CZ2017272A3 - Diagnostický proužek pro stanovení množství sarkosinu, kreatininu a peroxidu vodíku v biologickém nebo environmentálním vzorku - Google Patents

Diagnostický proužek pro stanovení množství sarkosinu, kreatininu a peroxidu vodíku v biologickém nebo environmentálním vzorku Download PDF

Info

Publication number
CZ2017272A3
CZ2017272A3 CZ2017-272A CZ2017272A CZ2017272A3 CZ 2017272 A3 CZ2017272 A3 CZ 2017272A3 CZ 2017272 A CZ2017272 A CZ 2017272A CZ 2017272 A3 CZ2017272 A3 CZ 2017272A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
activity
zone
long
strip
concentration
Prior art date
Application number
CZ2017-272A
Other languages
English (en)
Inventor
Dagmar Uhlířová
Michaela Dočekalová
Martina Staňková
Lukáš Melichar
Josef Růžička
René Kizek
Original Assignee
Prevention Medicals s.r.o.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Prevention Medicals s.r.o. filed Critical Prevention Medicals s.r.o.
Priority to CZ2017-272A priority Critical patent/CZ2017272A3/cs
Priority to EP18172282.8A priority patent/EP3404418A3/en
Priority to CA3005214A priority patent/CA3005214A1/en
Publication of CZ2017272A3 publication Critical patent/CZ2017272A3/cs

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/70—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving creatine or creatinine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
    • C12Q1/28—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/558—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/902—Oxidoreductases (1.)
    • G01N2333/906—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.7)
    • G01N2333/9065—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.7) acting on CH-NH groups of donors (1.5)
    • G01N2333/90672—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.7) acting on CH-NH groups of donors (1.5) with oxygen as acceptor (1.5.3) in general
    • G01N2333/90677—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.7) acting on CH-NH groups of donors (1.5) with oxygen as acceptor (1.5.3) in general with a definite EC number (1.5.3.-)
    • G01N2333/90683—Sarcosine oxidase (1.5.3.1)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/902—Oxidoreductases (1.)
    • G01N2333/908—Oxidoreductases (1.) acting on hydrogen peroxide as acceptor (1.11)
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/978—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5)
    • G01N2333/986—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5) acting on amide bonds in cyclic amides (3.5.2), e.g. beta-lactamase (penicillinase, 3.5.2.6), creatinine amidohydrolase (creatininase, EC 3.5.2.10), N-methylhydantoinase (3.5.2.6)

Abstract

Řešení se týká diagnostického proužku pro enzymatický test na stanovení množství sarkosinu a kreatininu na základě vzniklého peroxidu vodíku v biologickém vzorku nebo v environmentálním vzorku s možností vizuálního elektronického vyhodnocení vyhodnocením intenzity barevného produktu reakce. Na diagnostickém proužku jsou aplikovány zóny ze savé matrice, kde první reakční zóna pro stanovení sarkosinu obsahuje sarkosin oxidázu, sodnou sůl 3-(N-ehtyl-3-methylanilin) propansulfonové kyseliny a fenol a druhá reakční zóna obsahuje peroxidázu a 4-amino-2,3-dimethyl-1-fenyl-3-pyrazol nebo může proužek v reakční zóně obsahovat 3,3-diaminobenzidin, o-fenyldiamin nebo amonnou sůl 2,2´-azino-bis(3-ethylbenzothiazolin-6) sulfonové kyseliny.

Description

CZ 2017 - 272 A3
Diagnostický proužek pro stanovení množství sarkosinu, kreatininu a peroxidu vodíku v biologickém nebo environmentálním vzorku
Oblast techniky
Vynález se týká diagnostického proužku pro enzymatický test na stanovení množství sarkosinu a kreatininu na základě vzniklého peroxidu vodíku v biologickém vzorku nebo v environmentálním vzorku.
Dosavadní stav techniky
Rychlý rozvoj analytických metod umožnil vývoj přenosných způsobů identifikace vybraných analytů (látek) jak v prostředí, tak v biologickém vzorku [1-3]. Pro měření koncentrace jednotlivých analytů v biologických tekutinách byla vyvinuta celá řada testovacích zařízení. Taková zařízení byla navržena pro měření například hladiny glukosy, cholesterolu, proteinů, ketonů, fenylalaninu nebo enzymů v krvi, moči, spermatu, slinách. Suché reagenční proužky se používají v klinických laboratořích, ordinacích a domácnostech pro stanovení uvedených analytů ve vzorcích tělesných tekutin. Analýza pomocí enzymatických testů je jednoduchá, časově nenáročná, nevyžadující specializovanou obsluhu. Metodu kvantitativní detekce sarkosinu ve vzorku moči pomocí chromatografie a hmotnostní spektrometrie uvádí spis CN102662013 nebo CN1026800599. Detekci sarkosinu pomocí zařízení na bázi elektroforézyelektrochemiluminiscence popisuje například dokument CN101718746. Kvantitativní rutinní stanovení sarkosinu je však stále náročné na přístrojové vybavení, často vyžaduje chemickou úpravu biologického vzorku a není dostatečně citlivé a přesné.
Byly popsány detekční proužky z plastického materiálu, které obsahují více zón (část s imobilizovaným enzymem, chromogenní substrát, srovnávací etalon). Významné postavení mají detektory inhibice acetylcholinesterázy pro zachycení bojové chemické látky, pesticidů, organofosfátů. Diagnostické testovací proužky slouží pro rychlou semikvantitativní analýzu moči, séra, krve. Uvedená technologie je široce využívána pro stanovení především glukózy [4]. Umožňují snadno a rychle testovat klinicky významné analyty v moči, séru, krvi a vyvodit tak určité závěry o přítomnosti různých onemocnění [5]. Navržené testy mají zpravidla dlouho dobu trvanlivosti a nevyžadují další technické vybavení.
Dosud však chybí proužkový test k rychlé a snadné diagnostice látek, majících vztah k nádorovým onemocněním (sarkosin, hemoglobin), infekčním chorobám (sarkosin a peroxid) nebo funkci ledvin (kreatinin) nebo test využitelný v detekci nebezpečných látek z prostředí.
Literatura:
1. Wang, W., et al., Enzymatic hydrolysis device for zero-trans fatty acid, has liquid feeding mechanism whose liquid outlet is connected with liquid inlet of coil pipe, and tank chassis provided with water outlet connected with liquid outlet of coil pipe, GUANGZHOU AOJIAN FENGZE BIOTECHNOLOGY CO (GUAN-Non-standard).
2. Cao, C., et al., Method for qualitative and quantitative detection of protein in dairy product for detecting protein content in food, involves testing pure milk sample and testing electrophoresis fingerprints followed by performing enzymatic hydrolysis, Univ Shanghai Jiaotong (Usjt-C).
3. Ehrenkranz, J.R.L., System for performing enzyme-based diagnostic test to sample e.g. human, has interpretive algorithm to convert detectable signal from detectable label to numerical value for quantification of amount or activity of enzyme in sample, EHRENKRANZ J R L
- 1 CZ 2017 - 272 A3 (EHRE-Individual) EHRENKRANZ J R L (EHRE-Individual).
4. Douglas, J., et al., Multilayer reacting testing strip and method for measuring concentration of analyte in sample, I. LIFESCAN, Milpitas, CA, US Editor 1997: USA.
5. Apparatus for testing biological sample e.g. saliva sample for detection of cancer, has test pads arranged side by side, so that outer surface of housing defines window through which portions of front surface of test areas are visible, VIGILANT BIOSCIENCES INC (VIGI-Nonstandard).
6. Burg, B., et al., Computer-implemented method for quantifying color change of test medium on diagnostic instrument involves identifying reference samples for medium in the instrument, determining dominant camera-captured color of reference sample/test medium, SCANADU INC (SCAN-Non-standard) SCANADU INC (SCAN-Non-standard) BURG B (BURG-lndividual) ZIZI M (ZIZI-Individual) ROWE A A (ROWE-Individual) SMART A (SMAR-Individual) DE BROUWER W (DBRO-Individual) SCANADU INC (SCAN-Nonstandard).
7. Wahl, R., O. Cromwell, and H. Liebig, esling strip for diagnosis of allergies in vitro and use thereof D. MERCK PATENT GMBH, DE, Editor 1997: Nemecko.
8. TALALAK, Kwanrutai, Julaluk NOIPHUNG, Temsiri SONGJAROEN, Orawon CHAILAPAKUL a Wanida LAIWATTANAPAISAL. A facile low-cost enzymatic paper-based assay for the determination of urine creatinine. Taianta. 2015, 144, 915-921.
Podstata vynálezu
Výše uvedený nedostatek řeší proužkový enzymatický test na vybrané markéry pro posouzení zdravotního stavu (funkce ledvin, infekce, nádorová onemocnění) nebo přítomnosti nebezpečné látky v prostředí, umožňující provedení s plnou krví, sérem, plazmou, močí, spermatem, případně vodou, vynálezu se týká proužkového testu k in vitro detekci hemoglobinu, sarkosinu, kreatininu, peroxidu vodíku v biologickém vzorku nebo environmentálním vzorku s vizuálním vyhodnocením intenzity barevného produktu reakce, ale též s možností elektronického vyhodnocení jak pomocí počítače, tak pomocí chytrého telefonu.
Předmětem vynálezu je diagnostický proužek pro stanovení množství sarkosinu v biologickém nebo environmentálním vzorku, který sestává z podložky, na které jsou aplikovány zóny ze savé matrice pro provedení testu. Proužek má šířku 0.4 cm a délku 4,0 cm. Na jednom konci proužku je aplikována vzorková zóna délky 0,5 cm, na kterou navazuje první reakční zóna délky 1,0 cm, obsahující sarkosin oxidázu o aktivitě 1-20 KU/1. sodnou sůl 3-(N-ethyl-3-methylanilin) propansulfonové kyseliny (TOPS) o koncentraci 0,1-2,0 mM a fenol o koncentraci 1-20 mM. Na první reakční zónu navazuje druhá reakční zóna délky 0,7 cm obsahující peroxidázu o aktivitě 1100 KU/1 a 4-amino-2,3-dimethyl-l-fenyl-3-pyrazolu (AAP) o koncentraci 0,1-2,0 mM. Druhá reakční zóna přechází v detekční zónu délky 0,3 cm a detekční zóna pak přechází v zónu včelího vosku délky 1,5 cm, která tvoří druhý konec diagnostického proužku.
Předmětem vynálezu je také diagnostický proužek pro stanovení množství sarkosinu stejného provedení, jak je uvedeno výše, kde proužek má šířku 0,4 cm a délku 4,0 cm. Na jednom konci proužku je aplikována vzorková zóna délky 0,5 cm, na kterou navazuje reakční zóna délky 2,5 cm, obsahující sarkosin oxidázu o aktivitě 1-20 KU/1, 3,3 diaminobenzidin (DAB) o koncentraci 1-15 mM, peroxidázu o aktivitě 1-100 KU/1 a fenol o koncentraci 1-20 mM. Reakční zóna přechází v detekční zónu délky 0,3 cm, která pak přechází v zónu včelího vosku (Z) délky 0,7 cm, která tvoří druhý konec diagnostického proužku.
-2CZ 2017 - 272 A3
Předmětem vynálezu je i diagnostický proužek pro stanovení množství sarkosinu stejného provedení, jak je uvedeno výše, kde proužek má šířku 0,4 cm a délku 4,0 cm. Na jednom konci proužku je aplikována vzorková zóna délky 0,5 cm, na kterou navazuje reakění zóna délky 2,5 cm, obsahující sarkosin oxidázu o aktivitě 1-20 KU/1, o-fenyldiamin (OPD) o koncentraci 5-25 mM, peroxidázu o aktivitě 1-100 KU/1 a fenol o koncentraci 1-20 mM. Reakění zóna přechází v detekční zónu délky 0,3 cm, která pak přechází v zónu včelího vosku (Z) délky 0,7 cm, která tvoří druhý konec diagnostického proužku.
Předmětem vynálezu je navíc diagnostický proužek pro stanovení množství sarkosinu stejného provedení, jak je uvedeno výše, kde proužek má šířku 0,4 cm a délku 4,0 cm. Na jednom konci proužku je aplikována vzorková zóna délky 0,5 cm, na kterou navazuje reakční zóna délky 2,5 cm, obsahující sarkosin oxidázu o aktivitě 1-20 KU/1, amonnou sůl 2,2'-azino-bis(3ethylbenzolhiazolin-6) sulfonové kyseliny o koncentraci 1-6 mM, peroxidázu o aktivitě 1-100 KU/1 a fenol o koncentraci 1-20 mM. Reakční zóna přechází v detekční zónu délky 0,3 cm, která pak přechází v zónu včelího vosku (Z) délky 0,7 cm, která tvoří druhý konec diagnostického proužku.
Předmětem vynálezu je dále diagnostický proužek pro stanovení množství kreatininu v biologickém nebo environmentálním vzorku, který sestává z podložky, na které jsou aplikovány zóny ze savé matrice pro provedení testu. Proužek má šířku 0,4 cm a délku 4,0 cm. Na jednom konci proužkuje aplikována vzorková zóna délky 0,5 cm, na kterou navazuje první reakční zóna délky 1,0 cm, obsahující kreatinázu o aktivitě 6-15 KU/1, sarkosin oxidázu o aktivitě 5-12 KU/1, askorbát oxidázu o aktivitě 1-5 KU/1, katalázu o aktivitě 100-400 KU/1, sodnou sůl 3-(N-ethyl-3methylanilin) propansulfonové kyseliny (TOPS) o koncentraci 0,3-1,2 mM a fenol o koncentraci 1-15 mM. Na první reakční zónu navazuje druhá reakční zóna délky 0,7 cm obsahující kreatininázu o aktivitě 50-300 KU/1, peroxidázu o aktivitě 20-100 KU/1 a 4-amino-2,3-dimethyll-fenyl-3-pyrazolu (AAP) o koncentraci 0,5-4,0 mM. Druhá reakční zóna přechází v detekční zónu délky 0,3 cm a detekční zóna přechází v zónu včelího vosku délky 1,5 cm, která tvoří druhý konec diagnostického proužku.
První reakční zóna diagnostického proužku pro stanovení kreatininu podle jiného výhodného provedení obsahuje kreatinázu o aktivitě 6-15 KU/1. sarkosin oxidázu o aktivitě 5-12 KU/1, askorbát oxidázu o aktivitě 1-5 KU/1, katalázu o aktivitě 100-400 KU/1 a fenol o koncentraci 115 mM a druhá reakční zóna obsahuje kreatininázu o aktivitě 50-300 KU/1, peroxidázu o aktivitě 20-100 KU/1 a 3,3 diaminobenzidin (DAB) o koncentraci 1-15 mM.
První reakční zóna diagnostického proužku pro stanovení kreatininu podle dalšího výhodného provedení obsahuje kreatinázu o aktivitě 6-15 KU/1, sarkosin oxidázu o aktivitě 5-12 KU/1, askorbát oxidázu o aktivitě 1-5 KU/1, katalázu o aktivitě 100-400 KU/1 a fenol o koncentraci 1-15 mM a druhá reakční zóna obsahuje kreatininázu o aktivitě 50-300 KU/1, peroxidázu o aktivitě 20100 KU/1 peroxidázu o aktivitě 20-100 KU/1 a o-fenyldiamin (OPD) o koncentraci 5-25 mM.
Předmětem vynálezu je také diagnostický proužek pro stanovení množství peroxidu vodíku v biologickém nebo environmentálním vzorku, který sestává z podložky, na které jsou aplikovány zóny ze savé matrice pro provedení testu. Proužek má šířku 0,4 cm a délku 4,0 cm. Na jednom konci proužkuje aplikována vzorková zóna délky 0,5 cm, na kterou navazuje první reakční zóna délky 1,0 cm, obsahující sodnou sůl 3-(N-ethyl-3-methylanilin) propansulfonové kyseliny (TOPS) o koncentraci 0,1-2,0 mM a druhá reakční zóna o délce 0,7 cm obsahuje 4-amino-2,3dimethyl-l-fenyl-3-pyrazolu (AAP) o koncentraci 0,1-2,0 mM a peroxidázu o aktivitě 3-10 KU/1. Druhá reakční zóna přechází v detekční zónu délky 0,3 cm a detekční zóna přechází v zónu včelího vosku (Z) délky 1,5 cm, která tvoří druhý konec diagnostického proužku.
Diagnostický proužek pro stanovení množství peroxidu vodíku stejného provedení, jak je uvedeno výše, může obsahovat jednu reakční zónu délky 2,5 cm, která obsahuje peroxidázu o aktivitě 3-100 KU/1, 3,3 diaminobenzidin (DAB) o koncentraci 1-15 mM.
-3CZ 2017 - 272 A3
Jiný výhodný diagnostický proužek pro stanovení množství peroxidu vodíku stejného provedení, jak je uvedeno výše, může obsahovat jednu reakční zónu délky 2,5 cm, která obsahuje peroxidázu o aktivitě 3-100 KU/1, o-fenyldiamin (OPD) o koncentraci 5-25 mM.
Další výhodný diagnostický proužek pro stanovení množství peroxidu vodíku stejného provedení, jak je uvedeno výše, může obsahovat jednu reakční zónu, která obsahuje peroxidázu o aktivitě 3-100 KU/1. amonnou sůl 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazolin-6) sulfonové kyseliny (ABTS) o koncentraci 1-6 mM.
Podložka diagnostického proužku je výhodně provedena z plastové fólie, papírového nebo kovového materiálu. Savým materiálem je nejčastěji filtrační papír, celulózový nebo plastový materiál. Savý nosič se napouští známým způsobem napouštěcími roztoky. Napuštěné a usušené savé nosiče se upraví na čtvercová nebo obdélníková pole, která se upevní na podložku proužku [7].
Biologickým vzorkem vhodným pro detekci diagnostickým proužkem podle vynálezu je například lidská moč, sérum, plazma nebo sperma; environmentálním vzorkem může být například přírodní nebo bazénová voda.
Ke každému typu diagnostického proužku přísluší stupnice intenzity barvy určující intenzitu proběhlé reakce a množství analytu (Obr. 4-6). Při vizuálním hodnocení kvantitativního množství analytu se porovnává intenzita vzniklého produktu barevné reakce v detekční zóně s intenzitou zbarvení jednotlivých detekčních zón s kontrolní stupnicí intenzit dané barvy určující množství zkoumané látky ve vzorku. Typický proužkový test zahrnuje negativní a pozitivní kontrolu (Obr. 2) [6]. Kromě kontrolních stupnic intenzit dané barvy pro určitý analyt obsahuje testovací systém zpravidla dále testovací zkumavky, testovací stojánek, pipety pro jedno použití a vhodné detekční substráty, jako je 4-amino-2,3-dimethyl-l-fenyl-3-pyrazol (AAP), sodná sůl 3-(N-ethyl-3methylanilin) propansulfonové kyseliny (TOPS), 3,3 diaminobenzidin (UAB) a o-Phenyldiamin (OPD) a amonná sůl 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazolin-6) sulfonové kyseliny (ABTS).
Vynález umožňuje snadnou delekci analytů využití určení množství sarkosinu, kreatininu, hemoglobinu, peroxidu vodíku v biologickém vzorku u hospitalizovaných pacientů nebo domácí testování určení přítomnosti dané látky v analyzovaném vzorku nebo toxické látky v environmentálním vzorku.
Přehled vyobrazení:
Obr. 1: (A) Metodou 3D tisku připravené šablony pro přípravu a zpracování jednotlivých zón papírových detekčních proužků. (B) Návrh jednoduchého 3D tiskem připraveného držáku pro jednotlivé proužky; zleva: spodní díl, vrchní díl; a - celková délka; b vnitřní část, c - šířka, d prostor pro nasátí vzorku, e - detekční okénko, f- délka nad detekčním okénkem, g - délka pod detekčním okénkem, h - šířka k nasávací části.
Obr. 2: (A) Konstrukční schéma proužkového detekčního testu s jednotlivými zónami. Možnosti použití materiálu pro jednotlivé zóny. (B) Uspořádání vlastního testovacího systému do podoby KDN, kde K je kontrolní diagnostický proužek, D je detekční proužek, N je negativní proužek.
Obr. 3: Detekční proužek s uspořádáním jednotlivých zón, (A) obsahující dvě reakční zóny; (B) obsahující jednu reakční zónu; A = 0,4 cm; B = 4,0 cm, V = 0,5 cm; R1 = 1,0 cm; 112 = 0,7 cm; D = 0,3 cm; Z = 1,5 cm.
Obr. 4: Srovnávací proužek pro stanovení množství vzniklého peroxidu vodíku ve vzorku pro určení množství sarkosinu. (A) detekční škála intenzity barvy použitá pro vyhodnocení množství
-4CZ 2017 - 272 A3 sarkosinu ve vzorku; (B) Závislost denzily barevné reakce na množství sarkosinu; v insetu lineární část závislosti (R2 = 0,99); (C) Známé množství v testovacích vzorcích artificiální moči šrafovaný graf, v porovnání se stanovením koncentrace sarkosinu v těchto vzorcích pomocí detekčního proužku, jako aplikované koncentrace sarkosinu. Průměrná chyba stanovení 10%.
Obr. 5: Detekční proužek pro stanovení množství vzniklého peroxidu vodíku ve vzorku. (A) barevná detekční škála použitá pro vyhodnocení množství peroxidu vodíku ve vzorku; (B) Závislost denzity barevné reakce na množství peroxidu vodíku; v insetu lineární část závislosti (R2 = 0,99); (C) Známé množství v testovacích vzorcích artificiální moči - šrafovaný graf, v porovnání se stanovením koncentrace peroxidu vodíku v těchto vzorcích pomocí detekčního proužku, jako aplikované koncentrace peroxidu vodíku. Průměrná chyba stanovení 8%.
Obr. 6: Detekční proužek pro stanovení množství vzniklého peroxidu vodíku ve vzorku pro určení hladiny kreatininu. (A) Barevná detekční škála použitá pro vyhodnocení množství kreatininu ve vzorku; (B) Závislost denzity barevné reakce na množství kreatininu; v insetu lineární část závislosti (R = 0,95); (C) Aplikace detekčního proužku pro určení množství kreatininu v biologickém vzorku (moči), šrafovaný graf, v porovnání s fotometrickou detekcí (pikrát). Průměrná chyba stanovení 15%.
Příklady uskutečnění vynálezu
Příprava diagnostického proužku pro enzymatické stanovení sarkosinu, kreatininu nebo peroxidu vodíku ve vzorku
Sestavení testu probíhalo následovně. Připravil se diagnostický proužek 1 z oboustranně lepící podložky odstřihnutím z lepící pásky (Tesá; Budapešť, Maďarsko) o délce 4,0 cm a šířce 1,9 cm. Na straně, kde je ochranná folie, se vyřezal nožem pruh o délce 2,5 cm a šířce 0,4 cm. Takto připravená podložka se vložila do plastové šablony na výrobu proužků (Obr. 1A). Po odstranění ochranné folie mimo vymezený pruh se nanla tenká vrstva včelího vosku. Po zaschnutí vosku se odstrannila i zbylá ochranná folie z vymezeného pruhu. Poté se připravily obdélníky jednotlivých zón z filtračního papíru Whatman 1 (Whatman, GE Healthcare Life Sciences, Spojené království) o šířce 0,4 cm; pro vzorkovou zónu V o délce 0,5 cm a pro detekční zónu D o délce 0,3 cm. Dále se připravil obdélník z filtračního papíru o šířce 0,4 cm a délce 1,0 cm pro první reakční zónu RL obdélník z filtračního papíru o šířce 0,4 cm a délce 0,7 cm pro druhou reakční zónu R2 nebo případné obdélník z filtračního papíru o šířce 0,4 cm a délce 2,5 cm pro první reakční zónu R1 pro typ detekčního proužku pouze sjednotí reakční zónou (Obr. 3B).
Na reakční zóny pro určený typ testu se nanesla příslušná reakční činidla dle složení a postupu uvedeného v jednotlivých příkladech. Reakční činidla se nechala zaschnout. Poté se všechny obdélníky z filtračního papíru postupně nalepily na lepící podložku v pořadí dle Obr. 3 (A) nebo Obr. 3 (B). Pro větší stálost a delší trvanlivost je lépe obdélníková pole po nanesení reakčního činidla lyofilizovat. Před samotným testováním vzorku se připravené diagnostické proužky 1 vložily vzorkovou zónou V do nádobek nejprve s několika standardy sarkosinu, kreatininu nebo peroxidu vodíku o známém množství a v nádobce se ponechaly 5-10 minut. Alternativně lze použít držák na test (Obr. 1 B). Během této doby došlo ke vzlínání vzorku, reakcím v reakčních zónách a barevné reakci v detekční zóně D. Reakce se zastavila včelím voskem na konci proužku v zóně Z. Za 15 minut se vyhodnotil výsledek změřením intenzity zbarvení detekční zóny metodou Qinslab (Color test) (Obr. 4-0).
Příklad 1
Stanovení sarkosinu ve vzorku moče
Pro testování se použije vzorek čerstvé, nejlépe ranní moče, která musí být promíchána a
-5 CZ 2017 - 272 A3 diagnostický proužek 1 se dvěma reakěními zónami Rl a R2 (Obr. 3A) připravený dle postupu uvedeného výše.
Připraví se také reakění ěinidlo (10 μΐ) pro reakční zónu Rl dle složení a koncentrací uvedených v tabulce 1:
Tabulka 1:
Složka Koncentrace
Sarkosin oxidáza 1-20 KU/1
Sodná sůl 3-(N-ethyl-3- methylanilin) propansulfonové kyseliny (TOPS) 0,1-2,0 mM
Fenol 1-20 mM
Dále se připraví reakční činidlo (5 μΐ) pro reakční zónu R2 dle složení a koncentrací uvedených v tabulce 2:
Tabulka 2:
Složka Koncentrace
Peroxidáza 1-100 K.U/1
4-amino-2,3-dimethyl-1 feny 1-3-pyrazol (AAP) 0,1-2,0 mM
Připravené obdélníky z filtračního papíru dle postupu uvedeného výše pro reakční zónu Rl a reakční zónu R2 se vloží do petriho misky. Na obdélník pro reakční zónu Rl se napipetuje 10 μΐ reakčního činidla pro zónu Rl a na obdélník pro reakční zónu R2 se napipetuje 5 μΐ činidla pro reakční zónu R2. Reakční činidla se nechají zaschnout. Poté se všechny obdélníky z filtračního papíru postupně nalepí na lepící podložku v pořadí dle Obr. 3 (A). Pro větší stálost a delší trvanlivost je lépe obdélníková pole po nanesení reakčního činidla lyofilizovat.
Připravený diagnostický proužek s nanesenými reakěními činidly se vloží vzorkovou zónou V do nádobky se vzorkem, kde dojde k rychlému vzlínání. Doba vzlínání je 5-10 minut. Během této doby dochází k enzymatickým reakcím v reakčních zónách Rl a R2 a barevné reakci v detekční zóně. Enzymatická reakce se zastaví v zóně Z včelího vosku na druhém konci proužku. V reakčních zónách Rl a R2 probíhají následující enzymatické reakce:
Sarkosin oxidáza
Sarkosin + O2 + H2O θ Glycin + HCHO + H2O2
Peroxidáza
H2O2 + AAP + TOPS + Fenol θ Chinonimin + 4 H2O
Enzym sarkosin oxidáza rozloží sarkosin na glycin, HCHO a H2O2. Vzniklý H2O2 reaguje se substrátem 4-amino-2,3-dimethyl-l-fenyl-3-pyrazol(AAP), sodnou solí 3-(N-ethyl-3methylanilin) propansulfonové kyseliny (TOPS) a enzymem peroxidáza. Vytvoří se fialově
-6CZ 2017 - 272 A3 zbarvený produkt chinonimin, jehož intenzita zbarvení je přímo úměrná koncentraci sarkosinu ve vzorku. Množství sarkosinu je úměrné množství vznikajícího H2O2. Následně se zbarvení detekění zóny naskenuje a po té vyhodnotí pomocí programu Qinslab (color test).
Alternativně lze místo 4-amino-2,3-dimethyl-l-fenyl-3-pyrazolu (AAP) a sodné soli 3-(N-ethyl3-methylanilin) propansulfonové kyseliny (TOPS) použít:
a) 3,3 diaminobenzidin (DAB) o koncentraci 1-15 mM, který tvoří hnědě zbarvený produkt. K testování se pak použije diagnostický proužek 1 jen s první reakční zónou R1 délky 2,5 cm, kde probíhají následující enzymatické reakce:
Sarkosin oxidáza
Sarkosin + O2 + H2O θ Glycin + HCHO + H2O2
Peroxidáza
H2O2 + Fenol + DAB θ ox. DAB + 4 H2O
b) o-fenyldiamin (OPD), o koncentraci 5-25 mM, který tvoří žlutě zbarvený produkt.
K testování se pak použije diagnostický proužek 1 jen s první reakění zónou R1 délky 2,5 cm kde probíhají následující enzymatické reakce:
Sarkosin oxidáza
Sarkosin + O2 + H2O θ Glycin 4- HCHO 4- H2O2
Peroxidáza
H2O2 + Fenol + OPD θ ox. OPD + 4 H2O
c) amonná sůl 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazolin-6) sulfonové kyseliny (ABTS) o koncentraci 1-6 mM, která tvoří zeleně zbarvený produkt. K testování se pak použije diagnostický proužek 1 jen s první reakění zónou RC délky 2,5 cm, kde probíhají následující enzymatické reakce:
Sarkosin oxidáza
Sarkosin + O2 + H2O θ Glycin 4- HCHO 4- H2O2
Peroxidáza
H2O2 + Fenol + ABTS θ ox. ABTS + 4 H2O
Příklad 2
Stanovení peroxidu vodíku ve vzorku bazénové vody
Pro testování se použije vzorek bazénové vody a detekění proužek 1 s jednou reakění zónou R1 připravený dle postupu uvedeného výše.
Připraví se také reakění činidlo (10 μΐ) pro reakění zónu R1 dle složení a koncentrací uvedených v tabulce 1:
Tabulka 1:
-7 CZ 2017 - 272 A3
Složka Koncentrace
Peroxidáza 3-100 KU/1
4-amino-2,3-dimethyl-1 -fenyl-3pyrazol (AAP) 0,1-2,0 mM
Sodná sůl 3-(N-ethyl-3-methylanilin) propansulfonové kyseliny (TOPS) 0,1 -2,0 mM
Připravený obdélník z filtračního papíru, dle postupu uvedeného výše, pro reakční zónu Rl se vloží do petriho misky. Na obdélník pro reakční zónu Rl se napipetuje 10 μΐ reakčního činidla Rl. Reakční činidlo se nechá zaschnout. Všechny obdélníky z filtračního papíru se postupně nalepí na lepící podložku v pořadí dle Obr.3 (B).
Připravený diagnostický proužek 1 s naneseným reakčním činidlem se vloží vzorkovou zónou V do nádobky se vzorkem, kde dojde k rychlému vzlínání. Doba vzlínání je 5-10 minut. Během této doby dochází k enzymatickým reakcím v reakčních zónách Rl a R2 a barevné reakci v detekční zóně D. V reakční zóně Rl probíhá následující enzymatická reakce:
Peroxidáza
H2O2 + AAP + TOPS θ Chinonimin + 4 H2O
V této reakci je důležitý enzym peroxidáza, který rozkládá peroxid vodíků za přítomnosti substrátu 4-amino-2,3-dimethyl-l-fenyl-3-pyrazolu (AAP) a sodné soli 3-(N-ethyl-3methylanilin) propansulfonové kyseliny (TOPS). Po reakci enzymu peroxidázy a substrátu se vytvoří fialově zbarvený chinonimin, jehož intenzita zbarvení je přímo úměrná koncentraci H2O2. Enzymatická reakce se zastaví v zóně Z včelího vosku na druhém konci proužku L Následně se zbarvení detekční zóny naskenuje a po té vyhodnotí pomocí programu Qinslab (color test).
Alternativně lze místo 4-amino-2,3-dimethyl-l-fenyl-3-pyrazolu (AAP) a sodné soli 3-(N-ethyl3-methylanilin) propansulfonové kyseliny (TOPS) použít:
a) 3,3-diaminobenzidin (DAB) o koncentraci 1-15 mM, který tvoří hnědě zbarvený produkt. V reakční zóně Rl proužku pak kde probíhá následující enzymatická reakce:
Peroxidáza
H2O2 + DAB θ ox. DAB + 4 H2O
b) o-fenyldiamin (OPD), o koncentraci 5-25 mM, který tvoří žlutě zbarvený produkt.
V reakční zóně Rl kde probíhá následující enzymatické reakce:
Peroxidáza
H2O2 + OPD θ ox. OPD + 4 H2O
c) amonná sůl 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazolin-6) sulfonové kyseliny (ABTS) o koncentraci 1-6 mM, která tvoří zeleně zbarvený produkt. V reakční zóně Rl, kde probíhá následující enzymatické reakce:
Peroxidáza
H2O2 + ABTS θ ox. ABTS + 4 H2O
-8CZ 2017 - 272 A3
Příklad 3
Stanovení kreatininu ve vzorku plazmy
Pro testování se použije vzorek čerstvé plazmy a diagnostický proužek i se dvěma reakčními zónami Rl a R2 připravený dle postupu uvedeného výše.
Připraví se také reakční činidlo (10 μΐ) pro reakční zónu Rl dle složení a koncentrací uvedených v tabulce 1:
Tabulka 1
Složka Koncentrace
Kreatináza 6-15 KU/1
Sarkosin oxidáza 5-12 KU/1
Askorbát oxidáza 1-5 KU/1
Kataláza 100-400 KU/1
Sodná sůl kyseliny 3-(N-ethyl-3methylanilino)-2-hydroxypropansulfonové (TOPS) 0,3-1,2 mM
Fenol 1-15 mM
Připraví se dále reakční činidlo (5 μΐ) pro reakční zónu R2 dle složení a koncentrací uvedených v tabulce 2:
Tabulka 2
Složka Koncentrace
Kreatinináza 50-300 KU/1
Peroxidáza 20-100 KU/1
4-amino-2,3-dimethyl-l-fenyl-3-pyrazol (AAP) 0,5-4,0 mM
Připraví se reakční zóny Rl a R2 s reakčními činidly a kompletní diagnostický proužek 1 tak, jak je uvedeno v příkladu 1.
Připravený diagnostický proužek i s nanesenými reakčními činidly se vloží vzorkovou zónou V do nádobky se vzorkem. Během vzlínání v reakčních zónách Rl a R2 probíhají následující enzymatické reakce:
KiWůnhtÓZH:
-9CZ 2017 - 272 A3
Pro stanovení kreatininu ve vzorku moči a plazmě jsou důležité enzymy kreatinináza, který je potřebný pro rozklad kreatininu, dále enzym kreatináza, který rozloží vzniklý kreatin na sarkosin a močovinu. Sarkosin rozštěpí přítomný enzym sarkosin oxidáza za vzniku peroxidu, glycinu a formaldehydu. Množství kreatininu je úměrné množství vznikajícího H2O2. H2O2 se substrátem 4amino-2,3-dimethyl-l-fenyl-3-pyrazol (AAP), sodnou solí 3-(N-ethyl-3-methylanilin) propansulfonové kyseliny (TOPS) a enzymem peroxidáza, vytvoří fialově zbarvený produkt chinonimin, jehož intenzita zbarvení je přímo úměrná koncentraci kreatininu ve vzorku. Enzymatická reakce se zastaví včelím voskem na druhém konci proužku. Alternativně lze použít i substrát DAB (3,3 diaminobenzidin) nebo OPD (o-Phenyldiamin), který se přidá do reakčního činidla pro reakční zónu R2 jak je uvedeno v předchozích příkladech.
Průmyslová využitelnost
Test je vhodný pro stanovení sarkosinu, kreatininu, peroxidu vodíku v biologickém vzorku, plazmě, vodě a především v moči. Oproti běžným postupům (spektrofotometrickému stanovení) je doba stanovení výrazně zkrácena bez požadavků na nákladné přístrojové vybavení s minimální úpravou. Výsledek testu se projeví za 10 až 15 minut. Informace získaná tímto testem umožní normalizování dalších klinických testů a stanovení diagnóz.

Claims (15)

  1. NÁROKY NA OCHRANU
    1. Diagnostický proužek (1) pro stanovení množství sarkosinu v biologickém nebo environmentálním vzorku, který sestává z podložky, na které jsou aplikovány zóny ze savé matrice pro provedení testu, vyznačující se tím, že proužek (I) má šířku (A) 0,4 cm délku (B) 4,0 cm, přičemž na jednom konci proužkuje aplikována vzorková zóna (V) délky 0,5 cm, na kterou navazuje reakční zóna (Rl) délky 1,0 cm, obsahující sarkosin oxidázu o aktivitě 1-20 KU/1, sodnou sůl 3-(N-ethyl-3-methylanilin) propansultónové kyseliny (TOPS) o koncentraci 0,1-2,0 mM a fenol o koncentraci 1,0-20,0 mM, na reakční zónu (Rl) navazuje reakční zóna (R2) délky 0,7 cm, obsahující peroxidázu o aktivitě 1-100 KU/1 a 4-amino-2,3-dimethyl-l-fenyl-3-pyrazolu o koncentraci 0,1-2,0 mM, reakční zóna (R2) přechází v detekční zónu (D) délky 0,3 cm a detekční zóna (D) přechází v zónu včelího vosku (Z) délky 1,5 cm, která tvoří druhý konec diagnostického proužku
  2. 2. Diagnostický proužek (1) pro stanovení množství sarkosinu dle nároku 1, vyznačující se tím, že proužek (1) má šířku (A) 0,4 cm délku (B) 4,0 cm, přičemž na jednom konci proužku (1) je aplikována vzorková zóna (V) délky 0,5 cm, na kterou navazuje reakční zóna (Rl) délky 2,5 cm, obsahující sarkosin oxidázu o aktivitě 1,0-20,0 KU/1, 3,3-diaminobenzidin (DAB) o koncentraci 1,0 - 15,0 mM, peroxidázu o aktivitě 1-100 KU/1 a fenol o koncentraci 1,0-20,0 mM, reakční zóna (Rl) přechází v detekční zónu (D) délky 0,3 cm a detekční zóna (D) přechází v zónu (Z) včelího vosku délky 0,7 cm, která tvoří druhý konec diagnostického proužku (1).
  3. 3. Diagnostický proužek (1) pro stanovení množství sarkosinu dle nároku 1, vyznačující se tím, že proužek (1) má šířku (A) 0,4 cm délku (B) 4,0 cm, přičemž na jednom konci proužku (1) je aplikována vzorková zóna (V) délky 0,5 cm, na kterou navazuje reakční zóna (Rl) délky 2,5 cm, obsahující sarkosin oxidázu o aktivitě 1,0-20,0 KU/1, o-fenyldiamin (OPD) o koncentraci 5,0-25,0 mM, peroxidázu o aktivitě 1,0-100,0 KU/1 a fenol o koncentraci 1,0-20,0 mM, reakční
    - 10CZ 2017 - 272 A3 zóna (R1) přechází v detekční zónu (D) délky 0,3 cm a detekční zóna (D) přechází v zónu (Z) včelího vosku délky 0,7 cm, která tvoří druhý konec diagnostického proužku (1).
  4. 4. Diagnostický proužek (1) pro stanovení množství sarkosinu dle nároku 1, vyznačující se tím, že proužek (1) má šířku (A) 0,4 cm délku (B) 4 cm, přičemž na jednom konci proužku (1) je aplikována vzorková zóna (V) délky 0,5 cm, na kterou navazuje reakční zóna (Rl) délky 2,5 cm, obsahující sarkosin oxidázu o aktivitě 1,0-20,0 KU/1, amonnou sůl 2,2'-azino-bis(3ethylbenzothiazolin-6) sulfonové kyseliny o koncentraci 1,0-6,0 mM, peroxidázu o aktivitě 1-100 KU/1 a fenol o koncentraci 1,0-20,0 mM, reakční zóna (Rl) přechází v detekční zónu (D) délky 0,3 cm a detekční zóna (D) přechází v zónu (Z) včelího vosku délky 0,7 cm, která tvoří druhý konec diagnostického proužku (1).
  5. 5. Diagnostický proužek (1) pro stanovení množství kreatininu v biologickém nebo environmentálním vzorku, který sestává z podložky, na které jsou aplikovány zóny ze savé matrice pro provedení testu, vyznačující se tím, že proužek (1) má šířku (A) 0,4 cm délku (B) 4,0 cm, přičemž na jednom konci proužku (1) je aplikována vzorková zóna (V) délky 0,5 cm, na kterou navazuje reakční zóna (Rl) délky 1,0 cm, obsahující kreatinázu o aktivitě 6-15 KU/1, sarkosin oxidázu o aktivitě 5-12 KU/1, askorbát oxidázu o aktivitě 1-5 KU/1, katalázu o aktivitě 100-400 KU/1, sodnou sůl 3-(N-ethyl-3-methylanilin) propansulfonové kyseliny o koncentraci 0,3-1,2 mM a fenol o koncentraci 1-15 mM, na reakční zónu (Rl) navazuje reakční zóna (R2) délky 0,7 cm obsahující kreatininázu o aktivitě 50-300 KU/1, peroxidázu o aktivitě 20-100 KU/1 a 4-amino-2,3-dimethyl-l-fenyl-3-pyrazolu (AAP) o koncentraci 0,5-4,0 mM, reakční zóna (R2) přechází v detekční zónu (D) délky 0,3 cm a detekční zóna (D) přechází v zónu včelího vosku (Z) délky 1,5 cm, která tvoří druhý konec diagnostického proužku (1).
  6. 6. Diagnostický proužek (1) podle nároku 5, vyznačující se tím, že reakční zóna (Rl) obsahuje kreatinázu o aktivitě 6-15 KU11, sarkosin oxidázu o aktivitě 5,0-12,0 KU/1, askorbát oxidázu o aktivitě 1-5 KU/1, katalázu o aktivitě 100-400 KU/1 a fenol o koncentraci 1-15 mM a reakční zóna (R2) obsahuje kreatininázu o aktivitě 50-300 KU/1, peroxidázu o aktivitě 20-100 KU/1 a 3,3 diaminobenzidin (DAB) o koncentraci 1-15 mM.
  7. 7. Diagnostický proužek (1) podle nároku 5, vyznačující se tím, že reakční zóna (Rl) obsahuje kreatinázu o aktivitě 6-15 KU/1, sarkosin oxidázu o aktivitě 5-12 KU/1, askorbát oxidázu o aktivitě 1-5 KU/1, katalázu o aktivitě 100-400 KU/1 a fenol o koncentraci 1-15 mM, na reakční zónu (Rl) navazuje reakční zóna (R2) obsahující kreatininázu o aktivitě 50-300 KU/1, peroxidázu o aktivitě 20-100 KU/1 a o-fenyldiamin (OPD) o koncentraci 5-25 mM.
  8. 8. Diagnostický proužek (1) pro stanovení množství peroxidu vodíku v biologickém nebo environmentálním vzorku, který sestává z podložky, na které jsou aplikovány zóny ze savé matrice pro provedení testu, vyznačující se tím, že proužek (1) má šířku (A) 0,4 cm délku (B) 4,0 cm, přičemž na jednom konci proužku (1) je aplikována vzorková zóna (V) délky 0,5 cm, na kterou navazuje reakční zóna (Rl) o délce 1,0 cm obsahující sodnou sůl 3-(N-ethyl-3methylanilin) propansulfonové kyseliny o koncentraci 0,1-2,0 mM, reakční zóna (Rl) přechází v druhou reakční zónu (R2), která je dlouhá 0,7cm a obsahuje peroxidázu o aktivitě 3-100KU/1 a 4amino-2,3-dimethyl-l-fenyl-3-pyrazolu o koncentraci 0,1-2,0 mM (R2), dále přechází v detekční zónu (D) délky 0,3 cm a detekční zóna (D) přechází v zónu (Z) včelího vosku délky 1,5 cm. která tvoří druhý konec diagnostického proužku (1).
  9. 9. Diagnostický proužek (1) pro stanovení množství peroxidu vodíku, vyznačující se tím, že reakční zóna (Rl) obsahuje peroxidázu o aktivitě 3,0-100,0 KU/1 a 3,3-diaminobenzidin (DAB) o koncentraci 1-15 mM.
    -11CZ 2017 - 272 A3
  10. 10. Diagnostický proužek (1) pro stanovení množství peroxidu vodíku, vyznačující se tím, že reakční zóna (Rl) obsahuje peroxidázu o aktivitě 3,0-100,0 KU/1 a o-fenyldiamin (OPD) o koncentraci 5-25 mM.
  11. 11. Diagnostický proužek (1) pro stanovení množství peroxidu vodíku, vyznačující se tím, že reakční zóna (Rl) obsahuje peroxidázu o aktivitě 3-100 KU/1 a amonnou sůl 2,2'-azino-bis(3ethylbenzothiazolin-6) sulfonové kyseliny o koncentraci 1 -6 mM.
  12. 12. Diagnostický proužek (1) podle nároků 1-11, vyznačující se tím, že podložkou diagnostického proužkuje plastová fólie, papírový nebo kovový materiál.
  13. 13. Diagnostický proužek (1) podle nároků 1-12, vyznačující se tím, že savým materiálem je filtrační papír, celulózový nebo plastový materiál.
  14. 14. Diagnostický proužek (1) podle nároků 1-13, vyznačující se tím, že biologickým vzorkem je lidská moč, sérum, plazma nebo sperma.
  15. 15. Diagnostický proužek (1) podle nároků 1-13, vyznačující se tím, že environmentálním vzorkem je bazénová voda.
CZ2017-272A 2017-05-16 2017-05-16 Diagnostický proužek pro stanovení množství sarkosinu, kreatininu a peroxidu vodíku v biologickém nebo environmentálním vzorku CZ2017272A3 (cs)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2017-272A CZ2017272A3 (cs) 2017-05-16 2017-05-16 Diagnostický proužek pro stanovení množství sarkosinu, kreatininu a peroxidu vodíku v biologickém nebo environmentálním vzorku
EP18172282.8A EP3404418A3 (en) 2017-05-16 2018-05-15 A diagnostic strip for determining the amount of sarcosine, creatinine and hydrogen peroxide in a biological or environmental sample
CA3005214A CA3005214A1 (en) 2017-05-16 2018-05-16 A diagnostic strip for determining the amount of sarcosine, creatinine and hydrogen peroxide in a biological or environmental sample

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2017-272A CZ2017272A3 (cs) 2017-05-16 2017-05-16 Diagnostický proužek pro stanovení množství sarkosinu, kreatininu a peroxidu vodíku v biologickém nebo environmentálním vzorku

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ2017272A3 true CZ2017272A3 (cs) 2018-11-28

Family

ID=62492388

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2017-272A CZ2017272A3 (cs) 2017-05-16 2017-05-16 Diagnostický proužek pro stanovení množství sarkosinu, kreatininu a peroxidu vodíku v biologickém nebo environmentálním vzorku

Country Status (3)

Country Link
EP (1) EP3404418A3 (cs)
CA (1) CA3005214A1 (cs)
CZ (1) CZ2017272A3 (cs)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115201134B (zh) * 2022-09-15 2022-12-27 吉林大学第一医院 一种抗白皮杉醇干扰的肌酐检测试剂盒及其应用

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4948726A (en) * 1986-06-02 1990-08-14 Longoria Claude C Enzyme immunoassay based on membrane separation of antigen-antibody complexes
EP0525723B1 (en) * 1991-07-29 1997-05-14 Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. Process and device for specific binding assay
JP3075390B2 (ja) * 1996-02-13 2000-08-14 東洋紡績株式会社 新規なクレアチンアミジノヒドロラーゼ、その製法およびその用途
DE69912904T2 (de) * 1998-07-01 2004-11-04 Nitto Denko Corp., Ibaraki Markiertes Kojugat und Nachweismethode unter Verwendung desselben
CN101718746B (zh) 2009-12-30 2013-04-10 中国科学院长春应用化学研究所 一种肌氨酸的检测方法
CN102680599A (zh) 2012-05-11 2012-09-19 上海特敏生物医药科技有限公司 尿肌氨酸及肌酐测定试剂盒
CN102662013A (zh) 2012-05-18 2012-09-12 上海市徐汇区中心医院 一种尿样中肌氨酸的定量检测方法
CN105555962A (zh) * 2013-10-04 2016-05-04 Csquare株式会社 利用肌氨酸代谢产物中的甲醛或过氧化物的前列腺癌诊断试纸，其制造方法及利用其的前列腺癌诊断方法
CN103808926B (zh) * 2014-01-14 2016-08-17 中国科学院生物物理研究所 纳米模拟酶免疫层析检测方法

Also Published As

Publication number Publication date
EP3404418A3 (en) 2018-12-19
CA3005214A1 (en) 2018-11-16
EP3404418A2 (en) 2018-11-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0200507B1 (en) Improved enzyme immunoassay and a kit therefor
US4973549A (en) Quantitative diagnostic assay employing signal producing agent bound to support and measuring migration distance of detectable signal
JP5925026B2 (ja) クレアチニン測定用乾式試験片及びクレアチニン測定法
US20050227370A1 (en) Body fluid analyte meter & cartridge system for performing combined general chemical and specific binding assays
JP3698696B2 (ja) 生体試料調製方法、生体試料定量方法及び生体試料保存容器
JP2005526513A (ja) 白血球数の測定方法および装置
ZA200607521B (en) Body fluid analyte meter & cartridge system for performing combined general chemical and specific binding assays
ES2383765T3 (es) Nueva configuración de un dispositivo de tira reactiva seca y procedimiento para determinar un analitico en una muestra utilizando dicho dispositivo de tira reactiva seca
US20160252515A1 (en) Personal glucose meters for detection and quantification of enzymes and metabolites based on coenzyme detection
JP2611890B2 (ja) 乾式分析要素を用いた測定方法及び乾式分析要素
JPH0695954B2 (ja) クレアチニン又はクレアチンの測定要素及び測定方法
US20180355402A1 (en) Diagnostic strip for determining the amount of sarcosine, creatinine and hydrogen peroxide in a biological or environmental sample
US8703101B2 (en) Methods of determining NOx in a wound sample
CZ2017272A3 (cs) Diagnostický proužek pro stanovení množství sarkosinu, kreatininu a peroxidu vodíku v biologickém nebo environmentálním vzorku
JP2021535380A (ja) 糖尿病におけるマイクロサンプリング検出
CZ30831U1 (cs) Diagnostický proužek pro stanovení množství sarkosinu, kreatininu a peroxidu vodíku v biologickém nebo environmentálním vzorku
JP3421655B2 (ja) 血液分離器具及び血液分離方法
CN109900689A (zh) 抗干扰膜及肝功能联合测试条
US20180321202A1 (en) Methods and devices for detecting methanol poisoning using formate oxidase
US20110287461A1 (en) Enzymatic analytical membrane, test device and method
JP2005172533A (ja) 試験用具及び測定方法
JPS63305254A (ja) クレアチニン又はクレアチンの分析用要素及び方法
WO2018203145A1 (en) Systems and methods for monitoring biological fluids
US9664672B2 (en) Dry chemical test strip with multiple layers of membranes based on concentration gradient
US20100297601A1 (en) Small volume and ultra speed colorimetric sensor