散层，使其能够充分接触，并发生催化反应，产物顺利进入试剂层，进行后续的反应。

进一步的，所述扩散层是一层均匀的各向均性的多孔膜，由聚合物粘合剂及白色反光材料构成，湿膜厚度为100-300μm，所述扩散层中包含有丙氨酸氨基转移酶的底物，L-丙氨酸和α-酮戊二酸，所述扩散层的干膜厚度为100-200μm。扩散层的作用是均匀的将样品扩散并渗透到下一层中，并起到反射光的作用。扩散层多样品的扩散性能直接影响试剂层中的化学反应。扩散层也起到预先反应的作用，其中也包含有某些反应试剂。另外，扩散层也起到去除检测影响因子的作用。

进一步的，所述的辅助层由亲水性高分子材料制备而成。

当样品进入扩散层样品中的丙氨酸氨基转移酶催化底物L-丙氨酸和α-酮戊二酸，产生L-谷氨酸和丙酮酸，丙酮酸进入试剂层，其中的乳酸脱氢酶催化丙酮酸和NADH将丙酮酸被还原为乳酸，NADH被氧化为NAD⁺，在一定的时间在340nm处监测吸光度变化，NADH的氧化速率与丙氨酸氨基转移酶的活力成正比。

通过以上技术的运用，本发明的用于检查丙氨酸氨基转移酶的多层膜干片能够快速准确的检测血清、血浆中的丙氨酸氨基转移酶，同时还能提高干片的保存时间。

上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合附图详细说明如后。本发明的具体实施方式由以下实施例及其附图详细给出。

附图说明

下面结合附图和实施方式对本发明作进一步详细的说明。

图1是本发明的用于检测丙氨酸氨基转移酶的多层膜干化学试剂片的一实施例的层状示意图。

图2是本发明的用于检测丙氨酸氨基转移酶的多层膜干化学试剂片的另一实施例的层状示意图。

图中标号说明：1、透光层，2、试剂层，3、辅助层，4、扩散层，5、下支撑层，6、测试孔，7、上支撑层，8、加样孔，9、中间支撑层。

具体实施方式

参见图1所示，用于测定丙氨酸氨基转移酶的多层膜干化学试剂片，包括一下支撑层5，所述下支撑层5的一端开设有测试孔6，其还包一多层膜，所述多层膜包括依次由下往上迭合的透光层1、试剂层2、辅助层3和扩散层4，所述多层膜的透光层1的一面粘合固定于所述下支撑层5的测试孔6处。

参见图2所示，所述扩散层4之上设置一上支撑层7，所述上支撑层7上开设有一加样孔8，所述加样孔8位于所述上支撑层7与所述扩散层4结合的位置。

进一步的，所述上支撑层7与所述下支撑层5之间的孔隙处设置有一中间支撑层9。

进一步的，所述透光层1为在330nm-380nm透光率在80%以上的透明塑料，厚度为20-300μm。

进一步的，所述试剂层2内包含水溶性高分子材料及缓冲液、乳酸脱氢酶和NADH。

进一步的，所述扩散层4是一层均匀的各向均性的多孔膜，由聚合物粘合剂及白色反光材料构成，湿膜厚度为100-300μm。

进一步的，所述扩散层4中包含有丙氨酸氨基转移酶的底物，L-丙氨酸和α-酮戊二酸，所述扩散层4的干膜厚度为100-200μm。

进一步的，所述的辅助层3由亲水性高分子材料制备而成。

以下为本发明的具体某一配比的用于检测丙氨酸氨基转移酶的多层膜干化学试剂片。

透光层1采用厚度188μm的PET膜，在340nm透光率高达86%。将丙氨酸氨基转移酶的底物L-丙氨酸和α-酮戊二酸置于扩散层。试剂层2的涂膜液采用Tris缓冲液体系，具体配比如表1所示，将配置好的涂膜液均匀涂布于PET膜之上，涂膜厚度为100μm。干燥后涂布一层聚异丙基丙烯酰胺作为辅助层3。干燥后在其上涂布扩散层4，厚度为300μm，扩散层4的配比如表2所示。干燥后切成小片，然后使用乳白色PET塑料片作为为上支撑层7、下支撑层5和中间支撑层9。

表1 配置试剂层涂膜液配比:

试剂	浓度
		明胶	120g/L
NADH	3.5g/L
		磷酸吡哆醛	1.1g/L
乳酸脱氢酶	1200U/L

表2 扩散层配比：

材料	浓度
		醋酸纤维素	29g/L
BaSO₄	360g/L
		硅藻土	100g/L
L-丙氨酸	26g/L
		α-酮戊二酸	1.6g/L
表面活性剂	7g/L

上述实施例只是为了说明本发明的技术构思及特点，其目的是在于让本领域内的普通技术人员能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡是根据本发明内容的实质所做出的等效的变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。

Claims

1.用于测定丙氨酸氨基转移酶的多层膜干化学试剂片，包括一下支撑层（5），所述下支撑层（5）的一端开设有测试孔（6），其特征在于：还包一多层膜，所述多层膜包括依次由下往上迭合的透光层（1）、试剂层（2）、辅助层（3）和扩散层（4），所述多层膜的透光层（1）的一面粘合固定于所述下支撑层（5）的测试孔（6）处。

2.根据权利要求1所述的用于测定丙氨酸氨基转移酶的多层膜干化学试剂片，其特征在于：所述扩散层（4）之上设置一上支撑层（7），所述上支撑层（7）上开设有一加样孔（8），所述加样孔（8）位于所述上支撑层（7）与所述扩散层（4）结合的位置。

3.根据权利要求2所述的用于测定丙氨酸氨基转移酶的多层膜干化学试剂片，其特征在于：所述上支撑层（7）与所述下支撑层（5）之间的孔隙处设置有一中间支撑层（9）。

4.根据权利要求1或2或3所述的用于测定丙氨酸氨基转移酶的多层膜干化学试剂片，其特征在于：所述透光层（1）为在330nm-380nm透光率在80%以上的透明塑料，厚度为20-300μm。

5.根据权利要求1或2或3所述的用于测定丙氨酸氨基转移酶的多层膜干化学试剂片，其特征在于：所述试剂层（2）内包含水溶性高分子材料及缓冲液、乳酸脱氢酶和NADH。

6.根据权利要求1或2或3所述的用于测定丙氨酸氨基转移酶的多层膜干化学试剂片，其特征在于：所述扩散层（4）是一层均匀的各向均性的多孔膜，由聚合物粘合剂及白色反光材料构成，湿膜厚度为100-300μm。

7.根据权利要求6所述的用于测定丙氨酸氨基转移酶的多层膜干化学试剂片，其特征在于：所述扩散层（4）中包含有丙氨酸氨基转移酶的底物，L-丙氨酸和α-酮戊二酸，所述扩散层（4）的干膜厚度为100-200μm。

8.根据权利要求1或2或3所述的用于生化分析的多层膜干片，其特征在于：所述的辅助层（3）由亲水性高分子材料制备而成。