CN105400862A - 一种葡萄糖检测试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种葡萄糖检测试剂盒，属于临床体外检测试剂技术领域。本发明试剂盒包括试剂R1、试剂R2、校准品。通过在试剂R2中加入由4-FPBA、葡甘露聚糖、NaCl、丙二醇、曲拉通100、BSA组成的复合稳定剂，有效的提高了试剂盒的稳定性，其线性范围也较好，试剂的准确度高，有利于在市场中进一步的推广使用。

Description

一种葡萄糖检测试剂盒
技术领域
本发明涉及临床体外检测试剂技术领域，特别涉及一种葡萄糖检测试剂盒。
背景技术
葡萄糖(Glucose)(化学式C6H12O6)又称为玉米葡糖、玉蜀黍糖，简称为葡糖。英文别名Dextrose，Cornsugar，Grapesugar，Bloodsugar。是自然界分布最广且最为重要的一种单糖，它是一种多羟基醛。纯净的葡萄糖为无色晶体，有甜味但甜味不如蔗糖(一般人无法尝到甜味)，易溶于水，微溶于乙醇，不溶于乙醚。水溶液旋光向右，故属于"右旋糖"。葡萄糖在生物学领域具有重要地位，是活细胞的能量来源和新陈代谢中间产物，即生物的主要供能物质。植物可通过光合作用产生葡萄糖。在糖果制造业和医药领域有着广泛应用。
它是自然界分布最广泛的单糖。葡萄糖含五个羟基，一个醛基，具有多元醇和醛的性质。
葡萄糖无色结晶或白色结晶性或颗粒性粉末；无臭，味甜，有吸湿性。易溶于水，在碱性条件下加热易分解。应密闭保存。口服后迅速吸收，进入人体后被组织利用，也可转化成糖原或脂肪贮存。正常人体每分钟利用葡萄糖的能力为每公斤体重6毫克。是一种能直接吸收利用，补充热能的碳水化合物，是人体所需能量的主要来源，在体内被氧化成二氧化碳和水，并同时供给热量，或以糖原形式贮存。能促进肝脏的解毒功能，对肝脏有保护作用。是生物体内最为常见的能源物资。
人血清或血浆中葡萄糖参考范围为3.9～6.1mmol/L。葡萄糖的准确测定对于诊断和治疗高血糖症和低血糖症十分重要。高血糖症可见于糖尿病、静脉输入含葡萄糖液体、严重应激状态、脑血管意外。低血糖症可见于胰岛素用药、先天性碳水化合物代谢障碍和禁食。通常在研究这些疾病时，还将葡萄糖测定与各种耐量试验和刺激试验一同进行。
葡萄糖氧化酶（GOD）利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放出过氧化氢。过氧化物酶（POD）在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，使色原性氧受体4-氨基安替比啉（4-AA）和对羟基苯甲酸钠去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。该方法是一种无需预处理样本，技术和设备要求不高，而精密度和特异性更高的分析方法。由于该方法不需要昂贵的设备，可以实现自动化，且可测定大量标本，因此受到临床广泛推广。但是普通的葡萄糖检测试剂中由于存在酶，会使该试剂的稳定性受到影响，不利于试剂的长期保存，从而造成准确度差及浪费的不良后果。
发明内容
针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种葡萄糖检测试剂盒。该试剂盒与常规的试剂盒相比，稳定性好，准确度高，线性范围好，分析灵敏度高，有利于试剂在临床上的推广应用。
本发明是通过以下措施实现的：
一种葡萄糖酶检测试剂盒，其特征在于，它包含试剂R1、试剂R2和校准品，其中试剂R1组成为：
磷酸氢二钠25mmol/L
磷酸二氢钾50mmol/L
亚铁氰化钾0.05mmol/L
对羟基苯甲酸钠15mmol/L
4-氨基安替比林500μmol/L
过氧化物酶2000U/L
TritonX-1000.5%（V/V）
叠氮化钠0.5%（W/V）
试剂R2组成为：
磷酸氢二钠25mmol/L
磷酸二氢钾50mmol/L
葡萄糖氧化酶24000U/L
乙二胺四乙酸二钠10mmol/L
4-甲酰苯基硼酸0.01%
葡甘露聚糖0.5-1mg/mL
NaCl5mmol/L
丙二醇20mg/mL
曲拉通1001%
BSA0.1-1g/L。
所述试剂R1和试剂R2在使用时的比例为R1：R2=4：1。
本发明的试剂盒在具有双试剂功能的自动生化分析仪上进行，其具体使用方法见图4。
本发明所使用的校准品为英国朗道公司生产的复合校准品。
加入生理盐水、样本或校准品5μl，之后再加入R1试剂400μl预孵育5min后读取吸光度A1，之后再加入100μl的试剂R2反应5min后，读取吸光度A2，并计算ΔA。
本发明的有益效果：
本发明提供的葡萄糖酶显色法检测试剂盒，通过在试剂R2中加入了由4-甲酰苯基硼酸（4-FPBA）、葡甘露聚糖、NaCl、丙二醇、曲拉通100、BSA组成的复合稳定剂，各组分协同作用使试剂稳定性能优异，解决了酶长期保存不稳定这一难题，在试验中它能增加酶的稳定时间，而不会影响酶的活性，从而有效地增强了试剂盒的稳定性，却不会对试剂的准确度和分析灵敏度产生影响，有利于该试剂在市场中进一步的推广。
附图说明
图1实施例2准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性；
图2实施例3准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性；
图3实施例4准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性；
图4本发明试剂盒使用方法步骤。
具体实施方式
为了更好的理解本发明，下面结合具体实施例来进一步详细说明。
实施例1
市场上获得认可的一种准确度优异的葡萄糖试剂盒，它包括试剂R1、试剂R2、校准品。
其中试剂R1组成为：
磷酸氢二钠25mmol/L
磷酸二氢钾50mmol/L
亚铁氰化钾0.05mmol/L
对羟基苯甲酸钠15mmol/L
4-氨基安替比林500μmol/L
过氧化物酶2000U/L
TritonX-1000.5%（V/V）
叠氮化钠0.5%（W/V）
试剂R2组成为：
磷酸氢二钠25mmol/L
磷酸二氢钾50mmol/L
葡萄糖氧化酶24000U/L
乙二胺四乙酸二钠10mmol/L
本实施例描述的试剂盒，在使用时，其测定方法是采用具有双试剂功能的东芝120自动分析仪，操作如下：
加入生理盐水、样本或校准品5μl，之后再加入R1试剂400μl预孵育5min后读取吸光度A1，之后再加入100μl的试剂R2反应5min后，读取吸光度A2，并计算ΔA。
本实施例所使用的校准品为英国朗道公司生产的复合校准品。
实施例2
一种葡萄糖检测试剂盒，它包括试剂R1、试剂R2、校准品。
其中试剂R1组成为：
磷酸氢二钠25mmol/L
磷酸二氢钾50mmol/L
亚铁氰化钾0.05mmol/L
对羟基苯甲酸钠15mmol/L
4-氨基安替比林500μmol/L
过氧化物酶2000U/L
TritonX-1000.5%（V/V）
叠氮化钠0.5%（W/V）
试剂R2组成为：
磷酸氢二钠25mmol/L
磷酸二氢钾50mmol/L
葡萄糖氧化酶24000U/L
乙二胺四乙酸二钠10mmol/L
4-FPBA0.01%
葡甘露聚糖0.5mg/mL
NaCl5mmol/L
丙二醇20mg/mL
曲拉通1001%
BSA0.1g/L
具体测定方法同实施例1。
实施例3
一种葡萄糖检测试剂盒，它包括试剂R1、试剂R2、校准品。
其中试剂R1组成为：
磷酸氢二钠25mmol/L
磷酸二氢钾50mmol/L
亚铁氰化钾0.05mmol/L
对羟基苯甲酸钠15mmol/L
4-氨基安替比林500μmol/L
过氧化物酶2000U/L
TritonX-1000.5%（V/V）
叠氮化钠0.5%（W/V）
试剂R2组成为：
磷酸氢二钠25mmol/L
磷酸二氢钾50mmol/L
葡萄糖氧化酶24000U/L
乙二胺四乙酸二钠10mmol/L
4-FPBA0.01%
葡甘露聚糖0.8mg/mL
NaCl5mmol/L
丙二醇20mg/mL
曲拉通1001%
BSA0.5g/L
具体测定方法同实施例1。
实施例4
一种葡萄糖检测试剂盒，它包括试剂R1、试剂R2、校准品。
其中试剂R1组成为：
磷酸氢二钠25mmol/L
磷酸二氢钾50mmol/L
亚铁氰化钾0.05mmol/L
对羟基苯甲酸钠15mmol/L
4-氨基安替比林500μmol/L
过氧化物酶2000U/L
TritonX-1000.5%（V/V）
叠氮化钠0.5%（W/V）
试剂R2组成为：
磷酸氢二钠25mmol/L
磷酸二氢钾50mmol/L
葡萄糖氧化酶24000U/L
乙二胺四乙酸二钠10mmol/L
4-FPBA0.01%
葡甘露聚糖1mg/mL
NaCl5mmol/L
丙二醇20mg/mL
曲拉通1001%
BSA1g/L
具体测定方法同实施例1。
对上述实施例1-4中制得的试剂盒分析性能进行实验验证。
准确度验证实验：
将实施例2、3、4的试剂盒作为实验组，实施例1中市场上获得认可的准确度优异的葡萄糖试剂盒作为对照组进行对比实验，对40个样本进行检测，检测的结果如图1-图3。
通过图1-图3的检测数据可知，实施例2、3、4检测试剂盒与对照检测试剂盒的检测结果线性相关系数r分别为0.9954、0.9974、0.9979，相关性比较好，表明本发明的试剂盒与市场上获得认可的具有优异准确度的葡萄糖检测试剂盒有高度一致性，证明本发明试剂盒添加的其他各种成分对其准确性不会造成影响，试剂盒依然保持较好的准确度。
线性相关性验证实验：
找到葡萄糖高值样本为22mmol/L，用生理盐水进行系列稀释，配制6个不同浓度的样本，依次为22mmol/L、17.6mmol/L、13.2mmol/L、8.8mmol/L、4.4mmol/L、0mmol/L浓度的样本，每个浓度水平各样本分别测定三次，分别取其平均值。分别利用实施例1、2、3、4的试剂进行检测。检测结果如表1所示。
表1实施例1-4线性相关验证实验检测结果
理论浓度（mmol/L） 实施例1检测结果（mmol/L） 实施例2检测结果（mmol/L） 实施例3检测结果（mmol/L） 实施例4检测结果（mmol/L）
0 0.14 0.13 0.17 0.14
4.4 4.43 4.42 4.43 4.35
8.8 8.76 8.57 8.68 8.69
13.2 12.90 12.99 13.18 12.73
17.6 17.10 17.65 17.83 17.63
22 22.54 22.38 21.5 22.22
相关系数r 0.9985 0.9996 0.9993 0.9995
上述检测结果显示，实施例1-4检测结果相关性均大于0.990，但实施例2、3、4的检测结果大于0.999，与实施例1相比具有更好的线性相关性，这说明本发明试剂具有更好的线性相关性。
稳定性验证实验：
在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存试剂，检测四种实施例试剂的稳定性。四种试剂每月选取同一样本测定其吸光度三次，取平均值，与新鲜的实施例1试剂检测结果进行对比，从而确定试剂的稳定时间。检测数据如表2。
表2稳定性验证实验检测结果
时间 实施例1试剂检测结果 实施例2试剂检测结果 实施例3试剂检测结果 实施例4试剂检测结果 新鲜的实施例1试剂检测结果
12个月 0.31657 0.31606 0.31687 0.31698 0.31679
13个月 0.31568 0.31587 0.31646 0.31632 0.31682
14个月 0.31656 0.31668 0.31654 0.31674 0.31664
15个月 0.31326 0.31399 0.31387 0.31355 0.31406
16个月 0.09975 0.31966 0.31967 0.31008 0.31987
17个月 0.01221 0.31734 0.31686 0.31691 0.31729
18个月 0.00163 0.31826 0.31757 0.31811 0.31843
19个月 0.00022 0.31453 0.31432 0.31463 0.31457
20个月 0.00001 0.31685 0.31596 0.31623 0.31635
21个月 0.00000 0.31374 0.31421 0.31417 0.31461
22个月 0.00000 0.31284 0.31314 0.31321 0.31358
23个月 0.00000 0.31263 0.31198 0.31167 0.31265
24个月 0.00000 0.11198 0.31213 0.31191 0.31235
25个月 0.00000 0.02857 0.02843 0.03830 0.31232
26个月 0.00000 0.00165 0.00182 0.00297 0.31328
实验结果显示，实施例1试剂在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存15个月稳定，而实施例2、3、4试剂在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存24个月稳定，说明在试剂中通过加入复合稳定剂能够有效的提高葡萄糖检测试剂盒的稳定性。
综合以上分析，本发明提供的葡萄糖检测试剂盒，在试剂R2中通过加入复合稳定剂能够有效的提高试剂盒的稳定性，线性范围较好，试剂的准确度也较好。因此，本发明提供的葡萄糖检测试剂盒有利于在市场中进一步的推广使用。

Claims (3)

1.一种葡萄糖检测试剂盒，其特征在于，它包含试剂R1、R2和校准品，其中试剂R1组成为：
磷酸氢二钠25mmol/L
磷酸二氢钾50mmol/L
亚铁氰化钾0.05mmol/L
对羟基苯甲酸钠15mmol/L
4-氨基安替比林500μmol/L
过氧化物酶2000U/L
TritonX-1000.5%（V/V）
叠氮化钠0.5%（W/V）
试剂R2组成为：
磷酸氢二钠25mmol/L
磷酸二氢钾50mmol/L
葡萄糖氧化酶24000U/L
乙二胺四乙酸二钠10mmol/L
4-甲酰苯基硼酸0.01%
葡甘露聚糖0.5-1mg/mL
NaCl5mmol/L
丙二醇20mg/mL
曲拉通1001%
BSA0.1-1g/L。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和试剂R2在使用时的比例为R1：R2=4：1。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述组分2中加入了由4-FPBA、葡甘露聚糖、NaCl、丙二醇、曲拉通100、BSA六种成分组成的复合稳定剂。
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