CN105063174B

CN105063174B - 一种血清葡萄糖检测试剂

Info

Publication number: CN105063174B
Application number: CN201510554930.6A
Authority: CN
Inventors: 郁东; 李志明; 谭柏清; 甘宜梧; 谢清华
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2015-09-02
Filing date: 2015-09-02
Publication date: 2018-06-29
Anticipated expiration: 2035-09-02
Also published as: CN105063174A

Abstract

本发明公开了一种血清葡萄糖检测试剂，是由试剂R1和试剂R2组成的；所述试剂R1是由缓冲液、Mg²⁺、三磷酸腺苷(ATP)、NAD+、氟碳表面活性剂、BSA、蔗糖、海藻糖、甘露醇和防腐剂组成的；所述试剂R2是由缓冲液、Mg²⁺、BSA、蔗糖、海藻糖、甘露醇、葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶、己糖激酶、氟碳表面活性剂、防腐剂组成的。本发明试剂的准确度和稳定性好，价格便宜，使用方便，完全可以满足临床需要。

Description

一种血清葡萄糖检测试剂

技术领域

本发明涉及葡萄糖检测技术领域，特别涉及一种血清葡萄糖检测试剂。

背景技术

血清葡萄糖(GLU)，即人们常说的血糖，是指血液中葡萄糖浓度。在人体其主要来源于食物中的淀粉、肉内肌糖原及麦芽糖等经消化吸收而生成的葡萄糖。血糖大部分以糖原形式储存在肝脏和肌肉内，小部分随血液循环输送至组织器官中，进行氧化分解，为生命活动提供能量。

在正常情况下，在胰岛素等激素参与下，血清葡萄糖的分解与合成处于动态平衡，血糖保持相对稳定。正常人在空腹血糖浓度为3.61~6.11mmol/L。空腹血糖浓度超过7.0mmol/L称为高血糖。血糖浓度低于3.61mmol/L称为低血糖。血清葡萄糖(GLU)检测是一种常用的生化检测项目，它在糖尿病的诊断、疗效观察和一般的临床诊疗中的应用非常广泛。

目前，通过酶学方法测定血液葡萄糖是临床化学中的主流方法。其中最常用的有葡萄糖氧化酶法和己糖激酶法。葡萄糖氧化酶法的原理：葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化下，被氧化成葡萄糖酸，产生过氧化氢。在辣根过氧化物酶催化下，过氧化氢和各种色原反应，生成有色化合物，可进行比色测定。该法的缺点是易受还原性物质如胆红素、抗坏血酸、尿酸和谷胱甘肽等的干扰。与葡萄糖氧化酶方法相比，己糖激酶方法对葡萄糖的特异性高，不受尿酸和抗坏血酸的干扰。但其反应底物ATP及相关酶的稳定性稍差，解决己糖激酶法试剂稳定性已成当务之急。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测葡萄糖(GLU)的试剂及使用该试剂检测葡萄糖含量的方法。该试剂盒采用己糖激酶法，可以有效检测葡萄糖的含量，具有抗干扰能力强，稳定性好的优点。

本发明是通过以下步骤得到的：

一种血清葡萄糖检测试剂，是由试剂R1和试剂R2组成的；

所述试剂R1是由以下含量的成分组成的：

缓冲液100mmol/L

Mg²⁺5mmol/L

三磷酸腺苷(ATP) 2mmol/L

NAD+3mmol/L

氟碳表面活性剂 3ml/L

BSA2g/L

蔗糖 20g/L

海藻糖5g/L

甘露醇20g/L

防腐剂0.5g/L；

所述试剂R2是由以下含量的成分组成的：

缓冲液100mmol/L

Mg²⁺5mmol/L

BSA2g/L

蔗糖20g/L

海藻糖5g/L

甘露醇20g/L

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 2KU/L

己糖激酶 2KU/L

氟碳表面活性剂3ml/L

防腐剂0.5g/L。

所述的，R1试剂和R2试剂的体积比为4:1。

所述的，缓冲液为25℃，pH7.5的哌嗪-1,4-二乙磺酸缓冲液。

所述的，氟碳表面活性剂为非离子型氟碳表面活性剂。

所述的，防腐剂为NaN₃。

本发明的基本原理如下：

在己糖激酶(HK) 催化下，葡萄糖和ATP 发生磷酸化反应，生成葡萄糖-6-磷酸(G6P) 与ADP。然后在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD) 催化下，葡萄糖-6-磷酸(G6P)脱氢生成6-磷酸葡萄糖酸(6PG) ，同时使NADP 还原成NADPH 。反应式如下:

因此，吸光度的净增高值与葡萄糖浓度成正比。通过检测340 nm波长处吸光度的变化，可计算血清中葡萄糖浓度。

本发明在己糖激酶法的基础上，优化反应体系，通过采用哌嗪-1,4-二乙磺酸缓冲液（Good’s缓冲液之一），该缓冲液不参加和不干扰生物化学反应过程，对酶化学反应等无抑制作用，可有效提高各底物酶的活性和稳定性，增强试剂的抗干扰能力。并且体系中添加BSA、蔗糖、甘露醇、海藻糖等组成的复合稳定剂，使三磷酸腺苷(ATP)及各底物酶的稳定性进一步提高。

此外，本发明采用的非离子型氟碳表面活性剂，该表面活性剂具有高效、稳定，即高表面活性，高热力学和化学稳定性等显著优点。具体如下：（1）在极低应用浓度下便能显著降低水溶液的表面张力。极高的表面活性，即可将水溶液表面张力降到极低水平。（2）氟碳表面活性剂热稳定性高、化学稳定性好，可在强酸、强碱、强氧化介质等特殊应用体系中稳定有效地发挥其表面活性剂作用，不会与体系发生反应或分解。（3）氟碳表面活性剂能与其它各类活性剂很好地相容。通过添加氟碳表面活性剂可以显著促进各底物的溶解，维持体系的稳定。并且可以有效避免测试过程血清中干扰物质造成的体系浑浊等干扰，极大的增强了试剂的抗干扰能力。

本发明的有益效果：

1）本发明采用哌嗪-1,4-二乙磺酸缓冲液，添加多种抗干扰物质和稳定剂，可以有效保证底物ATP及体系中相关酶的稳定，显著改善了试剂的稳定性可抗干扰能力；

2）本发明采用新型非离子型氟碳表面活性剂，不仅显著改善测定的性能，而且增强了试剂的稳定性和抗干扰能力；

3）本发明试剂的准确度和稳定性好，价格便宜，使用方便，完全可以满足临床需要。

附图说明

图1为相关性检测结果；

图2为稳定性检测结果。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明：

实施例1

一种血清葡萄糖检测试剂，是由试剂R1和试剂R2组成的；

所述试剂R1是由以下含量的成分组成的：

缓冲液100mmol/L

Mg²⁺5mmol/L

三磷酸腺苷(ATP) 2mmol/L

NAD+3mmol/L

非离子型氟碳表面活性剂 3ml/L

BSA2g/L

蔗糖 20g/L

海藻糖5g/L

甘露醇20g/L

NaN₃0.5g/L；

所述试剂R2是由以下含量的成分组成的：

缓冲液100mmol/L

Mg²⁺5mmol/L

BSA2g/L

蔗糖20g/L

海藻糖5g/L

甘露醇20g/L

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 2KU/L

己糖激酶 2KU/L

氟碳表面活性剂3ml/L

NaN₃0.5g/L。

所述的，R1试剂和R2试剂的体积比为4:1。

所述的，缓冲液为25℃，pH7.5的哌嗪-1,4-二乙磺酸缓冲液。

本实施例检测试剂的检测方法：

本实施例的血清葡萄糖检测试剂，在使用时采用具有双试剂功能的全自动生化分析仪，如日立7180全自动分析仪，利用终点法进行测定。具体的检测方法如表1所示。

表1血清葡萄糖检测试剂的检测方法

计算：血清葡萄糖含量（mmol/L）＝（∆A测定÷∆A标准）×C标准。

抗干扰性实验

取新鲜混合血清，分成2等份，然后将每等份再分成5等份，加入不同的干扰物质，使其在血清中的浓度达到表2的要求，然后分别用实施例1所得试剂，与市场常见并认可的葡萄糖(GLU)试剂同时对比测定血清中GLU的含量，对照组测定结果与加入不同干扰物质后各组的实验结果见表2。其中：相对偏差(%)=(干扰样本的测定均值－对照样本的测定均值)/对照样本的测定均值×100%。

表2 抗干扰性实验结果

由表2可以看出，实施例1试剂在抗坏血酸≤1704μmol/L、胆红素≤684μmol/L、血红蛋白≤5g/L、甘油三酯≤22.6mmol/L的条件下，对测试结果没有明显干扰。而对照组试剂在上述浓度干扰物质存在时，受到明显干扰，这说明通过优化反应缓冲体系、添加新型非离子表面活性剂后，本发明的检测试剂的抗干扰性能显著提高，远远优于对比试剂。

Claims

1.一种血清葡萄糖检测试剂，其特征在于，是由试剂R1和试剂R2组成的；

所述试剂R1是由以下含量的成分组成的：

缓冲液100mmol/L

Mg²⁺5mmol/L

三磷酸腺苷(ATP) 2mmol/L

NAD+3mmol/L

氟碳表面活性剂 3ml/L

BSA2g/L

蔗糖 20g/L

海藻糖5g/L

甘露醇20g/L

防腐剂0.5g/L；

所述试剂R2是由以下含量的成分组成的：

缓冲液100mmol/L

Mg²⁺5mmol/L

BSA2g/L

蔗糖20g/L

海藻糖5g/L

甘露醇20g/L

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 2KU/L

己糖激酶 2KU/L

氟碳表面活性剂 3ml/L

防腐剂0.5g/L；

所述R1试剂和R2试剂的体积比为4:1；

所述缓冲液为25℃，pH7.5的哌嗪-1,4-二乙磺酸缓冲液；

所述氟碳表面活性剂为非离子型氟碳表面活性剂。

2.根据权利要求1所述的血清葡萄糖检测试剂，其特征在于，所述防腐剂为NaN₃。