CN115219485A - 一种肝功三联检测试卡及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种肝功三联检测试卡及其制备方法，包括压板、底座、检测单元，检测单元的四组反应层包括谷丙转氨酶检测单元、谷草转氨酶检测单元、白蛋白检测单元、空白检测单元，肝功三联检测试卡用于定量测定人体全血、血清、血浆中谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性及白蛋白含量，项目之间互相独立，不互相干扰，保证检测结果的准确度；肝功三联检测试卡样本量为45ul，检测时间为3min，一次加样可同时检测谷丙转氨酶、谷草转氨酶、白蛋白三个项目；在检测过程中无需专业人员操作、无废液处理要求、快速诊断等优势，配套仪器小型，可随时移动，不受时间、地点的限制，适用于急救、急诊、家庭、药店、社区医院、门诊、体检中心等场所。

Description

一种肝功三联检测试卡及其制备方法

技术领域

本发明涉及肝功能检查领域，具体为一种肝功三联检测试卡及其制备方法。

背景技术

肝功能的检查对诊断肝脏是否异常有着重要意义，检测肝功能主要的目的是检测肝脏是否有损伤、损伤的程度及损伤治疗的预后情况。目前生化测定试剂类型可分为干化学和湿化学，湿化学检测需要特定的仪器设备、专业的技术人员、定期的废液处理要求，仪器大型且昂贵，检测时间长，不能实现即时即地进行检测，且只能测定血清、血浆、尿液及脑脊液等样本，测定全血样本需要进行离心操作。干化学试剂主要适用于急救、急诊、家庭、药店、社区医院、门诊、体检中心等场所，具有快速诊断、操作简单、节约成本等优势。

临床上肝功能主要的检测指标有转氨酶、白蛋白、谷氨酰转移酶、胆红素等。谷丙转氨酶、谷草转氨酶、白蛋白是临床检测肝功能状态的首选指标。转氨酶升高的水平可以敏感地检测肝脏是否受到损害，且AST/ALT比值对肝纤维化程度的判定有一定的临床指导意义。白蛋白是由肝脏产生的，白蛋白的降低程度与肝炎严重程度相平行，是判断肝炎预后程度的重要指标。

目前，医院急诊生化测试所使用的多为进口的干化学产品，如强生、富士、罗氏，强生和富士是将胶卷生产领域中的涂层技术运用到了临床诊断领域，将测定反应中所需的试剂按照反应次序分别均匀涂覆在透明塑料薄片上，最终通过仪器测定显色层光信号变化达到定量测定目的。

美国奥森多公司推出的VITORS 350，适用于急诊和常规生化的全自动分析系统，检测项目包括肝功、肾功、心肌酶、血脂、蛋白、离子等，真正实现结果的快速、准确、能充分满足临床准确、快速和灵活的诊断需求。

罗氏则采用横向扩散模式，以各种膜材料为反应载体，如玻纤等各种织物，滴加样本后，样本横向扩散至测试区域发生反应产生颜色变化，同样通过仪器测定光信号变化达到定量测定目的，其显著的特点是可以以全血为测定样本。

国内的测量肝功能项目的干化学项目只有转氨酶、白蛋白，如万孚的转氨酶试纸及白蛋白试纸、艾康的转氨酶试纸，其原理和罗氏相似。虽然国内还有几家有相关产品的信息，但是真正在市场上销售的产品只有艾康生物的，并且也只有谷丙转氨酶ALT试条。

目前国内检测肝功能主要采用湿式试剂盒，湿式试剂盒主要与大型仪器配套使用，准确度高，一次加样可同时进行三个项目测试。

如公开号为CN102128918B的中国专利公开了一种检测试纸，尤其是一种检测血液样本中被分析物含量的干化学试纸。检测试纸包括加样层、反应层、底板和锁液部件，加样层、反应层和底板自上而下垂直排列，反应层的至少一侧包括锁液部件，锁液部件吸收液体的速度小于或等于反应层吸收液体的速度。由于锁液部件能够将多余的液体样本吸收，使多余的样本不会流出试纸范围，避免了对环境造成污染或避免样本接触到检测者。

如公开号为CN113913508A的中国专利公开了miR-195-3p检测试剂在制备诊断肝脏氧化应激损伤产品中的应用，具体涉及miR-195-3p检测试剂在制备诊断肝脏氧化应激损伤产品中的应用。所述miR-195-3p的序列如SEQ ID NO.1所示，本发明通过检测miR-195-3p在肝组织和肝细胞中的表达水平，阐明了在Hcy诱导肝脏氧化应激损伤过程中miR-195-3p的作用，为以后从分子水平诊断肝脏氧化应激损伤提供了理论依据，具有重大的理论意义和潜在的实用价值。

如公开号为CN110791547A的中国专利公开了一种用于体外诊断的肌酐定量检测干片，包括带样品滴加孔的上外壳、扩散层、酶层、色素层、树脂层、支持层、带透光孔的下外壳，其中，上外壳与下外壳相互贴合，上外壳中心位置开有样品滴加孔，下外壳中心位置开有透光孔，扩散层、酶层、色素层、树脂层、支持层通过涂布工艺从上到下依次分层贴合在一起，所述色素层包括色素、缓冲液以及亲水性聚合物，所述酶层包括肌酐氨基水解酶、过氧化物酶、肌氨酸氧化酶、肌酸脒基水解酶以及缓冲液和亲水性聚合物。通过本发明，以解决现有技术存在的荧光光度技术对仪器的要求比较高，在液相中，可以用来检测的分光光度计很贵，且结果不能长期保存的问题。

综上所述，本发明实际要解决的技术问题在于：

奥森多试剂干片配套仪器过大，不能实现即时即地进行检测，且只能测定血清、血浆、尿液及脑脊液等样本，测定全血样本需要进行离心操作；

罗氏测试条缺点是加样量较大，一次加样只能测试一个项目；

国内的万孚干化学试纸只能测血清、血浆样本，不能检测全血样本，且只有一次加样只能测定一个项目；艾康同样有一次加样只能测试一个项目缺点；

湿式试剂盒主要与大型仪器配套使用，成本较高，且需要专业技术人员操作，需要处理废液，定期维护。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种肝功三联检测试卡及其制备方法，以解决上述问题。

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现。

一种肝功三联检测试卡,包括压板、底座、检测单元，所述压板上设有加样孔，所述底座上设有四个底座检测孔、底座卡槽，所述检测单元固定在底座卡槽中，且压板卡设在检测单元上方，所述检测单元包括扩散层、滤血层、辅助层、反应层，且四者依次叠放，所述辅助层与反应层整体分为四组，且相互间隔，所述四组反应层包括谷丙转氨酶检测单元、谷草转氨酶检测单元、白蛋白检测单元、空白检测单元，肝功三联检测试卡用于定量测定人体全血、血清、血浆中谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性及白蛋白含量，项目之间互相独立，不互相干扰，保证检测结果的准确度；肝功三联检测试卡预留空白检测孔，用于校准谷丙转氨酶、谷草转氨酶、白蛋白测试结果：测试卡项目之间互相独立，加样位置对项目读值有一定影响，位于边缘孔的空白检测卡通过算法拟合可用于校准谷丙转氨酶、谷草转氨酶、白蛋白测试结果，保证检测结果准确。

优选的，所述压板选用高分子聚合材料，所述底座为透明塑料材质，其中一面具有粘性，可粘贴反应层，所述加样孔为椭圆形，所述底座检测孔为四个独立圆形，所述扩散层为一层均匀的各向均性的亲水性纱网，所述滤血层选用玻璃纤维、无纺布、滤纸、聚醚砜或聚醚砜材料任意一种材料制成，所述辅助层为玻璃纤维膜，所述反应层选用不同孔径的聚砜系列膜、GR/GF/GX系列膜、尼龙膜、聚醚砜或聚砜膜类材质中的任意一种，且反应层上附有相应的谷丙转氨酶检测单元、谷草转氨酶检测单元、白蛋白检测单元、空白检测单元，肝功三联检测试卡可实现一次加样同时进行三个项目测试，可检测的样本类型为全血、血清或血浆：肝功三联检测试卡样本量为45ul，检测时间为3min，一次加样可同时检测谷丙转氨酶、谷草转氨酶、白蛋白三个项目；肝功三联检测试卡在检测过程中具有操作简单、成本低、无需专业人员操作、无废液处理要求、快速诊断等优势，配套仪器小型，可随时移动，不受时间、地点的限制，能真正实现床旁诊断，适用于急救、急诊、家庭、药店、社区医院、门诊、体检中心等场所，是未来POCT发展的必然趋势。

优选的，所述谷丙转氨酶检测单元包括谷丙转氨酶反应试剂，所述谷丙转氨酶反应试剂包括缓冲体系、丙酮酸氧化酶、过氧化物酶、辅酶、色原、激活剂、稳定剂，所述缓冲体系为磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液或者Good`S缓冲液中的任意一种，浓度为0.05M-1.0M，反应PH在6.5-8.0；丙酮酸氧化酶的浓度为50-150U/ml，过氧化物酶溶度为200-1000U/ml；辅酶采用黄素腺嘌呤二核苷酸和硫胺素焦磷酸，黄素腺嘌呤二核苷酸浓度为0.1mg/ml-0.2mg/ml，硫胺素焦磷酸浓度为0.5mg/ml-1mg/ml；色原是单一组分或者两种组分的色原物质，浓度为0.02％-0.5％；丙酮酸氧化酶激活剂采用Mg2+，浓度为0.5g/L-1g/L；酶的稳定剂为糖类糖类或蛋白类稳定剂，在体系中的浓度为0.5％-2％。

优选的，所述谷草转氨酶检测单元包括谷草转氨酶反应试剂，所述谷草转氨酶反应试剂包括缓冲体系、丙酮酸氧化酶、草酰乙酸脱羧酶、过氧化物酶、辅酶、色原、激活剂和稳定剂，其中，缓冲体系选用磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液或者Good`S缓冲液中任意一种，浓度为0.05M-1.0M，反应PH在6.5-8.0；丙酮酸氧化酶的浓度为50-150U/ml，草酰乙酸脱羧酶浓度为50-150U/ml，过氧化物酶溶度为200-1000U/ml；辅酶采用黄素腺嘌呤二核苷酸和硫胺素焦磷酸，黄素腺嘌呤二核苷酸浓度为0.1mg/ml-0.2mg/ml，硫胺素焦磷酸浓度为0.5mg/ml-1mg/ml；色原是单一组分或者两种组分的色原物质，浓度为0.02％-0.5％；丙酮酸氧化酶激活剂采用Mg2+，浓度为0.5g/L-1g/L；酶的稳定剂为糖类糖类或蛋白类稳定剂，在体系中的浓度为0.5％-2％。

优选的，所述白蛋白检测单元包括白蛋白反应试剂，所述白蛋白反应试剂包括缓冲体系、染料、表面活性剂，其中，缓冲体系为柠檬酸缓冲液、丁二酸缓冲液或者苹果酸缓冲液中的任意一种，浓度为0.5M-1.0M，反应PH为4.2；染料为溴甲酚绿或者溴甲酚紫，浓度为0.1％-0.5％；表面活性剂为聚氧乙烯月桂醚或者曲拉通，浓度为0.1％-0.5％。

优选的，所述对应谷丙转氨酶检测单元的辅助层包括谷丙转氨酶底物试剂，所述谷丙转氨酶底物试剂包括缓冲体系、L-丙氨酸和α-酮戊二酸，所述缓冲体系选用磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液或者Good`S缓冲液中任意一种，浓度为0.05M-1.0M，反应PH在6.5-8.0；L-丙氨酸浓度为0.5M-1.0M，α-酮戊二酸浓度为5mM-50mM。

优选的，所述对应谷草转氨酶检测单元的辅助层包括谷草转氨酶底物试剂，所述谷草转氨酶底物试剂包括缓冲体系、L-天冬氨酸和α-酮戊二酸，所述缓冲体系选用磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液或者Good`S缓冲液中任意一种，浓度为0.05M-1.0M，反应PH在6.5-8.0；L-天冬氨酸浓度为0.5M-1.0M，α-酮戊二酸浓度为5mM-50mM。

一种肝功三联检测试卡的制备方法，包括反应层的制作；辅助层的处理；整体装配，在底座上对应位置粘贴四组空白的反应层，分别将谷丙转氨酶检测单元、谷草转氨酶检测单元、白蛋白检测单元定量喷涂在对应的反应层上，所述空白检测单元反应膜也无反应液，将喷涂好的底座放置37°烘箱烘干，制得反应层。

优选的，将谷丙转氨酶底物试剂浸润辅助层后在37°条件下烘干制备，制备成谷丙转氨酶的辅助层；将谷草转氨酶底物试剂浸润辅助膜后在37°条件下烘干制备，制备成谷草转氨酶的辅助层，白蛋白检测单元、空白检测单元的辅助层不做处理。

优选的，将喷涂有三个单元反应层的烘干好的底座放置平台上，按照辅助层、滤血层、扩散层顺序依次叠放在底座对应单元反应层上，将制备好的三个检测单元放置底座对应的测试孔位置上，将压板压紧，制成肝功三联检测试卡。

相比于现有技术而言，本发明公开了一种肝功三联检测试卡及其制备方法，包括压板、底座、检测单元，检测单元的四组反应层包括谷丙转氨酶检测单元、谷草转氨酶检测单元、白蛋白检测单元、空白检测单元，肝功三联检测试卡用于定量测定人体全血、血清、血浆中谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性及白蛋白含量，项目之间互相独立，不互相干扰，保证检测结果的准确度；

肝功三联检测试卡预留空白检测孔，用于校准谷丙转氨酶、谷草转氨酶、白蛋白测试结果：测试卡项目之间互相独立，加样位置对项目读值有一定影响，位于边缘孔的空白检测卡通过算法拟合可用于校准谷丙转氨酶、谷草转氨酶、白蛋白测试结果，保证检测结果准确；

肝功三联检测试卡可实现一次加样同时进行三个项目测试，可检测的样本类型为全血、血清或血浆：肝功三联检测试卡样本量为45ul，检测时间为3min，一次加样可同时检测谷丙转氨酶、谷草转氨酶、白蛋白三个项目；

肝功三联检测试卡在检测过程中具有操作简单、成本低、无需专业人员操作、无废液处理要求、快速诊断等优势，配套仪器小型，可随时移动，不受时间、地点的限制，能真正实现床旁诊断，适用于急救、急诊、家庭、药店、社区医院、门诊、体检中心等场所，是未来POCT发展的必然趋势。

附图说明

图1为本发明肝功三联检测试卡的正面结构示意图；

图2为本发明肝功三联检测试卡的背面结构示意图；

图3为本发明肝功三联检测试卡的内部结构示意图；

图4为本发明A部分的放大示意图；

图5为本发明肝功三联检测试卡与干式生化分析仪Compass-2000两者之间对比测试示意图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。

实施例1

一种肝功三联检测试卡，包括压板1、底座2、检测单元3，所述压板1上设有加样孔11，所述底座2上设有四个底座检测孔21、底座2卡槽，所述检测单元3固定在底座2卡槽中，且压板1卡设在检测单元3上方，所述检测单元3包括扩散层31、滤血层32、辅助层33、反应层34，且四者依次叠放，所述辅助层33与反应层34整体分为四组，且相互间隔，所述四组反应层34包括谷丙转氨酶检测单元、谷草转氨酶检测单元、白蛋白检测单元、空白检测单元。所述压板1选用高分子聚合材料，所述底座2为透明塑料材质，其中一面具有粘性，可粘贴反应层34，所述加样孔11为椭圆形，所述底座检测孔21为四个独立圆形，所述扩散层31为一层均匀的各向均性的亲水性纱网，所述滤血层32选用玻璃纤维、无纺布、滤纸、聚醚砜或聚醚砜材料任意一种材料制成，所述辅助层33为玻璃纤维膜，所述反应层34选用不同孔径的聚砜系列膜、GR/GF/GX系列膜、尼龙膜、聚醚砜或聚砜膜类材质中的任意一种，且反应层34上附有相应的谷丙转氨酶检测单元、谷草转氨酶检测单元、白蛋白检测单元、空白检测单元。所述谷丙转氨酶检测单元包括谷丙转氨酶反应试剂，所述谷丙转氨酶反应试剂包括缓冲体系、丙酮酸氧化酶、过氧化物酶、辅酶、色原、激活剂、稳定剂，所述缓冲体系为磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液或者Good`S缓冲液中的任意一种，浓度为0.05M-1.0M，反应PH在6.5-8.0；丙酮酸氧化酶的浓度为50-150U/ml，过氧化物酶溶度为200-1000U/ml；辅酶采用黄素腺嘌呤二核苷酸和硫胺素焦磷酸，黄素腺嘌呤二核苷酸浓度为0.1mg/ml-0.2mg/ml，硫胺素焦磷酸浓度为0.5mg/ml-1mg/ml；色原是单一组分或者两种组分的色原物质，浓度为0.02％-0.5％；丙酮酸氧化酶激活剂采用Mg2+，浓度为0.5g/L-1g/L；酶的稳定剂为糖类糖类或蛋白类稳定剂，在体系中的浓度为0.5％-2％。所述谷草转氨酶检测单元包括谷草转氨酶反应试剂，所述谷草转氨酶反应试剂包括缓冲体系、丙酮酸氧化酶、草酰乙酸脱羧酶、过氧化物酶、辅酶、色原、激活剂和稳定剂，其中，缓冲体系选用磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液或者Good`S缓冲液中任意一种，浓度为0.05M-1.0M，反应PH在6.5-8.0；丙酮酸氧化酶的浓度为50-150U/ml，草酰乙酸脱羧酶浓度为50-150U/ml，过氧化物酶溶度为200-1000U/ml；辅酶采用黄素腺嘌呤二核苷酸和硫胺素焦磷酸，黄素腺嘌呤二核苷酸浓度为0.1mg/ml-0.2mg/ml，硫胺素焦磷酸浓度为0.5mg/ml-1mg/ml；色原是单一组分或者两种组分的色原物质，浓度为0.02％-0.5％；丙酮酸氧化酶激活剂采用Mg2+，浓度为0.5g/L-1g/L；酶的稳定剂为糖类糖类或蛋白类稳定剂，在体系中的浓度为0.5％-2％。所述白蛋白检测单元包括白蛋白反应试剂，所述白蛋白反应试剂包括缓冲体系、染料、表面活性剂，其中，缓冲体系为柠檬酸缓冲液、丁二酸缓冲液或者苹果酸缓冲液中的任意一种，浓度为0.5M-1.0M，反应PH为4.2；染料为溴甲酚绿或者溴甲酚紫，浓度为0.1％-0.5％；表面活性剂为聚氧乙烯月桂醚或者曲拉通，浓度为0.1％-0.5％。所述对应谷丙转氨酶检测单元的辅助层33包括谷丙转氨酶底物试剂，所述谷丙转氨酶底物试剂包括缓冲体系、L-丙氨酸和α-酮戊二酸，所述缓冲体系选用磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液或者Good`S缓冲液中任意一种，浓度为0.05M-1.0M，反应PH在6.5-8.0；L-丙氨酸浓度为0.5M-1.0M，α-酮戊二酸浓度为5mM-50mM。所述对应谷草转氨酶检测单元的辅助层33包括谷草转氨酶底物试剂，所述谷草转氨酶底物试剂包括缓冲体系、L-天冬氨酸和α-酮戊二酸，所述缓冲体系选用磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液或者Good`S缓冲液中任意一种，浓度为0.05M-1.0M，反应PH在6.5-8.0；L-天冬氨酸浓度为0.5M-1.0M，α-酮戊二酸浓度为5mM-50mM。

一种肝功三联检测试卡的制备方法，包括反应层34的制作；辅助层33的处理；整体装配，在底座2上对应位置粘贴四组空白的反应层34，分别将谷丙转氨酶检测单元、谷草转氨酶检测单元、白蛋白检测单元定量喷涂在对应的反应层34上，所述空白检测单元反应膜也无反应液，将喷涂好的底座2放置37°烘箱烘干，制得反应层34，将谷丙转氨酶底物试剂浸润辅助层33后在37°条件下烘干制备，制备成谷丙转氨酶的辅助层33；将谷草转氨酶底物试剂浸润辅助膜后在37°条件下烘干制备，制备成谷草转氨酶的辅助层33，白蛋白检测单元、空白检测单元的辅助层33不做处理，将喷涂有三个单元反应层34的烘干好的底座2放置平台上，按照辅助层33、滤血层32、扩散层31顺序依次叠放在底座2对应单元反应层34上，将制备好的三个检测单元3放置底座2对应的测试孔位置上，将压板1压紧，制成肝功三联检测试卡。

比较例1

基于上述具体实施方式选取市面上成熟且市面销售的由江苏康尚生物医疗科技有限公司研发的干式生化分析仪Compass-2000作为比较，并对实验结果加以说明，干式生化分析仪Compass-2000包括面盖，面盖的外表面一侧设置有凹口，且面盖的外表面与凹口相对应的位置嵌套滑动连接有运动盖，凹口内设置有保温棉，保温棉的内表面设置有导热架，导热架上设置有第一通孔，且导热架内表面设置有发热片，发热片上且位于导热架的顶部相对应的位置设置有感温头，凹口内且位于导热架下方位置设置有检测基座，检测基座的底部设置有多个第二通孔，且检测基座内嵌入设置有挡光架，挡光架上与多个第二通孔相对应的位置均设置有第三通孔，检测基座上位于挡光架上方位置设置有镜片，面盖内与检测基座相对应的位置设置有检测板，检测板的顶部与检测基座的底部相固定连接，检测板上设置有多个光电探测器，面盖的一侧设置有测试条。运动盖的底部设置有密封圈，通过密封圈的设置即可以保证检测结构的密封性，同时也可以起到保温的作用；镜片的材质为透明玻璃或者PMMA，镜片可以保证检测结构能够稳定运行的同时，也可以起到防尘保护作用；检测板上位于多个光电探测器一侧位置分别设置有热敏电阻与LED灯，通过热敏电阻与LED灯的配合设置可以保证光电探测器能够稳定运行进行检测工作；第一通孔、第二通孔、第三通孔以及光电探测器均设置在相互对应位置上，通过结构的配合设置，可以保证检测结构可以正常进行检测工作；测试条与导热架之间为嵌套配合设置，通过结构的设置可以方便将测试条稳定的放置到导热架上，可以方便进行稳定的检测工作，测试条可以方便承载待检测的试剂与样品。工作原理：在使用干式生化分析仪光学检测装置时，将待检测的试剂或者样品放置到测试条上，滑动打开运动盖，将测试条嵌套卡入导热架内，并关闭运动盖，通过导热架上的发热片加热工作，能够提供检测所需的温度，通过检测板上的光电探测器配合检测基座结构以及通孔结构的设置。

为了验证本发明的可行性和有效性，将本发明的肝功三联检测试卡与干式生化分析仪Compass-2000两者之间进行测试，随机抽取20个有梯度的静脉血样品进行测试，然后与医院生化值进行评价，如图5所示，结果分析：R平方值都在0.96以上，检测结果与医院检验结果匹配性良好。

由此可见，肝功三联检测试卡用于定量测定人体全血、血清、血浆中谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性及白蛋白含量，项目之间互相独立，不互相干扰，保证检测结果的准确度；肝功三联检测试卡预留空白检测孔，用于校准谷丙转氨酶、谷草转氨酶、白蛋白测试结果：测试卡项目之间互相独立，加样位置对项目读值有一定影响，位于边缘孔的空白检测卡通过算法拟合可用于校准谷丙转氨酶、谷草转氨酶、白蛋白测试结果，保证检测结果准确；肝功三联检测试卡可实现一次加样同时进行三个项目测试，可检测的样本类型为全血、血清或血浆：肝功三联检测试卡样本量为45ul，检测时间为3min，一次加样可同时检测谷丙转氨酶、谷草转氨酶、白蛋白三个项目；肝功三联检测试卡在检测过程中具有操作简单、成本低、无需专业人员操作、无废液处理要求、快速诊断等优势，配套仪器小型，可随时移动，不受时间、地点的限制，能真正实现床旁诊断，适用于急救、急诊、家庭、药店、社区医院、门诊、体检中心等场所，是未来POCT发展的必然趋势。

如图2所示底座检测孔21依次从上至下看到的是白蛋白检测单元、谷丙转氨酶检测单元、谷草转氨酶检测单元、空白检测单元。

如图3所示需要注意的是仅表达相互之间位置关系，底座形状该处不做要求。

需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、工作、器件、组件和/或它们的组合。

需要说明的是，本申请的说明书和权利要求书及上述附图中的术语“第一”、“第二”等是用于区别类似的对象，而不必用于描述特定的顺序或先后次序。应该理解这样使用的数据在适当情况下可以互换，以便这里描述的本申请的实施方式能够以除了在这里图示或描述的那些以外的顺序实施。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种肝功三联检测试卡，其特征在于：包括压板(1)、底座(2)、检测单元(3)，所述压板(1)上设有加样孔(11)，所述底座(2)上设有四个底座检测孔(21)、底座(2)卡槽，所述检测单元(3)固定在底座(2)卡槽中，且压板(1)卡设在检测单元(3)上方，所述检测单元(3)包括扩散层(31)、滤血层(32)、辅助层(33)、反应层(34)，且四者依次叠放，所述辅助层(33)与反应层(34)整体分为四组，且相互间隔，所述四组反应层(34)包括谷丙转氨酶检测单元、谷草转氨酶检测单元、白蛋白检测单元、空白检测单元。

2.根据权利要求1所述的肝功三联检测试卡，其特征在于：所述压板(1)选用高分子聚合材料，所述底座(2)为透明塑料材质，其中一面具有粘性，可粘贴反应层(34)，所述加样孔(11)为椭圆形，所述底座检测孔(21)为四个独立圆形，所述扩散层(31)为一层均匀的各向均性的亲水性纱网，所述滤血层(32)选用玻璃纤维、无纺布、滤纸、聚醚砜或聚醚砜材料任意一种材料制成，所述辅助层(33)为玻璃纤维膜，所述反应层(34)选用不同孔径的聚砜系列膜、GR/GF/GX系列膜、尼龙膜、聚醚砜或聚砜膜类材质中的任意一种，且反应层(34)上附有相应的谷丙转氨酶检测单元、谷草转氨酶检测单元、白蛋白检测单元、空白检测单元。

3.根据权利要求1所述的肝功三联检测试卡，其特征在于：所述谷丙转氨酶检测单元包括谷丙转氨酶反应试剂，所述谷丙转氨酶反应试剂包括缓冲体系、丙酮酸氧化酶、过氧化物酶、辅酶、色原、激活剂、稳定剂，所述缓冲体系为磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液或者Good`S缓冲液中的任意一种，浓度为0.05M-1.0M，反应PH在6.5-8.0；丙酮酸氧化酶的浓度为50-150U/ml，过氧化物酶溶度为200-1000U/ml；辅酶采用黄素腺嘌呤二核苷酸和硫胺素焦磷酸，黄素腺嘌呤二核苷酸浓度为0.1mg/ml-0.2mg/ml，硫胺素焦磷酸浓度为0.5mg/ml-1mg/ml；色原是单一组分或者两种组分的色原物质，浓度为0.02％-0.5％；丙酮酸氧化酶激活剂采用Mg2+，浓度为0.5g/L-1g/L；酶的稳定剂为糖类糖类或蛋白类稳定剂，在体系中的浓度为0.5％-2％。

4.根据权利要求1所述的肝功三联检测试卡，其特征在于：所述谷草转氨酶检测单元包括谷草转氨酶反应试剂，所述谷草转氨酶反应试剂包括缓冲体系、丙酮酸氧化酶、草酰乙酸脱羧酶、过氧化物酶、辅酶、色原、激活剂和稳定剂，其中，缓冲体系选用磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液或者Good`S缓冲液中任意一种，浓度为0.05M-1.0M，反应PH在6.5-8.0；丙酮酸氧化酶的浓度为50-150U/ml，草酰乙酸脱羧酶浓度为50-150U/ml，过氧化物酶溶度为200-1000U/ml；辅酶采用黄素腺嘌呤二核苷酸和硫胺素焦磷酸，黄素腺嘌呤二核苷酸浓度为0.1mg/ml-0.2mg/ml，硫胺素焦磷酸浓度为0.5mg/ml-1mg/ml；色原是单一组分或者两种组分的色原物质，浓度为0.02％-0.5％；丙酮酸氧化酶激活剂采用Mg2+，浓度为0.5g/L-1g/L；酶的稳定剂为糖类糖类或蛋白类稳定剂，在体系中的浓度为0.5％-2％。

5.根据权利要求1所述的肝功三联检测试卡，其特征在于：所述白蛋白检测单元包括白蛋白反应试剂，所述白蛋白反应试剂包括缓冲体系、染料、表面活性剂，所示缓冲体系为柠檬酸缓冲液、丁二酸缓冲液或者苹果酸缓冲液中的任意一种，浓度为0.5M-1.0M，反应PH为4.2；染料为溴甲酚绿或者溴甲酚紫，浓度为0.1％-0.5％；表面活性剂为聚氧乙烯月桂醚或者曲拉通，浓度为0.1％-0.5％。

6.根据权利要求1所述的肝功三联检测试卡，其特征在于：所述对应谷丙转氨酶检测单元的辅助层(33)包括谷丙转氨酶底物试剂，所述谷丙转氨酶底物试剂包括缓冲体系、L-丙氨酸和α-酮戊二酸，所述缓冲体系选用磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液或者Good`S缓冲液中任意一种，浓度为0.05M-1.0M，反应PH在6.5-8.0；L-丙氨酸浓度为0.5M-1.0M，α-酮戊二酸浓度为5mM-50mM。

7.根据权利要求1所述的肝功三联检测试卡，其特征在于：所述对应谷草转氨酶检测单元的辅助层(33)包括谷草转氨酶底物试剂，所述谷草转氨酶底物试剂包括缓冲体系、L-天冬氨酸和α-酮戊二酸，所述缓冲体系选用磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液或者Good`S缓冲液中任意一种，浓度为0.05M-1.0M，反应PH在6.5-8.0；L-天冬氨酸浓度为0.5M-1.0M，α-酮戊二酸浓度为5mM-50mM。

8.一种基于权利要求1～7中任意一项所述的肝功三联检测试卡的制备方法，其特征在于：反应层(34)的制作；辅助层(33)的处理；整体装配，首先在底座(2)上对应位置粘贴四组空白的反应层(34)，分别将谷丙转氨酶检测单元、谷草转氨酶检测单元、白蛋白检测单元定量喷涂在对应的反应层(34)上，所述空白检测单元反应膜也无反应液，将喷涂好的底座(2)放置37°烘箱烘干，制得反应层(34)。

9.根据权利要求8所述的肝功三联检测试卡的制备方法，其特征在于：将谷丙转氨酶底物试剂浸润辅助层(33)后在37°条件下烘干制备，制备成谷丙转氨酶的辅助层(33)；将谷草转氨酶底物试剂浸润辅助膜后在37°条件下烘干制备，制备成谷草转氨酶的辅助层(33)，白蛋白检测单元、空白检测单元的辅助层(33)不做处理。

10.根据权利要求9所述的肝功三联检测试卡的制备方法，其特征在于：将喷涂有三个单元反应层(34)的烘干好的底座(2)放置平台上，按照辅助层(33)、滤血层(32)、扩散层(31)顺序依次叠放在底座(2)对应单元反应层(34)上，将制备好的三个检测单元(3)放置底座(2)对应的测试孔位置上，将压板(1)压紧，制成肝功三联检测试卡。

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