CN102154443A - 一种肌酸激酶mb同工酶活性测定试剂及其制备方法 - Google Patents

一种肌酸激酶mb同工酶活性测定试剂及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN102154443A
CN102154443A CN2011100738905A CN201110073890A CN102154443A CN 102154443 A CN102154443 A CN 102154443A CN 2011100738905 A CN2011100738905 A CN 2011100738905A CN 201110073890 A CN201110073890 A CN 201110073890A CN 102154443 A CN102154443 A CN 102154443A
Authority
CN
China
Prior art keywords
reagent
mmol
activity
isoenzyme
creatine kinase
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN2011100738905A
Other languages
English (en)
Other versions
CN102154443B (zh
Inventor
不公告发明人
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhejiang Dong'ou Diagnosis Producuts Co Ltd
Original Assignee
Zhejiang Dong'ou Diagnosis Producuts Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhejiang Dong'ou Diagnosis Producuts Co Ltd filed Critical Zhejiang Dong'ou Diagnosis Producuts Co Ltd
Priority to CN2011100738905A priority Critical patent/CN102154443B/zh
Publication of CN102154443A publication Critical patent/CN102154443A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN102154443B publication Critical patent/CN102154443B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂,含有:硫代氧化型辅酶、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶、巯基试剂、镁盐、葡萄糖激酶或己糖激酶、抗CK-M抗体、磷酸肌酸,二磷酸腺苷、葡萄糖和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶。其制备方法为:将各成分溶于pH为5.0~9.5的缓冲液中。本发明的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂,检测灵敏度能放大数倍,测定结果具有高精密度、准确度。

Description

一种肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及医学检验领域中的一种分析试剂,具体涉及用于测定血液中肌酸激酶MB同工酶活性的试剂。
背景技术
肌酸激酶(CK)有三种主要的同工酶,即CK-MM,CK-MB,CK-BB。肌酸激酶MB同工酶(CK-MB),主要存在于心肌中,是心肌酶谱中最有特异性的酶,从八十年代起公认为心肌酶学诊断的“金标准”,应用于急性心肌梗塞(AMI)的早期诊断, 是诊断及监测AMI病人病情敏感而特异的指标。
临床上最普遍采用免疫抑制法,其原理:免疫抑制法试剂中的抗CK-M抗体抑制CK-M亚基,即抑制CK-MM活性和CK-MB的CK-M亚单位的活性,通过测定样品中未被抑制的CK-B单体的活力(相当于一半CK-MB活力),所以将结果乘以2,计算出CK-MB的活力, CK-MB试剂的检测灵敏度相应也比CK 低一半左右,由于CK-MB参考值 <25 U/L,其上限25 U/L的每分钟吸光度变化值只有 0.003左右,检测仪器的温飘及脂浊标本的干扰,都会产生较大的测量误差,使得测定结果不可靠。申请号 200610114997.9 的专利通过反应生成过氧化氢+鲁米诺+过氧化物酶化学发光法测定肌酸激酶MB同工酶活性,虽然有较高的检测灵敏度,但由于肌酸激酶在血清中很容易失活,通常要加入巯基试剂保持其活力,巯基试剂会严重抑制过氧化氢 +过氧化物酶反应,使其测定结果不可靠性。
发明内容
为了解决上述技术问题,本发明提供一种肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂,含有:硫代氧化型辅酶、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PGDH)、巯基试剂、镁盐、葡萄糖激酶(GLUK)(或己糖激酶)、抗CK-M抗体、磷酸肌酸(CP),二磷酸腺苷(ADP)、葡萄糖和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)。
优选地,上述硫代氧化型辅酶为硫代氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(Thio-NAD)或其盐,或者硫代氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(Thio-NADP)或其盐;所述巯基试剂为N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)或硫代甘油(TG)。
进一步地,上述的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂,还可以含有:一磷酸腺苷(AMP)、二腺苷五磷酸(P1,P5-DiAP)、稳定剂和防腐剂。
上述稳定剂为蛋白稳定剂、二糖、多糖、多元醇、氨基酸、螯合剂或非离子表面活性剂的一种或两种以上任意混合物;所述防腐剂为PROCLIN 系列防腐剂、叠氮钠、庆大霉素、氯霉素、对羟基苯甲酸甲酯、脱氧乙酸及其盐或阳离子表面活性剂中的一种或其两种以上任意混合物。
优选地,所述肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂为含有如下浓度成分的溶液:
磷酸肌酸             5-200 mmol/L
二磷酸腺苷           0.5-20 mmol/L
葡萄糖               1-200 mmol/L
葡萄糖激酶(或己糖激酶)  0.1-100 KU/L
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶   0.1-100 KU/L
6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶    0.1-100 KU/L
硫代氧化型辅酶       0.1-50 mmol/L
巯基试剂             1-100 mmol/L
抗CK-M 抗体      CK-M 抑制>500 U/L
镁盐               1-100 mmol/L
上述的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂,还可含有如下浓度的成分:
一磷酸腺苷       0.5-20 mmol/L
二腺苷五磷酸     0.001-0.1 mmol/L
稳定剂           0.1-20 mmol/L
防腐剂           0.1-20 g/L
上述的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂的制备方法为:将各成分溶于pH为5.0~9.5的缓冲液中。
上述的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂可为双试剂,包括:试剂1和试剂2,所述试剂1包括以下成分:二磷酸腺苷、葡萄糖、葡萄糖激酶(或己糖激酶,优选葡萄糖激酶)、G6PDH、6PGDH 、硫代氧化型辅酶、巯基试剂、抗CK-M 抗体、镁盐,所述试剂2包括以下成分:磷酸肌酸。
上述的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂(双试剂)的制备方法,步骤为:1)将第一剂的各成分溶于pH为5.0~9.5的缓冲液中,备用;2)将第二剂的成分溶于pH为5.0~9.5的缓冲液中,备用。
上述制备方法中,所述缓冲液为浓度为20-500 mmol/L的咪唑缓冲液、 Bis-Tris缓冲液或生物缓冲液。
本发明提供的肌酸肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂能够达到以下效果:
1)本发明的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂,检测灵敏度与现有技术相比能放大数倍,使测定结果具有高精密度、准确度;
2)本发明的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂在 405 nm生成黄色指示,可以应用到干式试剂、快速检测试剂。
附图说明
图1是实施例2制得的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂和对比例的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂的反应灵敏度曲线。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明,以使本领域的技术人员可以更好的理解本发明并能予以实施,但所举实施例不作为对本发明的限定。
本发明的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂含有硫代氧化型辅酶、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶、巯基试剂、镁盐、葡萄糖激酶(或己糖激酶,优选葡萄糖激酶)、抗CK-M抗体、磷酸肌酸,二磷酸腺苷、葡萄糖和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶,其测定活性时的反应原理为:
反应1、CK-M 被 抗CK-M抗体抑制
反应式2、磷酸肌酸 + 二磷酸腺苷                                                
Figure 915692DEST_PATH_IMAGE001
 肌酸 + 三磷酸腺苷
反应式3、三磷酸腺苷 + 葡萄糖 
Figure 730064DEST_PATH_IMAGE002
二磷酸腺苷 + G6P
反应式4、G6P + Thio-NAD(P)+
Figure 850729DEST_PATH_IMAGE003
 6-PG + Thio-NAD(P)H + H+
反应式5、6-PG + Thio-NAD(P)+  核糖-5-磷酸+ Thio-NAD(P)H + H+
在 405 nm 测定吸光度增加的速率与肌酸激酶MB同工酶活性成正比。
本发明采用硫代氧化型辅酶其在405nm具有较高的吸光度,而且反应式3 产物葡萄糖-6-磷酸经过本发明二级放大,结合高灵敏的指示系统,使本发明的检测灵敏度可以达到临床上最普遍采用的免疫抑制法的4倍左右,从而测定结果精度提高得以保障。
所述的硫代氧化型辅酶,可以是硫代氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(Thio-NAD)、硫代氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(Thio-NADP),或上述辅酶的盐类。
所述用于激活肌酸激酶活性的巯基试剂,可以是N-乙酰-L-半胱氨酸、硫代甘油等巯基试剂。
加入的镁离子可以是醋酸镁、硫酸镁、氯化镁等,镁离子的加入除可激活反应式2的反应外,更作为酶的辅助因子,维持酶的构象。
作为优化的技术方案,肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂中还含有:一磷酸腺苷、二腺苷五磷酸、稳定剂和防腐剂。
一磷酸腺苷和二腺苷五磷酸的加入可降低待测样品中其他酶对测定结果的干扰。
所述的稳定剂可以为蛋白稳定剂、多元醇、氨基酸、螯合剂和非离子表面活性剂。其中,所述的多元醇、二糖、多糖、蛋白类稳定剂、氨基酸、螯合剂、二价金属离子,可以是单独使用,也可以是组合使用。
其中,多元醇可以是甘油、乙二醇、丙二醇、二甘醇等,多元醇可以和水相互间形成坚强的氢键,降低水分子的活力,保持酶活性的三维结构。二糖类可以是蔗糖、海藻糖、山梨醇、甘露醇等。蛋白类稳定剂可以是牛血清白蛋白、人血清白蛋白、卵清蛋白等,蛋白类稳定剂可以和试剂中酶分子作用,减少离解为亚基或变性失活。氨基酸可以是赖氨酸、天门冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、蛋氨酸、精氨酸、缬氨酸、亮氨酸、甘氨酸、苏氨酸、酪氨酸、组氨酸等及其盐,氨基酸可以协助保护酶蛋白质氨基酸核心序列的构想完整性,提高稳定性。螯合剂有乙二胺四乙酸、亚氨基二乙酸、氮三乙酸和二乙基三胺五乙酸、2-环已二胺四乙酸、乙二醇双(α-氨基乙酸)醚四乙酸、乙基乙二胺三乙酸等及其盐类,螯合剂中微量重金属,可防止抑制酶活性。非离子表面活性剂可以是:吐温系列、TritonX、聚乙二醇系列等非离子表面活性剂,起到主要增溶、澄清、防止水溶液游离氧等作用。
防腐剂可以是 PROCLIN 系列防腐剂(2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮和5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮)、叠氮钠、庆大霉素、氯霉素、对羟基苯甲酸甲酯、脱氧乙酸及其盐、阳离子表面活性剂等,可在保质期内抑制微生物的生长,防止试剂失效。
将上述各成分溶于pH为5.0~9.5的缓冲液中即可制得本发明的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂。缓冲液无特定要求,最好pH在5.0-9.5,可以使用是咪唑缓冲液,也可以是 Bis-Tris缓冲液、Good’s 生物缓冲液等以维持试剂的pH值。本发明优选采用pH为5.0~7.5,浓度为20-500 mmol/L的咪唑醋酸缓冲剂作为缓冲液。
为提高试剂保存时的稳定性,本发明的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂可为双试剂:将以下成分:二磷酸腺苷、葡萄糖、葡萄糖激酶、G6PDH、6PGDH 、硫代氧化型辅酶、巯基试剂、抗CK-M 抗体和镁盐溶于pH 5.0~9.5的缓冲液中制成试剂1;将磷酸肌酸溶于pH 5.0~9.5的缓冲液中制成试剂2。缓冲液无特定要求,最好pH在5.0-9.5,可以使用是咪唑缓冲液,也可以是 Bis-Tris缓冲液、Good’s 生物缓冲液等以维持试剂的pH值。本发明优选采用pH为5.0~7.5,浓度为20-500 mmol/L的咪唑醋酸缓冲剂作为缓冲液。
上述各成分在缓冲液中的浓度优选为:
磷酸肌酸             5-200 mmol/L
二磷酸腺苷           0.5-20 mmol/L
葡萄糖               1-200 mmol/L
葡萄糖激酶          0.1-100 KU/L
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶  0.1-100 KU/L
6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶   0.1-100 KU/L
硫代氧化型辅酶       0.1-50 mmol/L
巯基试剂             1-100 mmol/L
抗CK-M 抗体(CK-M 抑制>500 U/L)
镁盐               1-100 mmol/L
一磷酸腺苷       0.5-20 mmol/L
二腺苷五磷酸     0.001-0.1 mmol/L
稳定剂           0.1-20 mmol/L
防腐剂           0.1-20 g/L。
以本发明制得的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂对肌酸激酶MB同工酶活性测定的具体步骤如下:
在日立 7180 自动生化分析仪上测定精密度试验:将取待测血清标本加入本发明的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂中,混匀,37℃孵育1~3分钟后,连续监测2分钟波长405nm的吸光度变化速率,测得待测标本中肌酸激酶MB同工酶的活性数值。
本发明制得的肌酸激酶MB同工酶的精密度计算,具体步骤如下:
取高低两个水平的血清样本,在日立7180自动生化分析仪上平行测定同一样本20次,计算测定值的平均值和标准差,按(2)式计算批内变异系数。
变异系数=S/×100%…………(2)
式中:S为标准差,计算公式为
Figure 1853DEST_PATH_IMAGE006
dn为同水平各次所测值的偏差,计算公式为dn=xn-
Figure 57533DEST_PATH_IMAGE005
xn为同水平各次所测值;
为平均值,计算公式为
Figure 673508DEST_PATH_IMAGE005
=(x1+x2+……+xn)/n。
本发明的优选实施例具体如下:
实施例1
本实施例的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂,其主要成分及浓度如下:
咪唑缓冲液 pH 6.7   100 mmol/L
磷酸肌酸  30 mmol/L
ADP   2 mmol/L
葡萄糖 20 mmol/L
GluK    2 KU/L
G6PDH   1.5 KU/L
6PGDH   10 KU/L
硫代氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸  2 mmol/L
NAC   20 mmol/L
抗CK-M 抗体(CK-M 抑制>2000 U/L)
EDTA  2 mmol/L
乙酸镁  10 mmol/L
AMP  5 mmol/L
P1,P5-DiAP  0.01 mmol/L
将本实施例制得的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂在日立 7180 生化分析仪上测定精密度试验:将取待测标本12μL加入本发明的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂 300μL中,混匀,37℃孵育1-3分钟后,连续监测2分钟吸光度变化速率,测定波长 405nm,测得肌酸激酶MB同工酶活性数值。
日立 7180 自动生化分析仪 测定参数:
TEST NAME                  CK-MB
ASSAY                       RATE-A
TIME                         10
POINT                        10-16
WAVELENGTH                660/405
SAMPLE VOLUME(NORMAL)   12
REAGENT  R1                300
REAGENT  R2
REAGENT  R3
UNIT                          U/L
K                              4522
本实施例的精密度实验计算结果如下:
表一、精密度试验:
从表一的试验结果:与对照例相比,本发明的试剂具有更好的精密度,在低值标本测定时表现更为优异。
实施例2
本实施例的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂,其主要成分及浓度如下:
咪唑缓冲液 pH 6.7   100 mmol/L
磷酸肌酸   30 mmol/L
ADP      2 mmol/L
葡萄糖    20 mmol/L
GluK     2 KU/L
G6PDH   2 KU/L
6PGDH   15 KU/L
硫代氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸  2 mmol/L
NAC   20 mmol/L
抗CK-M 抗体(CK-M 抑制>2000 U/L)
EDTA  2 mmol/L
乙酸镁  10 mmol/L
AMP  5 mmol/L
P1,P5-DiAP  0.01 mmol/L
将本实施例制得的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂在日立 7180 生化分析仪上测定精密度试验:将取待测标本12μL标本加入本发明的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂 300μL中,混匀,37℃孵育1~3分钟后,连续监测2分钟吸光度变化速率,测定波长 405nm,测得肌酸激酶MB同工酶活性数值。
日立 7180 自动生化分析仪 测定参数:
TEST NAME                  CK-MB
ASSAY                       RATE-A
TIME                         10
POINT                        10-16
WAVELENGTH                660/405
SAMPLE VOLUME(NORMAL)   12
REAGENT  R1                300
REAGENT  R2
REAGENT  R3
UNIT                          U/L
K                              4522
本实施例的肌酸激酶MB同工酶活性测定实验结果见附图1,从测光点18-34点的曲线反应趋势说明实施例反应的吸光度变化幅度远大于对照例,说明本实施例肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂的灵敏度高。
实施例3
本实施例的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂为双试剂,其主要成分及浓度如下:
试剂1:
咪唑缓冲液 pH 6.5   100 mmol/L
ADP   2 mmol/L
葡萄糖 20 mmol/L
GluK    2 KU/L
G6PDH   1.5 KU/L
6PGDH   10 KU/L
硫代氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸  2 mmol/L
硫代甘油   100 mmol/L
抗CK-M 抗体(CK-M 抑制>2000 U/L)
EDTA  2 mmol/L
乙酸镁  10 mmol/L
AMP  5 mmol/L
P1,P5-DiAP  0.01 mmol/L
试剂2:
Tris/Hcl 缓冲液 pH 9.0  25 mmol/L
磷酸肌酸 150 mmol/L
将本实施例制得的肌酸激酶MB同工酶活性测定双试剂在日立 7180 生化分析仪上测定精密度试验:将取待测标本8μL标本加入160μL试剂1中,混匀,37℃孵育5分钟后,再加入40μL试剂2,37℃孵育3分钟连续监测2分钟吸光度变化速率,测定波长 405nm。
日立 7180 生化分析仪测定参数:
TEST NAME                  CK-MB
ASSAY                       RATE-A
TIME                         10
POINT                        28-34
WAVELENGTH                660/405
SAMPLE VOLUME(NORMAL)   8
REAGENT  R1                 160
REAGENT  R2
REAGENT  R3                 40
UNIT                          U/L
K                              4522
本实施例的精密度实验计算结果如下:
表二、精密度试验:
Figure 315153DEST_PATH_IMAGE008
从表二的试验结果可看出:本实施例制得的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂同样具有良好的精密度。
表三、质控
Figure 556779DEST_PATH_IMAGE009
从表三的试验结果可看出:测定结果可靠性与对照例一致,不因为方法改良影响可靠性,测定结果都在质控范围内,都符合要求。
实施例4
本实施例的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂,其主要成分及浓度如下:
咪唑缓冲液 pH 6.7   100 mmol/L
磷酸肌酸  20 mmol/L
ADP   1.5  mmol/L
葡萄糖 15 mmol/L
GluK    2 KU/L
G6PDH   1.5 KU/L
6PGDH   8 KU/L
硫代氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸  1.5 mmol/L
NAC   15 mmol/L
抗CK-M 抗体(CK-M 抑制>1000 U/L)
EDTA  2 mmol/L
乙酸镁  8 mmol/L
AMP  3 mmol/L
P1,P5-DiAP  0.007 mmol/L
将本实施例制得的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂在日立 7180 生化分析仪上测定精密度试验:将取待测标本6μL加入本发明的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂 300μL中,混匀,37℃孵育1-3分钟后,连续监测2分钟吸光度变化速率,测定波长 405nm,测得肌酸激酶MB同工酶活性数值。
日立 7180 自动生化分析仪 测定参数:
TEST NAME                  CK-MB
ASSAY                       RATE-A
TIME                         10
POINT                        10-16
WAVELENGTH                660/405
SAMPLE VOLUME(NORMAL)   6
REAGENT  R1                300
REAGENT  R2
REAGENT  R3
UNIT                          U/L
K                              8870
本实施例的精密度实验计算结果如下:
表四、精密度试验:
Figure 458001DEST_PATH_IMAGE010
表五、质控
Figure 163789DEST_PATH_IMAGE011
从表四、五的试验结果:与对照例相比,本发明的试剂在大幅降低抗体和酶等组分用量情况下,仍具有较好的性能。
对照例
本对照例的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂,其主要成分及浓度如下:
咪唑缓冲液 pH 6.7  100 mmol/L
磷酸肌酸  30 mmol/L
ADP      2 mmol/L
葡萄糖   20 mmol/L
己糖激酶(HK)    2.5 KU/L
G6PDH   1.5 KU/L
辅酶Ⅱ(NADP)   2 mmol/L
N-乙酰半胱氨酸(NAC)     20 mmol/L
抗CK-M 抗体(CK-M 抑制>2000 U/L)
EDTA    2 mmol/L
乙酸镁  10 mmol/L
AMP        5 mmol/L
P1,P5-DiAP  0.01 mmol/L
将对照例制得的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂在日立 7180 生化分析仪上测定精密度试验:将取待测标本12μL标本加入本发明的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂 300μL中,混匀,37℃孵育1-3分钟后,连续监测2分钟吸光度变化速率,测定波长 340 nm。
本对照例的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂反应原理
反应1、CK-M 被 抗CK-M抗体抑制
反应式2、磷酸肌酸 + 二磷酸腺苷 
Figure 561272DEST_PATH_IMAGE012
 肌酸 + 三磷酸腺苷
反应式3、三磷酸腺苷 + 葡萄糖 二磷酸腺苷 + 葡萄糖-6-磷酸
反应式4、葡萄糖-6-磷酸+ NADP+
Figure 995107DEST_PATH_IMAGE014
6-磷酸葡萄糖酸 + NADPH + H+
吸光度增加的速率与肌酸激酶MB同工酶活性成正比。
本发明与对照例相比,主要优点在于:1)、以硫代氧化型辅酶(硫代氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸或其盐,或者硫代氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸或其盐)代替辅酶Ⅱ,硫代氧化型辅酶在405nm的吸光度变化率高于辅酶Ⅱ在340nm的吸光度变化率,从而提高的检测灵敏度;2)、添加了6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶,从而反应式2 产物的葡萄糖-6-磷酸经过本发明二级放大,结合高灵敏的指示系统,使本发明的检测灵敏度可以达到对照例的4倍左右,从而测定结果精度提高得以保障;3)本发明 在 405 nm生成黄色指示,可以应用到干式试剂、快速检测试剂,而对照例为 340nm,肉眼无法判断。
以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例,本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换,均在本发明的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。

Claims (10)

1.一种肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂,其特征在于,含有:硫代氧化型辅酶、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶、巯基试剂、镁盐、葡萄糖激酶或己糖激酶、抗CK-M抗体、磷酸肌酸,二磷酸腺苷、葡萄糖和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶。
2.根据权利要求1所述的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂,其特征在于,所述硫代氧化型辅酶为硫代氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸或其盐,或者硫代氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸或其盐;所述巯基试剂为N-乙酰-L-半胱氨酸或硫代甘油。
3.根据权利要求1所述的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂,其特征在于,还含有:一磷酸腺苷、二腺苷五磷酸、稳定剂和防腐剂。
4.根据权利要求3所述的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂,其特征在于,所述稳定剂为蛋白稳定剂、二糖、多糖、多元醇、氨基酸、螯合剂或非离子表面活性剂的一种或两种以上任意混合物;所述防腐剂为PROCLIN 系列防腐剂、叠氮钠、庆大霉素、氯霉素、对羟基苯甲酸甲酯、脱氧乙酸及其盐或阳离子表面活性剂中的一种或其两种以上任意混合物。
5.根据权利要求1所述的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂,其特征在于,所述肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂为含有如下浓度成分的溶液:
磷酸肌酸             5-200 mmol/L
二磷酸腺苷           0.5-20 mmol/L
葡萄糖               1-200 mmol/L
葡萄糖激酶或己糖激酶   0.1-100 KU/L
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶   0.1-100 KU/L
6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶    0.1-100 KU/L
硫代氧化型辅酶       0.1-50 mmol/L
巯基试剂             1-100 mmol/L
抗CK-M 抗体        CK-M 抑制>500 U/L 
镁盐                1-100 mmol/L。
6.根据权利要求5所述的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂,其特征在于,还含有如下浓度的成分:
一磷酸腺苷       0.5-20 mmol/L
二腺苷五磷酸     0.001-0.1 mmol/L
稳定剂           0.1-20 mmol/L
防腐剂           0.1-20 g/L。
7.根据权利要求1所述的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂,其特征在于,所述肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂为双试剂,包括:试剂1和试剂2,所述试剂1包括以下成分:二磷酸腺苷、葡萄糖、葡萄糖激酶或己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶、硫代氧化型辅酶、巯基试剂、抗CK-M 抗体和镁盐,所述试剂2包括以下成分:磷酸肌酸。
8.权利要求1~6任一项所述的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂的制备方法,其特征在于,将各成分溶于pH为5.0~9.5的缓冲液中。
9.权利要求7所述的肌酸激酶MB同工酶活性测定试剂的制备方法,其特征在于,步骤为:1)将第一剂的各成分溶于pH为5.0~9.5的缓冲液中,备用;2)将第二剂的成分溶于pH为5.0~9.5的缓冲液中,备用。
10.根据权利要求8或9所述的制备方法,其特征在于,所述缓冲液为浓度为20-500 mmol/L的咪唑缓冲液、 Bis-Tris缓冲液或生物缓冲液。
CN2011100738905A 2011-03-25 2011-03-25 一种肌酸激酶mb同工酶活性测定试剂及其制备方法 Active CN102154443B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2011100738905A CN102154443B (zh) 2011-03-25 2011-03-25 一种肌酸激酶mb同工酶活性测定试剂及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2011100738905A CN102154443B (zh) 2011-03-25 2011-03-25 一种肌酸激酶mb同工酶活性测定试剂及其制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN102154443A true CN102154443A (zh) 2011-08-17
CN102154443B CN102154443B (zh) 2013-02-13

Family

ID=44436114

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2011100738905A Active CN102154443B (zh) 2011-03-25 2011-03-25 一种肌酸激酶mb同工酶活性测定试剂及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN102154443B (zh)

Cited By (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104357544A (zh) * 2014-12-05 2015-02-18 重庆中元生物技术有限公司 一种高稳定性的肌酸激酶检测试剂盒
CN104374905A (zh) * 2014-11-28 2015-02-25 山东博科生物产业有限公司 一种血清肌酸激酶检测试剂
CN105063174A (zh) * 2015-09-02 2015-11-18 郁东 一种血清葡萄糖检测试剂
CN106093386A (zh) * 2016-05-27 2016-11-09 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 一种测定肌酸激酶同工酶(ck‑mb)的试剂盒
CN107267595A (zh) * 2017-07-19 2017-10-20 王贤俊 一种肌酸激酶同工酶检测试剂的制备方法
CN107402305A (zh) * 2017-07-19 2017-11-28 王贤俊 一种肌酸激酶同工酶的定量检测试剂盒
CN107641642A (zh) * 2017-10-25 2018-01-30 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种肌酸激酶同工酶双试剂及其制备方法
CN108008131A (zh) * 2017-12-29 2018-05-08 广州市丰华生物工程有限公司 一种检测滤纸干血片中肌酸激酶的试剂盒及其制备方法
CN108276470A (zh) * 2017-01-06 2018-07-13 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 细胞裂解液、提取胞内蛋白的方法、制备弓形虫抗原的方法和试剂盒
CN109517813A (zh) * 2018-11-21 2019-03-26 东软威特曼生物科技(南京)有限公司 一种肌酸激酶及其同工酶激活剂、测定试剂及试剂盒
CN109517879A (zh) * 2018-11-08 2019-03-26 东软威特曼生物科技(南京)有限公司 一种肌酸激酶及其同工酶测定试剂及其试剂盒
CN110133265A (zh) * 2019-06-10 2019-08-16 天津市宝坻区人民医院 血清中肌酸激酶试剂盒及测定方法
CN111057746A (zh) * 2020-01-03 2020-04-24 浙江夸克生物科技有限公司 一种肌酸激酶同工酶测定试剂盒
CN111157724A (zh) * 2020-01-17 2020-05-15 上海高踪医疗器械科技有限公司 一种磷酸肌酸激酶同工酶检测试剂盒
CN112159833A (zh) * 2020-06-04 2021-01-01 三诺生物传感股份有限公司 一种消除内源性葡萄糖干扰的试剂及其应用和方法
CN113866410A (zh) * 2021-11-04 2021-12-31 广州达安基因股份有限公司 一种测定肌酸激酶同工酶活性的试剂盒及其测定方法
CN113881658A (zh) * 2021-07-27 2022-01-04 东软威特曼生物科技(南京)有限公司 一种高稳定性的肌酸激酶酶保护添加剂
CN114150040A (zh) * 2021-11-12 2022-03-08 中生北控生物科技股份有限公司 一种抗结晶的肌酸激酶检测试剂盒及其制备方法
CN114778858A (zh) * 2022-06-23 2022-07-22 深圳市帝迈生物技术有限公司 一种狼疮抗凝物检测试剂盒

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4360413A (en) * 1980-12-29 1982-11-23 Beckman Instruments, Inc. Creatine kinase isoenzyme electrophoretic technique and improved creatine kinase isoenzyme reagent for use therein
CN1904062A (zh) * 2005-07-25 2007-01-31 希森美康株式会社 肌酸激酶活性测定用试剂
CN1908628A (zh) * 2006-08-10 2007-02-07 福建省洪诚生物药业有限公司 血清中肌酸激酶同工酶的化学发光测定方法
CN1916623A (zh) * 2005-08-17 2007-02-21 希森美康株式会社 肌酸激酶活性测定用试剂

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4360413A (en) * 1980-12-29 1982-11-23 Beckman Instruments, Inc. Creatine kinase isoenzyme electrophoretic technique and improved creatine kinase isoenzyme reagent for use therein
CN1904062A (zh) * 2005-07-25 2007-01-31 希森美康株式会社 肌酸激酶活性测定用试剂
CN1916623A (zh) * 2005-08-17 2007-02-21 希森美康株式会社 肌酸激酶活性测定用试剂
CN1908628A (zh) * 2006-08-10 2007-02-07 福建省洪诚生物药业有限公司 血清中肌酸激酶同工酶的化学发光测定方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
《 Analytical Biochemistry》 19891231 James R. Florini James R. Florini 399-404 第182卷, *

Cited By (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104374905A (zh) * 2014-11-28 2015-02-25 山东博科生物产业有限公司 一种血清肌酸激酶检测试剂
CN104374905B (zh) * 2014-11-28 2016-03-30 山东博科生物产业有限公司 一种血清肌酸激酶检测试剂
CN104357544A (zh) * 2014-12-05 2015-02-18 重庆中元生物技术有限公司 一种高稳定性的肌酸激酶检测试剂盒
CN105063174A (zh) * 2015-09-02 2015-11-18 郁东 一种血清葡萄糖检测试剂
CN105063174B (zh) * 2015-09-02 2018-06-29 郁东 一种血清葡萄糖检测试剂
CN106093386A (zh) * 2016-05-27 2016-11-09 安徽伊普诺康生物技术股份有限公司 一种测定肌酸激酶同工酶(ck‑mb)的试剂盒
CN108276470A (zh) * 2017-01-06 2018-07-13 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 细胞裂解液、提取胞内蛋白的方法、制备弓形虫抗原的方法和试剂盒
CN107267595A (zh) * 2017-07-19 2017-10-20 王贤俊 一种肌酸激酶同工酶检测试剂的制备方法
CN107402305A (zh) * 2017-07-19 2017-11-28 王贤俊 一种肌酸激酶同工酶的定量检测试剂盒
CN107641642A (zh) * 2017-10-25 2018-01-30 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种肌酸激酶同工酶双试剂及其制备方法
CN107641642B (zh) * 2017-10-25 2021-02-12 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种肌酸激酶同工酶双试剂及其制备方法
CN108008131A (zh) * 2017-12-29 2018-05-08 广州市丰华生物工程有限公司 一种检测滤纸干血片中肌酸激酶的试剂盒及其制备方法
CN109517879A (zh) * 2018-11-08 2019-03-26 东软威特曼生物科技(南京)有限公司 一种肌酸激酶及其同工酶测定试剂及其试剂盒
CN109517879B (zh) * 2018-11-08 2021-09-10 东软威特曼生物科技(南京)有限公司 一种肌酸激酶及其同工酶测定试剂及其试剂盒
CN109517813B (zh) * 2018-11-21 2022-04-12 东软威特曼生物科技(南京)有限公司 一种肌酸激酶及其同工酶激活剂、测定试剂及试剂盒
CN109517813A (zh) * 2018-11-21 2019-03-26 东软威特曼生物科技(南京)有限公司 一种肌酸激酶及其同工酶激活剂、测定试剂及试剂盒
CN110133265A (zh) * 2019-06-10 2019-08-16 天津市宝坻区人民医院 血清中肌酸激酶试剂盒及测定方法
CN111057746A (zh) * 2020-01-03 2020-04-24 浙江夸克生物科技有限公司 一种肌酸激酶同工酶测定试剂盒
CN111057746B (zh) * 2020-01-03 2023-10-27 浙江夸克生物科技有限公司 一种肌酸激酶同工酶测定试剂盒
CN111157724A (zh) * 2020-01-17 2020-05-15 上海高踪医疗器械科技有限公司 一种磷酸肌酸激酶同工酶检测试剂盒
CN112159833A (zh) * 2020-06-04 2021-01-01 三诺生物传感股份有限公司 一种消除内源性葡萄糖干扰的试剂及其应用和方法
CN112159833B (zh) * 2020-06-04 2022-12-23 三诺生物传感股份有限公司 一种消除内源性葡萄糖干扰的试剂及其应用和方法
CN113881658A (zh) * 2021-07-27 2022-01-04 东软威特曼生物科技(南京)有限公司 一种高稳定性的肌酸激酶酶保护添加剂
CN113866410A (zh) * 2021-11-04 2021-12-31 广州达安基因股份有限公司 一种测定肌酸激酶同工酶活性的试剂盒及其测定方法
CN114150040A (zh) * 2021-11-12 2022-03-08 中生北控生物科技股份有限公司 一种抗结晶的肌酸激酶检测试剂盒及其制备方法
CN114778858A (zh) * 2022-06-23 2022-07-22 深圳市帝迈生物技术有限公司 一种狼疮抗凝物检测试剂盒

Also Published As

Publication number Publication date
CN102154443B (zh) 2013-02-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102154443B (zh) 一种肌酸激酶mb同工酶活性测定试剂及其制备方法
US6380380B1 (en) Use of nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) and nicotinamide adenine dinucliotide phosphate (NADP) analogs to measure enzyme activities metabolites and substrates
Nishimura et al. Blood level of mitochondrial aspartate aminotransferase as an indicator of the extent of ischemic necrosis of the rat liver
Costa et al. Promising blood-derived biomarkers for estimation of the postmortem interval
CN100595282C (zh) 谷丙转氨酶测定试剂盒
CN105203472A (zh) 一种稳定的游离脂肪酸测定试剂盒
CN104357544A (zh) 一种高稳定性的肌酸激酶检测试剂盒
CN104483487A (zh) 检测人血液中1,5-脱水山梨醇的试剂盒
CN105063174B (zh) 一种血清葡萄糖检测试剂
CN107641642B (zh) 一种肌酸激酶同工酶双试剂及其制备方法
EP0043181B1 (en) Measuring composition containing enzymes
CN105002263B (zh) 一种还原型辅酶复合试剂及其应用
US7371314B2 (en) Creatinine sensor calibration
CN1904062B (zh) 肌酸激酶活性测定用试剂
CN102243227B (zh) 非对称二甲基精氨酸浓度的测定方法及测定试剂
CN102564979A (zh) 循环酶法测定乙醇浓度的方法及乙醇测定试剂盒
JP3619865B2 (ja) 液体の安定なチオール活性化剤
CN102382875B (zh) 一种适用于吡喃糖氧化酶法测定血清1,5-脱水葡糖醇的高浓度葡萄糖清除方法及试剂盒
CN111662955A (zh) 一种腺苷脱氨酶测定试剂盒
CN109517879B (zh) 一种肌酸激酶及其同工酶测定试剂及其试剂盒
CN104673878A (zh) 一种单体系测定糖化白蛋白与白蛋白浓度比值的试剂盒
CN103397076B (zh) 氯化盐在制备消除测定结果出现负值或零值的生化试剂中的应用
CA1290228C (en) Reagent for determining creatine kinase
KR100836179B1 (ko) 생체시료의 신규한 측정방법
CN102140495B (zh) 二甲基精氨酸二甲胺水解酶测定方法及其诊断试剂

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant