CN115855927A - 一种丙氨酸氨基转移酶干化学试剂片及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种丙氨酸氨基转移酶干化学试剂片及其制备方法，包括上卡壳、下卡壳以及卡放在两者之间的多层膜；上卡壳的中间部位开设有用于观测反应结果的测试孔，上卡壳内侧面的中部开设有用于安放多层膜的凹槽；下卡壳的中间部位开设有用于滴加样品的加样孔；多层膜包括依次由下往上迭合的透光层、辅助层、滤血层以及扩散层。本发明的有益效果是：采用透光层和辅助层迭合的结构，试剂稳定性好，显色强度高，均匀度好，减少了加样端测定产生的气泡造成的干扰，可使用全血、血清、血浆作为标本，能够提高测试的准确度和精密度，且所制备的干化学试剂片结构简单，便于使用。

Description

一种丙氨酸氨基转移酶干化学试剂片及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种用于定量测定人体全血、血清或血浆中的丙氨酸氨基转移酶的干化学试剂片，具体为一种丙氨酸氨基转移酶干化学试剂片及其制备方法，属于体外临床诊断试剂技术领域。

背景技术

丙氨酸氨基转移酶又称谷丙转氨酶，是一种参与蛋白代谢的酶。其主要存在与肝细胞的胞浆中，在肾、心、肌肉等组织及器官中含量较低。血清中丙氨酸氨基转移酶的浓度增高表明肝细胞受损，是反应肝细胞受损的灵敏指标。检测血液中的丙氨酸氨基转移酶对急性乙型肝炎、慢性肝炎、HBV携带者、重型肝炎以及肝硬化、肝癌等一系列病毒性肝炎的诊断和分析有重要意义。

临床对于丙氨酸氨基转移酶的测定可分为湿化学和干化学两种方法。干化学主要用于快速检测。干化学比湿化学更加方便、灵活、操作简便。

临床急诊生化指标所使用的干化学产品基本上是国外公司的产品，大概有三种类型。第一类是以强生公司为代表的多层膜干片的干化学技术，利用感光胶片的涂层技术将扩散层、反射层、试剂层等试剂涂在透明支撑层上，从支撑层的反面测定光密度的变化。第二类是日本京都公司的干化学技术，其组成为一塑料支撑层，一端为反应区包括样品层和试剂层，试剂层为某种织物作为试剂载体，加样和测试同时在上部进行。第三类是罗氏公司的干化学产品，将试剂涂布在多丝的纤维或织物上，全血透过玻璃纤维横向过滤后与上试剂层接触反应。以强生公司为代表的多层膜干片生产工艺复杂，对材料设备要求高；以日本京都公司为代表的干片有某些缺陷，如在加样端容易产生一定的气泡、过量液体等，加样和测定在同一侧可能造成干扰。

国内有公司申请了干化学专利，上海科华生物工程公司申请的专利200720072185.2和200710044719.5，无锡申瑞生物制品有限公司的专利200610161430.7。其中描述了测定丙氨酸氨基转移酶的干化学试纸条，在这些专利中应用的方法是将配好的检测液直接浸泡在滤纸或者纤维膜上，然后粘合在塑料基材上进行测试。这种方法使得吸附于滤纸或者纤维膜中的试剂量无法确定，重复性不能充分保证，缺乏准确性和精密度。

发明内容

本发明的目的就在于为了解决上述至少一个技术问题而提供一种丙氨酸氨基转移酶干化学试剂片及其制备方法。

本发明通过以下技术方案来实现上述目的：一种丙氨酸氨基转移酶干化学试剂片，包括上卡壳、下卡壳以及卡放在两者之间的多层膜；

所述上卡壳与下卡壳之间通过凹凸槽卡扣连接，所述上卡壳的中间部位开设有用于观测反应结果的测试孔，且所述上卡壳内侧面的中部开设有用于安放多层膜的凹槽，所述下卡壳的中间部位开设有用于滴加样品的加样孔；

所述多层膜包括依次由下往上迭合的透光层、辅助层、滤血层以及扩散层。

作为本发明再进一步的方案：多层膜的透光层选用聚乙烯PE、聚氯乙烯PVC、聚丙烯PP、聚对苯二甲酸乙二醇酯PET、聚碳酸酯PC，优选PET膜。

作为本发明再进一步的方案：多层膜的辅助层选用聚醚砜PES膜、硝酸纤维素膜、聚砜膜、玻纤膜，优选聚醚砜PES膜。

多层膜的滤血层选用玻纤膜、硝酸纤维素膜、聚砜膜、聚醚砜膜，优选玻纤膜。

作为本发明再进一步的方案：多层膜的扩散层选用尼龙膜、聚四氟乙烯膜，优选尼龙膜。

作为本发明再进一步的方案：透光层和辅助层上分布有反应试剂，所述反应试剂包括水溶性高分子材料、缓冲体系、底物、丙酮酸氧化酶、过氧化物酶、色原、激活剂、稳定剂，具体包括：

水溶性高分子材料采用明胶、羟丙基甲基纤维素或醋酸纤维素，浓度为50g/L-180g/L；

缓冲体系采用磷酸盐缓冲液、Tris-HCL或Good＇s缓冲液，浓度为0.05M-1.5M，反应最佳pH值在6.3-7.8；

底物采用L-丙氨酸和α-酮戊二酸钠、L-丙氨酸的浓度为0.5M-2.0M、α-酮戊二酸钠浓度为5mM-100mM；

丙酮酸氧化酶的适宜浓度为30-150U/ml；

激活剂采用Mg2+，Mg2+的浓度为1.0g/L-4.0g/L；

酶稳定剂采用二糖、多糖类或蛋白类稳定剂，重量浓度为0.1％-2.0％；

过氧化物酶浓度为30-150U/ml；

色原作为指示剂，优选色原强吸收处波长不同于样本的强吸收处的波长，优选波长为610-650nm的色原，浓度为0.03％-0.6％。

作为本发明再进一步的方案：滴加于加样孔内的样品包括定量全血或血清、血浆，且样品中的丙氨酸氨基转移酶(ALT)催化底物L-丙氨酸和α-酮戊二酸钠，产生L-谷氨酸和丙酮酸。

一种丙氨酸氨基转移酶干化学试剂片，其制备方法包括以下步骤：

步骤一、使用涂布机将配置好的显色液和底物溶液分别涂布在透光层和辅助层上，30-50℃真空干燥2h；

步骤二、依次将晾干的透光层、辅助层、滤血层以及扩散层使用微电脑快速斩切机裁切成8.3mm*4.4mm大小的长方片，按顺序组装放入上卡壳所开设的凹槽内；

步骤三、将组装有多层膜的上卡壳与下卡壳对位卡放在一起，形成干化学试剂片，并放入存有干燥剂的不透明瓶避光保存。

本发明的有益效果是：采用透光层和辅助层迭合的结构，试剂稳定性好，显色强度高，均匀度好，减少了加样端测定产生的气泡造成的干扰，可使用全血、血清、血浆作为标本，能够提高测试的准确度和精密度，且所制备的干化学试剂片结构简单，便于使用。

附图说明

图1为本发明干化学试剂片整体结构示意图；

图2为本发明干化学试剂片拆分结构示意图；

图3为本发明多层膜结构示意图。

图中：1、上卡壳，11、测试孔，12、凹槽，2、下卡壳，21、加样孔，3、多层膜，31、透光层，32、辅助层，33、滤血层，34、扩散层。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例一

如图1至图3所示，一种丙氨酸氨基转移酶干化学试剂片，包括上卡壳1、下卡壳2以及卡放在两者之间的多层膜3；

所述上卡壳1与下卡壳2之间通过凹凸槽卡扣连接，所述上卡壳1的中间部位开设有用于观测反应结果的测试孔11，且所述上卡壳1内侧面的中部开设有用于安放多层膜3的凹槽12，所述下卡壳2的中间部位开设有用于滴加样品的加样孔21；

所述多层膜3包括依次由下往上迭合的透光层31、辅助层32、滤血层33以及扩散层34。

实施例二

如图1至图3所示，本实施例中除包括实施例一中的所有技术特征之外，还包括：

多层膜3的透光层31选用聚乙烯PE、聚氯乙烯PVC、聚丙烯PP、聚对苯二甲酸乙二醇酯PET、聚碳酸酯PC，优选PET膜。

多层膜3的辅助层32选用聚醚砜PES膜、硝酸纤维素膜、聚砜膜、玻纤膜，优选聚醚砜PES膜。

多层膜3的滤血层33选用玻纤膜、硝酸纤维素膜、聚砜膜、聚醚砜膜，优选玻纤膜。

多层膜3的扩散层34选用尼龙膜、聚四氟乙烯膜，优选尼龙膜。

实施例三

如图1至图3所示，本实施例中除包括实施例一中的所有技术特征之外，还包括：

透光层31和辅助层32上分布有反应试剂，所述反应试剂包括水溶性高分子材料、缓冲体系、底物、丙酮酸氧化酶、过氧化物酶、色原、激活剂、稳定剂，具体包括：

水溶性高分子材料采用明胶、羟丙基甲基纤维素或醋酸纤维素，浓度为50g/L-180g/L；

缓冲体系采用磷酸盐缓冲液、Tris-HCL或Good＇s缓冲液，浓度为0.05M-1.5M，反应最佳pH值在6.3-7.8；

底物采用L-丙氨酸和α-酮戊二酸钠、L-丙氨酸的浓度为0.5M-2.0M、α-酮戊二酸钠浓度为5mM-100mM；

丙酮酸氧化酶的适宜浓度为30-150U/ml；

FAD浓度为0.1mg/ml-0.3mg/ml；

TPP浓度为0.3mg/ml-0.9mg/ml；

丙酮酸氧化酶的激活剂采用Mg2+，Mg2+的浓度为1.0g/L-4.0g/L；

酶稳定剂采用二糖、多糖类或蛋白类稳定剂，如蔗糖，海藻糖和牛血清白蛋白等，在体系中的重量浓度为0.1％-2.0％；

过氧化物酶浓度为30-150U/ml；

色原作为指示剂，优选色原强吸收处波长不同于样本的强吸收处的波长，优选波长为610-650nm的色原，浓度为0.03％-0.6％。

滴加于加样孔21内的样品包括定量全血或血清、血浆，且样品中的丙氨酸氨基转移酶(ALT)催化底物L-丙氨酸和α-酮戊二酸钠，产生L-谷氨酸和丙酮酸。

实施例四

一种丙氨酸氨基转移酶干化学试剂片，其制备方法包括以下步骤：

步骤一、使用涂布机将配置好的显色液和底物溶液分别涂布在透光层31和辅助层32上，30-50℃真空干燥2h；

步骤二、依次将晾干的透光层31、辅助层32、滤血层33以及扩散层34使用微电脑快速斩切机裁切成8.3mm*4.4mm大小的长方片，按顺序组装放入上卡壳1所开设的凹槽12内；

步骤三、将组装有多层膜3的上卡壳1与下卡壳2对位卡放在一起，形成干化学试剂片，并放入存有干燥剂的不透明瓶避光保存。

其中，试剂组成如表一所示：

表一为试剂组组成

准备样本浓度为15.625U/L、31.25U/L、62.5U/L、125/L、250U/L的丙氨酸氨基转移酶校准品，采用试纸对这些样本进行测试。取30μl样本滴加于加样孔，使用小型生化分析仪进行测定，读取2min处的电压值，将其转化为吸光度，如表二所示：

表二为吸光度变化

准备样本浓度为98.2U/L、204U/L的丙氨酸氨基转移酶质控品，采用上述试纸对这些样本进行测试。每个浓度测试10次。取30μl样本滴加于加样孔，使用小型生化分析仪进行测定，读取2min处的电压值，将其转化为吸光度并带入表二中的直线回归方程，测试结果如表三所示。

表三为ALT的测试结果

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对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。

此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (8)

1.一种丙氨酸氨基转移酶干化学试剂片，其特征在于：包括上卡壳(1)、下卡壳(2)以及卡放在两者之间的多层膜(3)；

所述上卡壳(1)与下卡壳(2)之间通过凹凸槽卡扣连接，所述上卡壳(1)的中间部位开设有用于观测反应结果的测试孔(11)，且所述上卡壳(1)内侧面的中部开设有用于安放多层膜(3)的凹槽(12)，所述下卡壳(2)的中间部位开设有用于滴加样品的加样孔(21)；

所述多层膜(3)包括依次由下往上迭合的透光层(31)、辅助层(32)、滤血层(33)以及扩散层(34)。

2.根据权利要求1所述的一种丙氨酸氨基转移酶干化学试剂片，其特征在于：所述多层膜(3)的透光层(31)选用聚乙烯PE、聚氯乙烯PVC、聚丙烯PP、聚对苯二甲酸乙二醇酯PET、聚碳酸酯PC。

3.根据权利要求1所述的一种丙氨酸氨基转移酶干化学试剂片，其特征在于：所述多层膜(3)的辅助层(32)选用聚醚砜PES膜、硝酸纤维素膜、聚砜膜、玻纤膜。

4.根据权利要求1所述的一种丙氨酸氨基转移酶干化学试剂片，其特征在于：所述多层膜(3)的滤血层(33)选用玻纤膜、硝酸纤维素膜、聚砜膜、聚醚砜膜。

5.根据权利要求1所述的一种丙氨酸氨基转移酶干化学试剂片，其特征在于：所述多层膜(3)的扩散层(34)选用尼龙膜、聚四氟乙烯膜。

6.根据权利要求1所述的一种丙氨酸氨基转移酶干化学试剂片，其特征在于：所述透光层(31)和辅助层(32)上分布有反应试剂，所述反应试剂包括水溶性高分子材料、缓冲体系、底物、丙酮酸氧化酶、过氧化物酶、色原、激活剂、稳定剂，具体包括：

水溶性高分子材料采用明胶、羟丙基甲基纤维素或醋酸纤维素，浓度为50g/L-180g/L；

缓冲体系采用磷酸盐缓冲液、Tris-HCL或Good＇s缓冲液，浓度为0.05M-1.5M，反应最佳pH值在6.3-7.8；

底物采用L-丙氨酸和α-酮戊二酸钠、L-丙氨酸的浓度为0.5M-2.0M、α-酮戊二酸钠浓度为5mM-100mM；

丙酮酸氧化酶的适宜浓度为30-150U/ml；

激活剂采用Mg2+，Mg2+的浓度为1.0g/L-4.0g/L；

酶稳定剂采用二糖、多糖类或蛋白类稳定剂，重量浓度为0.1％-2.0％；

过氧化物酶浓度为30-150U/ml；

色原作为指示剂，优选色原强吸收处波长不同于样本的强吸收处的波长，优选波长为610-650nm的色原，浓度为0.03％-0.6％。

7.根据权利要求1所述的一种丙氨酸氨基转移酶干化学试剂片，其特征在于：滴加于所述加样孔(21)内的样品包括定量全血或血清、血浆，且样品中的丙氨酸氨基转移酶催化底物L-丙氨酸和α-酮戊二酸钠，产生L-谷氨酸和丙酮酸。

8.一种基于权利要求1所述的一种丙氨酸氨基转移酶干化学试剂片的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：

步骤一、使用涂布机将配置好的显色液和底物溶液分别涂布在透光层(31)和辅助层(32)上，30-50℃真空干燥；

步骤二、依次将晾干的透光层(31)、辅助层(32)、滤血层(33)以及扩散层(34)使用微电脑快速斩切机裁切成长方片，按顺序组装放入上卡壳(1)所开设的凹槽(12)内；

步骤三、将组装有多层膜(3)的上卡壳(1)与下卡壳(2)对位卡放在一起，形成干化学试剂片，并放入存有干燥剂的不透明瓶避光保存。

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