CN105063174A

CN105063174A - 一种血清葡萄糖检测试剂

Info

Publication number: CN105063174A
Application number: CN201510554930.6A
Authority: CN
Inventors: 郁东; 李志明; 谭柏清; 甘宜梧; 谢清华
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2015-09-02
Filing date: 2015-09-02
Publication date: 2015-11-18
Anticipated expiration: 2035-09-02
Also published as: CN105063174B

Abstract

本发明公开了一种血清葡萄糖检测试剂，是由试剂R1和试剂R2组成的；所述试剂R1是由缓冲液、Mg²⁺、三磷酸腺苷(ATP)、NAD+、氟碳表面活性剂、BSA、蔗糖、海藻糖、甘露醇和防腐剂组成的；所述试剂R2是由缓冲液、Mg²⁺、BSA、蔗糖、海藻糖、甘露醇、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、己糖激酶、氟碳表面活性剂、防腐剂组成的。本发明试剂的准确度和稳定性好，价格便宜，使用方便，完全可以满足临床需要。

Description

一种血清葡萄糖检测试剂

技术领域

本发明涉及葡萄糖检测技术领域，特别涉及一种血清葡萄糖检测试剂。

背景技术

血清葡萄糖(GLU)，即人们常说的血糖，是指血液中葡萄糖浓度。在人体其主要来源于食物中的淀粉、肉内肌糖原及麦芽糖等经消化吸收而生成的葡萄糖。血糖大部分以糖原形式储存在肝脏和肌肉内，小部分随血液循环输送至组织器官中，进行氧化分解，为生命活动提供能量。

在正常情况下，在胰岛素等激素参与下，血清葡萄糖的分解与合成处于动态平衡，血糖保持相对稳定。正常人在空腹血糖浓度为3.61~6.11mmol/L。空腹血糖浓度超过7.0mmol/L称为高血糖。血糖浓度低于3.61mmol/L称为低血糖。血清葡萄糖(GLU)检测是一种常用的生化检测项目，它在糖尿病的诊断、疗效观察和一般的临床诊疗中的应用非常广泛。

目前，通过酶学方法测定血液葡萄糖是临床化学中的主流方法。其中最常用的有葡萄糖氧化酶法和己糖激酶法。葡萄糖氧化酶法的原理：葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化下，被氧化成葡萄糖酸，产生过氧化氢。在辣根过氧化物酶催化下，过氧化氢和各种色原反应，生成有色化合物，可进行比色测定。该法的缺点是易受还原性物质如胆红素、抗坏血酸、尿酸和谷胱甘肽等的干扰。与葡萄糖氧化酶方法相比，己糖激酶方法对葡萄糖的特异性高，不受尿酸和抗坏血酸的干扰。但其反应底物ATP及相关酶的稳定性稍差，解决己糖激酶法试剂稳定性已成当务之急。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测葡萄糖(GLU)的试剂及使用该试剂检测葡萄糖含量的方法。该试剂盒采用己糖激酶法，可以有效检测葡萄糖的含量，具有抗干扰能力强，稳定性好的优点。

本发明是通过以下步骤得到的：

一种血清葡萄糖检测试剂，是由试剂R1和试剂R2组成的；

所述试剂R1是由以下含量的成分组成的：

缓冲液100mmol/L

Mg²⁺5mmol/L

三磷酸腺苷(ATP) 2mmol/L

NAD+3mmol/L

氟碳表面活性剂 3ml/L

BSA2g/L

蔗糖 20g/L

海藻糖5g/L

甘露醇20g/L

防腐剂0.5g/L；

所述试剂R2是由以下含量的成分组成的：

缓冲液100mmol/L

Mg²⁺5mmol/L

BSA2g/L

蔗糖20g/L

海藻糖5g/L

甘露醇20g/L

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 2KU/L

己糖激酶 2KU/L

氟碳表面活性剂3ml/L

防腐剂0.5g/L。

所述的，R1试剂和R2试剂的体积比为4:1。

所述的，缓冲液为25℃，pH7.5的哌嗪-1,4-二乙磺酸缓冲液。

所述的，氟碳表面活性剂为非离子型氟碳表面活性剂。

所述的，防腐剂为NaN₃。

本发明的基本原理如下：

在己糖激酶(HK) 催化下，葡萄糖和ATP 发生磷酸化反应，生成葡萄糖-6-磷酸(G6P) 与ADP。然后在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD) 催化下，葡萄糖-6-磷酸(G6P)脱氢生成6-磷酸葡萄糖酸(6PG) ，同时使NADP 还原成NADPH 。反应式如下:

因此，吸光度的净增高值与葡萄糖浓度成正比。通过检测340 nm波长处吸光度的变化，可计算血清中葡萄糖浓度。

本发明在己糖激酶法的基础上，优化反应体系，通过采用哌嗪-1,4-二乙磺酸缓冲液（Good’s缓冲液之一），该缓冲液不参加和不干扰生物化学反应过程，对酶化学反应等无抑制作用，可有效提高各底物酶的活性和稳定性，增强试剂的抗干扰能力。并且体系中添加BSA、蔗糖、甘露醇、海藻糖等组成的复合稳定剂，使三磷酸腺苷(ATP)及各底物酶的稳定性进一步提高。

此外，本发明采用的非离子型氟碳表面活性剂，该表面活性剂具有高效、稳定，即高表面活性，高热力学和化学稳定性等显著优点。具体如下：（1）在极低应用浓度下便能显著降低水溶液的表面张力。极高的表面活性，即可将水溶液表面张力降到极低水平。（2）氟碳表面活性剂热稳定性高、化学稳定性好，可在强酸、强碱、强氧化介质等特殊应用体系中稳定有效地发挥其表面活性剂作用，不会与体系发生反应或分解。（3）氟碳表面活性剂能与其它各类活性剂很好地相容。通过添加氟碳表面活性剂可以显著促进各底物的溶解，维持体系的稳定。并且可以有效避免测试过程血清中干扰物质造成的体系浑浊等干扰，极大的增强了试剂的抗干扰能力。

本发明的有益效果：

1）本发明采用哌嗪-1,4-二乙磺酸缓冲液，添加多种抗干扰物质和稳定剂，可以有效保证底物ATP及体系中相关酶的稳定，显著改善了试剂的稳定性可抗干扰能力；

2）本发明采用新型非离子型氟碳表面活性剂，不仅显著改善测定的性能，而且增强了试剂的稳定性和抗干扰能力；

3）本发明试剂的准确度和稳定性好，价格便宜，使用方便，完全可以满足临床需要。

附图说明

图1为相关性检测结果；

图2为稳定性检测结果。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明：

实施例 1

一种血清葡萄糖检测试剂，是由试剂R1和试剂R2组成的；

所述试剂R1是由以下含量的成分组成的：

缓冲液100mmol/L

Mg²⁺5mmol/L

三磷酸腺苷(ATP) 2mmol/L

NAD+3mmol/L

非离子型氟碳表面活性剂 3ml/L

BSA2g/L

蔗糖 20g/L

海藻糖5g/L

甘露醇20g/L

NaN₃0.5g/L；

所述试剂R2是由以下含量的成分组成的：

缓冲液100mmol/L

Mg²⁺5mmol/L

BSA2g/L

蔗糖20g/L

海藻糖5g/L

甘露醇20g/L

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 2KU/L

己糖激酶 2KU/L

氟碳表面活性剂3ml/L

NaN₃0.5g/L。

所述的，R1试剂和R2试剂的体积比为4:1。

所述的，缓冲液为25℃，pH7.5的哌嗪-1,4-二乙磺酸缓冲液。

本实施例检测试剂的检测方法：

本实施例的血清葡萄糖检测试剂，在使用时采用具有双试剂功能的全自动生化分析仪，如日立7180全自动分析仪，利用终点法进行测定。具体的检测方法如表1所示。

表1血清葡萄糖检测试剂的检测方法

计算：血清葡萄糖含量（mmol/L）＝（∆A测定÷∆A标准）×C标准。

抗干扰性实验

取新鲜混合血清，分成2等份，然后将每等份再分成5等份，加入不同的干扰物质，使其在血清中的浓度达到表2的要求，然后分别用实施例1所得试剂，与市场常见并认可的葡萄糖(GLU)试剂同时对比测定血清中GLU的含量，对照组测定结果与加入不同干扰物质后各组的实验结果见表2。其中：相对偏差(%)=(干扰样本的测定均值－对照样本的测定均值)/对照样本的测定均值×100%。

表2 抗干扰性实验结果

由表2可以看出，实施例1试剂在抗坏血酸≤1704μmol/L、胆红素≤684μmol/L、血红蛋白≤5g/L、甘油三酯≤22.6mmol/L的条件下，对测试结果没有明显干扰。而对照组试剂在上述浓度干扰物质存在时，受到明显干扰，这说明通过优化反应缓冲体系、添加新型非离子表面活性剂后，本发明的检测试剂的抗干扰性能显著提高，远远优于对比试剂。

相关性实验

利用实施例1制得的检测试剂，对照组使用市场常见的国家食品药品监督管理局认可的某公司的葡萄糖试剂盒，同时检测了20个临床血清样本，检测结果如表3所示，并获得两种试剂的相关性曲线如图1所示。

表3 相关性实验结果

从表3和图1可知，两个试剂盒的相关系数为0.9996，说明了两者有极大的相关性。

稳定性实验

对实施例1制得的检测试剂，均匀分装为13组，每组的试剂量为R1为20mL，R2为5mL，并且取13组市场常见的国家食品药品监督管理局认可的某公司的葡萄糖(GLU)试剂盒作对照，放置到2-8℃冰箱中，每月的同一天取出一组试剂检测GLU质控品（靶值为7.05mmol/L），检测结果如图2所示。

由图2可知，本发明实施例1试剂在2-8℃储存条件下比市场常见的葡萄糖(GLU)测定试剂盒更加稳定。

通过验证，本试剂与同类检测试剂对比相关性好，临床检测样本结果一致，能够达到市场对产品的应用要求，并且抗干扰性能好，是一种更加稳定、好的血清葡萄糖检测试剂。

Claims

1.一种血清葡萄糖检测试剂，其特征在于，是由试剂R1和试剂R2组成的；

所述试剂R1是由以下含量的成分组成的：

缓冲液100mmol/L

Mg²⁺5mmol/L

三磷酸腺苷(ATP) 2mmol/L

NAD+3mmol/L

氟碳表面活性剂 3ml/L

BSA2g/L

蔗糖 20g/L

海藻糖5g/L

甘露醇20g/L

防腐剂0.5g/L；

所述试剂R2是由以下含量的成分组成的：

缓冲液100mmol/L

Mg²⁺5mmol/L

BSA2g/L

蔗糖20g/L

海藻糖5g/L

甘露醇20g/L

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 2KU/L

己糖激酶 2KU/L

氟碳表面活性剂3ml/L

防腐剂0.5g/L。

2.根据权利要求1所述的血清葡萄糖检测试剂，其特征在于，所述R1试剂和R2试剂的体积比为4:1。

3.根据权利要求1所述的血清葡萄糖检测试剂，其特征在于，所述缓冲液为25℃，pH7.5的哌嗪-1,4-二乙磺酸缓冲液。

4.根据权利要求1所述的血清葡萄糖检测试剂，其特征在于，所述氟碳表面活性剂为非离子型氟碳表面活性剂。

5.根据权利要求1所述的血清葡萄糖检测试剂，其特征在于，所述防腐剂为NaN₃。