CN114047145A - 一种血清葡萄糖测定试剂、试剂球的制备方法及测定芯片 - Google Patents

Abstract

本申请实施例涉及检测试剂技术领域，尤其涉及一种血清葡萄糖测定试剂、试剂球的制备方法及测定芯片。本申请实施例提供的血清葡萄糖测定试剂包括：缓冲液、稳定剂、金属离子络合剂、氯化镁、ATP钠盐、氧化型辅酶、己糖激酶、葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶、葡萄糖氧化酶和赋形剂。血清葡萄糖测定试剂可制成血清葡萄糖测定试剂球；血清葡萄糖测定试剂可置于测定芯片体内，制成血清葡萄糖测定芯片，利用反应体系在340nm处吸光度的变化可计算出检测样本中葡萄糖浓度的含量。测试结果表明，本申请实施例提供的血清葡萄糖测定试剂的检测结果更加精准，且具有较强的抗干扰能力，稳定性好。

Description

一种血清葡萄糖测定试剂、试剂球的制备方法及测定芯片

技术领域

本申请实施例涉及检测试剂技术领域，尤其涉及一种血清葡萄糖测定试剂、试剂球的制备方法及测定芯片。

背景技术

随着经济的发展和生活方式的改变，糖尿病的患病率逐年增加，其患者人群呈流行化和年轻化趋势，给社会带来巨大的经济负担，市场对血清葡萄糖测定试剂的需求量日益增加，血清葡萄糖测定试剂测试结果的准确性一直以来都是购买者考虑的重要因素。

目前，血清葡萄糖测定常用的方法为葡萄糖氧电极法、葡萄糖氧化酶法与己糖激酶法，后二者常用于生化检测血清葡萄糖。葡萄糖氧化酶法基于Trinder反应，偶联酶为过氧化物酶，相比较下己糖激酶法两步酶催化法特异性更高，但现有己糖激酶法测定血清葡萄糖的试剂整体测定结果的准确性不高。

发明内容

本申请实施例提供一种测定结果准确的血清葡萄糖测定试剂、试剂球的制备方法及测定芯片。

第一方面，本申请实施例中提供了一种血清葡萄糖测定试剂，包括以下组分：

在一些实施例中，所述缓冲液包括磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、哌嗪-N,N-二(2-乙磺酸)缓冲液、2[(2-氨基-2氧代乙基)氨基]乙磺酸缓冲液、3-(N-吗啉代)-2-羟基丙磺酸缓冲液、N,N-二(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸缓冲液和N-(2-羟乙基)哌嗪-N/-(2-乙磺酸)缓冲液中的至少一种。

在一些实施例中，所述稳定剂包括乙二醇、丙三醇、甘油、硫酸铵、牛血清白蛋白、碳酸盐、胆酸盐、氯化钠、1,2-二硫代苏糖醇、乙二醇二乙醚二胺四乙酸中的至少一种。

在一些实施例中，所述赋形剂包括甘露醇、海藻糖、聚乙二醇、水溶性淀粉中的至少一种。

在一些实施例中，所述氧化型辅酶为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸。

在一些实施例中，所述金属离子络合剂为乙二胺四乙酸二钠盐。

在一些实施例中，所述血清葡萄糖测定试剂呈球状，体积在2.5ul-3.5ul之间。

第二方面，本申请实施例中提供了一种血清葡萄糖测定试剂球的制备方法，步骤如下：

将缓冲液加入第一预设量的水中；

在所述缓冲液在水中完全溶解后，依次加入稳定剂、金属离子络合剂、氯化镁、ATP钠盐、氧化型辅酶混合形成第一溶液；

将所述第一溶液的PH值调整至预设PH值得到第二溶液；

在所述第二溶液中依次加入己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、葡萄糖氧化酶和赋形剂得到第三溶液；

将所述第三溶液的液滴滴在液氮中，以使所述液滴形成冰球；

将所述冰球进行冷冻干燥，制得所述血清葡萄糖测定试剂球。

在一些实施例中，所述预设PH值的范围为6.0-8.0。

第三方面，本申请实施例中还提供了一种血清葡萄糖测定芯片，所述血清葡萄糖测定芯片包括芯片本体和所述血清葡萄糖测定试剂，其中，所述血清葡萄糖测定试剂设置于所述芯片本体内部。

本申请实施例的有益效果是：区别于现有技术，本申请实施例提供的血清葡萄糖测定试剂包括葡萄糖氧化酶，通过添加适量的葡萄糖氧化酶，能够等比例的消耗掉样本中部分葡萄糖，使待测葡萄糖浓度处于准确度较高的测量浓度范围内，从而提高检测精度。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对本发明实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见地，下面所描述的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本申请一实施例提供的血清葡萄糖测定试剂球的制备方法的流程示意图；

图2为本申请一实施例提供的血清葡萄糖测定芯片的临床相关性分析图；

图3为本申请一实施例提供的血清葡萄糖测定芯片的线性范围分析图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

需要说明的是，如果不冲突，本发明实施例中的各个特征可以相互组合，均在本发明的保护范围之内。另外，虽然在装置示意图中进行了功能模块的划分，在流程图中示出了逻辑顺序，但是在某些情况下，可以以不同于装置示意图中的模块划分，或流程图中的顺序执行所示出或描述的步骤。

除非另有定义，本说明书所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本说明书中在本发明的说明书中所使用的术语，例如“第一”、“第二”、“第三”等，只是为了描述具体的实施方式的目的，不是用于限制本发明。本说明书所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

己糖激酶法是血清葡萄糖浓度测定的一种常用方法。

己糖激酶法的原理是在己糖激酶的作用下，腺苷三磷酸上的磷酸基转移到葡萄糖，反应生成腺苷二磷酸和葡萄糖-6-磷酸。在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶催化下，葡萄糖-6-磷酸与氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸反应生成还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和6-磷酸葡萄糖酸。还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在340nm波长处有最大吸收，通过测定还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的生成速率，即可求得样本中葡萄糖的含量。

现有己糖激酶法测定血清葡萄糖的试剂，整体测定结果的准确性不高。发明人经过大量研究分析发现，测定结果准确性低的原因是己糖激酶法测定葡萄糖浓度有一定的范围限制，若待测样本中的葡萄糖浓度过高，接近或超过线性范围上限时，可能会导致测定结果准确度较低。

本申请实施例，在血清葡萄糖测定试剂中添加适量的葡萄糖氧化酶，使葡萄糖氧化酶能够等比例的消耗掉样本中部分葡萄糖，使待测葡萄糖浓度处于准确度较高的测量浓度范围内，从而提高检测精度。

本申请实施例提供的血清葡萄糖测定试剂的检测原理如下：检测样本与血清葡萄糖测定试剂接触，使得该血清葡萄糖测定试剂中的葡萄糖氧化酶等比例地消耗掉样本中部分葡萄糖，使待测葡萄糖浓度处于准确度较高的测量浓度范围内。己糖激酶催化ATP钠盐上的磷酸基转移到葡萄糖，生成腺苷二磷酸和葡糖-6-磷酸，然后葡糖-6-磷酸被氧化为6-磷酸葡糖。同时氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸被葡糖-6-磷酸脱氢酶催化还原为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸。该血清葡萄糖测定试剂与检测样本反应充分后POCT分析系统将监测340nm波长处的光吸收变化，依此计算并给出血清葡萄糖浓度。

为了便于读者理解本发明，下面结合具体的实施例进行说明。

本申请实施例提供一种血清葡萄糖测定试剂，包括以下组分：

葡萄糖氧化酶主要起催化氧化作用，用于与待测样本中的葡萄糖发生氧化反应，等比例消耗待测样本中的葡萄糖，使待测样本中的葡萄糖浓度处于准确度较高的测量浓度范围内，从而在进一步的浓度测定时可以确保测定结果的准确性。

缓冲液对溶液的酸碱性能起到很好的缓冲作用。缓冲液是一种能在加入少量酸或碱和水时抵抗pH改变的溶液(当往某些溶液中加入一定量的酸和碱时，有阻碍溶液pH变化的作用)。

在一些实施例中，缓冲液包括磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、哌嗪-N,N-二(2-乙磺酸)缓冲液、2[(2-氨基-2氧代乙基)氨基]乙磺酸缓冲液、3-(N-吗啉代)-2-羟基丙磺酸缓冲液、N,N-二(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸缓冲液和N-(2-羟乙基)哌嗪-N/-(2-乙磺酸)缓冲液中的至少一种。

稳定剂能够使本申请实施例提供的试剂中酶的活性稳定，减少因长期储存、温度变化、运输颠簸等造成的试剂性能下降，确保测定结果的准确性。

在一些实施例中，稳定剂可以是乙二醇、丙三醇、甘油、硫酸铵、牛血清白蛋白、碳酸盐、胆酸盐、氯化钠、1,2-二硫代苏糖醇、乙二醇二乙醚二胺四乙酸中的至少一种。

金属离子络合剂可以螯合样本中多余的金属离子，防止金属离子对反应过程及测定结果造成干扰，可以是乙二胺四乙酸二钠盐。

氧化型辅酶作为反应底物，参与催化氧化反应，可以是氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸。氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸可以被葡糖-6-磷酸脱氢酶催化还原为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸。

ATP钠盐是腺苷三磷酸二钠盐，用作反应底物，己糖激酶用于催化腺苷三磷酸上的磷酸基转移到葡萄糖，生成腺苷二磷酸和葡萄糖-6-磷酸，然后将葡萄糖-6-磷酸氧化为6-磷酸葡糖。

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶作为反应底物，主要起催化氧化作用，氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸被葡糖-6-磷酸脱氢酶催化还原为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸。

氯化镁作为反应底物，溶液中的镁离子与己糖激酶同时作为催化剂，使ATP钠盐上的磷酸基转移到葡萄糖，生成腺苷二磷酸和葡糖-6-磷酸。

赋形剂能够赋予血清葡萄糖测定试剂良好的外观，使血清葡萄糖测定试剂疏松多孔，易于冻干和复溶。

在一些实施例中，赋形剂可以是甘露醇、海藻糖、聚乙二醇、水溶性淀粉中的至少一种。

在一些实施例中，血清葡萄糖测定试剂的最适宜的PH值为6.0-8.0时，血清葡萄糖测定试剂中各种酶的活性最好。PH偏小(呈酸性)或偏大(呈碱性)都会使酶的活性将受到影响，进而影响体系的反应进度。PH值的改变会影响酶活性中心的必须基团的解离程度，同时还会影响反应底物和辅酶的解离程度，从而影响酶分子对底物分子的结合和催化。

在一些实施例中，可以采用PH试纸等方法测试该血清葡萄糖测定试剂混合液的PH值，并通过加入PH调节液调整该血清葡萄糖测定试剂混合液的PH值至预设值。

在另一些实施例中，可以使用盐酸或者氢氧化钠调整溶液的PH值，也可以使用其他PH调节液，此处只是对本实施例技术方案的简单说明，不构成对技术方案的限制。

在一些实施例中，血清葡萄糖测定试剂呈球状，体积在2.5ul-3.5ul之间。在实际应用中，可以将呈液体状的血清葡萄糖试剂通过定量控制滴珠点胶机直接滴在液氮中结成冰球，并使冰球体积控制在2.5-3.5ul，之后将冰球置于真空冷冻干燥机中进行冻干，氮气复压后可以将冻干试剂球收集保存在干燥的铝瓶中。

本申请实施例还提供一种血清葡萄糖测定试剂球的制备方法，请参阅图1，包括如下步骤：

S10：将缓冲液加入第一预设量的水中；

S20：在所述缓冲液在水中完全溶解后，依次加入稳定剂、金属离子络合剂、氯化镁、ATP钠盐、氧化型辅酶混合形成第一溶液；

S30：将所述第一溶液的PH值调整至预设PH值得到第二溶液；

在一些实施例中，所述第二溶液的预设PH值为6.0-8.0。

S40：在所述第二溶液中依次加入己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、葡萄糖氧化酶和赋形剂得到第三溶液；

S50：将所述第三溶液的液滴滴在液氮中，以使所述液滴形成冰球；

在一些实施例中，配制好混合液后，可以通过点胶机将混合液的液滴滴在液氮中，使液滴在液氮中凝结成冰球。本领域技术人员可以根据实际需要调整滴入液氮中的混合液的液滴的大小，并通过控制液滴的大小来调整冰球的体积。

在一些实施例中，冰球的体积为2.5ul-3.5ul。

S60：将所述冰球进行冷冻干燥，制得所述血清葡萄糖测定试剂球。

在获得冰球后，将冰球置于真空冷冻干燥机进行冷冻干燥，获得血清葡萄糖测定试剂球，待氮气复压后将血清葡萄糖测定试剂球收集并保存在干燥的铝瓶中。

其中，冷冻干燥是指将冰球预先进行降温冻结成固体，在低温减压条件下利用水的升华性能，使冰球低温脱水而达到干燥目的。

冷冻干燥后，冰球中除水外的各组分(缓冲液、非离子型去垢剂、阴离子染料、赋形剂)本身留在冻结时的冰架中，因此冷冻干燥后的冰球疏松多孔且体积不变，由于冰球干燥前始终处于冻结状态，同时冰晶均匀分布于物质中，升华过程不会因脱水而发生浓缩现象。冷冻干燥后得到的试剂球呈海绵状疏松多孔，体积基本与干燥前的冰球保持不变，极易溶于水而恢复原状。

从而，通过该方法制备出的含有上述任一实施例试剂组分的血清葡萄糖测定试剂球，具有较好的形态及复融溶解性，还能完全冻干；且具有较高的稳定性和精密度。

本申请实施例还提供了一种血清葡萄糖测定芯片，该血清葡萄糖测定芯片包括芯片本体和如上任一实施例所述的试剂，其中，血清葡萄糖测定试剂设置于芯片本体内部。

在一些实施例中，芯片本体由注塑成型的塑料基底和光学膜通过粘结胶层粘贴而成，芯片本体包括样本槽、稀释液槽、定量槽、混合槽、废液槽、液流通道和比色孔等结构。芯片本体还包括多个可存放试剂球的比色孔，检测样本进入比色孔后与试剂球发生化学反应。

在一些实施例中，该血清葡萄糖测定芯片可以应用于POCT分析仪，领用POCT分析仪检测37℃下340nm波长处吸光度的变化值，并使用英国朗道公司提供的校准品进行定标，可计算得到样本中葡萄糖的浓度。

可以理解的是，基于赋形剂能够赋予试剂球良好的外观，使试剂球疏松，从而，使得试剂球与检测样本接触后，溶解性良好，与样本反应充分。

为进一步阐述本申请的技术方案，以下提供本申请血清葡萄糖测定试剂的若干实施例。

在一些实施例中，血清葡萄糖测定试剂可以是以下组分：

其中，血清葡萄糖测定试剂的PH值在6.0-8.0。

具体的：

实施例一：

上述血清葡萄糖测定试剂可以是以下组分：三羟甲基氨基甲烷缓冲液100mmol/L、乙二胺四乙酸二钠盐1g/L、氯化镁1g/L、ATP钠盐1g/L、氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸10g/L、己糖激酶10KU/L、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶10KU/L、葡萄糖氧化酶500KU/L、海藻糖20g/L、聚乙二醇600020g/L。该血清葡萄糖测定试剂的PH值在为6.5。

实施例二：

上述血清葡萄糖测定试剂可以是以下组分：三羟甲基氨基甲烷缓冲液20mmol/L、乙二胺四乙酸二钠盐10g/L、氯化镁10g/L、ATP钠盐10g/L、氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸50g/L、己糖激酶20KU/L、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶20KU/L、葡萄糖氧化酶100KU/L、海藻糖80g/L、聚乙二醇6000 80g/L。该血清葡萄糖测定试剂的PH值在7.1。

实施例三：

上述血清葡萄糖测定试剂可以是以下组分：三羟甲基氨基甲烷缓冲液60mmol/L、乙二胺四乙酸二钠盐4g/L、氯化镁3g/L、ATP钠盐3g/L、氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)30g/L、己糖激酶15KU/L、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶15KU/L、葡萄糖氧化酶350KU/L、海藻糖50g/L、聚乙二醇6000 50g/L。该血清葡萄糖测定试剂的PH值在7.6。

在另一些实施例中，血清葡萄糖测定试剂还可以是以下组分：

其中，血清葡萄糖测定试剂的PH值在6.0-8.0。

具体的：

实施例四：

上述血清葡萄糖测定试剂可以是以下组分：哌嗪-N,N-二(2-乙磺酸)缓冲液20mmol/L、胆酸钠20g/L、氯化钾20g/L、乙二胺四乙酸二钠盐10g/L、氯化镁10g/L、ATP钠盐10g/L、氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸50g/L、己糖激酶10KU/L、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶10KU/L、葡萄糖氧化酶500KU/L、甘露醇100g/L、聚乙二醇3350 50g/L。该血清葡萄糖测定试剂的PH值在6.9。

实施例五：

上述血清葡萄糖测定试剂可以是以下组分：哌嗪-N,N-二(2-乙磺酸)缓冲液80mmol/L、胆酸钠15g/L、氯化钾15g/L、乙二胺四乙酸二钠盐4g/L、氯化镁6g/L、ATP钠盐5g/L、氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸30g/L、己糖激酶15KU/L、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶15KU/L、葡萄糖氧化酶280KU/L、甘露醇70g/L、聚乙二醇3350 30g/L。该血清葡萄糖测定试剂的PH值在6.4。

实施例六：

上述血清葡萄糖测定试剂可以是以下组分：哌嗪-N,N-二(2-乙磺酸)缓冲液100mmol/L、胆酸钠10g/L、氯化钾10g/L、乙二胺四乙酸二钠盐1g/L、氯化镁1g/L、ATP钠盐1g/L、氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸10g/L、己糖激酶20KU/L、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶20KU/L、葡萄糖氧化酶100KU/L、甘露醇50g/L、聚乙二醇3350 10g/L。该血清葡萄糖测定试剂的PH值在7.0。

下面结合具体的测试对比实验，对采用本申请实施例1中的血清葡萄糖测定试剂制成的芯片(下称血清葡萄糖测定芯片1)的性能进行说明。

在空气湿度8％的环境中，向血清葡萄糖测定芯片1中注入检测样本，然后，使用深圳市锦瑞生物有限公司便携式自动生化分析仪vp10进行检测，检测37℃下340nm波长吸光度的变化值。并使用英国朗道公司提供的校准品进行定标，可计算得到检测样本中葡萄糖浓度。

1)精密度测试：采用血清葡萄糖测定芯片1检测已知葡萄糖浓度的检测样本1，该检测样本1的葡萄糖浓度为6.24mmol/L，检测20次，得到20个检测到的浓度值。

计算这20个浓度值的均值、标准差和变异系数，得到均值为6.22mmol/L，标准差SD＝0.129，变异系数CV＝2.08％。

可知，测得浓度(6.22mmol/L)与实际浓度(6.24mmol/L)十分接近，准确度高，并且，标准差和变异系数均较小，说明血清葡萄糖测定芯片1的稳定性好。

2)准确度测试：采用血清葡萄糖测定芯片1测试已知葡萄糖浓度为15.6mmol/L的检测样本2，重复检测三次，获得浓度值，计算测得的浓度值的平均值为15.4mmol/L，相对偏差为-1.50％。

可知，测得浓度15.4mmol/L与实际浓度15.6mmol/L接近，准确度高，并且，相对偏差较小。

3)临床相关性分析

准备不同浓度葡萄糖的血清样本集A1和A2，即A1包括50份不同浓度葡萄糖的血清样本，A2与A1一样，也包括50份不同浓度葡萄糖的血清样本，采用某品牌对比试剂盘检测样本集A1中各血清样本的葡萄糖浓度，以及，采用血清葡萄糖测定芯片1(本法)检测样本集A2中各血清样本的葡萄糖浓度,。

检测结果如表1所示，对于同一浓度的样本1，采用某品牌对比试剂盘测得的葡萄糖浓度为6.1mmol/L，采用血清葡萄糖测定芯片1(本法)测得的葡萄糖浓度为6.8mmol/L。

表1临床相关性分析的检测结果

将表1中，某品牌对比试剂盘对应的检测浓度值作为X轴的值，将血清葡萄糖测定芯片1(本法)对应的检测浓度值作为Y轴的值，得到两组检测结果之间的相关方程如下：

Y＝1.098X-0.1243；

该相关方程的拟合线如图2所示，其中，相关系数R＝0.9970，相关系数越接近1代表两组数据之间的相关性越强。因此，本申请实施例提供的血清葡萄糖测定芯片1与某品牌对比试剂盘的测试结果相关性强。

4)线性范围测试

要求在[1，35]mmol/L区间内，其线性相关系数r≥0.990。

根据试剂的最大上限浓度，收集浓度大于待检试剂线性范围上限浓度的新鲜血清或与新鲜血清具有相同的基体状态的样本(或血清中加入待测物质纯品)作为高值样本，浓度极低或无该分析物的样本作为低限样本，但因低限样本难以收集，一般以生理盐水代替。

测试方法如下：将高低浓度标准血清样品以不同比例混合成6个不同浓度的血清样本，使血清葡萄糖浓度分别为1.0、7.8、14.6、21.4、28.2、35.0mmol/L。

采用本申请实施例提供的血清葡萄糖测定芯片1分别测试6个血清样本的葡萄糖浓度，每个血清样本测试3次，分别求出6个血清样本中葡萄糖测得浓度值的平均值Y。以每个样本稀释后的浓度X为自变量，以每个样本的测得浓度值均值Y为因变量求出线性回归方程，如下：

Y＝1.0033X+0.209；

该相关方程的拟合线如图3所示，其中，相关系数R＝0.9985，相关系数R越接近1，则说明采用本申请实施例提供的血清葡萄糖测定芯片1测得的结果与稀释后的实际结果越接近，即测得值接近实际值，本申请实施例提供的血清葡萄糖测定芯片1具有较高的准确度，另一方面，对于不同浓度的样本，都能准确测到，则线性范围好。

5)热稳定性测试

在空气湿度8％的环境中，将本申请实施例提供的血清葡萄糖测定芯片1封袋，在37℃避光环境中贮存0、2、3、4、6、8天。以朗道校准品和质控品为检测样本，测试本申请实施例提供的血清葡萄糖测定芯片1的准确度，相对偏差应在±10.0％以内。

具体的，由朗道公司提供两组质控品(样本1和样本2)，分别采用达到上述存储要求后的血清葡萄糖测定芯片1分别检测样本1和样本2，对于同种类的血清葡萄糖测定芯片1，检测三次。

表2为样本1通过存储各天数后的血清葡萄糖测定芯片1检测到的检测结果，表3为样本2通过存储各天数后的血清葡萄糖测定芯片1检测到的检测结果。其中，平均值为三次检测到的浓度的平均值，靶值为样本中葡萄糖的实际浓度。

从表2和表3中可以得出，本申请实施例提供的血清葡萄糖测定芯片1在环境中存储2、3、4、6和8天后，相对偏差的绝对值仍在10.0％以内，因此，具有较好的热稳定性，在环境中储存多天后仍能确保其检测结果的准确性。

表2样本1的检测结果

表3样本2的检测结果

6)长期稳定性测试

在空气湿度8％的环境中，将本申请实施例提供的血清葡萄糖测定芯片1封袋，在2-8℃避光环境中贮存0、3、6、9、12、15个月后。以朗道校准品和质控品为检测样本时，测试该血清葡萄糖测定芯片1的准确度，相对偏差应在±10.0％以内。具体的，由朗道公司提供两组质控品(样本3和样本4)，分别采用在2-8℃避光环境中贮存0、3、6、9、12、15个月后的血清葡萄糖测定芯片1检测样本3和样本4，对于同种类的血清葡萄糖测定芯片1，检测三次。

表4为在2-8℃避光环境中贮存0、3、6、9、12、15个月后的血清葡萄糖测定芯片1对样本3的检测结果，表5为在2-8℃避光环境中贮存0、3、6、9、12、15个月后的血清葡萄糖测定芯片1对样本4的检测结果。其中，平均值为三次检测到的浓度的平均值，靶值为样本中葡萄糖的实际浓度。

从表4和表5中可以得出，本申请实施例提供的血清葡萄糖测定芯片1在环境中存储0、3、6、9、12、15个月后，相对偏差的绝对值仍在10.0％以内，因此，具有较好的长期稳定性，在环境中储存较长时间后仍能确保其检测结果的准确性。

表4样本3的检测结果

表5样本4的检测结果

7)抗干扰能力

干扰性试验：参考Fujita等人的方法，取新鲜混合血清，分为空白对照组和实验组，实验组加入不同的干扰物质，使其在血清中的浓度达到如下表6所示的要求。然后分别测定含有如下四种干扰物质的血清葡萄糖的含量，每种干扰物质重复三次，取平均值。测定结果见下表6。表6为干扰物质存在时的血清葡萄糖测定芯片1对血清葡萄糖含量的检测结果。相对偏差(％)＝(干扰样本的测定均值－对照组测定均值)/对照组测定均值×100％。

表6抗干扰测试结果

项目类型	测值	相对偏差	结论
				新鲜混合血清(空白对照)	6.3mmol/L	/	/
测含30mg/dL的抗坏血酸样本	6.4mmol/L	1.58％	合格
				测含40mg/dL的胆红素样本	6.3mmol/L	-0.53％	合格
测含400mg/dL的血红蛋白样本	6.2mmol/L	2.63％	合格
				测含500mg/dLL甘油三酯样本	6.2mmol/L	2.11％	合格

由上表6可看出，本申请实施例提供的血清葡萄糖测定芯片1在干扰物质存在时测试值的相对偏差的绝对值仍在10.0％以内，因此，本申请实施例提供的血清葡萄糖测定芯片1具有较好的抗干扰性，在多种干扰物质中仍能确保其检测结果的准确性。

综上所述，本申请实施例提供的血清葡萄糖测定试剂包括：缓冲液、稳定剂、金属离子络合剂、氯化镁、ATP钠盐、氧化型辅酶、己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、葡萄糖氧化酶、赋形剂。血清葡萄糖测定试剂中葡萄糖氧化酶等比例的消耗掉样本中部分葡萄糖，使待测葡萄糖浓度处于准确度较高的测量浓度范围内，己糖激酶催化ATP钠盐上的磷酸基转移到葡萄糖，生成腺苷二磷酸和葡萄糖-6-磷酸。然后葡萄糖-6-磷酸被氧化为6-磷酸葡糖，同时氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸被葡糖-6-磷酸脱氢酶催化还原为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸。

血清葡萄糖测定试剂可制成血清葡萄糖测定试剂球；血清葡萄糖测定试剂可置于测定芯片体内，制成血清葡萄糖测定芯片，利用反应体系在340nm处吸光度的变化可计算出检测样本中葡萄糖浓度的含量。测试结果表明，本申请实施例提供的血清葡萄糖测定试剂的检测结果更加精准，且具有较强的抗干扰能力，稳定性好。

最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本申请的技术方案，而非对其限制；在本申请的思路下，以上实施例或者不同实施例中的技术特征之间也可以进行组合，步骤可以以任意顺序实现，并存在如上所述的本申请的不同方面的许多其它变化，为了简明，它们没有在细节中提供；尽管参照前述实施例对本申请进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本申请各实施例技术方案的范围。

Claims (10)

1.一种血清葡萄糖测定试剂，其特征在于，包括以下组分：

2.根据权利要求1所述的血清葡萄糖测定试剂，其特征在于，所述缓冲液包括磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、哌嗪-N,N-二(2-乙磺酸)缓冲液、2[(2-氨基-2氧代乙基)氨基]乙磺酸缓冲液、3-(N-吗啉代)-2-羟基丙磺酸缓冲液、N,N-二(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸缓冲液和N-(2-羟乙基)哌嗪-N/-(2-乙磺酸)缓冲液中的至少一种。

3.根据权利要求1所述的血清葡萄糖测定试剂，其特征在于，所述稳定剂包括乙二醇、丙三醇、甘油、硫酸铵、牛血清白蛋白、碳酸盐、胆酸盐、氯化钠、1,2-二硫代苏糖醇、乙二醇二乙醚二胺四乙酸中的至少一种。

4.根据权利要求1所述的血清葡萄糖测定试剂，其特征在于，所述赋形剂包括甘露醇、海藻糖、聚乙二醇、水溶性淀粉中的至少一种。

5.根据权利要求1所述的血清葡萄糖测定试剂，其特征在于，所述氧化型辅酶为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸。

6.根据权利要求1所述的血清葡萄糖测定试剂，其特征在于，所述金属离子络合剂为乙二胺四乙酸二钠盐。

7.根据权利要求1-6任一项所述的血清葡萄糖测定试剂，其特征在于，所述血清葡萄糖测定试剂呈球状，体积在2.5ul-3.5ul之间。

8.一种血清葡萄糖测定试剂球制备方法，其特征在于，包括：

将缓冲液加入第一预设量的水中；

在所述缓冲液在水中完全溶解后，依次加入稳定剂、金属离子络合剂、氯化镁、ATP钠盐、氧化型辅酶混合形成第一溶液；

将所述第一溶液的PH值调整至预设PH值得到第二溶液；

在所述第二溶液中依次加入己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、葡萄糖氧化酶和赋形剂得到第三溶液；

将所述第三溶液的液滴滴在液氮中，以使所述液滴形成冰球；

将所述冰球进行冷冻干燥，制得所述血清葡萄糖测定试剂球。

9.根据权利要求8所述的血清葡萄糖测定试剂球制备方法，其特征在于，所述预设PH值的范围为6.0-8.0。

10.一种血清葡萄糖测定芯片，其特征在于，所述芯片包括芯片本体和如权利要求1-7任一项所述的试剂，其中，所述试剂设置于所述芯片本体内部。

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