抗干扰膜及肝功能联合测试条
技术领域
本发明涉及生物检测领域,具体而言,涉及一种抗干扰膜及肝功能联合测试条。
背景技术
谷丙转氨酶(ALT或GPT)和谷草转氨酶(AST或GOT)是临床最常用于检测肝脏疾病的酶,也是临床检测肝功能受损的首选指标。AST/ALT比值对肝脏纤维化程度的判定有一定的临床指导意义。医学研究结果显示,AST/ALT比值随着肝纤维化程度的加重而逐渐上升,当AST/ALT比值≥1时,对诊断早期肝硬化具有较强的指导意义。
临床上测定谷丙转氨酶、谷草转氨酶的主要有两种方法,包括动力学方法和显色法,前者主要应用于液体试剂检测,此方法耗时、操作复杂、需要比较大型的仪器,不适用于家庭、社区医院或者流动采血车等场所。目前市售的干化学试条较少,主要为显色法。去干扰效果良莠不齐,而AST/ALT指标单独检测,浪费时间、资源,而AST/ALT在不同环境或者不同时间点,或者用同一人的不同样本类型(静脉、动脉、末梢血)进行检测,对于AST/ALT这一比值有不确定的影响因素,影响临床判断。
此外,市面上多数的多项血液测定卡有卡壳进行固定,由于谷丙转氨酶和谷草转氨酶对于检测温度要求高,而卡壳造成热传导速度较慢,外界或者试条温度对检测结果造成的偏差较大。因此,没有传统的卡壳方式进行固定,谷丙转氨酶和谷草转氨酶联合测试试条组装有一定的难度。
有鉴于此,特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种抗干扰膜,制作简单、抗干扰效果好,使用方便,成本低。
本发明的第二目的在于提供一种肝功能联合测试条,能够同时检测AST、ALT及其比值,检测稳定性高、抗干扰性能好,能够快速高效准确的获得检测检测。
为了实现本发明的上述目的,特采用以下技术方案:
一种抗干扰膜,所述抗干扰膜通过抗干扰处理液浸润处理基材得到;
所述抗干扰处理液包括:
10-100KU/L的丙酮酸氧化酶、100-500KU/L的过氧化氢酶、3-30μM的二价铜盐和0.1-0.3g/L的红细胞抗体。
使用丙酮酸氧化酶、过氧化氢酶、二价铜盐和红细胞抗体制备的抗干扰处理液,具有良好的生物检测抗干扰性能。通过基材浸润抗干扰液的方式得到抗干扰膜,使得抗干扰液具体应用至干化学试条中,提升干化学试条的抗干扰能力,检测结果更加准确有效。
优选地,所述二价铜盐选自醋酸铜、氯化铜、硫酸铜中的一种或多种。
对二价铜盐的优选有利于提升抗干扰性能。为了进一步的提升抗干扰效果,抗干扰处理液中还可以加入15-25mM的亚铁氰化钾。
优选地,所述基材选自玻璃纤维膜、聚酯纤维膜或纤维素滤纸。
一种肝功能联合测试条,包括依次层叠的扩散膜、所述的抗干扰膜、滤血膜、反应膜、显色膜和底板;
所述反应膜包括ALT反应膜和AST反应膜,所述显色膜包括ALT显色膜和AST显色膜,所述ALT反应膜和所述AST反应膜之间、所述ALT显色膜和所述AST显色膜之间通过隔离层隔离,所述ALT反应膜与所述ALT显色膜对应设置,所述AST反应膜与所述AST显色膜对应设置;
所述底板开设有第一测试孔和第二测试孔,所述ALT显色膜覆盖所述第一测试孔,所述AST显色膜覆盖第二测试孔。
在该肝功能联合测试条上,检测ALT、AST共用同一扩散膜、抗干扰膜和滤血膜,通过隔离层设置独立的反应模块(ALT反应膜和显色膜、AST反应膜和显色膜),实现取一次样即可同时检测ALT、AST两种物质,可得出ALT、AST以及AST/ALT三个指标,可为临床诊断提供更为可靠的指导。
优选地,所述ALT反应膜使用ALT反应膜处理液浸润得到,所述ALT反应膜处理液包括:
10-100mM的L-丙氨酸和5-20mM的α-酮戊二酸;
优选地,所述ALT反应膜处理液还包括保护剂、防腐剂和PB缓冲液。
优选地,所述ALT显色膜使用ALT显色膜处理液处理得到,所述ALT显色膜处理液包括:
10-200KU/L的丙酮酸氧化酶、0.1-1mM的焦磷酸铵、0.5-5mM的黄素腺嘌呤二核苷酸二钠盐、10-200KU/L的过氧化物酶和显色剂5-20mM;
优选地,所述ALT显色膜处理液还包括保护剂、防腐剂和PB缓冲液。
优选地,所述AST反应膜使用AST反应膜处理液浸润得到,所述AST反应膜处理液包括:
10-100mM的L-天门冬氨酸钠和5-20mM的α-酮戊二酸;
优选地,所述AST反应膜处理液还包括保护剂、防腐剂和PB缓冲液。
优选地,所述AST显色膜使用AST显色膜处理液处理得到,所述AST显色膜处理液包括:
10-200KU/L的丙酮酸氧化酶、0.1-1mM的焦磷酸铵、0.5-5mM的黄素腺嘌呤二核苷酸二钠盐、10-200KU/L的草酰乙酸脱羧酶、10-200KU/L的过氧化物酶和显色剂5-20mM;
优选地,所述AST显色膜处理液还包括保护剂、防腐剂和PB缓冲液。
该肝功能联合测试条使用的是酶显色法进行指标测定,通过反应膜和显色膜上的相应有效成分的反应,最后通过测试仪器测算相应的ALT、AST以及AST/ALT三个指标。
需要说明的是,ALT反应膜处理液、ALT显色膜处理液、AST反应膜处理液、AST显色膜处理液中的保护剂、防腐剂和PB缓冲溶液可以相同,也可以不同。ALT显色膜处理液、AST显色膜处理液中的显色剂可以相同,也可以不同。
可选地,所述扩散膜的材质为聚酯纤维或尼龙纤维,所述扩散膜的孔径为60-100目;所述滤血膜为改性聚砜膜,所述滤血膜的孔径为0.8-5μm;所述反应膜的材质为玻璃纤维、聚丙烯、尼龙、纤维素纤维或聚酯纤维,所述反应膜的孔径为0.2-5μm;所述显色膜为不对称聚砜膜、尼龙膜,所述显色膜的孔径为0.2-5μm。
对膜的材质和孔径规格的优选,更加有利于快速高效准确的获得检测结果。
优选地,所述隔离层的材质为疏水性胶。
更加优选地,所述疏水性胶为热熔胶。
对隔离层的材质的优选,是为了更好的防止ALT、AST测试模块之间互相影响,保证检测的准确度。
与现有技术相比,本发明的有益效果为:
(1)结构简单,成本低;
(2)可使用同一样本同时检测、快速获得ALT、AST以及AST/ALT三个指标;
(3)抗干扰性能好,结果准确,能够应用于临床。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,以下将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为实施例1提供的肝功能联合测试条的示意图。
附图标记:
1-扩散膜;2-抗干扰膜;3-滤血膜;4-底板;5-ALT反应膜;6-AST反应膜;7-ALT显色膜;8-AST显色膜;9-隔离层;10-第一测试孔;11-第二测试孔。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述,但是本领域技术人员将会理解,下列实施例仅用于说明本发明,而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者,按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市售购买获得的常规产品。
需要特别说明的是,本申请实施例所用的红细胞抗体购自北京沫之东生物技术有限公司;保护剂和显色剂购自国药集团化学试剂有限公司和Amresco。
实施例1
如图1所示,一种肝功能联合测试条,包括依次层叠的扩散膜1、抗干扰膜2、滤血膜3、反应膜、显色膜和底板4;反应膜包括ALT反应膜5和AST反应膜6,显色膜包括ALT显色膜7和AST显色膜8,ALT反应膜5和AST反应膜6之间、ALT显色膜7和AST显色膜8之间通过隔离层9隔离,ALT反应膜5与ALT显色膜7对应设置,AST反应膜6与AST显色膜8对应设置;底板开设有第一测试孔10和第二测试孔11,ALT显色膜7覆盖第一测试孔10,AST显色膜8覆盖第二测试孔11。
扩散膜1、抗干扰膜2、滤血膜3、反应膜、显色膜和底板4之间通过胶黏方式固定。
需要说明的是,各个膜的宽度并不局限于图中所示的等宽设置方式。例如,为了保证抗干扰膜的全面覆盖,保证检测精度,可以将抗干扰膜的宽度设置成略宽于滤血膜。
实施例2
一种肝功能联合测试条,包括依次层叠的扩散膜1、抗干扰膜2、滤血膜3、反应膜、显色膜和底板4;反应膜包括ALT反应膜5和AST反应膜6,显色膜包括ALT显色膜7和AST显色膜8,ALT反应膜5和AST反应膜6之间、ALT显色膜7和AST显色膜8之间通过隔离层9隔离,ALT反应膜5与ALT显色膜7对应设置,AST反应膜6与AST显色膜8对应设置;底板开设有第一测试孔10和第二测试孔11,ALT显色膜7覆盖第一测试孔10,AST显色膜8覆盖第二测试孔11。
其中,ALT反应膜使用ALT反应膜处理液浸润得到,ALT反应膜处理液包括:10mM的L-丙氨酸和20mM的α-酮戊二酸。
ALT显色膜使用ALT显色膜处理液处理得到,ALT显色膜处理液包括:10KU/L的丙酮酸氧化酶、1mM的焦磷酸铵、0.5mM的黄素腺嘌呤二核苷酸二钠盐、200KU/L的过氧化物酶和5mM的显色剂。
AST反应膜使用AST反应膜处理液浸润得到,AST反应膜处理液包括:10mM的L-天门冬氨酸钠和20mM的α-酮戊二酸;
AST显色膜使用AST显色膜处理液处理得到,AST显色膜处理液包括:10KU/L的丙酮酸氧化酶、1mM的焦磷酸铵、0.5mM的黄素腺嘌呤二核苷酸二钠盐、200KU/L的草酰乙酸脱羧酶、10KU/L的过氧化物酶和20mM的显色剂。
抗干扰膜通过抗干扰膜处理液浸润基材玻璃纤维膜得到,抗干扰膜处理液包括10KU/L的丙酮酸氧化酶、500KU/L的过氧化氢酶、3μM的二价铜盐和0.3g/L的红细胞抗体。
扩散膜的材质为聚酯纤维,扩散膜的孔径为100目;滤血膜的材质为改性聚砜膜,滤血膜的孔径为0.8μm;反应膜的材质为玻璃纤维,反应膜的孔径为5μm;显色膜的材质为不对称聚砜膜,显色膜的孔径为5μm。
隔离层的材质为热熔胶。
在其他的可选的实施方式中,隔离层可以采用其他的疏水性胶。
实施例3
与实施例2不同的是:
ALT反应膜使用ALT反应膜处理液浸润得到,ALT反应膜处理液包括:100mM的L-丙氨酸、5mM的α-酮戊二酸、20g/L的保护剂海藻糖、0.5g/L的防腐剂和0.5M的PB缓冲液。
ALT显色膜使用ALT显色膜处理液处理得到,ALT显色膜处理液包括:200KU/L的丙酮酸氧化酶、0.1mM的焦磷酸铵、5mM的黄素腺嘌呤二核苷酸二钠盐、10KU/L的过氧化物酶、20mM的显色剂、20g/L的保护剂BSA、0.5g/L的防腐剂和0.5M的PB缓冲液。
AST反应膜使用AST反应膜处理液浸润得到,AST反应膜处理液包括:100mM的L-天门冬氨酸钠、5mM的α-酮戊二酸、20g/L的保护剂BSA、0.5g/L的防腐剂和0.5M的PB缓冲液;
AST显色膜使用AST显色膜处理液处理得到,AST显色膜处理液包括:200KU/L的丙酮酸氧化酶、0.1mM的焦磷酸铵、5mM的黄素腺嘌呤二核苷酸二钠盐、10KU/L的草酰乙酸脱羧酶、200KU/L的过氧化物酶、5mM的显色剂、20g/L的保护剂BSA、0.5g/L的防腐剂和0.5M的PB缓冲液。
其中,ALT显色膜和AST显色膜使用的显色剂包括N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3'5-二甲基苯胺钠盐(MAOS)和4-氨基安替比邻(4-AA)。
抗干扰膜通过抗干扰膜处理液浸润基材纤维素滤纸得到,抗干扰膜处理液包括100KU/L的丙酮酸氧化酶、100KU/L的过氧化氢酶、30μM的二价铜盐和0.1g/L的红细胞抗体。
扩散膜的材质为尼龙纤维,扩散膜的孔径为60目;滤血膜的材质为改性聚砜膜,滤血膜的孔径为5μm;反应膜的材质为聚丙烯,反应膜的孔径为0.2μm;显色膜的材质为尼龙膜,显色膜的孔径为0.2μm。
隔离层的材质为热熔胶。
实施例4
与实施例2不同的是:
ALT反应膜使用ALT反应膜处理液浸润得到,ALT反应膜处理液包括:50mM的L-丙氨酸、10mM的α-酮戊二酸、15g/L的保护剂BSA、0.8g/L的防腐剂和0.4M的PB缓冲液。
ALT显色膜使用ALT显色膜处理液处理得到,ALT显色膜处理液包括:100KU/L的丙酮酸氧化酶、0.5mM的焦磷酸铵、2mM的黄素腺嘌呤二核苷酸二钠盐、100KU/L的过氧化物酶、10mM的显色剂、25g/L的保护剂、0.6g/L的防腐剂和0.6M的PB缓冲液。
AST反应膜使用AST反应膜处理液浸润得到,AST反应膜处理液包括:50mM的L-天门冬氨酸钠、10mM的α-酮戊二酸、18g/L的保护剂海藻糖、0.4g/L的防腐剂和0.5M的PB缓冲液;
AST显色膜使用AST显色膜处理液处理得到,AST显色膜处理液包括:100KU/L的丙酮酸氧化酶、0.6mM的焦磷酸铵、3mM的黄素腺嘌呤二核苷酸二钠盐、150KU/L的草酰乙酸脱羧酶、100KU/L的过氧化物酶、10mM的显色剂、22g/L的保护剂BSA、0.6g/L的防腐剂和0.5M的PB缓冲液。
抗干扰膜通过抗干扰膜处理液浸润基材聚酯纤维膜得到,抗干扰膜处理液包括50KU/L的丙酮酸氧化酶、300KU/L的过氧化氢酶、20μM的二价铜盐、0.2g/L的红细胞抗体和20mM的亚铁氰化钾。
扩散膜的材质为聚酯纤维,扩散膜的孔径为80目;滤血膜的材质为改性聚砜膜,滤血膜的孔径为4μm;反应膜的材质为纤维素滤纸,反应膜的孔径为2μm;显色膜的材质为尼龙膜,显色膜的孔径为3μm。
隔离层的材质为热熔胶。
测试试验:
采集高低浓度ALT、AST的肝素钠静脉血样本,用生化仪定值两组样本ALT、AST浓度,配制不同血细胞压积样本:20%、30%、40%、50%、60%、70%。
用实施例3制备得到的肝功能联合测试条进行测试,表1为不同压积样本测试结果:
表1不同压积样本测试结果
由上表1可知,本申请提供的肝功能联合测试条,可同时测试全血中ALT、AST的值,样本的血细胞压积在30%-60%范围内,测试结果准确、出值快、不需要离心等繁琐操作。
比较例1
与实施例3不同之处在于,抗干扰膜只用基材,不使用抗干扰膜处理液处理。
按照实施例4操作,制备试条作为实验组,比较例1作为对照组。取健康人静脉血,在血液中分别添加不同浓度的干扰物。
干扰物种类浓度及样本测试结果见表2:
表2干扰物种类浓度及样本测试结果
由上表2可知,对照组抗干扰膜没有经过预处理,样本中的抗坏血酸对测试产生一定的负干扰,胆红素和丙酮酸钠对测试产生了正干扰,均超过15%,而实验组试条测试不受抗坏血酸、胆红素、丙酮酸钠的影响,主要是因为抗干扰膜经过与处理液处理后,膜上结合的二价铜盐、丙酮酸氧化酶、过氧化氢酶、亚铁氰化钾可以消除抗坏血酸、丙酮酸、胆红素对干扰的影响。
本申请提供的抗干扰膜制得的肝功能联合测试条,同时检测ALT、AST两种物质,可得出ALT、AST以及AST/ALT三个指标,为临床诊断提供更为可靠的指导,检测时间仅需3min快速简单,配套使用的仪器较小,可广泛应用于血站、社区医院和家庭的肝功能筛查。
尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明,然而应意识到,在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此,这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。