CN114813715A - 一种高密度脂蛋白胆固醇干化学试剂片及其制备方法 - Google Patents

一种高密度脂蛋白胆固醇干化学试剂片及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN114813715A
CN114813715A CN202210333663.XA CN202210333663A CN114813715A CN 114813715 A CN114813715 A CN 114813715A CN 202210333663 A CN202210333663 A CN 202210333663A CN 114813715 A CN114813715 A CN 114813715A
Authority
CN
China
Prior art keywords
layer
membrane
reagent
density lipoprotein
dry chemical
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202210333663.XA
Other languages
English (en)
Inventor
白鹏利
钱庆
李超
魏永红
章强
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhongke Jiarui Tianjin Medical Science And Technology Development Co ltd
Original Assignee
Zhongke Jiarui Tianjin Medical Science And Technology Development Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhongke Jiarui Tianjin Medical Science And Technology Development Co ltd filed Critical Zhongke Jiarui Tianjin Medical Science And Technology Development Co ltd
Priority to CN202210333663.XA priority Critical patent/CN114813715A/zh
Publication of CN114813715A publication Critical patent/CN114813715A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
    • G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
    • G01N21/78—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator producing a change of colour
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
    • G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
    • G01N21/31—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Plasma & Fusion (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明创造提供了一种高密度脂蛋白胆固醇干化学试剂片及其制备方法，包括下卡壳、多层膜、上卡壳；所述下卡壳安装在上卡壳的下方；所述下卡壳的一侧设有测试孔，下卡壳的另一侧开设用放置多层膜的多层膜凹槽，多层膜设置在多层膜凹槽内，上卡壳上设有加样孔，本发明创造所述的一种高密度脂蛋白胆固醇干化学试剂片及其制备方法，这样的迭合结构，增加了试剂的稳定性、均一性、显色度，减少了加样端测定产生的气泡造成的干扰。可使用全血、血清、血浆作为标本。能够提高测试的准确度和精密度。

Description

一种高密度脂蛋白胆固醇干化学试剂片及其制备方法
技术领域
本发明创造属于体外临床诊断试剂技术领域，尤其是涉及一种高密度脂蛋白胆固醇干化学试剂片及其制备方法。
背景技术
血液中的脂蛋白是脂肪和载脂蛋白的复合物，由它转运胆固醇。脂蛋白有四种形式：乳糜微粒、极低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)。HDL接受来自于包括动脉壁的各组织的胆固醇，通过直接逆转运或间接逆转运，将其运入肝脏，再清除出血液，因此HDL与积累于细胞内的胆固醇的除去作用相关。高密度脂蛋白在生理上起着将肝外组织的胆固醇运送到肝脏的运载工具的作用，因而可以防止游离胆固醇在肝外组织细胞上的沉积。动脉造影证明高密度脂蛋白胆固醇含量与动脉管腔狭窄程度呈显著的负相关。所以高密度脂蛋白是一种抗动脉粥样硬化的血浆脂蛋白，是冠心病的保护因子。高密度脂蛋白胆固醇对冠心病的临床诊断是一个重要的参考指标。它的升高是临床冠心病保护因子之一，并能防治和延缓动脉粥样硬化的发展。
世界卫生组织研究证实，每100毫升血液中的HDL升高1毫克，可使由动脉粥样硬化引起的心脑血管疾病的发病率和死亡率降低3-4％，世界卫生组织(WHO)专家组宣称：对于心脑血管病，广为接受而又最少争议最重要的保护因素是体内高密度脂蛋白(HDL)含量越高越好！
HDL胆固醇测定的参考方法是用超速离心分离HDL，然后用化学法或酶法测定其胆固醇含量。此法需特殊设备，临床检查实施起来不方便。现在临床检验中用大分子多阴离子化合物及两价阳离子沉淀血清中的LDL与VLDL，然后用化学法或酶法测定上层血清中的HDL胆固醇。沉淀法虽然不需要专门的设备，但是现有的沉淀法在甘油三酯浓度较高时，离心分离后，沉淀物会部分浮游，必须进行离心条件的设定。近年来，无需繁琐的操作且可以直接用自动分析装置测量的方法得到了普及。一种是通过使用硫酸化环糊精作为凝集剂，在与除HDL之外的脂蛋白充分反应后，使其与经聚氧乙二醇修饰的酶发生作用，再直接测定HDL胆固醇；一种是先使用触酶消除掉HDL以外的脂蛋白，然后使用对HDL具有特异作用的活化剂测定HDL。但是为了抑制除了HDL以外的脂蛋白所产生的反应，这两种直接测量HDL胆固醇的方法必须使用经PEG修饰的酶或抗体等昂贵的试剂，同时也需要大型设备对HDL胆固醇进行检测。
专利CN110554203A中利用双氧水淬灭量子点的方式来检测高密度脂蛋白的含量。缺点是HDL-C浓度较低时，所产生的双氧水较少，此时量子点对双氧水的表现不够灵敏。
发明内容
有鉴于此，本发明创造旨在提出一种高密度脂蛋白胆固醇干化学试剂片及其制备方法，能够快速检测、操作方便、稳定性好、均一性好的用于检测高密度脂蛋白胆固醇的多层膜干化学试剂片。
为达到上述目的，本发明创造的技术方案是这样实现的：
一种高密度脂蛋白胆固醇干化学试剂片，包括下卡壳、多层膜、上卡壳；所述下卡壳安装在上卡壳的下方；
所述下卡壳的一侧设有测试孔，下卡壳的另一侧开设用放置多层膜的多层膜凹槽，多层膜设置在多层膜凹槽内，上卡壳上设有加样孔。
多层膜包括试剂层、辅助层、滤血层和扩散层，试剂层、辅助层、滤血层和扩散层依次设置；
所述上卡壳上的两侧设有安装台，下卡壳上设有与安装台配合的凸起，凸起设置在安装台的两侧，安装台插接在凸起上。
试剂层为不对称聚醚砜膜、高度不对称聚砜膜、聚砜膜、玻纤膜中的一种；优选的，试剂层为高度不对称聚砜膜；
辅助层为聚醚砜膜、硝酸纤维素膜、聚砜膜、玻纤膜的一种，优选的，辅助层为聚醚砜膜。
滤血膜为玻纤膜、硝酸纤维素膜、聚砜膜、聚醚砜膜中的一种；优选的，滤血膜为玻纤膜。
扩散层为尼龙膜、聚四氟乙烯膜中的一种；优选的，扩散层为尼龙膜。
所述试剂层上涂覆有反应试剂1；
所述反应试剂1包括：
Figure BDA0003576139060000031
优选的，色原的波长为610-650nm。色原作为指示剂，优选色原强吸收处波长不同于样本的强吸收处的波长，优选波长为610-650nm的色原，浓度为0.1％-0.5。
所述辅助层上浸渍有反应试剂2；
所以反应试剂2包括：
缓冲体系 0.05M-1.5M；
表面活性剂 1％-10％；
所述滤血层上浸渍有反应试剂3；
所述反应试剂3包括：
缓冲体系 0.05M-1.5M；
磷钨酸钠 0.9％-5％；
无水氯化镁 0.15％-1.2％％。
水溶性高分子材料为明胶、羟丙基甲基纤维素、醋酸纤维素中的一种或两种及以上；缓冲体系为磷酸盐缓冲液，Tris-HCL或Good＇s缓冲液中的一种或两种及以上；表面活性剂为TritonX-100、SDS、十二烷基苯磺酸钠等中的一种。所述稳定剂为海藻糖、BSA中的一种或两种。
一种高密度脂蛋白胆固醇干化学试剂片的制备方法，包括如下步骤：
S1：使用涂布机将配置好的反应试剂1涂布在试剂层上；
S2：使用配置好的反应试剂2、3分别浸辅助层和滤血层；
S3：依次将试剂层、辅助层，以及滤血层和分散层剪裁为长方片，按顺序组装入卡壳。
所述步骤S1中的涂布的温度为30-50℃，然后真空干燥2h；
所述步骤S2中浸辅助层和滤血层的温度为30-50℃，真空干燥2h；
所述步骤S3为斩切机裁切成8.3mm*4.4mm大小的长方片。
反应试剂分布于试剂层、辅助层和滤血层。定量全血或血清、血浆滴加于加样孔内，血液样本经过扩散层均匀扩散至滤血层，与滤血层内的试剂发生反应，使HDL之外的脂蛋白和大多数红细胞停留在滤血层上，血液样本继续经过辅助层的作用，红细胞被完全过滤，只有HDL胆固醇的血浆进入反应层，通过反应层上的专用酶和显色剂作用，发生显色反应，颜色的深浅对应高密度脂蛋白胆固醇浓度的高低。
相对于现有技术，本发明创造所述的一种高密度脂蛋白胆固醇干化学试剂片及其制备方法具有以下有益效果：
本发明采用试剂层、辅助层和滤血层迭合的结构，其中一部分组分以涂布方式附着在高度不对称聚砜(BTS)膜上，其他组分是以浸泡的方式附着在辅助层和滤血层。这样的迭合结构，增加了试剂的稳定性、均一性、显色度，减少了加样端测定产生的气泡造成的干扰。可使用全血、血清、血浆作为标本。能够提高测试的准确度和精密度。
附图说明
构成本发明创造的一部分的附图用来提供对本发明创造的进一步理解，本发明创造的示意性实施例及其说明用于解释本发明创造，并不构成对本发明创造的不当限定。在附图中：
图1为本发明创造实施例所述的一种高密度脂蛋白胆固醇干化学试剂片的示意图。
附图标记说明：
1、上卡壳；2、扩散层；3、滤血层；4、辅助层；5、试剂层；6、下卡壳；7、测试孔；8、多层膜凹槽；9、加样孔；10、安装台；11、凸起。
具体实施方式
除有定义外，以下实施例中所用的技术术语具有与本发明创造所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
下面结合实施例及附图来详细说明本发明创造。
实施例1：
使用涂布机将配置好的反应试剂1涂布在高度不对称聚砜(BTS)膜上、30-50℃真空干燥2h。使用配置好的反应试剂2、3分别浸泡聚醚砜(PES)膜和滤血膜5min，30-50℃真空干燥2h。依次将高度不对称聚砜(BTS)膜、聚醚砜(PES)膜，以及滤血膜和尼龙膜使用微电脑快速斩切机裁切成8.3mm*4.4mm大小的长方片，按顺序组装入卡壳，放入存有干燥剂的不透明瓶避光保存。
反应试剂1:
磷酸盐缓冲液(pH＝6.8) 100mM
羟丙基甲基纤维素 25g/L
胆固醇酯酶 35U/mL
胆固醇氧化酶 22U/mL
过氧化物酶 800U/mL
海藻糖 0.1％
BSA 0.2％
色原 0.25％
甲醇 10％
反应试剂2:
磷酸盐缓冲液(pH＝6.8) 100mM
TritonX-100 5％
反应试剂3:
Figure BDA0003576139060000061
Figure BDA0003576139060000071
实施例2：
使用涂布机将配置好的反应试剂1涂布在高度不对称聚砜(BTS)膜上、30-50℃真空干燥2h。使用配置好的反应试剂2、3分别浸泡聚醚砜(PES)膜和滤血膜5min，30-50℃真空干燥2h。依次将高度不对称聚砜(BTS)膜、聚醚砜(PES)膜，以及滤血膜和尼龙膜使用微电脑快速斩切机裁切成8.3mm*4.4mm大小的长方片，按顺序组装入卡壳，放入存有干燥剂的不透明瓶避光保存。
反应试剂1:
磷酸盐缓冲液(pH＝6.8) 100mM
羟丙基甲基纤维素 25g/L
胆固醇酯酶 35U/mL
胆固醇氧化酶 22U/mL
过氧化物酶 800U/mL
海藻糖 0.1％
BSA 0.2％
色原 0.25％
甲醇 10％
反应试剂2:
磷酸盐缓冲液(pH＝6.8) 100mM
TritonX-100 2％
反应试剂3:
Figure BDA0003576139060000072
Figure BDA0003576139060000081
实施例3：
使用涂布机将配置好的反应试剂1涂布在高度不对称聚砜(BTS)膜上、30-50℃真空干燥2h。使用配置好的反应试剂2、3分别浸泡聚醚砜(PES)膜和滤血膜5min，30-50℃真空干燥2h。依次将高度不对称聚砜(BTS)膜、聚醚砜(PES)膜，以及滤血膜和尼龙膜使用微电脑快速斩切机裁切成8.3mm*4.4mm大小的长方片，按顺序组装入卡壳，放入存有干燥剂的不透明瓶避光保存。
反应试剂1:
磷酸盐缓冲液(pH＝6.8) 100mM
羟丙基甲基纤维素 25g/L
胆固醇酯酶 25U/mL
胆固醇氧化酶 14U/mL
过氧化物酶 500U/mL
海藻糖 0.1％
BSA 0.2％
色原 0.25％
甲醇 10％
反应试剂2:
磷酸盐缓冲液(pH＝6.8) 100mM
TritonX-100 5％
反应试剂3:
Figure BDA0003576139060000082
Figure BDA0003576139060000091
实施例4：
准备样本浓度为0.3mmol/L、0.6mmol/L、1.2mmol/L、1.6mmol/L、2.4mmol/L的高密度脂蛋白胆固醇校准品，采用实施例1～3中的试纸对这些样本进行测试。取30μl样本滴加于加样孔，使用小型生化分析仪进行测定，读取2min处的电压值，将其转化为吸光度。测试结果如表1。
表1吸光度变化
Figure BDA0003576139060000092
由表1可以看出：相对于实施例1，实施例2的TX-100减少后对胆固醇和胆固醇酯与脂蛋白的分离能力降低，导致测不到高浓度的HDL-C；相对于实施例1，实施例3的酶含量减少以后，高浓度HDL-C测不出来。
准备样本浓度为0.73mmol/L、1.97mmol/L的高密度脂蛋白胆固醇质控品，采用实施例1中的试纸对这些样本进行测试。每个浓度测试10次。取30μl样本滴加于加样孔，使用小型生化分析仪进行测定，读取2min处的电压值，将其转化为吸光度。测试结果如表2。
表2 HDL-C的测试结果
Figure BDA0003576139060000101
由表2可以看出：实施例1中试剂片的整体准确度、精密度都较好。本发明采用试剂层、辅助层和滤血层迭合的结构，其中一部分组分以涂布方式附着在高度不对称聚砜(BTS)膜上，其他组分是以浸泡的方式附着在辅助层和滤血层。这样的迭合结构，增加了试剂的稳定性、均一性、显色度，减少了加样端测定产生的气泡造成的干扰。可使用全血、血清、血浆作为标本。能够提高测试的准确度和精密度。
以上所述仅为本发明创造的较佳实施例而已，并不用以限制本发明创造，凡在本发明创造的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明创造的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种高密度脂蛋白胆固醇干化学试剂片，其特征在于：包括下卡壳(6)、多层膜、上卡壳(1)；所述下卡壳(6)安装在上卡壳(1)的下方；
所述下卡壳(6)的一侧设有测试孔(7)，下卡壳(6)的另一侧开设用放置多层膜的多层膜凹槽(8)，多层膜设置在多层膜凹槽(8)内，上卡壳(1)上设有加样孔(9)。
2.根据权利要求1所述的一种高密度脂蛋白胆固醇干化学试剂片，其特征在于：多层膜包括试剂层(5)、辅助层(4)、滤血层(3)和扩散层(2)，试剂层(5)、辅助层(4)、滤血层(3)和扩散层(2)依次设置；
所述上卡壳(1)上的两侧设有安装台(10)，下卡壳(6)上设有与安装台(10)配合的凸起(11)，凸起(11)设置在安装台(10)的两侧。
3.根据权利要求2所述一种高密度脂蛋白胆固醇干化学试剂片，特征在于：试剂层为不对称聚醚砜膜、高度不对称聚砜膜、聚砜膜、玻纤膜中的一种；
优选的，试剂层为高度不对称聚砜膜；
辅助层为聚醚砜膜、硝酸纤维素膜、聚砜膜、玻纤膜的一种，
优选的，辅助层为聚醚砜膜。
4.根据权利要求2所述的一种高密度脂蛋白胆固醇干化学试剂片，其特征在于：滤血膜为玻纤膜、硝酸纤维素膜、聚砜膜、聚醚砜膜中的一种；
优选的，滤血膜为玻纤膜；
扩散层为尼龙膜、聚四氟乙烯膜中的一种；
优选的，扩散层为尼龙膜。
5.根据权利要求2所述的一种高密度脂蛋白胆固醇干化学试剂片，其特征在于：所述试剂层上涂覆有反应试剂1；
所述反应试剂1包括：
Figure FDA0003576139050000021
优选的，色原的波长为610-650nm。
6.根据权利要求2所述的一种高密度脂蛋白胆固醇干化学试剂片，其特征在于：所述辅助层上浸渍有反应试剂2；
所以反应试剂2包括：
缓冲体系 0.05M-1.5M；
表面活性剂 1％-10％；
所述滤血层上浸渍有反应试剂3；
所述反应试剂3包括：
缓冲体系 0.05M-1.5M；
磷钨酸钠 0.9％-5％；
无水氯化镁 0.15％-1.2％％。
7.根据权利要求5或6所述的一种高密度脂蛋白胆固醇干化学试剂片，其特征在于：水溶性高分子材料为明胶、羟丙基甲基纤维素、醋酸纤维素中的一种或两种及以上；
缓冲体系为磷酸盐缓冲液，Tris-HCL或Good＇s缓冲液中的一种或两种及以上；
表面活性剂为TritonX-100、SDS、十二烷基苯磺酸钠等中的一种。
8.根据权利要求5所述的一种高密度脂蛋白胆固醇干化学试剂片，其特征在于：所述稳定剂为海藻糖、BSA中的一种或两种。
9.一种高密度脂蛋白胆固醇干化学试剂片的制备方法，根据权利要求1-6或8中任一项所述的一种高密度脂蛋白胆固醇干化学试剂片，其特征在于：包括如下步骤：
S1：使用涂布机将配置好的反应试剂1涂布在试剂层上；
S2：使用配置好的反应试剂2、3分别浸辅助层和滤血层；
S3：依次将试剂层、辅助层，以及滤血层和分散层剪裁为长方片，按顺序组装入卡壳。
10.根据权利要求9所述的一种高密度脂蛋白胆固醇干化学试剂片的制备方法，其特征在于：所述步骤S1中的涂布的温度为30-50℃，然后真空干燥2h；
所述步骤S2中浸辅助层和滤血层的温度为30-50℃，真空干燥2h；
所述步骤S3为斩切机裁切成8.3mm*4.4mm大小的长方片。
CN202210333663.XA 2022-03-31 2022-03-31 一种高密度脂蛋白胆固醇干化学试剂片及其制备方法 Pending CN114813715A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210333663.XA CN114813715A (zh) 2022-03-31 2022-03-31 一种高密度脂蛋白胆固醇干化学试剂片及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210333663.XA CN114813715A (zh) 2022-03-31 2022-03-31 一种高密度脂蛋白胆固醇干化学试剂片及其制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN114813715A true CN114813715A (zh) 2022-07-29

Family

ID=82533683

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210333663.XA Pending CN114813715A (zh) 2022-03-31 2022-03-31 一种高密度脂蛋白胆固醇干化学试剂片及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114813715A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11085066B2 (en) Blood sample assay method
US5888827A (en) Method for determination of cholesterol in low-density lipoprotein or very low-density lipoprotein
US6939682B2 (en) Test piece for assaying high density lipoprotein (HDL) cholesterol
CN102288747B (zh) 去除干扰的干化学定量测试试条、谷丙或谷草转氨酶定量测试试条及检测方法
CN110564810A (zh) 一种高性能小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒
EP0699767A1 (en) Method of determining cholesterol in high-density lipoprotein
EP0256562B1 (en) Dry-type multilayer analytical element
US20130040379A1 (en) Method for Measuring Low-Density Lipoprotein (LDL) Cholesterol and Test Piece for Measuring LDL Cholesterol
EP2108961B1 (en) Dry analytical element for measurement of high density lipoprotein cholesterol
CN111808921A (zh) 一种基于Trinder反应的检测试剂盒及其应用
FI77896B (fi) Komposition foer bestaemning av urinsyra eller kolesterol i ett vaetskeprov.
US20110053192A1 (en) Method Of Rapid Detection Of An Analyte In Bodily Fluids Using A Fluorescent Dry Test Strip Biosensor
CN114774256B (zh) 一种光学差分信号处理的血肌酐检测卡、制备方法及应用
CN114813715A (zh) 一种高密度脂蛋白胆固醇干化学试剂片及其制备方法
CN109900689B (zh) 抗干扰膜及肝功能联合测试条
CN108333175B (zh) 一种总胆固醇检测方法
CN112710656B (zh) 一种测定葡萄糖含量的试剂盒及其应用
US4778757A (en) Method for the determination of substrates or enzyme activities
JPS6259782B2 (zh)
US8163472B2 (en) Dry analytical element capable of reducing influence of hemolysis for body fluid component measurement
EP0761821B1 (en) Assay method avoiding interference by hemoglobin with light detection
CN111690716A (zh) 一种小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒的制备方法
US6720163B1 (en) Method for determining alkaline phosphatase and eliminating haemoglobin disturbances
EP0272578B1 (en) Multilayer analysis elements for the determination of total cholesterol
CN109706218A (zh) 一种测定脂蛋白残粒胆固醇的试剂盒

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination