CN110564810A - 一种高性能小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种高性能小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒,其原料按重量分包括:试剂A:Good’s缓冲液90‑110mmol/L、胆固醇酯酶1‑3ku/L、胆固醇氧化酶1‑2ku/L、磷脂酶0.7‑0.9ku/L、过氧化氢酶400‑600ku/L和N‑乙基‑N‑(2‑羟基‑3‑磺丙基)‑3‑甲基苯胺钠盐(TOOS)1‑3mmol/L;试剂B:Good’s缓冲液90‑110mmol/L、过氧化物酶2‑3ku/L、4‑氨基安替比林3‑5mmol/L和叠氮钠0.04%‑0.06%,本发明涉及脂蛋白胆固醇检测技术领域。该高性能小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒,通过胆固醇脂酶、胆固醇氧化酶、磷脂酶和过氧化氢酶去除非sdLDL‑C成份,避免其余脂蛋白胆固醇对检测过程中的干扰,能够使用全自动生化分析仪直接测定血清小而密低密度脂蛋白胆固醇容量,适合临床和实验室对小而密低密度脂蛋白胆固醇含量测定的需要。
Description
技术领域
本发明涉及脂蛋白胆固醇检测技术领域,具体为一种高性能小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒。
背景技术
固醇在血液中常以脂蛋白的形式存在,而血浆中低密度脂蛋白是运输内源性胆固醇的主要载体,其通过结合其细胞膜上的低密度脂蛋白受体被降解和转化。低密度脂蛋白胆固醇是由LDL-C是空腹血浆中的主要脂蛋白,约占血浆脂蛋的2/3,是运输胆固醇到肝外组织的主要运载工具;LDL-R功能缺陷会造成血浆LDL-C的清除能力降低,最终导致动脉内膜粥样斑块形成。因此,LDL-C的含量与心血管疾病的发病率及病变程度相关,被认为是动脉粥样硬化的主要致病因子,其浓度与冠心病的发病率有明显正相关,也是评价个体冠心病发生的危险因素的一个重要指标。
低密度脂蛋白胆固醇水平升高是独立的致动脉粥样硬化危险因素,而sdLDL-C作为低密度脂蛋白的主要组分,现有的小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒,大都是直接通过对sdLDL-C进行上色检测其含量,然而其他脂蛋白胆固醇在检测试剂的催化过程中会有部分进行转化,使得检测的结果不精确,不适合推广。
发明内容
(一)解决的技术问题
针对现有技术的不足,本发明提供了一种高性能小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒,解决了现有的小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒,直接通过对sdLDL-C进行上色检测其含量,其他脂蛋白胆固醇在检测试剂的催化过程中会有部分进行转化的问题。
(二)技术方案
为实现以上目的,本发明通过以下技术方案予以实现:一种高性能小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒,其原料按重量分包括:试剂A:Good’s缓冲液90-110mmol/L、胆固醇酯酶1-3ku/L、胆固醇氧化酶1-2ku/L、磷脂酶0.7-0.9ku/L、过氧化氢酶400-600ku/L和N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐(TOOS)1-3mmol/L;试剂B:Good’s缓冲液90-110mmol/L、过氧化物酶2-3ku/L、4-氨基安替比林3-5mmol/L和叠氮钠0.04%-0.06%。
优选的,所述其原料按重量分包括:试剂A:Good’s缓冲液90mmol/L、胆固醇酯酶1ku/L、胆固醇氧化酶1ku/L、磷脂酶0.7ku/L、过氧化氢酶400ku/L和N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐(TOOS)1mmol/L;试剂B:Good’s缓冲液90mmol/L、过氧化物酶2ku/L、4-氨基安替比林3mmol/L和叠氮钠0.04%。
优选的,所述其原料按重量分包括:试剂A:Good’s缓冲液100mmol/L、胆固醇酯酶2ku/L、胆固醇氧化酶1.5ku/L、磷脂酶0.8ku/L、过氧化氢酶500ku/L和N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐(TOOS)2mmol/L;试剂B:Good’s缓冲液100mmol/L、过氧化物酶2.5ku/L、4-氨基安替比林4mmol/L和叠氮钠0.05%。
优选的,所述其原料按重量分包括:试剂A:Good’s缓冲液110mmol/L、胆固醇酯酶3ku/L、胆固醇氧化酶2ku/L、磷脂酶0.9ku/L、过氧化氢酶600ku/L和N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐(TOOS)3mmol/L;试剂B:Good’s缓冲液110mmol/L、过氧化物酶3ku/L、4-氨基安替比林5mmol/L和叠氮钠0.06%。
优选的,所述Good’s缓冲液的pH值为7.0-7.4。
优选的,所述磷脂酶为鞘磷脂酶。
优选的,所述过氧化物酶的pH值为6.8-7.2。
优选的,高性能小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒的检测方法,具体包括以下步骤:
S1、清除非sdLDL-C:取血清或者血浆样本,在血清或者血浆样本加入试剂A,在胆固醇脂酶、胆固醇氧化酶、磷脂酶和过氧化氢酶的作用下,先清除非sdLDL-C成份,即:乳糜微粒、极低密度脂蛋白和中间密度脂蛋白,大而轻低密度脂蛋白和高密度脂蛋白中包含的胆固醇;
S2、检测sdLDL-C:然后在血清或者血浆样本加入试剂B,叠氮钠的作用下,过氧化氢酶被抑制,而在特殊表面活性剂的作用下,sd LDL-C被释放出来,进而在胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶作用下,生成过氧化氢,然后过氧化氢在过氧化物酶的作用下,与色原生成紫红色的醌类物质,进而检测sdLDL-C的浓度。
(三)有益效果
本发明提供了一种高性能小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒。与现有技术相比,具备以下有益效果:该高性能小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒,通过在其原料按重量分包括:试剂A:Good’s缓冲液90-110mmol/L、胆固醇酯酶1-3ku/L、胆固醇氧化酶1-2ku/L、磷脂酶0.7-0.9ku/L、过氧化氢酶400-600ku/L和N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐(TOOS)1-3mmol/L;试剂B:Good’s缓冲液90-110mmol/L、过氧化物酶2-3ku/L、4-氨基安替比林3-5mmol/L和叠氮钠0.04%-0.06%,S1、清除非sdLDL-C:取血清或者血浆样本,在血清或者血浆样本加入试剂A,在胆固醇脂酶、胆固醇氧化酶、磷脂酶和过氧化氢酶的作用下,先清除非sdLDL-C成份,即:乳糜微粒、极低密度脂蛋白和中间密度脂蛋白,大而轻低密度脂蛋白和高密度脂蛋白中包含的胆固醇;S2、检测sdLDL-C:然后在血清或者血浆样本加入试剂B,叠氮钠的作用下,过氧化氢酶被抑制,而在特殊表面活性剂的作用下,sdLDL-C被释放出来,进而在胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶作用下,生成过氧化氢,然后过氧化氢在过氧化物酶的作用下,与色原生成紫红色的醌类物质,进而检测sdLDL-C的浓度,通过胆固醇脂酶、胆固醇氧化酶、磷脂酶和过氧化氢酶去除非sdLDL-C成份,然后在叠氮钠的作用下,释放sdLDL-C,利用胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶生成过氧化氢,配合过氧化物酶与色原生成紫红色的醌类物质,使得检测过程中去除了非sdLDL-C成份,避免其余脂蛋白胆固醇对检测过程中的干扰,能够使用全自动生化分析仪直接测定血清小而密低密度脂蛋白胆固醇容量,适合临床和实验室对小而密低密度脂蛋白胆固醇含量测定的需要。
附图说明
图1为本发明临产实验数据统计表图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
请参阅图1,本发明实施例提供三种技术方案:一种高性能小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒的检测方法,具体包括以下实施例:
实施例1
一种高性能小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒的原料按重量分包括:试剂A:Good’s缓冲液90mmol/L、胆固醇酯酶1ku/L、胆固醇氧化酶1ku/L、磷脂酶0.7ku/L、过氧化氢酶400ku/L和N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐(TOOS)1mmol/L;试剂B:Good’s缓冲液90mmol/L、过氧化物酶2ku/L、4-氨基安替比林3mmol/L和叠氮钠0.04%,Good’s缓冲液的pH值为7.0,磷脂酶为鞘磷脂酶,过氧化物酶的pH值为6.8。
本发明中,高性能小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒的检测方法,具体包括以下步骤:
S1、清除非sdLDL-C:取血清或者血浆样本,在血清或者血浆样本加入试剂A,在胆固醇脂酶、胆固醇氧化酶、磷脂酶和过氧化氢酶的作用下,先清除非sdLDL-C成份,即:乳糜微粒、极低密度脂蛋白和中间密度脂蛋白,大而轻低密度脂蛋白和高密度脂蛋白中包含的胆固醇;
S2、检测sdLDL-C:然后在血清或者血浆样本加入试剂B,叠氮钠的作用下,过氧化氢酶被抑制,而在特殊表面活性剂的作用下,sd LDL-C被释放出来,进而在胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶作用下,生成过氧化氢,然后过氧化氢在过氧化物酶的作用下,与色原生成紫红色的醌类物质,进而检测sdLDL-C的浓度。
实施例2
一种高性能小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒的原料按重量分包括:试剂A:Good’s缓冲液100mmol/L、胆固醇酯酶2ku/L、胆固醇氧化酶1.5ku/L、磷脂酶0.8ku/L、过氧化氢酶500ku/L和N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐(TOOS)2mmol/L;试剂B:Good’s缓冲液100mmol/L、过氧化物酶2.5ku/L、4-氨基安替比林4mmol/L和叠氮钠0.05%,Good’s缓冲液的pH值为7.2,磷脂酶为鞘磷脂酶,过氧化物酶的pH值为7.0。
本发明中,高性能小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒的检测方法,具体包括以下步骤:
S1、清除非sdLDL-C:取血清或者血浆样本,在血清或者血浆样本加入试剂A,在胆固醇脂酶、胆固醇氧化酶、磷脂酶和过氧化氢酶的作用下,先清除非sdLDL-C成份,即:乳糜微粒、极低密度脂蛋白和中间密度脂蛋白,大而轻低密度脂蛋白和高密度脂蛋白中包含的胆固醇;
S2、检测sdLDL-C:然后在血清或者血浆样本加入试剂B,叠氮钠的作用下,过氧化氢酶被抑制,而在特殊表面活性剂的作用下,sd LDL-C被释放出来,进而在胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶作用下,生成过氧化氢,然后过氧化氢在过氧化物酶的作用下,与色原生成紫红色的醌类物质,进而检测sdLDL-C的浓度。
实施例3
一种高性能小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒的原料按重量分包括:试剂A:Good’s缓冲液110mmol/L、胆固醇酯酶3ku/L、胆固醇氧化酶2ku/L、磷脂酶0.9ku/L、过氧化氢酶600ku/L和N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐(TOOS)3mmol/L;试剂B:Good’s缓冲液110mmol/L、过氧化物酶3ku/L、4-氨基安替比林5mmol/L和叠氮钠0.06%,Good’s缓冲液的pH值为7.4,磷脂酶为鞘磷脂酶,过氧化物酶的pH值为7.2。
本发明中,高性能小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒的检测方法,具体包括以下步骤:
S1、清除非sdLDL-C:取血清或者血浆样本,在血清或者血浆样本加入试剂A,在胆固醇脂酶、胆固醇氧化酶、磷脂酶和过氧化氢酶的作用下,先清除非sdLDL-C成份,即:乳糜微粒、极低密度脂蛋白和中间密度脂蛋白,大而轻低密度脂蛋白和高密度脂蛋白中包含的胆固醇;
S2、检测sdLDL-C:然后在血清或者血浆样本加入试剂B,叠氮钠的作用下,过氧化氢酶被抑制,而在特殊表面活性剂的作用下,sd LDL-C被释放出来,进而在胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶作用下,生成过氧化氢,然后过氧化氢在过氧化物酶的作用下,与色原生成紫红色的醌类物质,进而检测sdLDL-C的浓度。
临床试验
采用实施例1-3所述的高性能小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒进行临床实验,具体试验过程如下:
选取400个正常人的血清样本,分为4组,每组100个正常人的血清样本,检测试剂盒分别采用高、中、低剂量组及对照组进行检测,对照组为小而密低密度脂蛋白胆固醇正常值。
如图1可知,实施例2采用的原料比例所达到的效果优于其他两种,小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒的检测效果最好,因此为最佳的比例搭配。
综上所述,通过胆固醇脂酶、胆固醇氧化酶、磷脂酶和过氧化氢酶去除非sdLDL-C成份,然后在叠氮钠的作用下,释放sdLDL-C,利用胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶生成过氧化氢,配合过氧化物酶与色原生成紫红色的醌类物质,使得检测过程中去除了非sdLDL-C成份,避免其余脂蛋白胆固醇对检测过程中的干扰,能够使用全自动生化分析仪直接测定血清小而密低密度脂蛋白胆固醇容量,适合临床和实验室对小而密低密度脂蛋白胆固醇含量测定的需要。
需要说明的是,在本文中,诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来,而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且,术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含,从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素,而且还包括没有明确列出的其他要素,或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例,对于本领域的普通技术人员而言,可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型,本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (8)
1.一种高性能小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒,其特征在于:其原料按重量分包括:试剂A:Good’s缓冲液90-110mmol/L、胆固醇酯酶1-3ku/L、胆固醇氧化酶1-2ku/L、磷脂酶0.7-0.9ku/L、过氧化氢酶400-600ku/L和N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐(TOOS)1-3mmol/L;试剂B:Good’s缓冲液90-110mmol/L、过氧化物酶2-3ku/L、4-氨基安替比林3-5mmol/L和叠氮钠0.04%-0.06%。
2.根据权利要求1所述的一种高性能小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒,其特征在于:其原料按重量分包括:试剂A:Good’s缓冲液90mmol/L、胆固醇酯酶1ku/L、胆固醇氧化酶1ku/L、磷脂酶0.7ku/L、过氧化氢酶400ku/L和N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐(TOOS)1mmol/L;试剂B:Good’s缓冲液90mmol/L、过氧化物酶2ku/L、4-氨基安替比林3mmol/L和叠氮钠0.04%。
3.根据权利要求1所述的一种高性能小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒,其特征在于:其原料按重量分包括:试剂A:Good’s缓冲液100mmol/L、胆固醇酯酶2ku/L、胆固醇氧化酶1.5ku/L、磷脂酶0.8ku/L、过氧化氢酶500ku/L和N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐(TOOS)2mmol/L;试剂B:Good’s缓冲液100mmol/L、过氧化物酶2.5ku/L、4-氨基安替比林4mmol/L和叠氮钠0.05%。
4.根据权利要求1所述的一种高性能小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒,其特征在于:其原料按重量分包括:试剂A:Good’s缓冲液110mmol/L、胆固醇酯酶3ku/L、胆固醇氧化酶2ku/L、磷脂酶0.9ku/L、过氧化氢酶600ku/L和N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐(TOOS)3mmol/L;试剂B:Good’s缓冲液110mmol/L、过氧化物酶3ku/L、4-氨基安替比林5mmol/L和叠氮钠0.06%。
5.根据权利要求1-4所述的一种高性能小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒,其特征在于:所述Good’s缓冲液的pH值为7.0-7.4。
6.根据权利要求1-4所述的一种高性能小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒,其特征在于:所述磷脂酶为鞘磷脂酶。
7.根据权利要求1-4所述的一种高性能小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒,其特征在于:所述过氧化物酶的pH值为6.8-7.2。
8.根据权利要求1-4所述的一种高性能小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒,其特征在于:其检测方法具体包括以下步骤:
S1、清除非sdLDL-C:取血清或者血浆样本,在血清或者血浆样本加入试剂A,在胆固醇脂酶、胆固醇氧化酶、磷脂酶和过氧化氢酶的作用下,先清除非sdLDL-C成份,即:乳糜微粒、极低密度脂蛋白和中间密度脂蛋白,大而轻低密度脂蛋白和高密度脂蛋白中包含的胆固醇;
S2、检测sdLDL-C:然后在血清或者血浆样本加入试剂B,叠氮钠的作用下,过氧化氢酶被抑制,而在特殊表面活性剂的作用下,sd LDL-C被释放出来,进而在胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶作用下,生成过氧化氢,然后过氧化氢在过氧化物酶的作用下,与色原生成紫红色的醌类物质,进而检测sdLDL-C的浓度。
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